組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)報(bào)告_1

1、組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)報(bào)告植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)報(bào)告一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握無菌操作的植物組織培養(yǎng)方法；2通過配置ms培養(yǎng)基母液，掌握母液的配置和保存方法； 3通過誘導(dǎo)豌豆根、莖、葉形成愈傷組織學(xué)習(xí)愈傷組織的建立方法；4通過誘導(dǎo)豌豆莖、葉形成愈傷組織學(xué)習(xí)愈傷組織的建立方法； 5了解植物細(xì)胞通過分裂、增殖、分化、發(fā)育, 最終長成完整再生植株的過程, 加深對植物細(xì)胞的全能性的理解。二、實(shí)驗(yàn)原理（一）植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)是把植物的器官，組織以至單個(gè)細(xì)胞，應(yīng)用無菌操作使其在人工條件下，能夠繼續(xù)生長，甚至分化發(fā)育成一完整植株的過程。植物的組織在培養(yǎng)條件下，原來已經(jīng)分化停止生長的細(xì)胞，又能重新分裂，形成沒有組織結(jié)構(gòu)的細(xì)胞團(tuán)

2、，即愈傷組織。這一過程稱為“脫分化作用”，已經(jīng)“脫分化”的愈傷組織，在一定條件下，又能重新分化形成輸導(dǎo)系統(tǒng)以及根和芽等組織和器官，這一過程稱“再分化作用”。（二）植物細(xì)胞的全能性植物細(xì)胞的全能性即是每個(gè)植物的本細(xì)胞或性細(xì)胞都具有該植物的全套遺傳基因，在一定培養(yǎng)條件下每個(gè)細(xì)胞都可發(fā)育成一個(gè)與母體一樣的植株。（三）組織的分化與器官建成外植體誘導(dǎo)出愈傷組織后，經(jīng)過繼代培養(yǎng)，可以在愈傷組織內(nèi)部形成一類分生組織即具有分生能力的小細(xì)胞團(tuán)，然后，再分化成不同的器官原基。有些情況下，外植體不經(jīng)愈傷組織而直接誘導(dǎo)出芽、根。（四）培養(yǎng)基的組成培養(yǎng)基中各成分的比例及濃度與細(xì)胞或組織的生長或分化所需要的最佳條件相近，

3、似成功地使用該培養(yǎng)基進(jìn)行組織培養(yǎng)的主要條件。營養(yǎng)培養(yǎng)基一般由無機(jī)營養(yǎng)、碳源和能源、維生素、植物激素（生長調(diào)節(jié)劑）和包括有機(jī)氮、酸和復(fù)雜物質(zhì)的添加劑組成。三、實(shí)驗(yàn)器材高壓滅菌鍋、超凈工作臺、烘箱、培養(yǎng)室鑷子、記號筆、橡皮筋、玻璃器皿、三角燒瓶、燒杯、量筒、剪刀、棉塞、繩子、牛皮紙、酒精燈、噴霧器等。四、實(shí)驗(yàn)材料豌豆種子五、實(shí)驗(yàn)藥品藥品、70% 酒精、 0.1% 升汞、ms培養(yǎng)基、蒸餾水、naoh、 84消毒液、蔗糖、瓊脂等。六、實(shí)驗(yàn)步驟（一）培養(yǎng)基母液的配制表1.ms培養(yǎng)基個(gè)成分的含量（單位：mg/l）表2.ms培養(yǎng)基所需母液以及擴(kuò)大倍數(shù)名稱大量元素微量元素 ca鹽 mg鹽 fe鹽有機(jī)肌醇激素?cái)U(kuò)

4、大倍數(shù) 50 50 50 50 50 100 100 100 定容體積(ml)500 500 500 500 500 200 200 50 吸取毫升數(shù)/l20 20 20 20 20 10 10 5（注：吸取毫升數(shù)為每升培養(yǎng)基所吸取的母液的體積）表3.配制母液所需的藥品及稱取量 （注：根據(jù)表1與表2計(jì)算各物質(zhì)的稱取量） 藥品名稱 nh4no3 kno3 kh2po4 稱取量（mg）41250 47500 4250 藥品名稱 kina2mno4?2h2o cuso4?5h2o 稱取量（mg）20.75 6.25 0.625 cacl2?2h2o 11000 cocl2?6h2o 0.625 mg

5、so4?7h2o 9250 肌醇 2000 feso4?4h2o 695 甘氨酸 40 na-edta 932.5 鹽酸硫胺素 8 mnso4?7h2o 557.5 鹽酸吡哆醇 10 znso4?7h2o 215 煙酸 10 h3bo3 155 （1） ms大量元素母液的配制參考表3稱取一定量的下列藥品用蒸餾水溶解，定容至500ml存放于冰箱中備用。名稱重量（mg）名稱重量(mg)nh4no3 kno341250 47500kh2po4 cacl22h2o4250 11000 （2） ms微量元素母液參考表3稱取一定量的下列藥品用蒸餾水溶解，定容至500ml存放于冰箱中備用。名稱 ki h3b

