[建筑]無(wú)菌室標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)程與驗(yàn)收規(guī)范

1、無(wú)菌室標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)程與驗(yàn)收規(guī)范(潔凈室沉降菌測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程) (潔凈室沉降菌測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程) (潔凈室沉降菌測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程)隱藏 窗體頂端窗體底端無(wú)菌室標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)程與驗(yàn)收規(guī)范潔凈室沉降菌測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 (含潔凈室沉降菌測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程) 1.目的本規(guī)程旨在為無(wú)菌操作及無(wú)菌室的保護(hù)提供一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)程。 2.適用范圍生測(cè)實(shí)驗(yàn)室 3.責(zé)任者 qc 主管生測(cè)員 4.定義無(wú) 5.安全注意事項(xiàng)嚴(yán)格無(wú)菌操作，防止微生物污染；操作人員進(jìn)入無(wú)菌室應(yīng)先關(guān)掉紫外燈。 6.規(guī)程 6.1.無(wú)菌室應(yīng)設(shè)有無(wú)菌操作間和緩沖間，無(wú)菌操作間潔凈度應(yīng)達(dá)到 10000 級(jí)，室內(nèi)溫度保持在 20-24，濕度保持在 45-60%。超凈

2、臺(tái)潔凈度應(yīng)達(dá)到 100 級(jí)。 6.2.無(wú)菌室應(yīng)保持清潔，嚴(yán)禁堆放雜物，以防污染。 6.3.嚴(yán)防一切滅菌器材和培養(yǎng)基污染，已污染者應(yīng)停止使用。 6.4.無(wú)菌室應(yīng)備有工作濃度的消毒液，如 5的甲酚溶液，70的酒精， 0.1的新潔爾滅溶液，等等。 6.5.無(wú)菌室應(yīng)定期用適宜的消毒液滅菌清潔， 以保證無(wú)菌室的潔凈度符合要 求。 6.6.需要帶入無(wú)菌室使用的儀器，器械，平皿等一切物品，均應(yīng)包扎嚴(yán)密， 并應(yīng)經(jīng)過(guò)適宜的方法滅菌。 6.7.工作人員進(jìn)入無(wú)菌室前，必須用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在緩沖間 更換專用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用 70%的乙醇再次擦拭雙手)，方可 進(jìn)入無(wú)菌室進(jìn)行操作。 6.8.

3、無(wú)菌室使用前必須打開(kāi)無(wú)菌室的紫外燈輻照滅菌 30 分鐘以上，并且同 時(shí)打開(kāi)超凈臺(tái)進(jìn)行吹風(fēng)。操作完畢，應(yīng)及時(shí)清理無(wú)菌室，再用紫外燈輻照滅菌 20 分鐘。 6.9.供試品在檢查前，應(yīng)保持外包裝完整，不得開(kāi)啟，以防污染。檢查前， 用 70的酒精棉球消毒外表面。 6.10.每次操作過(guò)程中，均應(yīng)做陰性對(duì)照，以檢查無(wú)菌操作的可靠性。 6 .11.吸取菌液時(shí)，必須用吸耳球吸取，切勿直接用口接觸吸管。 6.12.接種針每次使用前后，必須通過(guò)火焰灼燒滅菌，待冷卻后，方可接種 培養(yǎng)物。 6.13.帶有菌液的吸管，試管，培養(yǎng)皿等器皿應(yīng)浸泡在盛有 5%來(lái)蘇爾溶液的 消毒桶內(nèi)消毒，24 小時(shí)后取出沖洗。 6.14.如有

