抗炎受試物A對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型的研究本科生畢業(yè)論文

1、本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 題 目：抗炎受試物A對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型的影響 學(xué) 系： 藥學(xué)系 專(zhuān) 業(yè)： 藥 學(xué) 表一 本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）開(kāi)題報(bào)告論文（設(shè)計(jì)）題目：抗炎受試物A對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型的影響背景與意義炎癥性腸?。↖BD，Inflammatory bowel disease）是一組原因未明的慢性腸道炎癥性疾病，包括潰瘍性結(jié)腸炎（UC，ulcerative colitis）和克羅恩病(CD，Crohns disease)。大約10%的結(jié)腸炎癥尚不能區(qū)分是CD或UC，在西方國(guó)家稱(chēng)為不明確的結(jié)腸炎。有專(zhuān)業(yè)醫(yī)學(xué)調(diào)查機(jī)構(gòu)經(jīng)過(guò)隨訪跟蹤研究，發(fā)現(xiàn)這些不明確結(jié)腸炎患者大多數(shù)發(fā)展稱(chēng)為UC，其臨床癥狀多

2、樣化，但以腹痛、腹瀉為主要腸道癥狀，病變可累及胃腸道任一部位，但結(jié)腸被侵犯最多。隨著我國(guó)人民生活水平的不斷提高，人民的生活習(xí)慣出現(xiàn)了質(zhì)的變化，快速的生活節(jié)奏成為現(xiàn)今社會(huì)的主旋律，然而我國(guó)炎癥性腸病病人近年來(lái)的發(fā)病率亦不斷上升，但正因此潰瘍性結(jié)腸炎是一種原因未明的結(jié)直腸炎性病變，隨著病程延長(zhǎng)，倘若得不到針對(duì)性的治療，病程會(huì)不斷的加重，且癌變風(fēng)險(xiǎn)也隨之增加。但目前由于潰瘍性結(jié)腸炎臨床病例積累需較長(zhǎng)的時(shí)間，存在一定難度，建立潰瘍性結(jié)腸炎的動(dòng)物模型起到了重要作用。目前關(guān)于潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物模型較多，近年來(lái)，有研究者發(fā)現(xiàn)，使用TNBS誘發(fā)潰殤性結(jié)腸炎動(dòng)物模型，造模成功率高，而且造模成功的動(dòng)物模型出現(xiàn)自愈的

3、現(xiàn)象低，動(dòng)物模型的病癥癥狀與人類(lèi)癥狀相似。通常情況下，TNBS用量為100150 mg/kg體重，濃 度在50%以上的乙醇為45ml/kg體重。采用本方法復(fù)制 的模型，動(dòng)物結(jié)腸炎癥和潰殤至少維持78周。其中，13周為急性期改變，以中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)為主;48周為慢性炎癥改變，浸潤(rùn)細(xì)胞主要為淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞。病理改變主要表現(xiàn)為結(jié)腸組織潰殤形成，腸壁增厚，教膜及黠膜下層大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，肉芽組織及隱窩版腫形成。在檢測(cè)項(xiàng)目中，本模型采用的中性粒細(xì)胞髓過(guò)氧化物酶MPO是近年來(lái)臨床廣泛采用的一種診斷指標(biāo)。在急性炎癥期，腸壁主要為中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，故MPO活性增加;炎癥向慢性轉(zhuǎn)化后，則以淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)為主，MPO

