高倍顯微鏡觀察葉綠體與線粒體

1、高倍顯微鏡觀察葉綠體和線粒體實驗方案設(shè)計 學(xué) 院 生命科學(xué)學(xué)院 專 業(yè) 生物科學(xué)（師范） 年 級 2009級 5班 小 組 成 員 2011年12月18日一、實驗背景資料（一）主要背景本實驗來源于新人教版普通高中課程標(biāo)準(zhǔn)實驗教材必修1第三章第二節(jié)細(xì)胞器中的實驗用高倍顯微鏡觀察葉綠體和線粒體。中學(xué)生物學(xué)中與本實驗相關(guān)的理論知識主要有必修1中第三章細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)內(nèi)容部分關(guān)于葉綠體和線粒體的介紹，同時在后面的第四章、第五章還分別有關(guān)于細(xì)胞的呼吸作用和植物細(xì)胞光合作用的介紹以及必修3中關(guān)于生態(tài)系統(tǒng)的介紹等，這些知識與本實驗都有一定的聯(lián)系。其中重點是在“細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器的分工”中談到葉綠體是植物細(xì)胞的“養(yǎng)料

2、制造車間”和“能量轉(zhuǎn)換站”，線粒體是細(xì)胞的動力車間，植物細(xì)胞生命活動所需的能量，大約有95都是來自線粒體。同時關(guān)于本部分內(nèi)容在課堂上老師還可以對葉綠體和線粒體的基本結(jié)構(gòu)、形狀和功能做一些補充，如高等植物中葉綠體具有雙層膜結(jié)構(gòu)，兩膜間沒有聯(lián)系。在葉綠體內(nèi)部存在復(fù)雜的層膜結(jié)構(gòu)，它懸浮于基質(zhì)中，這些層膜叫做類囊體。類囊體也是雙層膜結(jié)構(gòu)，它通常又由幾十個垛疊在一起而構(gòu)成基粒，類囊體膜上有光合作用的色素。在綠色植物和藻類中普遍存在的葉綠體是光合作用場所。同時葉綠體也有自己特有的雙鏈環(huán)狀DNA，核糖體和進行蛋白質(zhì)生物合成的酶，能合成出一部分自己所必需的蛋白質(zhì)，因此科學(xué)家認(rèn)為葉綠體是一種半自主性的細(xì)胞器。另

3、外葉綠體是綠色植物進行光合作用的細(xì)胞含有的細(xì)胞器，所以認(rèn)為葉綠體是植物細(xì)胞的“養(yǎng)料制造車間”和“能量轉(zhuǎn)換站”。而對于線粒體也需要適當(dāng)?shù)淖鲆恍┙榻B，主要包括線粒體由兩層膜包被，外膜平滑，內(nèi)膜向內(nèi)折疊形成嵴，為酶提供更多的粘附位點，兩層膜之間有腔，線粒體中央是基質(zhì)。在基質(zhì)內(nèi)含有有氧呼吸作用的全部酶類，線粒體能為細(xì)胞的生命活動提供場所，是細(xì)胞內(nèi)有氧呼吸和形成ATP的主要場所，所以將其稱為細(xì)胞的“動力工廠”。另外，線粒體有自身的DNA和遺傳體系，因此，科學(xué)家線粒體也是一種半自主性的細(xì)胞器。另外，在初中的時候?qū)W生已經(jīng)接觸過顯微鏡，知道它的一般使用方法，在之前的實驗脂肪的鑒定中也使用過顯微鏡，學(xué)生對顯微鏡

4、的使用有一些基礎(chǔ)，但高倍鏡的使用可能不太熟練，這節(jié)課著重于高倍鏡的使用方法。課程標(biāo)準(zhǔn)對本實驗相關(guān)內(nèi)容的要求如下：1、使用高倍顯微鏡觀察葉綠體、線粒體的形態(tài)和分布。2、掌握高倍鏡的使用方法和臨時裝片的制作方法，能在觀察實驗中發(fā)現(xiàn)問題和提出問題，接受科學(xué)方法的訓(xùn)練，培養(yǎng)學(xué)生動手能力以及加強學(xué)生對細(xì)胞微觀結(jié)構(gòu)的認(rèn)識。3、實驗過程中，還能培養(yǎng)學(xué)生團隊精神。其中主要涉及到學(xué)生如何正確的使用光學(xué)顯微鏡以及如何制作臨時裝片和在實驗操作中的團隊合作三方面內(nèi)容。同時還對學(xué)生的生物學(xué)興趣培養(yǎng)做了一定的要求。本實驗的目的和意義主要讓學(xué)生學(xué)會生物學(xué)中的一些基本操作，培養(yǎng)學(xué)生動手操作能力以及養(yǎng)成生物科學(xué)的一些基本素養(yǎng)，