4、菌液灑在桌上或地上，應(yīng)立即用 5%石碳酸溶液或 3的來(lái)蘇爾傾 覆在被污染處至少 30 分鐘，再做處理。工作衣帽等受到菌液污染時(shí)，應(yīng)立即脫 去，高壓蒸汽滅菌后洗滌。 6.15.凡帶有活菌的物品，必須經(jīng)消毒后，才能在水龍頭下沖洗，嚴(yán)禁污染 下水道。 6.16.無(wú)菌室應(yīng)每月檢查菌落數(shù)。在超凈工作臺(tái)開(kāi)啟的狀態(tài)下，取內(nèi)徑 90mm 的無(wú)菌培養(yǎng)皿若干，無(wú)菌操作分別注入融化并冷卻至約 45的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 約 15ml，放至凝固后，倒置于 3035培養(yǎng)箱培養(yǎng) 48 小時(shí)，證明無(wú)菌后，取平 板 35 個(gè)， 分別放置工作位置的左中右等處， 開(kāi)蓋暴露 30 分鐘后， 倒置于 30 35培養(yǎng)箱培養(yǎng) 48 小時(shí)，取出

5、檢查。100 級(jí)潔凈區(qū)平板雜菌數(shù)平均不得超過(guò) 1 個(gè)菌落，10000 級(jí)潔凈室平均不得超過(guò) 3 個(gè)菌落。如超過(guò)限度，應(yīng)對(duì)無(wú)菌室進(jìn)行 徹底消毒，直至重復(fù)檢查合乎要求為止。 7.參照參照藥品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法 中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范中 (無(wú)菌檢查 法)章節(jié) 中華人民共和國(guó)醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) yy/t0188.6-1995藥品檢驗(yàn)操作規(guī)程 8.分發(fā)部門質(zhì)量管理部 無(wú)菌室技術(shù)指導(dǎo)說(shuō)明在獲得了無(wú)菌環(huán)境和無(wú)菌材料后，我們還要保持無(wú)菌狀態(tài)，才能對(duì)某種特定 的已知微生物進(jìn)行研究或利用它們的功能，否則外界的各種微生物很容易混入。 外界不相干的微生物混入的現(xiàn)象，在微生物學(xué)中我們叫做污染雜菌。防止污染是 微生物學(xué)工作中十分關(guān)

6、鍵的技術(shù)。一方面是徹底滅菌，另一方面防止污染，是無(wú) 菌技術(shù)的兩個(gè)方面。另外，我們還要防止所研究的微生物，特別是致病微生物或 經(jīng)過(guò)基因工程改造了的本來(lái)自然界不存在的微生物從我們的實(shí)驗(yàn)容器中逃逸到 外界環(huán)境中去。為了這些目的，在微生物學(xué)中，有許多措施。 無(wú)菌室內(nèi)的地面、墻壁必須平整，不易藏污納垢，便于清洗。工作臺(tái)的臺(tái)面 應(yīng)該處于水平狀態(tài)。無(wú)菌室和緩沖間都裝有紫外線燈，無(wú)菌室的紫外線燈距離工 作臺(tái)面 1 米。工作人員進(jìn)入無(wú)菌室應(yīng)穿滅過(guò)菌的服裝，戴帽子。 當(dāng)前無(wú)菌室多存在于微生物工廠，一般實(shí)驗(yàn)室則使用超凈臺(tái)。超凈臺(tái)其主要 功能是利用空氣層流裝置排除工作臺(tái)面上部包括微生物在內(nèi)的各種微小塵埃。 通 過(guò)電動(dòng)

7、裝置使空氣通過(guò)高效過(guò)濾器具后進(jìn)入工作臺(tái)面， 使臺(tái)面始終保持在流動(dòng)無(wú) 菌空氣控制之下。 而且在接近外部的一方有一道高速流動(dòng)的氣簾防止外部帶菌空 氣進(jìn)入。 在條件較困難的地方，也可以用木制無(wú)菌箱代替超凈臺(tái)。無(wú)菌箱結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單， 便于移動(dòng)，箱正面開(kāi)有兩個(gè)洞，不操作時(shí)用推拉式小門擋住，操作時(shí)可以將雙臂 伸進(jìn)去。正面上部裝有玻璃，便于在內(nèi)部操作，箱內(nèi)部裝有紫外線燈，從側(cè)面小 門可以放進(jìn)去器具和菌種等。 應(yīng)用無(wú)菌操作技術(shù)當(dāng)前不僅在微生物學(xué)研究和應(yīng)用上起著舉足輕重的作用， 而且 在許多生物技術(shù)中也被廣泛應(yīng)用。例如轉(zhuǎn)基因技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)等。 潔凈室沉降菌測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 潔凈室沉降菌測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 目的：建