6、o3 mnso47h2o znso47h2o 重量(mg) 20.75 155 557.5 215 名稱 na2moo42h2o cuso45h2o cocl26h2o 重量(mg) 6.25 0.625 0.625 （3） ms有機(jī)母液參考表3稱取一定量的下列藥品用蒸餾水溶解，定容至200ml存放于冰箱中備用。名稱肌醇煙酸鹽酸吡哆醇重量(mg)名稱鹽酸硫胺素甘氨酸重量(mg)2000 10 108 40（4） ms鐵鹽母液的配制參考表3稱取一定量的下列藥品用蒸餾水溶解，定容至500ml存放于冰箱中備用。名稱 edta二鈉重量(mg)932.5名稱 feso44h2o重量(mg)695 （5）

7、 ms鈣鹽母液的配制 參考表3稱取11000mg的cacl2?2h2o用蒸餾水溶解定容至500ml，保存于冰箱備用。 （6） ms鎂鹽母液的配制參考表3稱取9250mg的mgso4?7h2o用蒸餾水溶解定容至500ml，保存于冰箱備用。（7） ms肌醇母液的配制參考表3稱取2000mg的肌醇用蒸餾水溶解定容至200ml，保存于冰箱備用。（8） ms激素母液的配制各種生長素和細(xì)胞分裂素要單獨(dú)配制，不能混合在一起，生長素類一般要先用少量95%的酒精或1當(dāng)量的naoh溶解，細(xì)胞分裂素一般要先用1當(dāng)量的鹽酸溶解，然后再加蒸餾水定容。一般取100mg配成100ml母液。（二）培養(yǎng)基的配制以配制1l的ms

8、培養(yǎng)基為例進(jìn)行如下操作：（1）取1l的大燒杯，加入適量的蒸餾水在電磁爐上加熱至沸騰；（2）分別取（一）中配制的8種母液放入小燒杯中，然后加入，邊加邊攪拌；（3）稱取30g蔗糖加入，邊加邊攪拌；（4）稱取8g瓊脂加入，邊加邊攪拌，知之瓊脂粉溶解；（5）定容至1l，加入激素母液，用naoh調(diào)ph6.0左右；（6）將培養(yǎng)基分別分裝于洗好的三角瓶中，塞上棉塞包上牛皮紙用繩子扎緊；（7）放入消毒滅菌鍋滅菌，滅菌20分鐘左右；（8）滅菌后從滅菌鍋中取出培養(yǎng)基，平放在實(shí)驗(yàn)臺上令其冷卻凝固。（三）高壓蒸汽滅菌鍋的使用方法具體操作步驟：（1）高壓鍋放水至平把架；（2）把包扎好的培養(yǎng)基裝入高壓鍋；（3）蓋上熱壓鍋

9、蓋,上緊螺帽(注意對角擰緊螺帽)關(guān)上氣閥和安全閥；（4）然后接通電源；（5）壓力計(jì)升至0.05mpa時(shí)，打開放氣閥,排除冷空氣(此步很重要)；（6）排除冷空氣后,關(guān)閉放氣閥，待壓力升到0.11mpa位置時(shí)，開始計(jì)算滅菌時(shí)間，具體方法：當(dāng)壓力鍋指針升至0.12mpa時(shí)，關(guān)閉電源，待指針下降至0.11mpa時(shí)接通電源，不斷重復(fù)此操作過程，維持20分鐘；（7）滅菌時(shí)間達(dá)到20分鐘后，除去電源，打開放氣閥(注意要逐漸放氣)待篇二：組培實(shí)驗(yàn)報(bào)告植物組織培實(shí)驗(yàn)報(bào)告學(xué)院：生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院班級：10級生物技術(shù)植物班學(xué)號：2010193042 姓名：高學(xué)深養(yǎng)植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)一母液的配制與保存一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

10、1.學(xué)習(xí)母夜的配制方法和母液的保存方式。2.熟悉掌握制備母液的操作。二、實(shí)驗(yàn)原理培養(yǎng)基中提供植物生長所需的營養(yǎng)成分，才能滿足植物正常的生長發(fā)育的需求。主要包括水分、有機(jī)物質(zhì)、鹽類，而配制母液時(shí)將其分為大量、微量、鈣鹽、鎂鹽、鐵鹽、有機(jī)和肌醇分別配制。配置培養(yǎng)基時(shí)，為了使用方便和用量準(zhǔn)確，通常采用母液法進(jìn)行配置，即按培養(yǎng)基配方中各試劑的用量，擴(kuò)大若干倍后再準(zhǔn)確稱量分別先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用時(shí)按比例吸取母液進(jìn)行稀釋配置即可。三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器設(shè)備 1試劑 nh4no3 ,kno3 ,kh2po4 ,cacl22h2o ,mgso47h2o,feso47h2o na2-edt

11、a,mnso44h2o,znso47h2o,h3bo3,ki,na2moo42h2o cuso45h2o,cocl26h2o,肌醇，甘氨酸，鹽酸硫胺素，鹽酸吡哆醇，煙酸，蒸餾水。2.儀器設(shè)備電子天平，燒杯（50ml、100ml、500ml）量筒（1000ml、100ml、25ml），容量瓶(1000ml、500ml、100ml)，移液管（10ml，5ml，1ml）試劑瓶，玻璃棒數(shù)支，藥芍，稱量紙等。四、實(shí)驗(yàn)步驟1 、計(jì)算：計(jì)算各化學(xué)成分所需要的量。大量、微量和鹽類按擴(kuò)大50倍，定容500ml的配制計(jì)算。有機(jī)和肌醇按擴(kuò)大100倍，定容200ml的配制計(jì)算。計(jì)算后制成配方表。2、制定標(biāo)簽：裁取7張