5、如顯微鏡的使用，如何觀察植物細(xì)胞內(nèi)的一些結(jié)構(gòu)以及臨時裝片的制作等。同時通過本實驗也能學(xué)生了解到團隊合作的重要。另外在本試驗中通過對葉綠體的胞質(zhì)環(huán)流等現(xiàn)象的觀察，還能激起學(xué)生對生物學(xué)知識學(xué)習(xí)的興趣愛好。本實驗是在學(xué)生學(xué)習(xí)葉綠體、線粒體等相關(guān)知識進行的，便于學(xué)生對前面學(xué)生知識的理解。同時葉綠體、線粒體是生物細(xì)胞的重要細(xì)胞器，與生物的多種生命活動有關(guān)，對它們的學(xué)習(xí)便于學(xué)生對這些生命現(xiàn)象的理解。另外本實驗的學(xué)習(xí)還為后面章節(jié)細(xì)胞物質(zhì)的輸入和輸出、光合作用等相關(guān)內(nèi)容的學(xué)習(xí)打下了基礎(chǔ)。而在本章節(jié)細(xì)胞質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能中主要講述細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)和細(xì)胞器兩方面的內(nèi)容，關(guān)于細(xì)胞器的內(nèi)容，則是重點講述線粒體和葉綠體這兩種細(xì)胞

6、器，主要說明這兩種細(xì)胞器在動植物體中存在的部位、在細(xì)胞內(nèi)的分布、基本結(jié)構(gòu)和主要功能。此外，還簡要講述了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體、高爾基體、中心體和液泡這5種細(xì)胞器，從而可以看出本實驗內(nèi)容在本章中的重要性。另外本實驗是高中生物課程的第三個大實驗，是繼“觀察DNA和RNA在細(xì)胞中的分布”實驗后又一個觀察生物細(xì)胞中結(jié)構(gòu)物質(zhì)的實驗，體現(xiàn)生物學(xué)作為一門實驗科學(xué)，學(xué)會觀察的重要性，同時也可以看出本實驗的重要性。 在開展本實驗時常見的難題或疑問主要有以下方面：1、學(xué)生對顯微鏡的使用可能存在一定的問題（由于一些學(xué)生在初中時還少有機會接觸到顯微鏡，雖然在前兩次試驗中學(xué)生也使用到了顯微鏡，但對顯微鏡的操作需要有一定的經(jīng)驗才

7、能熟練地掌握，所以在本次試驗中顯微鏡的熟練使用仍是一個難題）；2、實驗的選材（要注意所選材料的必須含有大多的葉綠體，這就提高了選材的難度。同時針對線粒體的選材，因為其在所有真核生物都存在，且主要存在在生長比較旺盛的部位，所以可以思考除了用人口腔上皮細(xì)胞外，是否還有更好更方便的材料。）；3、對于線粒體的觀察，除了用健那綠染色外，是否還有其他的更好的染料；4、如何使本實驗成功觀察實驗結(jié)果以及實驗過程中的一些細(xì)節(jié)問題，如葉綠體的觀察注意保水，線粒體的觀察注意染色程度等；5、本實驗的觀察可否用其他方式替代，比如直接進行葉綠體、線粒體模型的制作，在進行模擬實驗。6、實驗的延伸、拓展，除了讓學(xué)生學(xué)會在實驗