8、立潔凈室中沉降菌的測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程， 1 目的：建立潔凈室中沉降菌的測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，保證藥品在規(guī)定潔凈級(jí)別內(nèi)進(jìn)行 生產(chǎn)。 2 范圍：潔凈室的沉降菌的監(jiān)測(cè)。3 依據(jù)：國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) gb/t 16294-1996。 4 職責(zé)：qa 潔凈度監(jiān)測(cè)人員、微生物檢驗(yàn)人員對(duì)本制度的實(shí)施負(fù)責(zé)。 5 內(nèi)容 5.1 潔凈室：對(duì)塵粒及微生物污染規(guī)定需進(jìn)行環(huán)境控制的房間或區(qū)域。 潔凈工作臺(tái)：一種工作臺(tái)或者與之類似的一個(gè)封閉圍擋工作區(qū)。 5.2 潔凈工作臺(tái)：一種工作臺(tái)或者與之類似的一個(gè)封閉圍擋工作區(qū)。其特點(diǎn)是自身能 夠供給經(jīng)過(guò)過(guò)濾的空氣或氣體，如垂直層流潔凈罩、水平層流罩、 夠供給經(jīng)過(guò)過(guò)濾的空氣或氣體，如垂直層流潔凈罩、

9、水平層流罩、垂直層流潔凈工作 臺(tái)、水平層流潔凈工作臺(tái)、自凈器等。 水平層流潔凈工作臺(tái)、自凈器等。 5.3 潔凈度：潔凈環(huán)境內(nèi)單位體積空氣中含大于或等于某一粒徑懸浮粒子的允許統(tǒng)計(jì)數(shù)。5.4 菌落：細(xì)菌培養(yǎng)后，由一個(gè)或幾個(gè)細(xì)菌繁殖而形成的一細(xì)菌集落，簡(jiǎn)稱 cfu。通常 用個(gè)數(shù)表示。 5.5 測(cè)試方法 5.5.1 方法概述：本測(cè)試方法利用沉降法，即通過(guò)自然沉降原理收集在空氣中的生物。在適宜的條件下讓其繁殖到可見(jiàn)的菌落數(shù)， 粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng) 48 小時(shí)以上培養(yǎng)，在適宜的條件下讓其繁殖到可見(jiàn)的菌落數(shù)， 來(lái)評(píng)定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來(lái)評(píng)定潔凈室的潔凈度。 5.5.2 所用的儀器和設(shè)備 高壓消毒

10、鍋： gz-zl-sop-066- 進(jìn)行操作。 5.5.2.1 高壓消毒鍋：使用時(shí)參照文件 gz-zl-sop-066-00 進(jìn)行操作。 5.5.2.2 恒溫培養(yǎng)箱：必須定期對(duì)培養(yǎng)箱的溫度計(jì)進(jìn)行檢定。 5.5.2.3 培養(yǎng)皿：一般采用中 90mm15mm 硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。使用前將培養(yǎng)皿置于 121濕熱滅菌 20 分鐘。 5.5.2.4 培養(yǎng)基：普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。將培養(yǎng)基加熱熔化，冷卻至約 45在無(wú)菌操 作條 件下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿約 15m1。 待瓊脂培養(yǎng)基凝固后， 將培養(yǎng)基平皿放入 30 35恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)數(shù)小時(shí)，若培養(yǎng)基平皿上確無(wú)菌落生長(zhǎng)，即可供采樣用， 制備好的培養(yǎng)基平皿應(yīng)在

