控制菌檢查用培養(yǎng)基適用性檢查操作規(guī)程

1、-作者xxxx-日期xxxx控制菌檢查用培養(yǎng)基適用性檢查操作規(guī)程【精品文檔】文件批準(zhǔn)表職責(zé)部門及職責(zé)姓名簽名日期起草部相關(guān)部門審核QA審核質(zhì)量管理部部門審核部批準(zhǔn)質(zhì)量負(fù)責(zé)人文件復(fù)審日期1目的 建立一個控制菌檢查用培養(yǎng)基檢查操作程序。2適用范圍 控制菌檢查中用的培養(yǎng)基。檢查項目包括培養(yǎng)基的促生長、指示和抑制特性能力。3發(fā)放范圍 質(zhì)量部4職責(zé)責(zé) 任 人職 責(zé)質(zhì)量部負(fù)責(zé)起草執(zhí)行該文件。5內(nèi)容5.1.1控制菌檢查用培養(yǎng)適用性檢查試驗用菌株。大腸埃希菌（Escherichia coli) CMCC(B0 44102金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) CMCC(B0 26003乙

2、型副傷寒沙門菌銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa) CMCC(B) 10104生孢梭菌(Clostridium sporgenes) CMCC(B) 64941白色念珠菌Candida albicans) CMCC(B) 980015.1.2將金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、沙門菌分別接種于胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中或在胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上，30-35培養(yǎng)18-24小時，將白色念珠菌接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上或沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，20-25培養(yǎng)2-3天，將生孢梭菌接捉于梭菌增菌培養(yǎng)基中置厭氧條件下30-35培養(yǎng)24-48小時或接種于硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基中3

3、0-35培養(yǎng)18-24小時。5.2.1液體培養(yǎng)基促生長能力檢查，取不大于100cfu的試驗菌分別接種于被檢查培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及不大于規(guī)定的最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)。增菌培養(yǎng)基多澄清液體培養(yǎng)基，與對照培養(yǎng)基比較，被檢查培養(yǎng)基中試驗菌應(yīng)生長良好，表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基渾濁。 固體培養(yǎng)基促生長能力檢查：取試驗菌液（含菌數(shù)不大于100cfu）分別涂布于被檢查培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基上，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及不大于規(guī)定的最短時間下培養(yǎng)，與對照培養(yǎng)基比較，被檢查培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基上生長的菌落大小、形態(tài)特征應(yīng)一致。若被檢查培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對照培養(yǎng)基上的菌落數(shù)的比值應(yīng)在50-

4、200%，且菌落形態(tài)、大小與對照培養(yǎng)基上的菌落 一致，則判斷該培養(yǎng)基的適用性檢查促生長能力符合規(guī)定。5.2.2培養(yǎng)基抑制能力檢查：取不少于100cfu的試驗菌分別接種于被檢查培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及不不小于規(guī)定的最長培養(yǎng)基時間下培養(yǎng)，試驗菌應(yīng)不得生長。5.2.3液體培養(yǎng)基指示能力檢查：取不大于100cfu的試驗菌分別接種于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及不大于規(guī)定的最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)。與對照培養(yǎng)基比較，被檢查培養(yǎng)基中試驗菌應(yīng)生長情況/指示劑反應(yīng)等應(yīng)與對照培養(yǎng)基一致。 固體培養(yǎng)基指示能力檢查：取試驗菌液（含菌數(shù)不大于100cfu）分別涂布于被

5、檢查培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基上，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及不大于規(guī)定的時間下培養(yǎng)，與對照培養(yǎng)基比較，被檢查培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基上生長的菌落大小、形態(tài)特征、菌落顏色及指示劑反應(yīng)等應(yīng)一致?？刂凭鷻z查涉及的14種培養(yǎng)基特點各異味，表中概述培養(yǎng)基檢查的具體項目，具體操作在其后說明。表1 控制菌檢查用培養(yǎng)基的促生長能力、抑制能力和指示特征控制菌的檢查培養(yǎng)基特征試驗菌株耐明鹽革蘭陰性菌腸道菌增菌液體培養(yǎng)基促生長能力大腸埃希菌、銅綠假單胞菌抑制能力金黃色葡萄球菌紫紅膽鹽葡萄糖 瓊脂培養(yǎng)基促生長能力+指示特征大腸埃希菌、銅綠假單胞菌大腸埃希菌麥凱康液體培養(yǎng)基促生長能力大腸埃希菌抑制能力金黃色葡萄球菌麥凱康瓊脂培

6、養(yǎng)基促生長能力+指示特征大腸埃希菌RV沙門菌增菌液體培養(yǎng)基促生長能力乙型副傷寒沙門菌抑制能力金黃色葡萄球菌木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基促生長能力+指示特性乙型 副傷寒沙門菌三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基指示能力乙型 副傷寒沙門菌溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基促生長能力銅綠假單胞菌抑制能力大腸埃希菌甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基促生長能力+指示特性金黃色葡萄球菌抑制能力大腸埃希菌梭菌增菌培養(yǎng)基促生長能力生孢梭菌哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基促生長能力生孢梭菌沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基促生長能力白色念珠菌沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基促生長能力+指示特性白色念珠菌念珠菌顯色培養(yǎng)基促生長能力+指示能力白色念珠菌抑制能力大腸埃希菌5.4控制菌培養(yǎng)基適