8、課需要掌握的東西外，是否還可以給他們其他一些啟示和引導(dǎo)，比如如何對活細(xì)胞中其他的一些結(jié)構(gòu)進行觀察等。（二）相關(guān)知識補充1、葉綠體（1）葉綠體的結(jié)構(gòu) 葉綠體是綠色植物細(xì)胞內(nèi)進行光合作用的結(jié)構(gòu)，是一種質(zhì)體。質(zhì)體有圓形、卵圓形或盤形3種形態(tài)。葉綠體含有葉綠素a、b而呈綠色，容易區(qū)別於另類兩類質(zhì)體無色的白色體和黃色到紅色的有色體。葉綠素a、b的功能是吸收光能，通過光合作用將光能轉(zhuǎn)變成化學(xué)能。葉綠體扁球狀，厚約2.5微米，直徑約5微米。具雙層膜，內(nèi)有間質(zhì)，間質(zhì)中含呈溶解狀態(tài)的酶和片層。片層由閉合的中空盤狀的類囊體垛堆而成，類囊體是形成高能化合物三磷酸腺苷(ATP)所必需。圖一：葉綠體結(jié)構(gòu)（2）葉綠體的由

9、來1880年，法國植物學(xué)家、植物葉綠體的發(fā)現(xiàn)者席姆佩爾證明淀粉是植物光合作用的產(chǎn)物。1883年，他經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)淀粉只在植物細(xì)胞的特定部位形成，并將其命名為葉綠體。（3）葉綠體與光合作用 葉綠體(chloroplast)是植物細(xì)胞所特有的能量轉(zhuǎn)換細(xì)胞器，其功能是進行光合作用， 即利用光能同化二氧化碳和水，生成糖，同時產(chǎn)生分子氧。起作用圖如下：圖二：光合作用過程圖（c3植物）2、線粒體（1）線粒體的結(jié)構(gòu)線粒體是由兩層單位膜套疊而成的封閉囊狀結(jié)構(gòu)。主要由外膜、內(nèi)膜、膜間隙和基質(zhì)4部分組成。外膜平滑，內(nèi)膜向內(nèi)折疊形成嵴，兩層膜之間即為膜間隙，線粒體中央是基質(zhì)。其結(jié)構(gòu)如下：嵴間隙(內(nèi)室) (外室) 圖三：

10、線 粒體結(jié)構(gòu)圖（2）線粒體的發(fā)現(xiàn)1980年，德國科學(xué)家Altmann首先在光學(xué)顯微鏡下觀察到動物細(xì)胞內(nèi)存在著一種顆粒狀的結(jié)構(gòu)，稱做生命小體（bioblast）。1987年Benda重復(fù)了以上實驗，并將之命名為線粒體（mitochondria）。1904年Meves在植物細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)了線粒體，從而確認(rèn)線粒體是普遍存在于真核生物所有細(xì)胞中的一種重要細(xì)胞器。（3）線粒體與呼吸作用 生物體內(nèi)的有機物在細(xì)胞內(nèi)經(jīng)過一系列的氧化分解，最終生成二氧化碳或其他產(chǎn)物，并且釋放出能量的總過程，叫做呼吸作用。它包括有氧呼吸和無氧呼吸，其中有氧呼吸是指細(xì)胞在氧的參與下，通過酶的催化作用，把糖類等有機物徹底氧化分解，產(chǎn)生

11、出二氧化碳和水，同時釋放出大量能量的過程。它是高等動物和植物進行呼吸作用的主要形式，細(xì)胞進行有氧呼吸的主要場所是線粒體。其過程如下圖：圖四：呼吸作用過程圖（有氧呼吸）2、 實驗原理（一）主要原理1、葉綠體的觀察植物綠色部位的細(xì)胞中含有葉綠體。如果將葉片的橫切片制成臨時裝片，就可以在顯微鏡下觀察到葉綠體。某些植物幼嫩的葉也可直接用于觀察葉綠體。2、線粒體的觀察線粒體是細(xì)胞進行有氧呼吸的主要場所，內(nèi)含細(xì)胞色素氧化酶系。健那綠是一種堿性染料,可以專一性地對線粒體進行染色。與線粒體內(nèi)的細(xì)胞色素氧化酶系發(fā)生作用時，染料始終保持氧化狀態(tài),呈藍綠色;而線粒體周圍的細(xì)胞質(zhì)中的染料被還原為無色的狀態(tài)。通過染色可

