化學制藥技術(shù)畢業(yè)設計（論文）利培酮分散片溶出度測定方法的建立

1、徐州醫(yī)藥高等職業(yè)學校畢 業(yè) 論 文題 目： 利培酮分散片溶出度測定方法的建立 學生姓名 學 號 專 業(yè) 化 學 制 藥 技 術(shù) 班 級 07高職化學制藥（1） 實習單位指導教師 學校指導教師 實習地點 徐州恩華一分廠 2011 年 06 月23目 錄摘要 1第一部分 實驗部分 11.1 樣品來源 11.2 測定方法 11.3 主要儀器與試劑 2第二部分 實驗步驟與結(jié)果 22.1 溶出度檢測波長的確定 22.2 空白輔料對溶出度測定的干擾 42.3 溶出介質(zhì)的選擇 52.4 溶出轉(zhuǎn)速的選擇 82.5 利培酮分散片溶出度測定的線性范圍 92.6 利培酮分散片溶出度測定的回收率試驗 102.7 溶出

2、度測定的中間精密試驗 112.8 溶出度測定的重復性試驗 122.9 溶出度測定溶液的穩(wěn)定性試驗 132.10 溶出均一性曲線 142.11 溶出度測定結(jié)果 18第三部分 討論 19第四部分 結(jié)論 20參考文獻 21利培酮分散片溶出度測定方法的建立摘 要目的：建立高效液相色譜法測定利培酮分散片溶出度。方法：采用hplc法，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的c18液相色譜柱，規(guī)格為：250mm4.6mm，5m；流動相：甲醇-0.04mol/l醋酸銨溶液（用醋酸調(diào)節(jié)ph到3.0）（50：50）；檢測波長：274nm；流速：1.0ml/min；理論板數(shù)按利培酮峰計算不低于3000。結(jié)果：高效液相色譜法

3、測定利培酮分散片的溶出度，空白輔料對溶出度的測定無干擾，并且本法的線性、準確度、回收率、重現(xiàn)性、精密度、溶液穩(wěn)定性試驗及三批樣品的溶出均一性結(jié)果均良好，并且同時與市售利培酮片（維思通）的溶出度做了比較，本方法可用于利培酮分散片溶出度的測定。結(jié)論： 高效液相色譜法可用于利培酮分散片溶出度的測定。關(guān)鍵詞：高效液相色譜；利培酮分散片；溶出度測定第一部分 實驗部分1.1樣品來源（1）利培酮對照品：由中國藥品生物制品檢定所提供，批號為：100570-200401 （2） 三批利培酮分散片中試樣品：由技術(shù)中心制劑室提供，批號：20090501，20090502，20090503，規(guī)格：1mg/片。（3）市

4、售利培酮片由西安楊森制藥有限公司生產(chǎn)。批號：070513030，商品名：維思通，規(guī)格：1mg/片。1.2 測定方法色譜條件與系統(tǒng)適用性 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.04mol/l醋酸銨溶液（用醋酸調(diào)節(jié)ph至 3.0）（50：50）為流動相；檢測波長：274nm；流速：1.0ml/min；柱溫：35，理論板數(shù)按利培酮峰計算應不低于2000。 測定法 取本品，照溶出度測定法（中國藥典2005年版二部附錄x c第三法），以0.1mol/l鹽酸溶液200ml為溶劑，轉(zhuǎn)速為每分鐘75轉(zhuǎn)，依法操作，經(jīng)20分鐘時，取溶液適量，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取利培酮對照品適量，精密稱定，加0

5、.1mol/l鹽酸制成每1ml中約含5g 的溶液，作為對照品溶液。取上述兩種溶液各50l，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算每片的溶出量。限度為標示量的80%，應符合規(guī)定。1.3 主要儀器與試劑主要儀器：rcz-8a智能藥物溶出儀 天津大學精密儀器廠 uv-2450 紫外分光光度計 日本島津 model 420 型精密酸度計 美國熱電 mettler ag 135雙量程電子天平 瑞士 agilent 1100高效液相色譜儀 美國 waters 515高效液相色譜儀 美國 hs色譜數(shù)據(jù)工作站 v4.0 杭州英譜 n2000色譜數(shù)據(jù)作站 浙江 c18 液相色譜柱 250mm4.6