4、活性即明顯下降活性與結(jié)腸急性炎癥的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，是評(píng)價(jià)急性期嚴(yán)重程度及鑒別急、慢性炎癥的重要指標(biāo)之一。在第一階段的動(dòng)物造模成功后，論文實(shí)驗(yàn)的第二階段就是藥物治療階段。本論文實(shí)驗(yàn)選擇治療潰瘍性結(jié)腸炎模型動(dòng)物的藥物是受試物A，對(duì)腸壁的炎癥有顯著的抑制作用，但是，因?yàn)閷?zhuān)利版權(quán)等因素，抗炎受試物A的相關(guān)信息不可公布。研究目的本論文研究中，我們通過(guò)注射100mg/kg體重的TNBS乙醇溶液建立潰瘍性結(jié)腸炎的動(dòng)物模型，然后對(duì)造模成功的動(dòng)物進(jìn)行抗炎受試物的治療，得到相關(guān)的數(shù)據(jù)結(jié)論，并初步探究潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)病癥癥狀及發(fā)病機(jī)制，與抗炎受試物對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎治療機(jī)制情況，以此為探究人類(lèi)潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機(jī)制與治

5、療機(jī)制提供一定的線索。方案與材料本論文選擇50只，180200g SD雄性大鼠，使用TNBS乙醇溶液灌腸復(fù)制潰瘍性結(jié)腸炎模型。將造模成功的大鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組，受試物低、高劑量組，陽(yáng)性對(duì)照組，10只/組，灌胃給藥，1次/d，連續(xù)10 d。取結(jié)腸組織進(jìn)行MPO和病理檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)全過(guò)程與SPF級(jí)動(dòng)物房中進(jìn)行，所有實(shí)驗(yàn)環(huán)境與實(shí)驗(yàn)工具經(jīng)過(guò)嚴(yán)格消毒使用，相關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作經(jīng)過(guò)相關(guān)資質(zhì)人員培訓(xùn)并通過(guò)測(cè)試，并且符合國(guó)家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，這些實(shí)驗(yàn)條件由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物心提供。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，每天記錄大鼠體重、皮毛、精神狀態(tài)、排便情況及相關(guān)日常觀察。實(shí)驗(yàn)結(jié)束前一天動(dòng)物禁食12h，不禁水。處死大鼠，截取自肛門(mén)向上10 cm的

6、結(jié)腸，沿腸系膜縱軸剪開(kāi)，用冰生理鹽水反復(fù)沖洗干凈，取一小部分肉眼觀察病變明顯的部位以福爾馬林固定，進(jìn)行組織病理學(xué)檢查，另取一小部分肉眼病變明顯的部位-80凍存，每組隨機(jī)抽取6只動(dòng)物的標(biāo)本，檢測(cè)各結(jié)腸組織MPO的變化。時(shí)間內(nèi)容備注資料積累、實(shí)驗(yàn)方案編寫(xiě)方案編寫(xiě)階段接收動(dòng)物、編號(hào)、稱(chēng)重造模階段檢疫觀察稱(chēng)重，禁食隨機(jī)分組，造模每天給藥、稱(chēng)重、觀察治療階段實(shí)驗(yàn)結(jié)束酶活性測(cè)定，病理測(cè)定檢測(cè)階段整理資料與數(shù)據(jù)，寫(xiě)報(bào)告結(jié)論分析階段預(yù)期研究成果1. 深入認(rèn)識(shí)到潰瘍性結(jié)腸炎的致病機(jī)制，與該病癥的動(dòng)物相關(guān)造模方法及TNBS造模作用機(jī)制。2. 得到造模間與治療期間動(dòng)物相關(guān)體征數(shù)據(jù)，初步探索得潰瘍性結(jié)腸炎對(duì)動(dòng)物體征的

7、具體影響，與治療藥物對(duì)病情的治療情況。3. 檢測(cè)出病變炎癥部位的病理情況，初步認(rèn)識(shí)到各程度潰瘍結(jié)腸炎對(duì)結(jié)腸的損傷程度的相關(guān)情況。4. 初步認(rèn)識(shí)MPO酶活性檢測(cè)的原理，與各程度潰瘍性結(jié)腸炎在MPO酶活性中的體現(xiàn)。參考文獻(xiàn)1. 鄭威揚(yáng)，潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)性結(jié)腸癌發(fā)病機(jī)制初探，北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，2. 周紅光等,潰克靈對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠外周血和腸系膜淋巴結(jié)CD4+CD_(25)+T細(xì)胞亞群的影響J.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010(21)7.3. 周光興等，人類(lèi)疾病動(dòng)物模型復(fù)制方法學(xué). 上海科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社4. 葉春玲,鐘玲主編藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)2003年8月 暨南大學(xué)印刷廠5. 徐淑云，藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)，第三版

