藥物分析與檢驗：第四章 藥物定量分析與分析方法驗證(1)

1、 生命科學學院制藥工程 第四章 藥物定量分析與分析方法驗證 定量分析樣品的前處理方法1定量分析方法2藥品質量標準分析方法驗證3本章內容1 含鹵素元素：u鹵素與脂肪鏈的碳原子相連結合不牢固u鹵素與芳環(huán)相連結合牢固2 含金屬元素：u含金屬有機藥物:金屬離子不直接與碳原子相連.為有機酸及酚的金屬鹽或配位化合物,金屬原子結合不牢固,在溶液中可直接離解出金屬離子.u有機金屬藥物:金屬離子直接與碳原子以共價鍵相連.結合狀態(tài)比較牢固,在溶液中不能直接離解出金屬離子.一、定量分析樣品的前處理方法IIICOOHCH3COHNNHCOCH3泛影酸泛影酸IIICH2CHCOOHNH2C2H5碘番酸碘番酸CH3CH3

2、OHCCl3C12H2O三氯叔丁醇三氯叔丁醇OCCHCHCOOOOO-OOOSbSbO-CHOCCHCO2K+3H2OHCCOOCCH OOFe酒石酸銻鉀酒石酸銻鉀富馬酸亞鐵富馬酸亞鐵根據鹵素或金屬在分子中結合牢固程度不同而異。1 非有機破壞的分析方法直接測定法經水解后測定法經氧化還原后測定法2 有機破壞的分析方法濕法破壞法干法破壞法氧瓶燃燒法一、定量分析樣品的前處理方法一、定量分析樣品的前處理方法直接測定法含金屬的有機藥物，金屬原子不直接與碳原子相連，結合不牢固。水解后測定法適用鹵素原子與碳原子結合不牢固藥物，含鹵素有機藥物溶于適當溶劑再水解，如鹵素與脂肪鏈連接藥物。 直接回流后測定 堿化回

3、流后測定 硫酸水解后測定經氧化還原后測定法鹵素與芳環(huán)連接（一般用于測碘） 堿性還原后測定法如泛影酸 酸性還原后測定法如碘番酸 利用藥物中可游離的金屬離子的氧化性測定含量（一）不經有機破壞的分析方法:（二）經有機破壞的分析方法1 濕法破壞 硝 酸-高氯酸法 HNO3-HClO4 硝酸-硫酸法 HNO3-H2SO4 硫酸-硫酸鹽法 H2SO4-MSO4 2 干法破壞 有機物灼燒灰化分解。 無水碳酸鈉或氧化鎂。3 氧瓶燃燒法 適于含鹵素、硫、氮等元素有機 藥物。 氧瓶燃燒法：將有機藥物放入充滿氧氣的密閉燒瓶中進行燃燒,并將燃燒所產生的欲測物質（氣態(tài)）吸收于適當吸收液中,然后根據欲測物質的性質,采用適

4、當分析方法進行鑒別、檢查或含量測定。 特點 A 快速分解有機藥物的簡單方法。 B 不需復雜設備,能使有機結合中的待測元素定量地分解成無機離子狀態(tài)。 C 適用于含鹵素及硫、磷、硒等藥物的鑒別、檢查和含量測定,特別適用于微量樣品的測定?？招目招腁.燃燒瓶 B.鉑絲網 C.D.盛固體樣品濾紙及其折疊法 E.F.G.稱取液體樣品方法7mm50mm30mm尾部尾部7mm13mm20mm25mm35 6mm16 6mm濾紙濾紙濾紙濾紙AGFEDCB氧瓶燃燒裝置及稱樣方法氧瓶燃燒法含氟有機藥物 H2O pH4.3 HAc-NaAc Buffer 茜素氟 分光光度法含氯有機藥物 NaOH溶液 銀量法 汞量法

5、分光法含溴有機藥物 H2O2-NaOH液 或NaOH液- 銀量法 分光法 硫酸肼飽和液含碘有機藥物 NaOH液- 銀量法 碘量法 硫酸 樣品 吸收液 測定方法肼飽和液 汞量法 分光法碘苯酯含量測定碘苯酯含量測定 取本品約20mg，精密稱定，照氧瓶燃燒法進行有機破壞，用NaOH T.S. 2ml與H2O 10ml為吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液10 ml，密塞，振搖放置數分鐘，加甲酸約1ml，用水洗滌瓶口，并通入空氣流約35min，以除去剩余的溴蒸氣，加KI 2g，密塞，搖勻，用Na2S2O3液 (0.02mol/L)滴定，至近終點時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍色消失，并將滴定的結果用空白試

6、驗校正。每1ml的硫代硫酸鈉液(0.02mol/L)相當于1.388mg的C19H29IO22HIO3+10KI+10CH3COOH6I2I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6CH3HCICOOC2H5CH28第二節(jié) 藥物的含量測定一、重量分析法 稱取一定量的供試品，采用適當的方法將被測組分從試樣中與其他組分分離，將分離的物質轉化成一定的稱量形式后稱重，由稱重形式的重量計算被測組分含量的方法。 揮發(fā)法：利用被測組分具有揮發(fā)性或將其轉化為揮發(fā)性物質，稱取揮發(fā)前后供試品重量，計算被測組分含量。 萃取法：利用被測組分與其他組分在互不溶的兩種溶劑中分配系數不同，使被測組分從試樣中定量轉移至提取