6、mm 5m 日本島津主要試劑：甲醇（色譜純） 上海凌峰化學試劑有限公司酸銨（分析純） 上?；瘜W試劑公司鹽酸（分析純） 徐州化學試劑總廠第二部分 實驗步驟與結(jié)果2.1 溶出度檢測波長的確定取利培酮對照品約5mg，加0.1mol/l鹽酸溶液溶解并制成每1ml中約含25g的溶液，作為對照品溶液；另稱取利培酮分散片空白輔料適量（約相當于1片利培酮分散片的空白輔料量），置于0.1mol/l鹽酸溶液200ml中，溶解、過濾，取續(xù)濾液作為空白輔料溶液；取上述兩種溶液，照紫外分光光度法（中國藥典2005年版二部附錄iv a），于190nm400nm的波長范圍內(nèi)掃描。【1】檢測結(jié)果見表1。表1 對照品溶液及空白

7、輔料溶液紫外掃描結(jié)果名稱最大吸收波長對照品溶液238.2 nm 、273.6nm空白輔料溶液在238.0 nm 、274.0nm波長處無吸收 根據(jù)上述的掃描結(jié)果可知，利培酮對照品的0.1mol/l鹽酸溶液在238 nm 、274nm的波長處有最大吸收，空白輔料在274nm的波長處無吸收，對本品的溶出度測定無干擾，故選擇274nm為本品溶出度測定的檢測波長。圖1 利培酮空白輔料紫外掃描圖 圖2 利培酮對照品紫外掃描圖2.2 空白輔料對溶出度測定的干擾取本品（批號：20080501）及利培酮分散片空白輔料適量（約相當于1片利培酮分散片的空白輔料量），照利培酮分散片溶出度測定項下的方法依法測定檢測結(jié)

8、果見表2表2 空白輔料對溶出度測定的干擾試驗結(jié)果名稱主峰保留時間(min)利培酮對照品5.34820090701批5.298空白輔料溶液在主峰處無色譜峰結(jié)論：空白輔料溶液在主峰處無色譜峰，不干擾本品溶出度的測定 圖1 利培酮分散片溶出度空白輔料液相色譜圖圖2 利培酮分散片對照品溶出度hplc色譜圖 圖3 利培酮分撒片供試品溶出度hplc色譜圖2.3溶出介質(zhì)的選擇取本品（批號：20090702），照溶出度測定法分別以溶出介質(zhì)1：水；介質(zhì)2：ph6.8的磷酸鹽緩沖液；介質(zhì)3：0.1mol/l鹽酸溶液為溶出介質(zhì)。體積均為200ml，轉(zhuǎn)速為每分鐘75轉(zhuǎn)，依法操作，在1、3、5、10、20、30分鐘時分

9、別取溶液2ml，濾過，作為供試品溶液，并及時在操作容器中補充溶出介質(zhì)2ml；另精密稱取利培酮對照品適量，先用0.1mol/l鹽酸溶液溶解，再用溶出介質(zhì)稀釋制成每1ml中約含5g的溶液，作為對照品溶液；精密量取對照品溶液和供試品溶液各50l，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算出每片的溶出量【2】。結(jié)果見表3。表3 利培酮分散片溶出介質(zhì)的選擇時間（min）溶出度%（水）溶出度%（ph6.8磷酸鹽緩沖液）溶出度%（0.1mol/l鹽酸）132.632.2457.123.6683.732.30344.541.6579.401.6894.091.13552.041.2492.740.7

10、899.871.001067.861.4299.734.34102.401.282081.013.96101.464.11102.131.353089.363.4698.762.36100.980.92 圖4 0.1mol/l鹽酸為溶出介質(zhì)對照品hplc色譜圖 圖5 0.1mol/l鹽酸為溶出介質(zhì)供試品譜圖 hplc色譜圖 圖6 水為溶出介質(zhì)對照品hplc色譜圖圖7 水為溶出介質(zhì)供試品hplc色譜圖圖8 磷酸鹽為溶出介質(zhì)對照品hplc色譜圖 圖9 磷酸鹽為溶出介質(zhì)供試品hplc色譜圖實驗結(jié)果表明：經(jīng)測定利培酮分散片以水為溶出介質(zhì)時，30分鐘時溶出不完全；以ph6.8磷酸鹽緩沖液為溶出介質(zhì)時，相