8、人民衛(wèi)生出版社6. .執(zhí)行實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)認(rèn)定評(píng)審準(zhǔn)則（2007年7月1日）7. MIC基因與潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)性的研究進(jìn)展.學(xué)生簽名： 年 月 日指導(dǎo)教師意見(jiàn) 該生對(duì)于所開(kāi)課題與指導(dǎo)老師進(jìn)行了充分的討論，并參考較為詳盡的文獻(xiàn)，最后確定的課題論文具有一定的使用價(jià)值。本論文課題是學(xué)生所學(xué)專(zhuān)業(yè)知識(shí)的延續(xù)，符合學(xué)生專(zhuān)業(yè)發(fā)展方向，對(duì)于提高學(xué)生的基本知識(shí)與技能，對(duì)于提高學(xué)生的實(shí)驗(yàn)研究能力有很大的幫助。論文構(gòu)思較為嚴(yán)密，論題較為新穎，具有一定的社會(huì)現(xiàn)實(shí)意義，研究方法與研究計(jì)劃基本合理，難度合適，學(xué)生能夠在預(yù)定時(shí)間內(nèi)完成該課題的設(shè)計(jì)。 1、同意開(kāi)題（ ） 2、修改后開(kāi)題（ ） 3、重新開(kāi)題（ ） 指導(dǎo)教師簽名： 年

9、 月 日表二 畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）過(guò)程檢查情況記錄表指導(dǎo)教師分階段檢查論文的進(jìn)展情況（要求過(guò)程檢查記錄不少于3次）：第1次檢查學(xué)生總結(jié)：方案的設(shè)定指引著整個(gè)實(shí)驗(yàn)的走向，每一步的實(shí)驗(yàn)設(shè)定都必須查閱大量相關(guān)文獻(xiàn)作為依據(jù)，確定其可行性，確保實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。論文課題實(shí)驗(yàn)已經(jīng)正式開(kāi)始，本階段查閱了大量相關(guān)潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的文獻(xiàn)資料，初步確定了實(shí)驗(yàn)方案，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的造模方式經(jīng)過(guò)對(duì)比，選用TNBS乙醇溶液灌腸復(fù)制潰瘍性結(jié)腸炎模型，實(shí)驗(yàn)預(yù)定設(shè)計(jì)5個(gè)組別，分別為正常組，模型組，受試物低、高劑量組與美沙拉秦組，而且設(shè)定治療時(shí)間為10日指導(dǎo)教師意見(jiàn)：該生已積極開(kāi)展了論文實(shí)驗(yàn)，查閱了大量相關(guān)資料文獻(xiàn)，實(shí)驗(yàn)方案亦有初步的定

10、稿，實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)基本上符合藥效性動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)，但是方案中有小部分的的設(shè)計(jì)仍有待改進(jìn)，對(duì)于相關(guān)部分實(shí)驗(yàn)操作仍需更深入了解認(rèn)識(shí)，對(duì)于實(shí)驗(yàn)方案中的各個(gè)部分仍需要進(jìn)一步的理解。第2次檢查學(xué)生總結(jié)：實(shí)驗(yàn)進(jìn)入了造模與治療階段，這兩個(gè)階段是本論文實(shí)驗(yàn)的主體，成個(gè)流程都按照最終定下的方案進(jìn)行著。在實(shí)際的操作上，因?yàn)閷?shí)驗(yàn)動(dòng)物的個(gè)體差異因素，成功造模的動(dòng)物日常體征都各自有所差別。剛剛進(jìn)入治療階段時(shí)，因?yàn)閷?shí)驗(yàn)動(dòng)物的病情較為嚴(yán)重，所以各項(xiàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作比預(yù)期難度增大，但仍在計(jì)劃內(nèi)進(jìn)行。初步得到了動(dòng)物日常觀察數(shù)據(jù)。指導(dǎo)教師意見(jiàn)：該論文實(shí)驗(yàn)進(jìn)入了的實(shí)際操作階段，各種實(shí)驗(yàn)中的情況都出現(xiàn)了，這時(shí)應(yīng)該仔細(xì)思考問(wèn)題是出現(xiàn)在哪里的，

