細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)

1、哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心Liao Y L, Hu L Y, Tsai K W, et al. Transcriptional regulation of miR-196b by ETS2 in gastric cancer cellsJ. Carcinogenesis, 2012: bgs031. IF=5.266The polymerization and depolymerization of F-actin are essential for cell motility. To assess whether the observed arrangements of the

2、actin cytoskeleton could affect the migration of shETS2- or lenti-196b-treated AGS cells, we examined cellular actin structure with phalloidine staining. The F-actin positive membranep r o t r u s i o n s w e r e significantly increased in addition to the F-actin organization enhancement in the shET

3、S2- or lenti-196b-treated AGS cells細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)知識相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器使用細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞培養(yǎng)教學(xué)視頻哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心 細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)知識細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)知識哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心 一、概念：一、概念：細(xì)胞培養(yǎng)是指從器官、組織中分離出細(xì)胞并在體外模擬體內(nèi)生理環(huán)境在無菌、適當(dāng)?shù)臏囟群鸵欢ǖ臓I養(yǎng)條件下使之生長生存，維持結(jié)構(gòu)和功能的培養(yǎng)方法。（培養(yǎng)物是單個細(xì)胞或細(xì)胞群）哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心二、細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)及局限性二、細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)及局限性u優(yōu)點(diǎn)：u能長時間直接觀察活細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)和生命活動，應(yīng)用領(lǐng)域廣。u便于觀察、記錄

4、、攝影，直接觀察細(xì)胞變化。 u可供研究的細(xì)胞種類廣泛，從低等生物到高等動物，以及人類；從胚胎到成體；從正常組織到腫瘤細(xì)胞皆可。 u便于使用不同方法研究細(xì)胞。u培養(yǎng)細(xì)胞攜帶有與體內(nèi)細(xì)胞同等的基因組，是分子生物學(xué)和基因工程學(xué)的研究對象和組成部分。u可同時提供大量生物性狀相似的實(shí)驗(yàn)對象，耗資少。u易于施加物理、化學(xué)和生物因素進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 u生物制品、基因工程制品、單克隆抗體生產(chǎn)必要手段。 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心u局限性局限性： 組織和細(xì)胞離體以后，獨(dú)立生存在人工培養(yǎng)環(huán)境中，組織和細(xì)胞離體以后，獨(dú)立生存在人工培養(yǎng)環(huán)境中，與體內(nèi)環(huán)境相比，仍有很大差異。故實(shí)驗(yàn)結(jié)果與體內(nèi)環(huán)境相比，仍有很大差異

5、。故實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能推至體不能推至體內(nèi)內(nèi)，輕易做出與體內(nèi)等同的結(jié)論。，輕易做出與體內(nèi)等同的結(jié)論。哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心 三、細(xì)胞培養(yǎng)特性細(xì)胞培養(yǎng)特性（一）生長方式 根據(jù)是否附于支持物上生長的特性，分為貼附生長和懸浮生長。 1.貼附生長 是指細(xì)胞附著于支持物表面生長。貼壁生長的細(xì)胞從形態(tài)學(xué)上大體分為上皮細(xì)胞型和成纖維細(xì)胞型兩種哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心（1）成纖維型細(xì)胞u細(xì)胞體呈梭形或不規(guī)則三角形或者是扇形，中央 有卵圓形核，胞質(zhì)突起，其生長特點(diǎn)為不緊密相連，多呈放射狀，漩渦狀或欄柵狀。u成纖維細(xì)胞 、心肌、平滑肌、成骨細(xì)胞、骨髓基質(zhì)干細(xì)胞等 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科

6、研實(shí)驗(yàn)中心（2）上皮型細(xì)胞u扁平不規(guī)則多角形，中有圓形核，細(xì)胞緊密相連成單層膜。其生長特點(diǎn)為細(xì)胞緊密相連，呈“鋪路石”狀u消化管外皮細(xì)胞、肝、胰、肺泡上皮、血管內(nèi)皮等 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心（3）其他貼附型細(xì)胞 游走型細(xì)胞u在支持物上散在生長，一般不連接成片。細(xì)胞質(zhì)經(jīng)常伸出偽足或突起，呈活躍的游走或變形運(yùn)動，速度快而且不規(guī)則u神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心 多形型細(xì)胞u難以確定其規(guī)律和穩(wěn)定的形態(tài) u神經(jīng)組織細(xì)胞哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心2.懸浮生長 不需要支持物，而懸浮于培養(yǎng)基中生長，多呈圓形。一般多來自于血液、脾或骨髓細(xì)胞。 懸浮型u見于各種造