11、對于以0.1mol/l鹽酸為溶出介質(zhì)時，溶出速度相對較慢，并且操作較繁瑣；在以0.1mol/l鹽酸為溶出介質(zhì)時，在5分鐘時溶出可達到80%以上，20分鐘時可溶出完全，并且操作簡便，因此選用0.1mol/l鹽酸溶液作為溶出介質(zhì)。2.4溶出轉(zhuǎn)速的選擇取利培酮分散片（批號：20090701），照溶出度測定法（中國藥典2005年版附錄x c第三法），以0.1mol/l鹽酸200ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速分別為每分鐘50轉(zhuǎn)和75轉(zhuǎn)，分別在1、3、5、10、20、30分鐘時取樣2ml，濾過，并及時在操作容器中補充0.1mol/l鹽酸溶液2ml，取續(xù)濾液作為供試品溶液，另取利培酮對照品適量，精密稱定，加0.1mo

12、l/l鹽酸制成每1ml中約含5g的溶液，作為對照品溶液，取上述兩種溶液各50l，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算出每片的溶出量【3】。計算溶出度，以此考查不同轉(zhuǎn)速對溶出度測定的影響。結(jié)果見表4。表4 不同轉(zhuǎn)速對利培酮分散片溶出度測定的影響時間（min）溶出度%（50轉(zhuǎn)/分）溶出度%（75轉(zhuǎn)/分）149.808.9483.732.30376.514.1894.091.13588.763.4299.871.001099.554.85102.401.2820101.723.11102.131.353098.902.23100.980.92 圖10利培酮分散片轉(zhuǎn)速為50轉(zhuǎn)對照品hp

13、lc色譜圖 圖11 利培酮分散片轉(zhuǎn)速為50轉(zhuǎn)供試品hplc色譜圖 結(jié)論：以上結(jié)果表明轉(zhuǎn)速為每分鐘50轉(zhuǎn)時，在溶出時間10分鐘時，溶出可達90%以上；而轉(zhuǎn)速為每分鐘75轉(zhuǎn)時，在溶出時間5分鐘時，溶出就可達90%以上，在溶出時間10分鐘時，溶出即可完全；能較好的反映藥物溶出的情況，因而選擇75轉(zhuǎn)/分為本品溶出度測定的轉(zhuǎn)速。2.5利培酮分散片溶出度的線性范圍精密稱取利培酮對照品適量，置100ml量瓶中，加 0.1mol/l鹽酸溶液超聲溶解并稀釋至刻度，分別精密吸取上述溶液1ml、2 ml、3 ml、5 ml、7 ml、10 ml置50ml量瓶中，加0.1mol/l鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，分別吸取上

14、述系列溶液各50l注入液相色譜儀，記錄色譜圖【4】。以峰面積（a）對濃度（c）進行線性回歸并計算回歸方程和相關(guān)系數(shù)。結(jié)果見表5表5 利培酮分散片溶出度測定的線性范圍編號c（g/ml）峰面積11.00480177.722.008163670.433.012246882.155.020414524.677.028581118.71010.04838185 以峰面積a對濃度c進行線性回歸，線性方程為：a=5105+83779x，相關(guān)系數(shù)r=0.99998 圖12 利培酮分散片溶出度測定的線性范圍圖結(jié)論：由線性方程可知，利培酮在1.004g/ml10.04g/ml濃度范圍內(nèi)濃度與峰面積成良好的線性關(guān)系

15、，可用于利培酮分散片的溶出度測定。2.6 利培酮分散片溶出度測定的回收率試驗 方法：分別精密稱取利培酮對照品約60mg(60%處方量)、80mg（80%處方量）、100mg（100%處方量）、120mg（120%處方量），每份均按100片的處方量精密加入輔料并混和均勻。分別配制成含利培酮為標示量60%、80%、100%、120%的模擬樣品，分別取上述四種不同標示量的模擬樣品，各稱取三份，分別用0.1mol/l鹽酸溶液溶解，配制成每1ml中約含3、4、5、6g的溶液，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液【5】。另取利培酮對照品適量，精密稱定，加0.1mol/l鹽酸溶液制成每1ml中約含5g的溶液，作為