11、再查閱各種相關(guān)資料，找出應(yīng)對(duì)措施，然后作出相關(guān)的改良的操作方法。第3次檢查學(xué)生總結(jié)：論文實(shí)驗(yàn)進(jìn)入了檢測(cè)與分析的階段，整個(gè)實(shí)驗(yàn)的原始數(shù)據(jù)基本都得出來(lái)了，初步分析數(shù)據(jù)，跟方案預(yù)期的結(jié)果大致相同，治療效果趨向一致。數(shù)據(jù)除了要初步分析，還需要更深入的解析分析，更細(xì)致展示論文的結(jié)果，同時(shí)也需要在結(jié)論基礎(chǔ)上發(fā)散性的延伸相關(guān)知識(shí)，這還需要查閱更多的相關(guān)文獻(xiàn)資料。指導(dǎo)教師意見(jiàn)：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析與知識(shí)延伸是論文實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要的一個(gè)環(huán)節(jié)，必須查閱更多的文獻(xiàn)資料才可以撰寫(xiě)，做到有根有據(jù)，而且這一環(huán)節(jié)的處理情況好壞，決定著該論的層次，分析得細(xì)致準(zhǔn)確能讓該論文升華到更高的層次。應(yīng)該下更多的功夫在總這一階段，而且要不厭其煩的

12、入分深析。第4次檢查學(xué)生總結(jié)：查閱了大量資料文獻(xiàn)后，對(duì)數(shù)據(jù)結(jié)果做出最直觀的描述后，在此基礎(chǔ)上對(duì)論文是的各個(gè)部分坐出的分析與知識(shí)的延伸，實(shí)驗(yàn)論文初步完成。但是仍有小部分內(nèi)容需要加深解析與延伸。指導(dǎo)教師意見(jiàn)：該生積極完成論文任務(wù)，得出的論文情況去預(yù)期情況基本一致，初步完成的論文結(jié)構(gòu)完整，內(nèi)容也豐富，大部分結(jié)果分析到位，有小部分內(nèi)容可以更加深入分析。但總體來(lái)說(shuō)，論文情況達(dá)到動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)要求學(xué)生簽名： 年 月 日指導(dǎo)教師簽名： 年 月 日總體完成情況指導(dǎo)教師意見(jiàn)： 本論文屬于動(dòng)物藥效學(xué)領(lǐng)域研究的課題。選題符合學(xué)生學(xué)科專(zhuān)業(yè)研究方向，體現(xiàn)了綜合學(xué)科知識(shí)的集成訓(xùn)練目的，課題具有重要的理論意義和實(shí)用價(jià)值。學(xué)

13、生針對(duì)課題的要求查閱與分析了大量相關(guān)文獻(xiàn)，一學(xué)科理論為指導(dǎo)，運(yùn)用動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)的方法，認(rèn)真細(xì)致地分析與研究了潰瘍性結(jié)腸炎的致病原理與動(dòng)物造模方法，及提出了美沙拉秦藥物治療方案，完成了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的描述與分析，且對(duì)造模方法，藥物治療，檢測(cè)方法有進(jìn)一步的延伸討論。本課題論文撰寫(xiě)認(rèn)真規(guī)范，基本符合科技論文的寫(xiě)作標(biāo)準(zhǔn)，文筆流暢，圖文表配合得當(dāng)，邏輯性強(qiáng)，工作量適中。論文成果和內(nèi)容反映了作者該學(xué)生有比較扎實(shí)的基礎(chǔ)理論和專(zhuān)業(yè)知識(shí)。1、按計(jì)劃完成，完成情況優(yōu)（ ）2、按計(jì)劃完成，完成情況良（ ）3、基本按計(jì)劃完成，完成情況合格（ ）4、完成情況不合格（ ）指導(dǎo)教師簽名： 年 月 日表三 本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）成績(jī)?cè)u(píng)定