12、以在高倍顯微鏡下觀察到呈現(xiàn)藍綠色的線粒體。（二）知識介紹1、光學(xué)顯微鏡（1）顯微鏡的介紹顯微鏡是由一個透鏡或幾個透鏡的組合構(gòu)成的一種光學(xué)儀器，是人類進入原子時代的標(biāo)志。主要用于放大微小物體成為人的肉眼所能看到的儀器。顯微鏡分光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡：光學(xué)顯微鏡是在1590年由荷蘭的楊森父子所首創(chuàng)?，F(xiàn)在的光學(xué)顯微鏡可把物體放大1600倍，分辨的最小極限達0.1微米。在本次試驗中我們將使用到光學(xué)顯微鏡，它通常由光學(xué)部分、照明部分和機械三部分組成，它的具體構(gòu)造如下圖：圖五：光學(xué)顯微鏡構(gòu)造圖（2）顯微鏡的使用方法a.對光： (a)將低倍鏡轉(zhuǎn)至鏡筒下方與鏡筒成一直線。 (b)撥動反光鏡，調(diào)節(jié)至視野最亮無陰

13、影。反光鏡有平、凹兩面，光源強時用平面，較暗時用凹面，需要強光時，將聚光器提高，光圈放大；需要弱光時，將聚光器降低，或光圈適當(dāng)縮小。 (c)將待觀察的標(biāo)本置載物臺上，轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器使鏡筒下降至接物鏡接近標(biāo)本。于轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器的同時，須俯身在鏡旁仔細(xì)觀察接物鏡與標(biāo)本之間的距離。 (d)左眼于接目鏡觀察，同時左手轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)，使鏡筒徐徐上升以調(diào)節(jié)焦距，使視野內(nèi)的物象看到上時即停，再調(diào)微調(diào)節(jié)器，至標(biāo)本清晰為止。 b.接物鏡的使用及光線的調(diào)節(jié)：顯微鏡一般具有三個接物鏡，即低倍、高倍及油鏡，固定于接物鏡轉(zhuǎn)換盤孔中。觀察標(biāo)本時，先使用低倍接物鏡，此時，視野較大，標(biāo)本較易查出，但放大倍數(shù)較?。ㄒ话惴糯?00倍），

14、較小的物體不易觀察其結(jié)構(gòu)。高倍接物鏡放大的倍數(shù)較大（一般放大400倍），能觀察微小的物體或結(jié)構(gòu)。寄生蟲的蠕蟲卵，微絲蚴，原蟲的滋養(yǎng)體及包囊，昆蟲的幼蟲，均使用低、高倍鏡。組織細(xì)胞內(nèi)的原蟲，則使用油鏡。使用低、高倍鏡觀察，如在低倍鏡下不能準(zhǔn)確鑒定所見的物體或其內(nèi)部構(gòu)造時，則轉(zhuǎn)高倍鏡觀察。使用油鏡觀察，一般加一滴油后直接將油鏡頭浸入油滴中進行鏡檢觀察。 c.低倍、高倍、油鏡頭的識別： (a)標(biāo)明放大倍數(shù)10，40，100，或10/0.25，40/0.65，100/1.30。 (b)低倍鏡最短，高倍鏡較長，油鏡最長。 (c)鏡頭前面的鏡孔低倍鏡最大，高倍鏡較大，油鏡最小。 (d)油鏡頭上?？逃泻谏h(huán)

15、圈，或“油”字。 d.低倍鏡換高倍鏡的使用方法： (a)光線對好后，移動推進器尋找需要觀察的標(biāo)本。 (b)如標(biāo)本的體積較大，不能清楚查見其構(gòu)造因而不能確認(rèn)時，則將標(biāo)本移至視野中央，再旋轉(zhuǎn)高倍接物鏡于鏡筒下方。 (c)旋轉(zhuǎn)微調(diào)節(jié)器至物象清晰為止。 (d)調(diào)節(jié)聚光器及光圈，使視野內(nèi)的物象達到最清晰的程度。 2、健那綠 健那綠，即Janus green B 染液，原來也曾譯為詹納斯綠 B，常用作線粒體專一性活體染色劑。 中文別名健那綠 、詹納斯綠、雙氮嗪綠、 蘇鐵木精，英圖六：健那綠文別名為Janus green，Diazine green，Diazine green S 。分子式C30H31ClN