7、血系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞和血液細(xì)胞u胞體圓形，不貼于支持物上，呈懸浮生長u容易大量繁殖 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心（二）生長特性1、接觸抑制：細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)時，分散貼壁生長的細(xì)胞一旦相互匯合接觸，即停止移動和生長的現(xiàn)象。細(xì)胞增殖到一定程度,也就是互相挨在一起的時候,糖蛋白識別了這種信息,就會使細(xì)胞停止繼續(xù)繁殖,這種現(xiàn)象就叫做接觸抑制。（腫瘤細(xì)胞不受影響）2、密度抑制：細(xì)胞接觸匯合成片后，雖發(fā)生接觸抑制，只要營養(yǎng)充分，細(xì)胞仍然能夠進(jìn)行增殖分裂，因此細(xì)胞數(shù)量仍在增多。但當(dāng)細(xì)胞密度進(jìn)一步增大，培養(yǎng)液中營養(yǎng)成分減少，代謝產(chǎn)物增多時，細(xì)胞因營養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響，則發(fā)生密度抑制（Density I

8、nhibition），導(dǎo)致細(xì)胞分裂停止。（腫瘤細(xì)胞受影響）哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心四、細(xì)胞培養(yǎng)所需儀器設(shè)備及用品四、細(xì)胞培養(yǎng)所需儀器設(shè)備及用品（一）無菌操作環(huán)境（一）無菌操作環(huán)境1.無菌操作區(qū)：只限于細(xì)胞培養(yǎng)，獨(dú)立的區(qū)域或與外界隔離，備有紫外殺菌條件（主要用于培養(yǎng)室空氣、操作臺、塑料培養(yǎng)皿和培養(yǎng)板等表面消毒 ）；2.個人：無菌服、無菌室專用鞋，并且?guī)峡谡趾兔弊?；哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心（二）設(shè)備（二）設(shè)備1.超凈工作臺：為細(xì)胞操作提供無菌環(huán)境2.顯微鏡：倒置顯微鏡、熒光顯微鏡等；3.CO2培養(yǎng)箱； 4.干烤箱 5.高壓鍋6.純水器、離心機(jī)、液氮罐、天平等；哈爾濱醫(yī)

9、科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心（三）用品（三）用品1.濾器：細(xì)胞培養(yǎng)用的培養(yǎng)基、消化液中含有多種生物活性物質(zhì)，這些物質(zhì)在高溫和射線的照射下易失去功能，必須用濾器除菌；2.培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板、吸管、加樣器等。哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心五、細(xì)胞生長條件細(xì)胞生長條件（一）營養(yǎng)物質(zhì)（一）營養(yǎng)物質(zhì) 細(xì)胞生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)包括氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)離子以及各種促生長因子等。血清中含有多種細(xì)胞生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)。 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心 血清血清 血清可來自多種動物，目前用于組織培養(yǎng)的血清主要是牛血清，在培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也用人血清、馬血清等。 n小牛血清：小牛血清取自出生1

10、030天的小牛。n新牛血清：新牛血清取自出生24小時之內(nèi)的新生牛。n胎牛血清：胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛，胎牛血清是品質(zhì)最高的，因?yàn)樘ヅ＿€未接觸外界，血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對細(xì)胞有害的成分最少。哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心（二）生長環(huán)境（二）生長環(huán)境 a.溫度:哺乳動物細(xì)胞適宜溫度范圍35-37。 b.pH值：CO2是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物也是細(xì)胞生長的必要條件細(xì)胞培養(yǎng)箱中通入一定量的CO2（一般5%）可使培養(yǎng)箱中的PH值保持在7.2-7.4之間。 c.濕度：相對濕度100%。CO2培養(yǎng)箱中要放置水槽，用以防止培養(yǎng)瓶（皿）中液體蒸發(fā)。 d.環(huán)境清潔無污染 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)

11、中心（三）細(xì)胞培養(yǎng)所需的液體（三）細(xì)胞培養(yǎng)所需的液體 A 水：細(xì)胞培養(yǎng)所需純凈水包括蒸餾水和離子交換水兩種。 B 平衡鹽液：它是等滲液體，不含鈣鎂離子。用于沖洗細(xì)胞。包括：HanKs液，D-HanKs液及PBS液等。 C 消化液：u 胰蛋白酶液：一般濃度0.25%u EDTA液：常用濃度是0.02%u 胰酶-EDTA混合液：將上述兩種液體按1：1混合即可。 兩種消化液聯(lián)合使用可提高消化效率。哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心D 培養(yǎng)基：主要有天然和合成兩種：l天然培養(yǎng)基：包括生物體液和組織液等；l合成培養(yǎng)基：目前常用：IMEM、F12K、RPMl-l640、DMEM培養(yǎng)液等，它是由多種物質(zhì)