16、對照品溶液。精密量取對照品溶液和供試品溶液各50l，分別注入液相色譜儀，按外標法以峰面積計算，并計算回收率【6】。結(jié)果見表6。表6 利培酮分散片溶出度測定的回收率試驗結(jié)果處方量對照品量（mg）輔料與主藥總量（g）回收率（%）平均值（%）rsd%60%60.298.1567100.10100.000.3299.97100.6180% 81.268.16299.8099.69100.26100%101.688.1829100.24100.0799.41120%122.28.123599.69100.2299.99 結(jié)論：用高效液相色譜法測定利培酮分散片的溶出度，60% 、80%、100%、120%

17、四種不同標示量樣品的回收率結(jié)果均在99.0%101.0%之間，相對標準偏差小于1%，說明用本法測定利培酮分散片的溶出度準確性好，回收率高，故本法可用于利培酮分散片的溶出度測定。2.7 溶出度測定的中間精密試驗. 測定法：取利培酮分散片三批樣品（批號為：20080501、20080502、20080503），各20片，研細，精密稱取適量（約相當于利培酮0.5mg），置100ml量瓶中，加0.1mol/l鹽酸溶液振搖、溶解，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取利培酮對照品適量，精密稱定，用0.1mol/l鹽酸溶液溶解并定量稀釋成每1ml中約含5g的溶液，作為對照品溶液，分別精密吸

18、取上述兩種溶液各50l，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算其標示量【7】。以不同的時間、不同的操作者、不同的儀器再重復進行試驗。兩次試驗結(jié)果見表7。表7 利培酮分散片溶出度測定的中間精密度試驗結(jié)果 儀器，日期批號waters 高效液相色譜儀 島津10a高效液相色譜儀平均值%rsd%11年11月4日11年11月5日20111001批103.61%103.42%103.390.25103.18%103.75%103.29%103.09%20111002批103.37%102.53%102.990.41102.51%103.26%102.81%103.44%20111003批102

19、.36%103.11%102.860.31103.02%102.61%103.18%102.90% 圖13 利培酮分散片溶出度精密度實驗對照品hplc色譜圖 圖14利培酮分散片溶出度精密度實驗供試品hplc色譜圖 結(jié)論：通過三批利培酮分散片的溶出度中間精密度試驗結(jié)果表明，rsd均小于1%，證明其方法精密度良好，可以作為利培酮分散片的溶出度測定方法。2.8 溶出度測定的重復性試驗取利培酮分散片樣品（批號：20111003）20片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于利培酮0.5mg），置100ml量瓶中，加0.1mol/l鹽酸溶液振搖、溶解，并稀釋至刻度搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取

20、利培酮對照品適量，精密稱定，用0.1mol/l鹽酸溶液溶解并定量稀釋制成每1ml中約含5g的溶液，作為對照品溶液，分別精密吸取上述兩種溶液各50l，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算其標示量【8】。結(jié)果見表8。表8 利培酮分散片溶出度測定的重復性試驗結(jié)果樣品編號含量（%）平均值（%）rsd（%）1102.69103.340.432104.043103.324103.265103.516103.21結(jié)論：以上結(jié)果表明，該方法重復性較好，可用于利培酮分散片溶出度的測定。2.9 溶出度測定溶液的穩(wěn)定性試驗 取利培酮分散片樣品（批號20111027）照溶出度測定法，經(jīng)20分鐘時，取樣濾過

21、，取續(xù)濾液作為供試品溶液；放置0、1、2、4、6、8小時，分別精密量取上述溶液各50l注入液相色譜儀，同時配制濃度為5g/ml的利培酮對照品溶液，照溶出度測定項下的方法進行測定【9】。記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算溶出度。結(jié)果見表9。表9 利培酮分散片溶出溶液穩(wěn)定性試驗時間（小時）溶出度 (%)(%)rsd(%)0101.62101.510.180.181101.332101.614101.396101.768101.32圖15 利培酮分散片溶出度溶液的穩(wěn)定性對照品hplc色譜圖圖16 利培酮分散片溶出度溶液的穩(wěn)定性供試品hplc色譜圖結(jié)論：本品的溶出液放置8小時后溶出度測定結(jié)果未見明顯變化