12、適當(dāng)大小的牛皮紙，用鉛筆寫上ms，種類，并標(biāo)明此類母液所含物質(zhì)，質(zhì)量，定容體積，擴(kuò)大倍數(shù)吸取量，制備人，制備日期。以大量為例如圖：3、大量元素母液的配制：先用量筒量取300ml蒸餾水放入 500ml 燒杯中，按照配方表中用量依次分別稱?。?nh4no3 ,kno3 , kh2po4 , 待第一種化合物完全溶解后再加入第二種化合物，溶解過程用玻璃棒攪拌，當(dāng)最后一種化合物完全溶解后，將溶液轉(zhuǎn)移至 500ml 容量瓶中，并用蒸餾水將燒杯和玻璃棒洗滌3次，每次約50ml，而后用蒸餾水定容至 500ml，然后轉(zhuǎn)移至細(xì)口試劑瓶中，貼上標(biāo)簽，并置于冰箱中低溫保存?zhèn)溆谩?、微量元素母液的配制按照配方表中用量用

13、電子天平依次稱取mnso44h2o,znso47h2o， h3bo3, ki, na2moo42h2o。cuso45h2o和 cocl26h2o先稀釋后用移液管吸取,按制備母液 i 的方法逐個(gè)溶解，轉(zhuǎn)移至容量瓶中，洗滌燒杯，然后定容至 500ml，轉(zhuǎn)入細(xì)口試劑瓶中，貼上標(biāo)簽，注明母液名稱，放大倍數(shù)，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存?zhèn)溆谩?、鐵鹽母液的制備把 feso47h2o 和 na2-edta 分別置于適量蒸餾水中，加熱攪拌使之完全溶解，保持加熱，把 feso4 倒入 na2-edta 溶液中并攪拌，接近沸騰時(shí)停止加熱，冷卻后調(diào) ph 到 5.5，將溶液轉(zhuǎn)移至 500ml 容量瓶中，洗滌

14、后用蒸餾水定容至 500ml，轉(zhuǎn)入細(xì)口試劑瓶中，用力振蕩 12min，貼上標(biāo)簽，注明母液名稱，放大倍數(shù)，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存?zhèn)溆谩?、有機(jī)化合物母液的制備按配方表中用量依次稱?。蝴}酸硫胺素,鹽酸吡哆醇，煙酸, 甘氨酸，用蒸餾水溶解后，定容200ml轉(zhuǎn)入細(xì)口試劑瓶中，貼上標(biāo)簽，注明母液名稱，放大倍數(shù)，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存?zhèn)溆谩?、植物生長物質(zhì)母液制備 naa 母液:準(zhǔn)確稱取 10mg,用少量 1mol/l naoh 溶解后加蒸餾水定容至 100ml,即配制成 0.1mg/ml 的 naa 母液，轉(zhuǎn)入細(xì)口試劑瓶中，貼上標(biāo)簽，注明母液名稱，放大倍數(shù)，配制日期，配制人，并置

15、于冰箱中保存?zhèn)溆谩?6ba 母液配制方法相似，濃度為 2mg/ml五、試驗(yàn)結(jié)果分析及注意事項(xiàng)1、kh2po4是吸熱溶解，可以把燒杯浸在溫水中溶解。2、制作標(biāo)簽時(shí)只能能用鉛筆寫。實(shí)驗(yàn)二、培養(yǎng)基的制備與滅菌一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)母液法配制培養(yǎng)基。2、學(xué)習(xí)用牛皮紙包三角瓶口的防污染方法。3、學(xué)習(xí)滅菌鍋的使用。二、實(shí)驗(yàn)原理為防止組織培養(yǎng)各物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)所以把微量和鐵鹽混在一起，為了避免物質(zhì)的反應(yīng)，所以要迅速倒入沸騰的蒸餾水中，瓊脂應(yīng)慢慢倒入，并邊攪拌邊倒入。組織培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基含有植物生長所必需的各類營養(yǎng)物質(zhì)，同時(shí)也是微生物繁殖的極好場所，因此必須對培養(yǎng)基 滅菌處理，以確保無菌操作的順利進(jìn)行。三、實(shí)驗(yàn)材料

16、、試劑和儀器設(shè)備 1.試劑：瓊脂，蔗糖，蒸餾水，1mol/l naoh,各類母液2.儀器設(shè)備：電子天平，燒杯，量筒，移液管，玻璃棒，藥芍，稱量紙，ph 試紙，錐形瓶，牛皮紙，棉塞等。四、實(shí)驗(yàn)步驟1.準(zhǔn)備將所需的各種母液按順序放好，將潔凈的各種玻璃器皿放在指定置。2 .大量的量取取 50ml量筒一個(gè)，將大量、有機(jī)、肌醇、鎂鹽，篇三：植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)報(bào)告植組織培養(yǎng)驗(yàn)報(bào)告班級：學(xué)號： 2011192017 姓名：李鵬物實(shí)植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)一植物組織培養(yǎng)母液的配制一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解植物組織培養(yǎng)基本培養(yǎng)基的組分及其作用。2.學(xué)習(xí)掌握植物組織培養(yǎng)ms培養(yǎng)基的配制方法。二、實(shí)驗(yàn)原理培養(yǎng)基是植物組織培