7、用性檢查的具體操作過程：5.4.6木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基：新鮮配制對照木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基，121滅菌15分鐘，備用。取含沙門菌的RV沙門增菌液體培養(yǎng)物劃線接種于木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基平板上30-35培養(yǎng)18-48小時，被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)18小時，被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落 一致，培養(yǎng)48小時，空白平板和接種金黃色葡萄球菌的平板應(yīng)不得生長。5.4.7三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基 新鮮配制對照三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基，121滅菌15分鐘，制成高底層（2-3cm）短斜面，備用，用接種針挑取在木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基平板上生長的疑似菌落于三糖鐵瓊脂培養(yǎng)

8、基高層斜面上進行斜面和高層穿刺接種，培養(yǎng)18-24小時，被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)18小時，被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色與對照培養(yǎng)基上的菌落一致;培養(yǎng)24小時，空白平板應(yīng)無菌落生長。5.4.8溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基 新鮮配制對照溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基，121滅菌15分鐘，備用。冷卻至60傾注平皿，35培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)8小時后備用。取7個無菌瓊脂平板，分別涂布接種銅綠假單胞菌和大腸埃希菌各3 皿，接種菌液0.1ml（含 菌50-100cfu），另一平板不接種菌作為空白對照 ，涂布均勻后于規(guī)定溫度30-35倒置培養(yǎng)18-72小時，被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)18小時，被檢培養(yǎng)基菌落大小、形

9、態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落 一致，培養(yǎng)72小時，空白平板和接種大腸埃希菌的平板應(yīng)無菌落生長。5.4.9甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基 新鮮配制對照甘露醇氯化鈉瓊脂培基，121滅菌15分鐘，冷卻至60冷卻至60傾注平皿，35培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)8小時后備用。取5個無菌瓊脂平板，分別涂布接種金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌各2 皿，接種菌液0.1ml（含 菌50-100cfu），另一平板不接種菌作為空白對照 ，涂布均勻后于規(guī)定溫度30-35倒置培養(yǎng)18-72小時，被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)18小時，被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落 一致，培養(yǎng)72小時，空白平板和接種大腸埃希菌的平板應(yīng)無菌落

10、生長。5.4.10梭菌增菌培養(yǎng)基 新鮮配制對照梭菌增菌培養(yǎng)基2瓶，121滅菌15分鐘，備用，接種生孢梭菌1瓶，接種菌液1ml(不大于100cfu),另一瓶不接種菌株作為空白對照，置規(guī)定溫度30-35厭氧條件下培養(yǎng)48小時，檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)48小時，空白培養(yǎng)瓶應(yīng)不得渾濁，與對照培養(yǎng)基比較，被檢培養(yǎng)基中試驗菌應(yīng)生長良好，表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變渾濁。5.4.11哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基 新鮮配制對照哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基，121滅菌15分鐘，冷卻至60傾注平皿，35培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)8小時后備用。取3個哥倫比亞瓊脂平板，涂布接種生孢梭菌各2 皿，接種菌液0.1ml（含 菌50-100cfu），另一平板不接種菌作為

11、空白對照 ，涂布均勻后于規(guī)定溫度30-35的厭氧條件倒置培養(yǎng)48-72小時，被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)48小時，被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落 一致，培養(yǎng)72小時，空白平板和接種大腸埃希菌的平板應(yīng)無菌落生長。 哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基營養(yǎng)豐富 ，適宜多數(shù)需氧菌的生長，為了消除其它雜菌生長對檢查結(jié)果的影響，可在每升滅菌后培養(yǎng)基中按無菌操作添加含有相當(dāng)于20mg慶大霉素的硫酸慶大霉素。添加慶大霉素的哥倫比亞瓊脂可參照 上述方法進行培養(yǎng)基適用性考察。5.4.12沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基 新鮮配制對照 沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基2瓶，21滅菌15分鐘，備用，接種白色念珠菌1瓶，接種菌液1ml(

12、不大于100cfu),另一瓶不接種菌株作為空白對照，置規(guī)定溫度30-35培養(yǎng)3-5天，檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)3天，與對照培養(yǎng)基比較，被檢培養(yǎng)基中試驗菌應(yīng)生長良好，表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變渾濁。培養(yǎng)5天，空白培養(yǎng)瓶和接種大腸埃希菌的培養(yǎng)瓶應(yīng)不得渾濁。5.4.13沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 新鮮配制對照沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，121滅菌15分鐘，冷卻至60傾注平皿，35培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)8小時后備用。取3個沙氏葡萄糖瓊脂平板，涂布接種白色念珠菌各2 皿，接種菌液0.1ml（含 菌50-100cfu），另一平板不接種菌作為空白對照 ，涂布均勻后于規(guī)定溫度30-35倒置培養(yǎng)24-48小時，被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)24小時，被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征、顏色及氣味應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落 一致，培養(yǎng)48小時，空白平板和接種大腸埃希菌的平板應(yīng)無菌落生長。5.4.14念珠菌顯色培養(yǎng)基 新鮮配制對照念珠菌顯色培養(yǎng)基，加熱充分溶解，冷卻至60傾注平皿，35培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)8小時后備用。念珠菌顯色平板使用前避光保存，取5個無菌念珠菌顯色平板，分別涂布接種白色念珠菌和大腸埃希菌各2 皿，接種菌液0.1ml（含 菌50-100cfu），另一平板不接種菌作為空白對照 ，涂布均勻后于