12、混合而制成的成品合成培養(yǎng)基，只能維持細(xì)胞不死，不能促進(jìn)細(xì)胞增殖生長，使用時需添加天然培養(yǎng)基，主要是牛血清 。根據(jù)細(xì)胞的種類選取不同的合成培養(yǎng)基。 ( (ATCCATCC//) )l其他：無血清培養(yǎng)基。哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心E 抗生素在離散細(xì)胞或培養(yǎng)細(xì)胞過程中，加入適量抗生素，可預(yù)放操作不慎而產(chǎn)生的污染。常用的有：l青霉素 100ug/mll鏈霉素 100ug/mll卡那霉素50ug/mll慶大霉素50ug/mll二性霉素2.5ug/ml等。 常配成1:100倍或1:200倍使用濃度的鹽溶液內(nèi)，分裝小瓶，冷凍

13、保存。使用前加入到培養(yǎng)液內(nèi)，每小瓶最好一次用完。 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心（一）無菌操作前準(zhǔn)備；（一）無菌操作前準(zhǔn)備；1 進(jìn)入無菌室前，應(yīng)洗手以保持清潔。在緩沖間換無菌室專用拖鞋和穿無菌服。2 將廢液桶放入超凈臺內(nèi)，然后將超凈臺的紫外燈打開，殺菌20-30分鐘，重復(fù)步驟1。3 培養(yǎng)基等液體最好恢復(fù)室溫，如是較難培養(yǎng)的細(xì)胞，在操作前液體一定要預(yù)溫。4 實(shí)驗(yàn)用品：做好計(jì)劃、按需領(lǐng)取并做好登記。注意：注意：紫外燈打開時，不要將培養(yǎng)基、消化液等放在室內(nèi)和 超凈臺內(nèi)。 六、細(xì)胞培養(yǎng)流程六、細(xì)胞培養(yǎng)流程 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心（二）細(xì)胞培養(yǎng)操作（二）細(xì)胞培養(yǎng)操作 1 操作時用

14、酒精棉擦手，裝液體的瓶子外面也要用酒精棉擦拭后再放在超凈臺內(nèi)。 2 物品擺放：酒精燈應(yīng)放在操作者的正前方，廢液桶和培養(yǎng)基等液體要放在酒精燈的兩側(cè)；并重新用酒精棉擦手。 3 用鑷子挾取吸管、瓶塞等物品時先要在酒精燈上過火。 4 培養(yǎng)基、PBS等，打開瓶塞后最好傾斜放置，培養(yǎng)瓶開口后盡可能放在酒精燈的附近。 5 打開或蓋上瓶塞時，瓶塞和瓶口都要在酒精燈上過火，燒瓶口時應(yīng)對著火焰燒瓶頸。蓋膠塞時應(yīng)用旋轉(zhuǎn)的方法，不要用鑷子壓膠塞的頂部，以免用力過大或受力不均打碎瓶子。哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心 6 吸管的使用：拿吸管用執(zhí)筆的方法，吸管在酒精燈上過火時間不要太長，以免造成培養(yǎng)基中的生物活性物

15、質(zhì)和消化液中酶活性失效。吸過液體的吸管不能再在酒精燈上過火。吸管操作要穩(wěn)，向培養(yǎng)瓶加液體時不要滴在瓶口或瓶外壁，以免造成污染。 7 如果培養(yǎng)兩種以上細(xì)胞時要分批操作，避免交叉污染； 8 從培養(yǎng)箱取出培養(yǎng)瓶時應(yīng)水平或瓶口上傾；往培養(yǎng)箱放培養(yǎng)瓶前，要檢查瓶壁外是否有液體，如有要用酒精棉擦去。 9 培養(yǎng)箱要輕開輕關(guān)。培養(yǎng)箱水槽內(nèi)水量要保持在總體積一半以上。哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心10.10.以原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)為例介紹培養(yǎng)過程以原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)為例介紹培養(yǎng)過程原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)：是指從組織中分離出細(xì)胞后在體外進(jìn)行的首次培養(yǎng)。l 原代培養(yǎng)的方法：組織塊法和酶消化法。l 原代培養(yǎng)的注意事項(xiàng)

16、： （1）原代培養(yǎng)時一定將組織中的血管和外膜等除干凈。 （2）組織塊法時，組織不應(yīng)過大一般剪成1mm3左右大小。然后將組織塊平鋪在培養(yǎng)皿上，先不要加培養(yǎng)液，放置15-30分鐘后加入少量液體，24小時后再補(bǔ)加培養(yǎng)液。 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心 （3）采用消化法時，要將組織塊剪成泥狀，不同組織要用不同的消化液，消化液濃度和消化時間也不相同，如果培養(yǎng)的不是成纖維細(xì)胞，要采用差速貼壁的方法去除成纖維細(xì)胞。 （4）原代培養(yǎng)的細(xì)胞需要進(jìn)一步純化。酶消化法，機(jī)械刮除法等。哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)是指原代培養(yǎng)的細(xì)胞增殖成單層后；或者是細(xì)胞鋪滿瓶底后；再或者是懸浮生長