14、表（試行）學(xué)生姓名甘健林學(xué)號(hào)專(zhuān)業(yè)藥學(xué)成績(jī)優(yōu) 秀 良 好 中 等 及 格 不 及 格 比例成績(jī)分級(jí)（10090分）（8980分） （7970分）（6960分）（60分）選 題 有相當(dāng)強(qiáng)的理論與實(shí)踐意義。選題有比較強(qiáng)的理論與現(xiàn)實(shí)意義。選題有一定的理論或?qū)嵺`意義。選題意義不大但無(wú)不妥之處。選題不當(dāng)，沒(méi)有意義。20%創(chuàng) 新 與 論 證1.用新方法進(jìn)行調(diào)查研究，采用的資料較新，研究結(jié)果有獨(dú)創(chuàng)性。2.論證思路清楚，邏輯性強(qiáng)；專(zhuān)業(yè)知識(shí)比較扎實(shí)；遵守學(xué)術(shù)規(guī)范，研究所得結(jié)論可靠。1.研究方法及視角有一定新意。2.論證思路較清楚，有一定的邏輯性；結(jié)論比較可靠。1.研究方法及視角均無(wú)創(chuàng)新，但尚能從他人的觀點(diǎn)中發(fā)現(xiàn)問(wèn)

15、題。2.論證基本清楚，結(jié)論有一定可靠性。1.研究方法及視角均無(wú)創(chuàng)新之處，所得出的結(jié)論無(wú)明顯價(jià)值。2.論證不夠嚴(yán)密，超過(guò)20%的篇幅表述不清楚。1.研究方法及視角水平均一般，所得出的結(jié)論無(wú)價(jià)值。2.論證不嚴(yán)密，超過(guò)40%的篇幅表述不清楚。50%寫(xiě) 作 水 平條理清晰，文字流暢；有豐富的文獻(xiàn)材料、充足的理論依據(jù)和數(shù)據(jù)。條理較為清楚，文字流暢；有文獻(xiàn)材料、充足的理論依據(jù)和數(shù)據(jù)。文字流暢；有一些文獻(xiàn)材料、理論依據(jù)和數(shù)據(jù)。文字尚算流暢；文獻(xiàn)材料、理論依據(jù)和數(shù)據(jù)較少。基本概念不清、錯(cuò)別字多；文獻(xiàn)材料、理論依據(jù)和數(shù)據(jù)少。20%格 式 規(guī) 范格式正確，完全符合學(xué)術(shù)規(guī)范及學(xué)院的要求，打印規(guī)范清晰。格式正確，符合

16、學(xué)院論文格式的要求，打印清晰。格式正確，基本符合格式要求，打印規(guī)范清楚，但個(gè)別地方有錯(cuò)漏。格式大部分符合論文格式的要求，并有少量錯(cuò)漏。格式不符合論文格式要求，打印不清晰，錯(cuò)漏較多。10%指導(dǎo)教師簽名成績(jī)（按百分制評(píng)分）：表四 本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）答辯情況表答辯人甘健林專(zhuān) 業(yè)藥學(xué)論文（設(shè)計(jì)）題目抗炎受試物A對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型的影響答辯小組組長(zhǎng)成 員答辯記錄：記錄人簽名： 年 月 日表5本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）答辯成績(jī)?cè)u(píng)定表（試行）學(xué)生姓名甘健林學(xué)號(hào)專(zhuān)業(yè)藥學(xué)論文題目抗炎受試物A對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型的影響評(píng)分項(xiàng)內(nèi) 容比例成績(jī)論文選題有相當(dāng)強(qiáng)的理論與實(shí)踐意義。15%學(xué)術(shù)內(nèi)容中心突出，邏輯嚴(yán)密，表述準(zhǔn)