16、6 分子量511.07。其原理為線粒體中細(xì)胞色素氧化酶使染料保持氧化狀態(tài)(即有色狀態(tài))呈藍綠色,而在周圍的細(xì)胞質(zhì)中染料被還原，成為無色狀態(tài)。配方見實驗藥品介紹，其主要用途為專一性線粒體的活細(xì)胞染料，可使線粒體呈現(xiàn)藍綠色，而細(xì)胞質(zhì)接近無色，以在高倍顯微鏡下觀察線粒體分布和形態(tài)。3.黑藻圖七：黑藻黑藻俗稱溫絲草、燈籠薇、轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)薇等，屬水鱉科、黑藻屬單子葉多年生沉水植物。莖圓柱形，表面具有縱向細(xì)棱紋，質(zhì)較脆。休眠芽長卵圓形；苞葉多數(shù)，螺旋狀緊密排列，白色或淡黃綠色，狹披針形至披針形。葉38片輪生，常具紫紅色或黑色小斑點，先端銳尖，邊緣鋸齒明顯，無柄，具腋生小鱗片；主脈1 條，明顯。花單性，雌雄同株或異

17、株腋生無柄雄佛焰苞近球形，綠色，表面具明顯的縱棱紋，頂端具刺凸；雄花萼片、花瓣各3片，白色。果實圓柱形，表面常有29個刺狀凸起。種子26粒，褐色，兩端尖。花果期510月。黑藻莖直立細(xì)長，長50-80厘米，葉帶狀披針形，4-8片輪生，通常以4-6片為多，長1.5厘米左右，寬約1.5-2cm。葉緣具小鋸齒，葉無柄。廣布于池塘、湖泊和水溝中。在中國南北各省及歐、亞、非和大洋洲等廣大地區(qū)均有分布。黑藻喜陽光充足的環(huán)境。環(huán)境蔭蔽植株生長受阻，新葉葉色變淡，老葉逐漸死亡。最好讓它每天接受23個小時的散射日光。性喜溫暖，耐寒，在1530的溫度范圍內(nèi)生長良好，越冬不低于 4。適宜淺水綠化、室內(nèi)水體綠化，作水下

18、植被，可盆栽、缸栽，是裝飾水族箱的良好材料，常作為中景、背景使用。是良好的沉水觀賞植物。3、 實驗材料及器具（一）材料：1、新鮮的黑藻的葉選材原因：黑藻葉片細(xì)胞層少，嫩葉只有一層細(xì)胞，便于觀察葉綠體的形態(tài)和分布，黑藻比較常見，便于取材。選材時注意選擇新鮮的富含葉綠體的嫩葉。實驗前用清水浸泡即可。2、人口腔上皮細(xì)胞選材原因：真核細(xì)胞內(nèi)一般都存在線粒體，選用人的口腔細(xì)胞一是方便，能引起同學(xué)的興趣，而是排除植物細(xì)胞葉綠體的干擾。取材時只用牙簽輕輕刮下口腔內(nèi)壁，注意不要刮破。（2） 實驗藥品 1、新配制的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的健那綠染液，（1）選材原因：健那綠染液是專一性染線粒體的活細(xì)胞染料，線粒體中細(xì)胞色

19、素氧化酶使染料保持氧化狀態(tài)(即有色狀態(tài))呈藍綠色，而在周圍的細(xì)胞質(zhì)中染料被還原，成為無色狀態(tài)。線粒體能在健那綠染液中維持活性數(shù)小時，通過染色，可以在高倍顯微鏡下觀察到生活狀態(tài)的線粒體的形態(tài)和分布。（2）配置方法：取健那綠0.5g+生理鹽水50ml，加熱到3040，使其充分溶解。注：此染液宜新鮮配置，以保持被氧化的能力。2、蒸餾水（葉綠體觀察時濕潤作用）3、生理鹽水（保持口腔上皮細(xì)胞的活性）（三）實驗儀器1、 主要器具光學(xué)顯微鏡（用于葉綠體、線粒體顯微觀察）；載玻片、蓋玻片（含葉綠體、線粒體材料臨時裝片制作）；滴管、鑷子、吸水紙（濕潤葉綠體材料、材料的撕取、臨時裝片制作后的吸水等）；消毒的牙簽（

20、刮取人的口腔上皮細(xì)胞）。2、光學(xué)顯微鏡的成像原理：（1）物體位于物鏡前方，離開物鏡的距離大于物鏡的焦距，但小于兩倍物鏡焦距。所以，它經(jīng)物鏡以后，必然形成一個倒立的放大的實像AB。 AB靠近F2的位置上。再經(jīng)目鏡放大為虛像AB后供眼睛觀察。眼睛通過目鏡所看到的不是物體本身，而是物體被物鏡所成的已經(jīng)放大了一次的像。 圖八：光學(xué)顯微鏡成像原理圖（2）高倍顯微鏡的使用方法：a.低倍鏡下，把物象移至視野中央。b.轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器更換高倍物鏡。c.調(diào)整光源或遮光器使視野亮度適宜。d.再轉(zhuǎn)動細(xì)準(zhǔn)焦螺旋至標(biāo)本物象清晰為止。注：視野中物像與標(biāo)本移動的關(guān)系：如視野中某觀察對象位于左下方如何移到中央，應(yīng)將裝片或切片向左下