17、的細(xì)胞增殖到一定程度后，我們將其稀釋，然后傳到新的培養(yǎng)瓶的過程。n貼壁生長的細(xì)胞用酶消化法傳代；n半貼壁細(xì)胞可直接吹打后分瓶；n懸浮生長細(xì)胞要先吹打再離心，然后將沉淀稀釋分瓶。哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心操作步驟：操作步驟：倒掉舊培養(yǎng)液用平衡鹽液（多用PBS）沖洗細(xì)胞后棄掉;加入消化液，要使消化液浸過細(xì)胞層面，然后棄掉;消化2-3分鐘（禁止放入培養(yǎng)箱）;鏡下觀察，當(dāng)細(xì)胞變圓變亮?xí)r應(yīng)終止消化。胰酶消化時可直接加含有血清的培養(yǎng)基吹打細(xì)胞后分瓶；如用EDTA消化需用Hanks液終止，混合液需先終止后離心然后分瓶;注意：注意： 無論是在培養(yǎng)瓶中還是在離心管中操作都要用吸管吹打細(xì)胞，使其成為單

18、個細(xì)胞懸液，然后均勻的分到兩個瓶中。哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心細(xì)胞培養(yǎng)中可能遇到的問題細(xì)胞培養(yǎng)中可能遇到的問題：1.細(xì)胞不貼壁或少貼壁2.細(xì)胞成團(tuán)或分散不均勻3.細(xì)胞生長緩慢4.培養(yǎng)瓶中出現(xiàn)殘?jiān)?.細(xì)胞污染（細(xì)菌、真菌等）哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心（三）無菌操作后（三）無菌操作后l無菌操作結(jié)束后，將廢液桶等物品取出，用酒精綿擦拭臺面并將臺內(nèi)物品擺放整齊，關(guān)閉通風(fēng)、照明，將臺內(nèi)紫外打開；l查看顯微鏡、離心機(jī)等設(shè)備電源是否關(guān)閉；l將掉到地面上的廢棄物撿起，如果有液體撒在地面上，要用清水擦拭。哈爾濱

19、醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心（四）無菌室清掃（四）無菌室清掃l依據(jù) 科研實(shí)驗(yàn)中心細(xì)胞培養(yǎng)間清潔規(guī)范進(jìn)行l(wèi)安排值日哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心七、細(xì)胞凍存與復(fù)蘇七、細(xì)胞凍存與復(fù)蘇（一）細(xì)胞凍存：1.細(xì)胞凍存時機(jī)：貼壁率為85%-95%的對數(shù)生長期細(xì)胞。2.凍存液：含有5%-7%二甲基亞砜的血清液3.凍存要求：凍存前一天換液；凍存液中細(xì)胞的終濃度以1-5x106/ml為宜；凍存時溫度應(yīng)逐漸降低；首次凍存時應(yīng)復(fù)蘇一支觀察其凍存效果。哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心（二）細(xì)胞復(fù)蘇二）細(xì)胞復(fù)蘇 細(xì)胞復(fù)蘇時應(yīng)在37水浴鍋中迅速融解，操作如下： u 準(zhǔn)備好培養(yǎng)液（預(yù)溫）和離心管u 將凍存

20、管從液氮中取出迅速放入純凈的37水中，待融解到還有黃豆粒大小冰塊時取出；u 將含有細(xì)胞的凍存管用酒精消毒后，將細(xì)胞懸液吸出放入離心管；u 加一管常溫的培養(yǎng)液混勻；u 800-1000轉(zhuǎn)/分離心，棄上清后加培養(yǎng)液，混合后移入培養(yǎng)瓶中。哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心細(xì)胞培養(yǎng)的核心原則是什么？ 無菌操作無菌操作哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器使用相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器使用哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心 天平的使用1.調(diào)水平：每天平開機(jī)前，應(yīng)觀察天平后部水平儀內(nèi)的水泡是否位于圓環(huán)的中央，否則通過天平的地腳螺栓調(diào)節(jié)，左旋升高，右旋下降。2.預(yù)熱：天平在初次接通電源或長時間斷電后開