7、溶劑中，然后將萃取液中溶劑揮干，稱取干燥物的重量，計算被測組分含量。 沉淀法：利用沉淀反應將被測組分以沉淀形式分離出來，并轉化為稱量形式，程定其重量，計算被測組分含量。 換算因數（重量因子）F：是指被測組分的摩爾質量與稱量形式的摩爾重量比。 F=a Mab Mb a、b為使待測組分存在形式與稱量形式中含有的待測元素原子數或分子數相等的最小公倍數。 Ma為供試品中待測組分的摩爾質量g/mol。 Mb為待測組分稱量形式的摩爾質量g/mol。含量（%）=W FW 100% 精密稱取熒光素鈉0.5013g，加水20ml溶解后，加稀鹽酸5ml使熒光素析出，用正丁醇-三氯甲烷（1:1）提取4次，每次20m

8、l，合并提取液，用水10ml洗滌，洗液再用異丁醇-三氯甲烷（1:1）5ml振搖提取，合并提取液，置105恒重的容器中，在水浴上通風蒸干，殘渣用乙醇10ml溶解后，再置水浴上蒸干，并在105 干燥至恒重，精密稱定，殘渣重量為0.4401g。已知熒光素鈉（C20H10Na2O5）的摩爾質量為376.28，計算熒光素鈉的百分含量。 二、容量分析法 系將一種已知準確濃度的滴定液（標準物質溶液）通過滴定管滴加到被測物質溶液中稱滴定。當滴入的滴定液中物質的量與被測物的物質的量正好符合滴定反應中的化學計量關系時，根據被消耗的滴定液的濃度和體積等有關數據計算被測物質的量。 1. 按化學反應類型 2. 按滴定方

9、式 酸堿滴定法 直接滴定 配位滴定法 剩余滴定 氧化還原滴定法 置換滴定 沉淀滴定法 間接滴定 滴定度：每1ml規(guī)定濃度的滴定液所相當的被測藥物的質量。 bC (mol/ml) 1mlT (mg) / M (mg/mol) C為滴定液摩爾濃度（mol/L或mmol/ml）a為被測藥物的摩爾數b為滴定液摩爾數M為被測藥物毫摩爾質量分子量 mg/mmol=aT= C abM 阿司匹林含量測定，用酸堿滴定法測定阿司匹林（M(C9H8O4)=180.16）氫氧化鈉滴定液摩爾濃度為0.1mol/L。 C9H8O4+NaOH C9H7O4Na+H2O 直接滴定法 含量（%）=100%V TWF=實際摩爾濃

10、度規(guī)定摩爾濃度含量（%）=V T W100% =V F T W100% 稱5取鹽酸奈福泮（C17H19NOHCl）0.1524g，加冰醋酸10ml，微溫使溶解，放冷，加5%醋酸汞溶液5ml與結晶紫指示液1滴，用0.0991mol/L的高氯酸滴定液滴定至溶液顯藍色，消耗高氯酸滴定液5.40ml，空白試驗消耗高氯酸滴定液0.15ml。已知每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當于28.98mg的C17H19NO HCl 。計算鹽酸奈福泮的百分含量。 剩余滴定法（回滴法） 先加過量滴定液A，反應完全后，再用另一滴定液B回滴剩余滴定液A。 空白試驗時消耗滴定液B的體積 樣品測定時消耗滴定液B的體積

11、 TA滴定液A的滴定度 W供試品稱取量含量（%）=100%（V0B-VsB）FB TAW 鹽酸去氧腎上腺素的含量測定。取本品約0.1g，精密稱定，置碘瓶中，加水20ml使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L），再加鹽酸5ml，立即密塞，放置15分鐘并時時振搖，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液10ml，立即密塞，振搖后，用硫代硫酸鈉（0.1mol/L）滴定，至近終點時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍色消失，并將滴定的結果用空白試驗校正。每1ml溴滴定液（0.05mol/L）相當于3.395mg的C9H13NO2HCl。 C9H13NO2+3Br2 C9H10Br3NO2+3HBr Br2+2KI 2K

12、Br+I2 I2+2Na2S2O3 2NaI+Na2S4O6二、藥品質量標準分析方法驗證藥品質量標準分析方法驗證方法驗證目的： 證明采用的方法適合于相應檢測要求。1 研究新藥時制定質量標準分析方法。2 藥物生產方法變更、制劑組分變更、原分析方法修訂。 需驗證的分析項目有:1 鑒別試驗。2 原料藥或制劑中有效成分含量測定。3 雜質或制劑中其他成分（防腐劑等）的定量測定或限度檢查。4 藥品溶出度、釋放度等功能檢查中,其溶出量的測定方法。 驗證的內容1.準確度 2.精密度3.專屬性 4.檢測限5.定量限 6.線性7.范圍 8.耐用性(1)準確度:定義：指用該方法測定的測量值與真實 值或參考值接近的程

13、度，以回收率表示。回收率= 原料藥 制劑測量值理論量100%(2)精密度：定 義: 同一均勻樣品多次測量值之間接近的程度。表 示：偏差，標準偏差(s)，相對標準偏差(RSD) 重復性: 同一實驗室,同一人用同一儀器多次測定的精密度。中間精密度: 同一實驗室，不同人，不同儀器測定的精密度。 重現性: 不同實驗室，不同人測定的精密度。(3)專屬性：指有其他成分（雜質、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能準確測定出被測物的特性)。(4)檢測限（limit of detection， LOD）： 藥物能被檢出的最低濃度(g/ml) 測 定: 信噪比法(5)定量限（1imit of quantitation，LOQ）： 藥物能被定量測出的最低濃度(g/ml)(6) 線性與范圍（linearity and range）： 待測物濃度與響應值成線性關系的濃度范圍 線性