21、方移動（同向移動）。原因是視野中物像移動的方向或切片移動的方向相反。（3）顯微鏡使用注意事項顯微鏡在從木箱中取出或裝箱時，右手緊握鏡臂，左手穩(wěn)托鏡座，輕輕取出，不要只用一只手提取，以防顯微鏡墜落，然后輕輕放在實習(xí)臺上或裝 入木箱內(nèi)； 顯微鏡放到實習(xí)臺上時，先放鏡座的一端，再將鏡座全部放穩(wěn)，切不可使鏡座全面同時與臺面接觸，這樣震動過大，透鏡和微調(diào)節(jié)器的裝置易損壞； 顯微鏡須經(jīng)常保持清潔，勿使油污和灰塵附著。如透鏡部分不潔時，用擦鏡紙輕擦，如有油污，先將擦鏡紙蘸少許二甲苯拭去； 顯微鏡不能在陽光下暴曬和使用；接目鏡和接物鏡不要隨便抽出和卸下必須抽取接目鏡時，須將鏡筒上口凈用布遮蓋，避免灰塵落入鏡筒

22、內(nèi)，更換接物鏡時，卸下后應(yīng)倒置在清潔的臺面下，并隨即裝入木箱的置放接物鏡的管內(nèi)； 顯微鏡用完后，取下標(biāo)本片，經(jīng)聚光器降下，再將物鏡轉(zhuǎn)成“八”字形，轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器使鏡筒下降，以免接物鏡與聚光器相碰； 顯微鏡應(yīng)放在干燥的地方，以防生霉。 按照正確的觀察順序，先用低倍鏡找到觀察的物像，通過移動臨時裝片選擇單層的典型細(xì)胞，再轉(zhuǎn)換高倍鏡進行觀察。利用自然光源鏡檢時，最好用朝北的光源，不宜采用直射陽光；利用人工光源時，宜用日光燈的光源。注意通過調(diào)整光圈來調(diào)節(jié)反射光線的強弱，使進入物鏡的光線不要太強。鏡檢時載物臺不可傾斜，因為當(dāng)在五套載物臺傾斜時，液體或油易流出，既損壞了標(biāo)本，又污染載物臺，也影響檢查結(jié)果4、

23、 實驗步驟（一）實驗材料準(zhǔn)備制片之前30min，將黑藻放于40 C的水中浸泡，最主要是浸泡其葉；并配制健那綠染液保持在37C保存。（二）臨時裝片制備1、葉綠體裝片在潔凈載玻片中央滴一滴清水。用鑷子夾起一片黑藻葉片，撕取小片放入水滴中，蓋上載玻片。2、線粒體裝片（1）染色 在潔凈載玻片中央滴一滴健那綠染液。用涼開水漱口34次，用消毒牙簽寬頭在自己漱凈的口腔內(nèi)壁上輕輕地刮幾下，把牙簽上附有碎屑的一端，放在染液中涂幾下，放置810min。時間到了以后蓋上蓋玻片，四周溢出的染液用吸水紙吸干。（2）洗脫 將載玻片平放在實驗臺上(防止因蓋玻片滑動造成細(xì)胞折疊而影響觀察)，在載玻片的一端逐滴滴加生理鹽水，在

24、另一端用吸水紙吸取液體，重復(fù)23次，即可洗去多余的染液。（三）鏡檢觀察將顯微鏡調(diào)光聚焦之后，先用低倍鏡找到要觀察的細(xì)胞，再換用高倍鏡觀察。5、 注意事項1.制備和鏡檢葉綠體裝片時，臨時裝片中的葉片不能放干了，要隨時保持有水狀態(tài)。2.在用牙簽取口腔上皮細(xì)胞時要注意像一個方向刮，不要來回滑動。3.在用牙簽取口腔上皮細(xì)胞時要注意使用的力度，注意別將自己口腔劃傷。4.染色期間要防止裝片干燥，必要時刻滴加染液。染色時間不宜過長8-10min.六、替代的實驗方法葉綠體觀察（實驗基本器材均不變，要求切片的多加刀片）實驗材料實驗步驟優(yōu)點缺點菠菜將菠菜洗凈 (事先去除黃葉 )。在無直射光和強光處晾干菠菜葉片。當(dāng)