21、機(jī)時，至少需要30分鐘的預(yù)熱時間。因此，實(shí)驗(yàn)室電子天平在通常情況下，不要經(jīng)常切斷電源。3.稱量：按下ON/OFF鍵, 接通顯示器;等待儀器自檢。當(dāng)顯示器顯示零時，自檢過程結(jié)束，天平可進(jìn)行稱量；放置稱量紙，按顯示屏兩側(cè)的Tare鍵去皮，待顯示器顯示零時，在稱量紙加所要稱量的試劑稱量。稱量完畢，按ON/OFF鍵, 關(guān)斷顯示器。相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器使用相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器使用哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 1.為正確使用天平，請您熟悉天平的幾種狀態(tài)：顯示器右上角顯示O：表示顯示器處于關(guān)斷狀態(tài)；顯示器左下角顯示O：表示儀器處于待機(jī)狀態(tài)，可進(jìn)行稱量；顯示器左上角出現(xiàn)菱形標(biāo)志：表示儀器的微處理器正

22、在執(zhí)行某個功能，此時不接受其他任務(wù)。2.天平在安裝時已經(jīng)過嚴(yán)格校準(zhǔn)，故不可輕易移動天平，否則校準(zhǔn)工作需重新進(jìn)行。3.嚴(yán)禁不使用稱量紙直接稱量！每次稱量后，請清潔天平，避免對天平造成污染而影響稱量精度，以及影響他人的工作。 相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器使用相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器使用哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心 使用方法使用方法 1. 以旋轉(zhuǎn)的方式把PH電極從保護(hù)帽中拔出，沖洗后定標(biāo)。2. 定標(biāo)后將PH電極用蒸餾水清洗后，將PH電極頭浸入待測樣品中（4cm）并用攪拌棒攪拌進(jìn)行測樣。3. 停幾分鐘讓PH電極讀數(shù)穩(wěn)定。4. 將顯示靜止在終點(diǎn)數(shù)值上讀取數(shù)據(jù)。5. 測量后，將電極用蒸餾水清洗，旋入保護(hù)帽中。相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器使

23、用相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器使用哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 1.每次使用前必須定標(biāo)：4.01 7.0 10.01 2.在將電極從一種溶液移入另一種溶液之前，用蒸餾水清洗電極。用紙巾將水吸干，切勿擦拭電極。3.小心使用電極，切勿將之用作攪拌棒。在拿放電極時，勿接觸電極膜。4.隨時留意電極保護(hù)液是否干涸，請通知儀器分析技術(shù)員填充。將灌有正確保護(hù)液的電極豎直放置。 5.做好使用登記。相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器使用相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器使用哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心使用方法使用方法 1、打開進(jìn)水壓力閥。 2、儀器顯示： PRE-OPERATEPRE-OPERATE狀態(tài)。 3、向下扳動操作手柄上的開關(guān)

24、，儀器顯示：18.2M.CM系統(tǒng) 即可開始工作。注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 1、隨時注意，進(jìn)水桶內(nèi)液面，避免 進(jìn)水管露出水面。 2、注意節(jié)約用水，不用時及時關(guān)閉 出水閥。相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器使用相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器使用哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心使用方法使用方法: :通電前首先在水箱中加入適量水，最好選用蒸餾水，切勿無水或水位低于電熱管、以防電熱管爆損。接通電源，打開開關(guān)設(shè)置溫度設(shè)置溫度按按SET鍵綠色數(shù)字閃動按“”“”鍵到所需溫度后按“”鍵到所需溫度后按按SET鍵確認(rèn)。注意事項(xiàng)注意事項(xiàng): :1.水浴鍋在使用時，必須可靠接地、水不可溢入控制箱內(nèi)以免發(fā)生危險(xiǎn)。2.必須按規(guī)定使用，切不可缺水，否則造成設(shè)備損壞。3

25、.使用時必須登記相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器使用相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器使用哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心使用方法：使用方法：1打開電源2. 調(diào)節(jié)所需風(fēng)速3. 使用的時候人坐于柜前，將玻璃門盡量放低，手通過門下伸進(jìn)柜內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。4. 使用后關(guān)閉電源相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器使用相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器使用哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心注意事項(xiàng)注意事項(xiàng): :n1 消毒期間嚴(yán)禁打開風(fēng)機(jī)，始終保持工作臺內(nèi)“死屏” 即無空氣對流效果。n2. 工作臺使用后即刻以75%酒精擦凈污漬；紫外燈消毒30分鐘后關(guān)機(jī)。n3.經(jīng)常用沙布沾上酒精將紫外線殺菌燈表面揩擦干凈，保持表面清潔，n以免影響紫外燈消毒效果。n4. 使用時必須登記相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器使用相關(guān)實(shí)