17、養(yǎng)中離體組織賴以生存和發(fā)育的條件。大多數(shù)培養(yǎng)基的成分是有無機(jī)鹽、有機(jī)化合物（碳源、維生素、肌醇、氨基酸等）、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)、水分和其他附加物等五大類物質(zhì)組成。無機(jī)鹽類由大量元素和微量元素組成。大量元素中，氮類化合物主要以硝酸類和銨類化合物的形式存在，但在培養(yǎng)基中多用硝酸類，也可以將硝酸類和銨類混合使用；磷和硫常用磷酸鹽和硫酸鹽來提供；鉀是培養(yǎng)基中主要的陽離子；鈣、鈉、鎂的需要量較少。微量元素包括碘、錳、銅、鋅、鈷、鐵。培養(yǎng)基中的鐵離子，大多數(shù)以螯合物的形式存在，即硫酸亞鐵與乙二胺四乙酸二鈉的混合。有機(jī)化合物包括碳源、維生素、肌醇、氨基酸等。培養(yǎng)中的植物組織和細(xì)胞的光合作用較弱，因此，需要在培養(yǎng)基

18、中附加一些碳水化合物物來提供營養(yǎng)需要。培養(yǎng)基中的碳水化合物通常為蔗糖。蔗糖除了作為培養(yǎng)基的碳源和能源外，對維持培養(yǎng)基的滲透壓也起著重要的作用。在培養(yǎng)基中加入維生素有助于細(xì)胞的分裂和增長。一般包括vb1、b6、煙酸、生物素、葉酸、泛酸鈣、vc。肌醇在糖類的相互轉(zhuǎn)化、維生素和激素的利用等方面具有重要的催進(jìn)作用。常用的植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)包括以下三類：生長素類：吲哚乙酸（iaa）、萘乙酸（naa）、二氯苯氧乙酸（2,4-d）細(xì)胞分裂素：玉米素（zt）6-芐基嘌呤（6-ba）和激動素（kt）。赤霉素：組織培養(yǎng)中使用的赤霉素只有一種，即赤霉酸（ga3）。培養(yǎng)基中的其他附加物包括人工合成和天然的有機(jī)物附加物。

19、其中最為常見的為酵母提取物。瓊脂作為培養(yǎng)基的支持物，也是最常用的郵寄附加物，他可以是培養(yǎng)基呈固體狀態(tài)，以利于組織和細(xì)胞的培養(yǎng)。植物組織培養(yǎng)是否成功，在很大的程度上取決于培養(yǎng)基的選擇之上。目前普遍使用的是ms培養(yǎng)基。ms固體培養(yǎng)基可用于誘導(dǎo)遇上組織，或用于胚胎、莖段、莖尖及花藥的培養(yǎng)等。ms培養(yǎng)基的硝酸鹽、鉀和銨的含量略高于其他的培養(yǎng)基，也是它被普遍使用的原因之一。三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑、配方和儀器設(shè)備 1試劑nh4no3 ,kno3 ,kh2po4 ,cacl22h2o ,mgso47h2o,feso47h2ona2-edta,mnso44h2o,znso47h2o,h3bo3,ki,na2moo

20、42h2o cuso45h2o,cocl26h2o,肌醇，甘氨酸，鹽酸硫胺素，鹽酸吡哆醇，煙酸，蒸餾水。 2.儀器設(shè)備電子天平，燒杯（50ml、100ml、500ml）量筒（1000ml、100ml、25ml），容量瓶(1000ml、500ml、100ml)，移液管（10ml，5ml，1ml）試劑瓶，玻璃棒數(shù)支，藥匙，稱量紙等。3、培養(yǎng)基配方化合物名稱 nh4no3 kno3 kh2po4 化合物名稱 mnso44h2o znso47h2o h3bo3 ki na2moo42h2o cuso45h2o cocl26h2o 化合物名稱 feso47h2o na2-edta 化合物名稱肌醇甘氨酸煙

21、酸硫胺素鹽酸吡哆醇煙酸 ms培養(yǎng)基有機(jī)物質(zhì)母液的配制培養(yǎng)基濃度(mg/l) 稱取質(zhì)量(g) 100 2 2 0.2 0.4 8 0.5 10 0.5 10 ms培養(yǎng)基大量元素母液配制培養(yǎng)基濃度(mg/l) 稱取質(zhì)量(g) 1650 41.25 1900 47.50 170 4.25 ms培養(yǎng)基微量元素母液配制培養(yǎng)基濃度(mg/l) 稱取質(zhì)量(g) 22.3 55.7 8.6 21.5 6.2 11.5 0.83 20.750.25 6.25 0.0025 0.625 0.0025 0.625 ms培養(yǎng)基鐵鹽母液配制培養(yǎng)基濃度(mg/l) 稱取質(zhì)量(g)27.8 6.95 37.3 9.32四、