22、。說明溶液在8小時內(nèi)穩(wěn)定。2.10 溶出均一性曲線測定條件：轉(zhuǎn)速75轉(zhuǎn)/分，0.1mol/l鹽酸溶液200ml為溶出介質(zhì)，溫度370.5，分別在1、3、5、10、15、20、30分鐘取樣2ml，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；并及時在操作容器中補充0.1mol/l鹽酸溶液2ml，另取利培酮對照品適量，精密稱定，用0.1mol/l鹽酸溶液制成每1ml中含5g利培酮的溶液，作為對照品溶液【10】。精密量取對照品和供試品溶液各50l，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算每片的溶出度【11】。結(jié)果見表10； 表10 利培酮分散片溶出均一性測定結(jié)果批號時間(min)溶出度(%)(%)rsd

23、(%)12345620111001185.9283.7785.1286.4689.2177.6984.703.884.58397.5493.3096.6297.69100.6797.1897.172.362.43598.5198.1499.57100.43103.39100.36100.071.881.881099.05100.95101.96101.46105.89102.34101.942.252.211598.66100.9899.72102.50103.70102.63101.371.921.902097.3899.1398.94100.12102.17100.4599.701.621

24、.633095.0697.6097.78100.05102.02100.4598.832.492.5220111002185.1786.9286.7583.6178.9183.4984.142.953.51396.8599.6696.3895.8392.0293.0495.632.762.895100.66101.2698.8597.5395.9496.3198.432.222.2610102.67105.07103.25103.5899.36102.87102.801.891.8415102.18103.06102.20102.1998.83102.99101.911.561.5320101

25、.13101.09100.9399.3497.0097.6599.521.841.853096.81101.5599.67100.3696.8998.3398.941.921.9420111003181.2484.6081.4779.4485.5682.7582.512.272.76395.7896.7099.0595.1695.7092.2495.772.212.31598.2998.39100.4799.9098.0195.7398.471.661.6910102.06102.19104.44102.5898.6196.15101.013.043.0115100.90101.29102.3

26、0101.5398.9798.33100.551.561.552098.94100.61100.80100.2095.9096.4098.812.162.193097.7599.3799.2199.8795.8192.9497.492.672.74維思通12.912.902.872.422.291.932.550.4115.89329.1634.8226.8426.7238.7332.3231.434.7715.19582.0576.4681.6679.9277.0785.6680.473.434.261095.7893.7894.4893.7195.7597.9395.241.601.681

27、596.1794.3397.3593.6896.0597.2495.801.511.572095.4893.6897.0193.4995.8195.7395.201.361.433094.9891.6296.2492.4394.2995.9894.261.882.00圖17 利培酮分散片溶出均一性對照品溶液hplc色譜圖圖18利培酮分散片溶出均一性供試品溶液hplc色譜圖結(jié)論：由以上結(jié)果可看出，三批利培酮分散片在溶出時間3分鐘時，溶出度大于80%，在溶出時間10分鐘時，溶出量達到最大值，在溶出時間20分鐘時，溶出已基本完全。而利培酮片在溶出時間10分鐘時，溶出量大于80%，在溶出時間15分鐘時

28、，溶出量達到最大值。由此可見，三批利培酮分散片的溶出速度遠大于利培酮片。三批利培酮分散片在20分鐘時的溶出度均大于80%，溶出均一性良好，采用高效液相色譜法測定利培酮分散片的溶出度，方法準確，故此方法可用于利培酮分散片溶出度的測定。并把利培酮分散片的溶出時間定為20分鐘。2.11 溶出度測定結(jié)果取本品三批樣品依照溶出度測定項下的方法依法測定。溶出度測定結(jié)果見表11。表11 三批利培酮分散片測定結(jié)果批號時間(min)123456%2011100120104.64101.92100.58101.26102.33101.73102.081.39201110022098.14102.61103.63102.8698.61105.04101.812.802001110032099.67100.02104.06100.6698.6399.13100.361.94圖19 利培酮分散片溶出度測定對照品hplc色譜圖圖20 利培酮分散片溶出度測定供試品hplc色譜圖結(jié)論：三批利培酮分散片在20分鐘時的溶出度均大于80%，測定結(jié)果均符合規(guī)定。 第三部分 討論3.1 由于本品的規(guī)格較小，為1mg/片，溶出介質(zhì)為200ml，溶出液的濃度為5g/ml，濃度較低，用紫外法測定吸收值較低，誤差較大，因此采用高效液相色譜法測定利培酮分散片的溶出度。3.2 經(jīng)測定利培酮分散片以水為溶出介質(zhì)時，30