26、驗(yàn)儀器使用哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心l1準(zhǔn)備l1.1檢查離心腔體有無異物l1.2通電前應(yīng)檢查儀器電源線是否連接正常.l2.開機(jī)l設(shè)定參數(shù)：l1）按設(shè)定鍵“SET”l2）將離心參數(shù)輸入。按“” “”鍵后按確定鍵“ENTER”以示確認(rèn)。l3.運(yùn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器使用相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器使用哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)：1每次修改參數(shù)后，必須按一次“設(shè)定確認(rèn)”鍵，否則離心機(jī)將保持原有工作狀態(tài)，對設(shè)定的參數(shù)不予理睬。2把經(jīng)過平衡的樣本放入離心機(jī)，按運(yùn)行鍵“STARE”，離心機(jī)將自動運(yùn)行。3清理系統(tǒng)和關(guān)機(jī)4清理離心腔雜物，關(guān)閉電源。5.使用時必須登記。相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器使用相關(guān)實(shí)驗(yàn)

27、儀器使用哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心開機(jī)，接連電源。打開鏡體下端的電控開關(guān)。(1)準(zhǔn)備：將待觀察對象置于載物臺上。旋轉(zhuǎn)三孔轉(zhuǎn)換器，選擇較小的物鏡。觀察，并調(diào)節(jié)鉸鏈?zhǔn)诫p目目鏡，舒適為宜。 (2)調(diào)節(jié)光源：推拉調(diào)節(jié)鏡體下端的亮度至適宜。通過調(diào)節(jié)聚光鏡下面的光柵來調(diào)節(jié)光源的大小。 (3)調(diào)節(jié)像距：轉(zhuǎn)三孔轉(zhuǎn)換器，選擇合適倍數(shù)的物鏡;更換并選擇合適的目鏡;同時調(diào)節(jié)升降， 以消除或減小圖像周圍的光暈，提高了圖像的襯度。 (4)觀察：通過目鏡進(jìn)行觀察結(jié)果;調(diào)整載物臺，選擇觀察視野。(5)關(guān)機(jī)取下觀察對象，推拉光源亮度調(diào)節(jié)器至最暗。關(guān)閉鏡體下端的開關(guān)，并斷開電源。旋轉(zhuǎn)三孔轉(zhuǎn)換器，使物鏡鏡片置于載物臺

28、下側(cè)，防止灰塵的沉降。 相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器使用相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器使用哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心n1.所有鏡頭表面必須保持清潔，落在鏡頭表面的灰塵，可用吸耳球吹去，也可用軟毛刷輕輕的撣去掉。 n2.當(dāng)鏡頭表面沾有油污或指紋時，可用脫脂棉蘸少許無水乙醇和乙醚的混合液(3:7)輕輕擦拭。 n3.不能用有機(jī)溶液清擦其它部件表面，特別是塑料零件，可用軟布蘸少量中性洗滌劑清擦。 n4.在任何情況下操作人員不能用棉團(tuán)、干布塊或干鏡頭紙擦試鏡頭表面，否則會刮傷鏡頭表面，嚴(yán)重?fù)p壞鏡頭，也不要用水擦試鏡頭，這樣會在鏡頭表面殘留一些水跡，因而可能滋生霉菌，嚴(yán)重?fù)p壞顯微鏡。 n5.儀器工作的間歇期間，為了防止灰塵進(jìn)入

29、鏡筒或透鏡表面，可將目鏡留在鏡筒上，或蓋上防塵塞，或用防塵罩將儀器罩住。 n6.微鏡盡可能不移動，若需移動應(yīng)輕拿輕放，避免碰撞。 n7.不允許隨意拆卸儀器，特別是中間光學(xué)系統(tǒng)或重要的機(jī)械部件，以免降低儀器的使用性能。相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器使用相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器使用哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心注意事項(xiàng)：1.嚴(yán)格遵守操作要求2.在儀器使用記錄上簽字3.遇到問題及時與老師聯(lián)系哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器使用相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器使用細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心一、細(xì)胞計(jì)數(shù)一、細(xì)胞計(jì)數(shù) 細(xì)胞計(jì)數(shù)是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中的一項(xiàng)基本技術(shù)，在細(xì)胞轉(zhuǎn)染、生長曲線測定、腫瘤細(xì)胞遷

30、移實(shí)驗(yàn)、腫瘤細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)、抗腫瘤藥物的篩選等很多實(shí)驗(yàn)中都用到此項(xiàng)技術(shù)。分類分類：n細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法n電子細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)法。細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心（一）步驟（一）步驟1、制備細(xì)胞懸液：用胰酶消化貼壁細(xì)胞或直接收集懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞制成單個細(xì)胞懸液。2、加樣：用移液器吸取少許細(xì)胞懸液在計(jì)數(shù)板上蓋玻片的雙側(cè)加微量細(xì)胞懸液，加樣時不要溢出蓋玻片也不要溢到計(jì)數(shù)板的凹槽內(nèi)。加樣過程中不能產(chǎn)生氣泡。3、計(jì)數(shù)：在顯微鏡下，用10物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格中的細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞壓線時本著計(jì)左不計(jì)右、計(jì)上不計(jì)下的原則準(zhǔn)確的計(jì)數(shù)細(xì)胞。4、將計(jì)算結(jié)果代入公式得出細(xì)胞密度： 細(xì)胞數(shù)/毫升