22、實(shí)驗(yàn)步驟1 、計(jì)算：計(jì)算各化學(xué)成分所需要的量。大量、微量和鹽類按擴(kuò)大50倍，定容500ml的配制計(jì)算。有機(jī)和肌醇按擴(kuò)大100倍，定容200ml的配制計(jì)算。計(jì)算后制成配方表。2、制定標(biāo)簽：裁取適當(dāng)大小的牛皮紙，用鉛筆寫上ms，種類，并標(biāo)明此類母液所含物質(zhì)，質(zhì)量，定容體積，擴(kuò)大倍數(shù)吸取量，制備人，制備日期以大量為例如圖：3、大量元素母液的配制：先用量筒量取300ml蒸餾水放入 500ml 燒杯中，按照配方表中用量依次分別稱?。?nh4no3 ,kno3 , kh2po4 , 待第一種化合物完全溶解后再加入第二種化合物，溶解過程用玻璃棒攪拌，當(dāng)最后一種化合物完全溶解后，將溶液轉(zhuǎn)移至 500ml 容量

23、瓶中，并用蒸餾水將燒杯和玻璃棒洗滌3次，每次約50ml，而后用蒸餾水定容至 500ml，然后轉(zhuǎn)移至細(xì)口試劑瓶中，貼上標(biāo)簽，并置于冰箱中低溫保存?zhèn)溆谩?、微量元素母液的配制按照配方表中用量用電子天平依次稱取mnso44h2o,znso47h2o， h3bo3, ki, na2moo42h2o。cuso45h2o和 cocl26h2o先稀釋后用移液管吸取,按制備母液 i 的方法逐個(gè)溶解，轉(zhuǎn)移至容量瓶中，洗滌燒杯，然后定容至 500ml，轉(zhuǎn)入細(xì)口試劑瓶中，貼上標(biāo)簽，注明母液名稱，放大倍數(shù)，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存?zhèn)溆谩?、鐵鹽母液的制備把 feso47h2o 和 na2-edta 分別置于

24、適量蒸餾水中，加熱攪拌使之完全溶解，保持加熱，把 feso4 倒入 na2-edta 溶液中并攪拌，接近沸騰時(shí)停止加熱，冷卻后調(diào) ph 到 5.5，將溶液轉(zhuǎn)移至 500ml 容量瓶中，洗滌后用蒸餾水定容至 500ml，轉(zhuǎn)入細(xì)口試劑瓶中，用力振蕩 12min，貼上標(biāo)簽，注明母液名稱，放大倍數(shù)，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存?zhèn)溆谩?、有機(jī)化合物母液的制備按配方表中用量依次稱?。蝴}酸硫胺素,鹽酸吡哆醇，煙酸, 甘氨酸，用蒸餾水溶解后，定容200ml轉(zhuǎn)入細(xì)口試劑瓶中，貼上標(biāo)簽，注明母液名稱，放大倍數(shù)，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存?zhèn)溆谩?、植物生長物質(zhì)母液制備 naa 母液:準(zhǔn)確稱取 10mg

25、,用少量 1mol/l naoh 溶解后加蒸餾水定容至 100ml,即配制成 0.1mg/ml 的 naa 母液，轉(zhuǎn)入細(xì)口試劑瓶中，貼上標(biāo)簽，注明母液名稱，放大倍數(shù)，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存?zhèn)溆谩?6ba 母液配制方法相似，濃度為 2mg/ml 五、試驗(yàn)結(jié)果分析及注意事項(xiàng)1、配制母液時(shí)注意藥品只能出不能進(jìn)。2、制作標(biāo)簽時(shí)只能能用鉛筆寫，防止油性筆字跡在高壓滅菌后模糊不清。 實(shí)驗(yàn)二、培養(yǎng)基的制備與滅菌 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)母液法配制培養(yǎng)基。2、學(xué)習(xí)用牛皮紙包三角瓶口的防污染方法。3、學(xué)習(xí)并熟悉自動化滅菌鍋的操作和保護(hù)。二、實(shí)驗(yàn)原理為防止組織培養(yǎng)各物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)所以把微量和鐵鹽混在一起，為

26、了避免物質(zhì)的反應(yīng)，所以要迅速倒入沸騰的蒸餾水中，瓊脂應(yīng)慢慢倒入，并邊攪拌邊倒入。組織培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基含有植物生長所必需的各類營養(yǎng)物質(zhì)，同時(shí)也是微生物繁殖的極好場所，因此必須對培養(yǎng)基滅菌處理，以確保無菌操作的順利進(jìn)行。三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器設(shè)備1.試劑：瓊脂，蔗糖，蒸餾水，1mol/l naoh,各類母液2.儀器設(shè)備：電子天平，燒杯，量筒，移液管，玻璃棒，藥芍，稱量紙，ph 試紙，錐形瓶，牛皮紙，棉塞等。四、實(shí)驗(yàn)步驟1.準(zhǔn)備將所需的各種母液按順序放好，將潔凈的各種玻璃器皿放在指定置。 2 .大量的量取取 50ml量筒一個(gè)，將大量、有機(jī)、肌醇、鎂鹽，鈣鹽、按配方表中的用量依次稱取并倒入500ml