17、確，有創(chuàng)新性且在實(shí)踐中的指導(dǎo)作用較強(qiáng)。40%寫(xiě)作水平條理清晰，論證有力，文字流暢；有豐富的文獻(xiàn)材料、充足的理論依據(jù)和數(shù)據(jù)。15%格式規(guī)范格式正確，完全符合學(xué)術(shù)規(guī)范及學(xué)院要求，打印規(guī)范清晰。10%答辯情況答題正確，重點(diǎn)突出，論述全面，緊扣主題，表達(dá)流暢，具有很強(qiáng)的說(shuō)服力。20%答辯小組成員簽名答辯成績(jī)（按百分制成績(jī)?cè)u(píng)分）學(xué)術(shù)誠(chéng)信聲明本人所呈交的畢業(yè)論文，是在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立研究分析得出的，所有研究數(shù)據(jù)均由孫逸仙醫(yī)院提供。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的作品或成果。對(duì)本論文的研究作出作出指導(dǎo)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確的方式標(biāo)明。本畢業(yè)論文的知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸

18、屬于培養(yǎng)單位。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。本人簽名： 日期： 抗炎受試物A對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型的影響論文摘要 背景：炎癥性腸病（IBD，Inflammatory bowel disease）是病因尚未明確的慢性非特異性腸道炎癥性疾病，包括潰瘍性結(jié)腸炎（UC，ulcerative colitis）和克羅恩病(CD，Crohns disease)。該病在西方國(guó)家比較多見(jiàn)，但近年在我國(guó)的發(fā)病率亦有上升趨勢(shì)。因其病因不明，一直是消化科較為棘手的疾病。目的：本論文實(shí)驗(yàn)主要針對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎（UC），研究抗炎受試物A對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型的治療作用及其可能的作用機(jī)制。方法：實(shí)驗(yàn)造模由50只S

19、D雄性大鼠，先分為正常組10只，模型組40只，模型組大鼠用塑膠管由肛門(mén)輕緩插入大鼠體內(nèi)深約8 cm，按照100 mg/kg的劑量緩慢注入含三硝基苯磺酸TNBS(trinitro-benzene-sulfonic acid) 25g/L的乙醇溶液，建立大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型。造模成功的大鼠按體重隨機(jī)分為4組，每組10只，分別為正常組，模型對(duì)照組，受試物低劑量組，受試物高劑量組，美沙拉嗪控釋顆粒組，每天1次分別灌胃給藥，連續(xù)10 d。每天進(jìn)行大鼠日常和體重觀察，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取病變結(jié)腸組織病理檢查，測(cè)定其MPO酶活性。結(jié)論：最后得出，抗炎受試物能降低MPO含量，顯著性降低潰瘍性結(jié)腸炎的病理評(píng)分（P0.0

20、5）關(guān)鍵詞 炎癥性腸病；抗炎受試物A；潰瘍性結(jié)腸炎；三硝基苯磺酸；MPO酶活性 The influence of Mesalazine in ulcerative colitis ratsAbstract Inflammatory bowel disease is an nonspecific Chronic Inflammation of the bowel, and it is not yet clear about Causes of illnes. This illness Including ulcerative colitis and Crohns disease, and it

21、is more common in western countries, however, the trend of Incidence infection is increasing in these years in our country. And The illness has been a hot potato in Digestion section for a long time. This Paper experiment mainly at ulcerative colitis, Research by test compound to investigate the eff