31、原液=（4大格細(xì)胞數(shù)之和/4）104細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心（二）注意事項(xiàng)（二）注意事項(xiàng)1、細(xì)胞懸液中的細(xì)胞一定是單個的細(xì)胞。2、在加樣前一定將細(xì)胞懸液充分混勻。3、計(jì)數(shù)時，如遇上2個以上細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán)，應(yīng)按單個細(xì)胞計(jì)數(shù)。細(xì)胞團(tuán)的數(shù)量不應(yīng)超過計(jì)數(shù)細(xì)胞的10%。細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心二、細(xì)胞生長曲線二、細(xì)胞生長曲線（一）原理及應(yīng)用 細(xì)胞生長曲線是觀察細(xì)胞生長基本規(guī)律的重要方法。通過此實(shí)驗(yàn)我們除了能夠得到正常組織細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞的生長規(guī)律外，同時我們還應(yīng)用于體外藥物敏感性的測定以及多種抑癌基因的研究。常用方法有細(xì)

32、胞計(jì)數(shù)法和MTT法。（二）操作步驟（略）細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心（三）注意事項(xiàng)（三）注意事項(xiàng)1、細(xì)胞計(jì)數(shù)法一般用24孔板，MTT法用96孔板。2、加入的細(xì)胞總數(shù)和培養(yǎng)基的量都要一致。3、細(xì)胞計(jì)數(shù)要準(zhǔn)確，接種的數(shù)量要適中，以7天剛好長滿為宜。不能使細(xì)胞增殖緩慢，也不能使細(xì)胞產(chǎn)生生長抑制。一般情況下，24孔板每孔接種1萬2萬，設(shè)三個副孔分別計(jì)數(shù)，取平均值；96孔板每孔接種10002000個，要設(shè)兩個副孔。4、細(xì)胞計(jì)數(shù)法時，直接加1ml胰酶.5、根據(jù)時間和細(xì)胞數(shù)量的關(guān)系繪制曲線。注意：本實(shí)驗(yàn)有2030的誤差。為了數(shù)據(jù)準(zhǔn)確最好重復(fù)一次。細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞學(xué)相關(guān)

33、實(shí)驗(yàn)哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心三、克隆（集落）形成實(shí)驗(yàn)三、克?。洌┬纬蓪?shí)驗(yàn)（一）概念及應(yīng)用 克隆形成實(shí)驗(yàn)是測定單個細(xì)胞增殖能力的有效方法。所謂克隆是指單個細(xì)胞在體外持續(xù)增殖6代以上其后所形成的細(xì)胞群.通過計(jì)數(shù)克隆形成率可對受檢細(xì)胞的增殖潛力作定量分析。常用于抗腫瘤藥物敏感性測定、基因治療、腫瘤放射生物學(xué)等方面的研究。方法：平板克隆形成實(shí)驗(yàn)和軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心克隆形成率克隆形成率% =克隆數(shù)克隆數(shù) 接種細(xì)胞數(shù)接種細(xì)胞數(shù)100細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)（二）公式（二）公式哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心（三

34、）操作方法：（三）操作方法： 1.平板法:適用于貼壁生長的細(xì)胞（細(xì)胞生長快慢均可）。具體操作如下： 將受檢細(xì)胞經(jīng)胰酶消化制成單個細(xì)胞懸液-細(xì)胞計(jì)數(shù)-細(xì)胞按倍數(shù)稀釋接種于24孔板或6孔板中培養(yǎng)23周-終止培養(yǎng)PBS沖洗-吉姆薩液染色-計(jì)數(shù)克隆數(shù)。注意：（1）要根據(jù)細(xì)胞增殖能力設(shè)計(jì)梯度。一般每孔按50、100、200個細(xì)胞的梯度密度設(shè)計(jì)。（2）終止培養(yǎng)時間以不少于2周而且克隆之間不發(fā)生融合為標(biāo)準(zhǔn)。細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心2.瓊脂法：適用于懸浮生長的細(xì)胞以及繁殖較快的貼壁細(xì)胞。 具體操作如下：將1.2%的瓊脂與2培養(yǎng)基按1：1混合-6板中加1.5ml/孔成底