11、 28的環(huán)境中存放。 5.5.3 測(cè)試步驟 5.5.3.1 采樣方法：將已制備好的培養(yǎng)皿放置在預(yù)先確定的取樣點(diǎn)，打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋， 使培養(yǎng)基表面暴露 0.5 小時(shí)，再將培養(yǎng)皿蓋上蓋后倒置。 5.5.3.2 培養(yǎng)：全部采樣結(jié)束，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在 3035培養(yǎng)， 時(shí)間不少于 48 小時(shí)。每批培養(yǎng)基應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)，檢查培養(yǎng)基本身是否污染， 定 3 只培養(yǎng)皿作對(duì)照培養(yǎng)。 5.5.3.3 菌落計(jì)數(shù)：用肉眼直接計(jì)數(shù)，然后用 510 倍放大鏡檢查，有否遺漏。若培養(yǎng)皿上有 2 個(gè)或 2 個(gè)以上菌落重疊，可分辨時(shí)仍以 2 個(gè)或 2 個(gè)以上的菌落計(jì)數(shù)。 5.6 注意事項(xiàng) 5.6.1 測(cè)試用具要做滅菌處

12、理，以確保測(cè)試的可靠性、正確性。 5.6.2 采取一切措施防止人為對(duì)樣本的污染。5.6.3 對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細(xì)的記錄。 5.6.4 由于細(xì)菌種類繁多，差別甚大，計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì) 觀察，不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長(zhǎng)的菌落，并須注意細(xì)菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別， 必要時(shí)用顯微鏡鑒別。 必要時(shí)用顯微鏡鑒別。 5.6.5 采樣前應(yīng)仔細(xì)檢查每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。 5.7 測(cè)試規(guī)則 5.7.1 測(cè)試狀態(tài) 5.7.1.1 沉降菌測(cè)試前：被測(cè)試潔凈室（區(qū)）的溫濕度須達(dá)到規(guī)定的要求，靜壓差、 必須控制在規(guī)定值內(nèi)。被測(cè)試潔凈室（區(qū)）已消毒。 必須控制在

13、規(guī)定值內(nèi)。5.7.1.2 測(cè)試狀態(tài)有靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種，并在報(bào)告中注明測(cè)試狀態(tài)。 5.7.1.3 測(cè)試人員：測(cè)試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級(jí)別的工作服。靜態(tài)測(cè)試時(shí)，室內(nèi)測(cè)試人員不得多于 2 個(gè)人。 5.7.2 測(cè)試時(shí)間 5.7.2.1 對(duì)單向流，如 100 級(jí)凈化房間內(nèi)及層流工作臺(tái)，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于 10 分鐘后開(kāi)始。 5.7.2.2 對(duì)非單向流，如 10000 級(jí)、100000 級(jí)以上的凈化房間，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于 30 分鐘開(kāi)始。 5.8 沉降菌計(jì)數(shù) 5.8.1 最少采樣點(diǎn)數(shù)目：可按表 1 確定。在滿足最少測(cè)點(diǎn)數(shù)的同時(shí)，還宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)，見(jiàn)表 2。 表 1 最少采樣點(diǎn)數(shù)目 注：表中的面積對(duì)于單向流潔凈室是指送風(fēng)面積，對(duì)于非單向流潔凈室是指房間面積。表 2 最少培養(yǎng)皿數(shù) 5.8.2 采樣點(diǎn)的布置：工作區(qū)測(cè)試點(diǎn)位置離地 0.81.5m 左右（略高于工作面）。在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測(cè)點(diǎn)，采樣點(diǎn)的布置應(yīng)力求均勻，避免采樣點(diǎn) 在某局部區(qū)域過(guò)于集中，某局部區(qū)域過(guò)于稀疏。5.8.3 記錄：測(cè)試報(bào)告中應(yīng)記錄房間溫度、相對(duì)濕度、壓差、測(cè)試狀態(tài)及測(cè)試數(shù)據(jù)。5.8.4 結(jié)果計(jì)算：用計(jì)數(shù)方法得出各個(gè)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。平均菌落數(shù)的計(jì)算見(jiàn)下式： m1+m2+mn 平均菌落數(shù) m=n 式