27、燒杯中。3 .微量鐵鹽的量取取 50ml 量筒一個(gè)，將微量和鐵鹽按配方表中的用量稱取并倒入100ml燒杯中。4.培養(yǎng)基配制取瓷盆一個(gè)，加入 1.5l 蒸餾水，置于電磁爐上加熱，將稱量好的所有母液倒入瓷盆中，用玻璃棒不斷攪拌。再稱量瓊脂 16 克，白砂糖 60 克，依次倒入瓷盆中，邊倒入邊攪拌，待瓊脂和白砂糖完全溶解后，并定容至 2l。 5、調(diào)ph 用 1mol/l naoh 和1moll hcl調(diào) ph 至 6.0。6、分裝把培養(yǎng)基分裝到三角瓶中，每瓶約50ml，用棉塞塞好再用牛皮紙，細(xì)繩包扎好，待滅菌。7、滅菌將所有的三角瓶整齊的放在滅菌鍋的鐵絲籃中，將溫度調(diào)為121滅菌20min。滅完后擺

28、放在水平的實(shí)驗(yàn)桌上勿動。五、試驗(yàn)結(jié)果分析及注意事項(xiàng)1、配制培養(yǎng)基前先大致估計(jì)一下藥品數(shù)量，不夠時(shí)提前配制。2、三角瓶滅菌時(shí)注意要放干凈冷空氣。 3、加的藥品種類較多，切忌加錯(cuò)。4、注意把三角瓶用棉塞塞好和用牛皮紙包好。5、滅完菌的三角瓶勿動，等待培養(yǎng)基冷卻凝固。 6、瓊脂不可加太快，以防加太快瓊脂結(jié)塊。實(shí)驗(yàn)三無菌植株的建立一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、通過實(shí)驗(yàn)，初步掌握外植體材料的消毒。2、學(xué)習(xí)超凈工作臺滅菌方法和操作要求。篇四：植物組織培養(yǎng)綜合實(shí)驗(yàn)報(bào)告模塊(2012年3月) 植物組織培養(yǎng)大實(shí)驗(yàn)綜合報(bào)告書寫說明植物組織培養(yǎng)這一個(gè)綜合性很強(qiáng)的大實(shí)驗(yàn)，植物組織培養(yǎng)大實(shí)驗(yàn)課程實(shí)驗(yàn)由7個(gè)分實(shí)驗(yàn)組成：實(shí)驗(yàn)用具的洗滌和

29、滅菌， ms培養(yǎng)基母液的配制， ms培養(yǎng)基的配制和滅菌，植物外植體消毒和接種，愈傷組織的誘導(dǎo)（又稱原代培養(yǎng)或初代培養(yǎng)），愈傷組織的繼代培養(yǎng)，愈傷組織的生根培養(yǎng)（植株再生）。實(shí)驗(yàn)報(bào)告是對實(shí)驗(yàn)觀察、比較所得結(jié)果的真實(shí)記載，是科學(xué)的記錄。實(shí)驗(yàn)報(bào)告的形式可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)風(fēng)容的不同而分文字描述、繪圖和列表3種形式。為了減少實(shí)驗(yàn)報(bào)告寫作過程中的重復(fù)性和減輕學(xué)生完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告的負(fù)擔(dān)，植物組織培養(yǎng)大實(shí)驗(yàn)課程實(shí)驗(yàn)報(bào)告由5次綜合實(shí)驗(yàn)報(bào)告組成，即：1、植物組織培養(yǎng)大實(shí)驗(yàn)綜合報(bào)告（一）（必做）：實(shí)驗(yàn)用具的洗滌和滅菌、ms培養(yǎng)基母液及ms培養(yǎng)基的配制和滅菌；2、植物組織培養(yǎng)大實(shí)驗(yàn)綜合報(bào)告（二）（必做）：植物外植體消毒和接種；

30、 3、植物組織培養(yǎng)大實(shí)驗(yàn)綜合報(bào)告（三）（必做）：愈傷組織的誘導(dǎo)（又稱原代培養(yǎng)或初代培養(yǎng)）； 4、植物組織培養(yǎng)大實(shí)驗(yàn)綜合報(bào)告（四）（必做）：愈傷組織的繼代培養(yǎng)；5、植物組織培養(yǎng)大實(shí)驗(yàn)綜合報(bào)告（五）（選做）：愈傷組織的生根培養(yǎng)（植株再生）。學(xué)生在寫植物組織培養(yǎng)大實(shí)驗(yàn)綜合報(bào)告時(shí)，實(shí)驗(yàn)報(bào)告中的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容、實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?shí)驗(yàn)原理、儀器設(shè)備和試劑等4部分可按照教師擬定的植物組織培養(yǎng)大實(shí)驗(yàn)綜合報(bào)告（一）至（五）中的內(nèi)容寫。實(shí)驗(yàn)方法部分可參照教師編寫的實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析是學(xué)生對自已實(shí)驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)記載和分析，思考題是教師為了讓學(xué)生加深對植物組織培養(yǎng)的原理與技術(shù)的理解和掌握而設(shè)計(jì)的。因此，綜合報(bào)告中的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分