35、層瓊脂-徹底冷凝后-用培養(yǎng)基配成0.35瓊脂作為上層瓊脂且內(nèi)加細(xì)胞（200或400)-培養(yǎng)2周-計(jì)數(shù)克隆數(shù)。注意：（1）瓊脂法所用瓊脂應(yīng)為低熔點(diǎn)瓊脂。配好的瓊脂要放在水中預(yù)溫，下層瓊脂水溫在50-60度之間，上層瓊脂水溫不要超過42度；（2）應(yīng)使下層瓊脂充分凝固后,再澆上層瓊脂，以避免上層瓊脂培養(yǎng)基中的細(xì)胞進(jìn)入下層瓊脂中；（3）澆上層瓊脂時操作要迅速，以免液體過涼導(dǎo)致上下分離；（4）操作中不能產(chǎn)生氣泡。細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心四、基底膜侵襲實(shí)驗(yàn)四、基底膜侵襲實(shí)驗(yàn)Transwell小室法:1. Transwell1. Transwell小室法的特點(diǎn)及原理

36、小室法的特點(diǎn)及原理 Transwell小室其外形為一個可放置在孔板里的小杯子，孔徑大小有0.112.0m，根據(jù)不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜.將小室放入培養(yǎng)板中，小室內(nèi)稱上室，培養(yǎng)板內(nèi)稱下室，上室內(nèi)盛裝的培養(yǎng)液其血清濃度較低，下室內(nèi)盛裝的培養(yǎng)液其血清濃度較高，上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜相隔。我們將細(xì)胞種在上室內(nèi)，細(xì)胞會往高營養(yǎng)的培養(yǎng)液里面跑，但是有膜擋著，所以要穿過膜才行。我們在膜上涂上一層基質(zhì)膠，模仿細(xì)胞的基底膜，經(jīng)一定時期培養(yǎng)后，我們計(jì)數(shù)通過聚碳酸酯膜細(xì)胞的數(shù)量來判斷受檢細(xì)胞的侵襲能力。細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心2.2.實(shí)驗(yàn)步驟：實(shí)驗(yàn)步驟

37、：Transwell小室的準(zhǔn)備： 購買的小室有兩種，一種是已鋪好基質(zhì)膠的，買來就可以用很方便，但也比較貴；另一種要自己鋪膠（層黏連蛋白和型膠原 ），價(jià)格較便宜。（1）從-20冰箱中取出小室在超凈臺內(nèi)將其放入24孔板，室溫放置。（2）在24孔板和小室內(nèi)各加入500L預(yù)熱的無血清培養(yǎng)基，37孵箱中水化2h。（3）水化后，在超凈臺內(nèi)用移液器小心地將小室液體移出，不要碰到基底膜。細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心（4）將受檢細(xì)胞全培養(yǎng)基終止消化，細(xì)胞計(jì)數(shù)，將細(xì)胞稀釋到10萬/mL濃度備用（培養(yǎng)液含0.2-1%血清）。（5）在24孔板內(nèi)另一排孔中加入750L全培養(yǎng)基（培養(yǎng)

38、液含10-15%血清），將小室移入上孔中，注意小室膜下不要產(chǎn)生氣泡，如產(chǎn)生氣泡應(yīng)去除。（6）在小室內(nèi)加入500L以備細(xì)胞懸液（5萬個細(xì)胞/孔），每組細(xì)胞設(shè)3個復(fù)孔。吹打均勻，鏡下觀察。（7）37孵箱中，培養(yǎng)24h。（8）從24孔板中取出小室，去掉液體用棉簽蘸無血清培養(yǎng)基擦干凈膜的內(nèi)表面，去掉未發(fā)生侵襲的細(xì)胞。（9）膜在無水甲醇中固定1min，水洗2遍；蘇木素染色5min，水洗干凈（至無色）；伊紅染色20sec，水洗干凈。細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心（10）將膜完全晾干。（11）用手術(shù)刀將膜完整地切下，中性樹膠將膜粘到載玻片上，蓋上蓋玻片。（12）光鏡下觀察

39、，計(jì)數(shù)，拍照。細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心五、細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)五、細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)（一）簡述：1 1 原理：原理：是指通過不同的載體和不同的導(dǎo)入方法將外源基因送入細(xì)胞內(nèi)，并使其在細(xì)胞內(nèi)表達(dá) 。2 2 導(dǎo)入方法：導(dǎo)入方法：物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類。物理介導(dǎo)有電穿孔法、顯微注射和基因槍等；化學(xué)介導(dǎo)有磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)等；生物介導(dǎo)最常用是病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。 細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心3 轉(zhuǎn)染類型：轉(zhuǎn)染類型：瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（1）瞬時轉(zhuǎn)染是指外源基因進(jìn)入受體細(xì)胞后，存在于游離的載體上，不整合到細(xì)胞的染色體上，在外源基因?qū)爰?xì)胞1-4天后收獲細(xì)胞進(jìn)行分析。（2）穩(wěn)定轉(zhuǎn)染需要外源基因整合到細(xì)胞的染色體上，從而得到穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。 細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心（二）細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：