熒光分光光度計測試步驟

1、熒光分光光度計測試步驟測試步驟：(一)樣品準(zhǔn)備 1.液體樣品根據(jù)用戶提供的技術(shù)指標(biāo)，檢查濃度范圍是否合適，如果需要稀釋，則要考慮所需溶劑類型和稀釋倍數(shù)。 2.固體樣品均勻粉末、片狀或具有光滑平面的塊狀樣品，均可直接測定。 (二)操作步驟 1.開機：接通電源，打開主機開關(guān)，點燃(打開)光源后，根據(jù)說明書要求啟動計算機。 2.檢測前準(zhǔn)備：參照儀器說明書，在20天內(nèi)至少進行一次激發(fā)校準(zhǔn)和發(fā)射校準(zhǔn)，檢測前儀器應(yīng)預(yù)熱。 3.工作條件的選擇：環(huán)境溫度應(yīng)在205;相對濕度不大于70%;電源穩(wěn)定，無磁場、電場干擾。根據(jù)樣品的特性及熒光強度，選擇合適的儀器工作條件(如狹縫、pm增益、響應(yīng)時間等)。 4.基本測定

2、 (1)熒光激發(fā)光譜測定 設(shè)置儀器參數(shù)，掃描發(fā)射波長，找到maxem，以此為發(fā)射波長，記錄發(fā)射強度作為激發(fā)波長的函數(shù)，便得到激發(fā)光譜。 (2)熒光發(fā)射光譜測定 設(shè)置儀器參數(shù)，掃描激發(fā)波長，找到maxex，以此為激發(fā)波長，記錄發(fā)射強度與發(fā)射波長間的函數(shù)關(guān)系，便得到熒光發(fā)射光譜。 (3)差譜測定 設(shè)置儀器參數(shù)，選擇合適的工作方式，測定背景溶液的發(fā)射光譜并儲存起來，在一定的工作方式下，掃描樣品溶液的發(fā)射波長，得到當(dāng)時的光度值和儲存的背景值之間的差示值，即差譜。 (4)峰面積積分 選擇適當(dāng)?shù)墓ぷ鞣绞?，對樣品溶液進行積分操作，即得到峰面積積分。 (5)熒光強度 選擇合適的測量參數(shù)，設(shè)置ex、em，采用定

3、點讀數(shù)或掃描方式，即可測得所選波長處的熒光強度。 (6)定量測定 配制一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在一定的測定條件下，設(shè)置ex、em，按照由稀至濃的次序，測定標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強度，繪制熒光強度濃度的工作曲線，不改變儀器參數(shù)測定未知溶液的熒光強度，由工作曲線即可求出未知溶液的濃度。 (三)分析結(jié)果的表述 1.熒光激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及其他光譜由儀器控制電腦直接繪出。 2.峰面積積分、熒光強度由儀器控制電腦計算顯示。 3.定量測試：在相同的測定條件下，測定一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強度，繪制出熒光強度-濃度的工作曲線。濃度未知的溶液的熒光強度測定后，由工作曲線求出該溶液的濃度。 (四)注意事項 1.在實驗開始前，應(yīng)提前打開儀器預(yù)熱，并配制好所需的溶液，對于已經(jīng)配制好的溶液，在不用時放在4冰箱中保存，放置時間超過一星期的溶液要重新配制。 2.實驗所用的樣品池是四面透光的石英池，拿取的時候用手指掐住池體的上角部，不能接觸到四個面，清洗樣品池后應(yīng)用擦鏡紙對其四個面進行輕輕擦拭。 3.在測試樣品時，注意熒光強度范圍的設(shè)定不要太高，以免測得的熒光強度超過儀器的測定上限。 4.實驗結(jié)束后，要及