31、析、思考題2部分內(nèi)容，要求學(xué)生必需獨(dú)立完成。植物組織培養(yǎng)大實(shí)驗(yàn)綜合報(bào)告（一）（必做）【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】實(shí)驗(yàn)用具的洗滌和滅菌、ms培養(yǎng)基母液及ms培養(yǎng)基的配制和滅菌【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?、掌握植物組織培養(yǎng)中常用實(shí)驗(yàn)用具的洗滌、滅菌方法及注意事項(xiàng)；2、掌握ms培養(yǎng)基母液的配制方法和注意事項(xiàng)；3、掌握ms培養(yǎng)基的配制、滅菌方法和注意事項(xiàng)。【實(shí)驗(yàn)原理】對植物外植體進(jìn)行離體培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基提供生長所需的營養(yǎng)成分等。培養(yǎng)基的主要成分包括無機(jī)營養(yǎng)物、碳源、維生素、植物生長物質(zhì)和有機(jī)附加物等。配制培養(yǎng)基通常都按配方濃度的若干倍稱量，配制成一系列的母液置于冰箱保存，使用時(shí)按比例稀釋。一般要配下列母液：大量元素母液、微量元素母液

32、、鐵鹽母液、有機(jī)化合物母液、植物生長物質(zhì)母液。凡是暴露在(未經(jīng)處理的)空氣中的物體，曾經(jīng)接觸過自然水源的物體都是有菌的。培養(yǎng)基中含有大量的有機(jī)物，特別是含糖量較高，是微生物滋生、繁殖的極好場所。而接種材料需要在無菌得件下培養(yǎng)很長的時(shí)間，如果培養(yǎng)基被微生物所污染，便達(dá)不到培養(yǎng)的預(yù)期結(jié)果。因此，培養(yǎng)基的滅菌，是植物組織培養(yǎng)中十分重要的環(huán)節(jié)。培養(yǎng)基滅菌的方法有多種，本實(shí)驗(yàn)田采用高壓蒸氣滅菌法（即濕熱滅菌法，其原理是：在密閉的蒸鍋內(nèi)，其中的蒸汽不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點(diǎn)不斷提高，從而鍋內(nèi)溫度也隨之增加。在0.10mpa的壓力下，鍋內(nèi)溫度達(dá)121。在此蒸汽溫度下，可以很快殺死各種細(xì)菌及其高度耐熱

33、的芽孢?！緝x器設(shè)備和試劑】1、儀器設(shè)備高壓蒸氣滅菌鍋，電子天平，冰箱，燒杯（100ml，500ml，1000ml），量筒（50ml，100ml，1000ml），試劑瓶（100ml，500ml，1000ml），三角瓶（50ml，100ml，250ml），培養(yǎng)瓶（100ml，150ml）或培養(yǎng)皿（d90mm，d1 20mm），洗耳球、刻度吸管，ph試紙，漏斗，玻璃棒，記號筆，線繩，牛皮紙或報(bào)紙，石棉網(wǎng)。2試劑重鉻酸鉀(k2cr2o7)、硫酸(h2so4)、硝酸鉀（kno3）、硝酸銨（nh4n03）、硫酸鎂（mgs047h20）、磷酸二氫鉀（kh2po4）、氯化鈉（cacl22h20）、硫酸錳（mn

34、044h20）、硫酸鋅（zns047h20）、硼酸（h3bo3）、碘化鉀（ki）、鉬酸鈉（namo042h20）、硫酸銅（cus045h2o）、氯化鈷（cocl26h20）、乙二胺四乙酸二鈉（ na2-edta）、硫酸亞鐵（fes047h20）、甘氨酸、鹽酸硫胺素（vitb1）、鹽酸吡哆素（vitb6）、肌醇、2,4-d、6-ba、 1 moll鹽酸、1 mol l氫氧化鈉、蔗糖、瓊脂?！緦?shí)驗(yàn)方法】1、簡述玻璃器皿的洗滌和滅菌方法； 2、簡述ms培養(yǎng)基母液（包括大量元素母液、微量元素母液、鐵鹽母液、有機(jī)化合物母 液、植物生長物質(zhì)母液等5種母液）的配制方法；3、簡述ms培養(yǎng)基配制（按照配制1l培

35、養(yǎng)基的量進(jìn)行描述）和滅菌方法?！舅伎碱}】1、什么是植物組織培養(yǎng)概念？在含有營養(yǎng)物質(zhì)及植物生長物質(zhì)的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)離體植物組織（器官或細(xì)胞）并誘導(dǎo)使其長成完整植株的技術(shù)植物的組織培養(yǎng)是根據(jù)植物細(xì)胞具有全能性這個(gè)理論，近幾十年來發(fā)展起來的一項(xiàng)無性繁殖的新技術(shù)。植物的組織培養(yǎng)廣義又叫離體培養(yǎng)，指從植物體分離出符合需要的組織.器官或細(xì)胞，原生質(zhì)體等，通過無菌操作，在人工控制條件下進(jìn)行培養(yǎng)以獲得再生的完整植株或生產(chǎn)具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的其他產(chǎn)品的技術(shù)。狹義是指組培指用植物各部分組織，如形成層.薄壁組織.葉肉組織.胚乳等進(jìn)行培養(yǎng)獲得再生植株，也指在培養(yǎng)過程中從各器官上產(chǎn)生愈傷組織的培養(yǎng)，愈傷組織再經(jīng)過再分化形成再