25、菠菜葉稍微變軟時 (此時葉片失去一部分水,下表皮與葉肉結(jié)合力較強、 較緊密 ), 取下一片較大菠菜葉, 用鑷子夾取菜葉下表皮, 從葉中部逐步向邊緣慢慢撕揭, 速度不要太快, 鑷子要貼近葉面, 如此操作, 下表皮上可連結(jié)一定量的葉肉, 將其制作成裝片后, 在顯微鏡下觀察。用菠菜做實驗材料 ,材料易得，方便。菠菜做材料時,首先它受采摘季節(jié)的限制，其次菠菜下表皮葉綠體含量少 ,帶有葉肉的下表皮細(xì)胞不規(guī)則,看見的葉綠體混亂，并且獲取稍帶葉肉的下表皮比較難,尤其是學(xué)生做這個實驗時更難,原因是用通常方法撕揭下表皮時, 下表皮難以被撕下或者撕下的下表皮上沒有葉肉。萬年青用剪刀取活體的萬年青葉片用刀片削去上表

26、皮,它的上表皮細(xì)胞不規(guī)則,有氣孔,葉綠體含量較少,不宜觀察。用刀片削取一薄片葉肉組織,葉肉組織呈綠色,如果綠色非常淡,那就是太薄了,太薄的葉肉組織葉綠體含量少,不宜觀察,太厚了細(xì)胞重疊,所以切片薄厚要適度。在載玻片中央滴滴清水,用鑷子夾取萬年青的葉肉組織,放在載玻片的清水里,然后蓋片觀察。萬年青是景天科多年生灌木,是一種觀賞植物,種植比較廣泛,其葉片較厚,葉肉細(xì)胞葉綠體的含量較多,是理想的實驗材料 。在制片的時候?qū)W(xué)生的要求比較高，切片太厚或者太薄都會使觀察結(jié)果不明顯，難以保證大多數(shù)學(xué)生有效地觀察到葉綠體的相關(guān)情況。天門冬取洗凈的天門冬葉狀枝23片。將一片葉狀枝置于備好的載玻片上，用刀片橫切葉

27、狀枝。用鑷子柄輕輕擠壓葉狀枝，可見少許淡綠色液體被擠出。除去殘枝。滴加一滴蒸餾水(或清水)，加蓋玻片，即制備完畢，于顯微鏡下觀察。用此法制備觀察葉綠體的臨時裝片，制作方法簡單，取材方便，最重要的是可以清晰的觀察到天門冬葉狀枝營養(yǎng)細(xì)胞中的葉綠體。裝片內(nèi)影響觀察的干擾物體(雜物、其他碎細(xì)胞等)少，營養(yǎng)細(xì)胞和葉綠體的關(guān)系顯、示得清楚，觀察目標(biāo)明晰準(zhǔn)確。材料不是很常見，不方便找到，壓片的時候難以觀察到單層的細(xì)胞，較黑藻來說制作過程稍顯復(fù)雜不是很方便。蘆薈縱剖蘆薈肉質(zhì)葉，洗去凝膠狀物質(zhì)，用解剖針輕輕來回劃動刮下葉肉細(xì)胞涂于載玻片上的水滴中，蓋片觀察。其葉綠體稍大，與菠菜的大小類似，但其分布分散一些，有利于觀察葉綠體的形狀和結(jié)構(gòu)蘆薈肉質(zhì)葉葉綠體含量較少，制片時量較少。線粒體觀察（實驗器材：顯微鏡、刀片、載玻片、蓋玻片、鑷子；實驗試劑：健那綠）實驗材料實驗步驟優(yōu)點缺點蔥取材：去除蔥植株（也可以用洋蔥）的綠色葉和根，留下基部的白色鱗片葉部分（即蔥頭）洗凈備用；制片：在潔凈的載玻片中央滴一滴健那綠染液。用鑷子從蔥鱗片葉內(nèi)側(cè)撕取一小塊透明薄