36、生植物。2、什么是外植體的含義？根據(jù)外植體的不同，植物組織培養(yǎng)可以分為幾種類型？外植體用于離體培養(yǎng)的初始材料稱為外植體，如在植物快速繁殖中從母株上切取的、用于消毒培養(yǎng)的莖芽、莖段、葉片或分生組織等。通常外植體的選擇與植物組織培養(yǎng)快速繁殖成功與否有著密切聯(lián)系，在建立植物組織培養(yǎng)快速繁殖體系應(yīng)首先考慮采用何種外植體來開始培養(yǎng)。決定外植體選擇的因素主要是來源、數(shù)量、消毒難易程度、以往經(jīng)驗(yàn)等。在蘭花組培中最為常用的外植體是莖尖和種子。3、植物組織培養(yǎng)有哪些特點(diǎn)？形態(tài)類似，結(jié)構(gòu)相同，功能相同通過組織培養(yǎng)得到的植物體的特點(diǎn)：組織培養(yǎng)得到的植物體的遺傳物質(zhì)與原植物體的遺傳物質(zhì)完全相同，表現(xiàn)出的性狀完全一樣（

37、排除基因突變等情況）。需要注意的是如果用親本的花粉進(jìn)行組織培養(yǎng)，那么得到的植株會是單倍體，單倍體的遺傳物質(zhì)自然也就比用體細(xì)胞培養(yǎng)的植株的遺傳物質(zhì)減少一半。植物組織培養(yǎng)的實(shí)質(zhì)是：基因的選擇性表達(dá)4、ms培養(yǎng)基包括哪些成分？各有什么作用？5、采用高壓蒸汽鍋高壓滅菌時(shí)，應(yīng)注意哪些事項(xiàng)？(4)注意事項(xiàng)。在滅菌過程中，應(yīng)注意排凈鍋內(nèi)冷空氣，鍋內(nèi)冷空氣如排放不凈，會影響滅菌效果，達(dá)不到徹底滅菌的目的。由于高壓蒸汽滅菌時(shí)，要使用溫度高達(dá)120 、兩6、簡述植物組織培養(yǎng)與農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的關(guān)系？7、滅菌和消毒有無差別？為什么？消毒是指用物理或化學(xué)方法消滅某種范圍內(nèi)的有害微生物，保留目的菌。例如，進(jìn)行食用菌組織分離時(shí)，

38、子實(shí)體表面必須進(jìn)行消毒，消滅體表雜菌，以便獲得分離物的純培養(yǎng)。滅菌是指用物理或化學(xué)方法，完全殺死培養(yǎng)基或器物內(nèi)外的一切微生物，使滅菌對象上的蛋白質(zhì)完全變性。滅菌：用理化方法殺死一定物質(zhì)中的微生物的微生物學(xué)基本技術(shù)。滅菌的徹底程度受滅菌時(shí)間與滅菌劑強(qiáng)度的制約。微生物對滅菌劑的抵抗力取決于原始存在的群體密度、菌種或環(huán)境賦予菌種的抵抗力。滅菌是獲得純培養(yǎng)的必要條件，也是食品工業(yè)和醫(yī)藥領(lǐng)域中必需的技術(shù)。消毒：（disinfection)是指殺死病原微生物、但不一定能殺死細(xì)菌芽孢的方法。通常用化學(xué)的方法來達(dá)到消毒的作用。用于消毒的化學(xué)藥物叫做消毒劑。植物組織培養(yǎng)大實(shí)驗(yàn)綜合報(bào)告（二）（必做）【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】

39、植物外植體消毒和接種 【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹繉W(xué)習(xí)和掌握植物外植體表面消毒的常規(guī)方法?！緦?shí)驗(yàn)原理】用于進(jìn)行組織培養(yǎng)的組織、器管和細(xì)胞稱為外植體。在植物組織培養(yǎng)中，外植體如果是帶菌的，在接種前都必須進(jìn)行表面消毒，這是取得培養(yǎng)成功的最基本的和重要的前提。常用消毒劑對外植體進(jìn)行消毒。接種是將經(jīng)嚴(yán)格的表面滅菌處理好的外植體，再經(jīng)無菌操作手續(xù)接到培養(yǎng)基上，這一過程叫做接種?！緦?shí)驗(yàn)材料】水稻成熟胚【儀器設(shè)備和試劑】1、儀器設(shè)備超凈工作臺，酒精燈，燒杯，鑷子，剪刀，手術(shù)刀，無菌吸水紙，一次性手套，標(biāo)簽紙，記號筆等。2、試劑 ms培養(yǎng)基，0.1氯化汞，75乙醇，無菌水。【實(shí)驗(yàn)方法】1、試述外植體（水稻成熟胚）的消毒方法。1、試述外植體（水稻成熟胚）的接種方法（包括接種前、接種、接種后等3個(gè)操作環(huán)節(jié)）?！緦?shí)驗(yàn)結(jié)果與分析】篇五：植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)報(bào)告植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)報(bào)告一實(shí)驗(yàn)?zāi)康淖屩参锝M織經(jīng)過脫分化作用，形成愈傷組織，經(jīng)過再分化作用，愈傷組織又能重新分化為有結(jié)構(gòu)的組織和器官，最終形成完整的植株。二實(shí)驗(yàn)原理植物組織培養(yǎng)是