22、ect of ulcerative colitis(rats. Molding methods 50 SD rats, the plastic tube insert rats body 8cm from fundament, with 100 mg/kg instill TNBS of 25g/L Surelease, then this is the model of ulcerative colitis rats. According to Body Weight , Made by successful SD rats were randomly divided into 5 grou

23、ps: normal control group, model control group ，test compound high control group, test compound lower control group and Mesalazine positive control group, 10 rats a group, respectively through stomach for one times a day for 10 d . observe carefully the situation and Weight, for the organization of t

24、he colon to pathological examination after the paper experiment over. The results showed Subject matter can reduce the content of MPO, and reduce Pathological mark of UC markedly.Keywords Inflammatory bowel disease；Subject matter； ulcerative colitis； TNBS(trinitro-benzene-sulfonic acid) ；MPO enzymic

25、 activity 目 錄引言11.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物21.1 動(dòng)物要求21.2飼養(yǎng)管理21.3選用理由22.實(shí)驗(yàn)藥品32.1抗炎受試物32.2陽(yáng)性對(duì)照物32.3實(shí)驗(yàn)用溶媒：蒸餾水33.主要實(shí)驗(yàn)儀器與試劑43.1實(shí)驗(yàn)儀器43.2實(shí)驗(yàn)試劑44實(shí)驗(yàn)方法54.1抗炎受試物配制方法54.2陽(yáng)性對(duì)照物配制方法54.3造模方法54.4檢測(cè)指標(biāo)55.結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析76.實(shí)驗(yàn)結(jié)果86.1一般臨床觀察86.2體重86.3組織病理學(xué)檢查96.4結(jié)腸組織MPO酶活性97.討論與分析137.1造模13參考文獻(xiàn)致謝引 言潰瘍性結(jié)腸炎又名非特異性潰瘍性結(jié)腸炎，系原因不明的慢性結(jié)腸和直腸黏膜炎性和潰瘍性病變。其原因可能與免疫、感染、遺

26、傳和精神因素有關(guān)。潰瘍性結(jié)腸炎，很多人都誤把它認(rèn)為是一般的腸炎。以前，此病在國(guó)內(nèi)的發(fā)病率并不是很高，但近些年來(lái)，隨著人們生活水平的提高，這個(gè)病也越來(lái)越多見(jiàn)。潰瘍性結(jié)腸炎是很難根治的，嚴(yán)重的會(huì)導(dǎo)致腸穿孔、結(jié)腸癌等?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，潰瘍性結(jié)腸炎可能與腸道細(xì)菌或病毒感染、精神刺激、食物及自身免疫反應(yīng)等因素相關(guān)，并與結(jié)腸癌關(guān)系密切，尤其病變范圍廣泛。目前由于潰瘍性結(jié)腸炎臨床病例積累需較長(zhǎng)的時(shí)間，存在一定難度，建立潰瘍性結(jié)腸炎的動(dòng)物模型起到了重要作用。目前關(guān)于潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物模型較多，近年來(lái)，有研究者發(fā)現(xiàn)，使用TNBS誘發(fā)潰殤性結(jié)腸炎動(dòng)物模型，造模成功率高，而且造模成功的動(dòng)物模型出現(xiàn)自愈的現(xiàn)象低，動(dòng)物模型

27、的病癥癥狀與人類(lèi)癥狀相似。本實(shí)驗(yàn)研究抗炎受試物A對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型的治療作用及其可能的作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)以SD雄性大鼠，使用TNBS 灌腸復(fù)制潰瘍性結(jié)腸炎模型。隨機(jī)分為模型對(duì)照組，受試藥低、高劑量組，陽(yáng)性對(duì)照物組，10只/組，灌胃給藥，1次/d，連續(xù)10 d。取結(jié)腸組織進(jìn)行MPO和病理檢測(cè)。本模型采用的中性粒細(xì)胞髓過(guò)氧化物酶MPO是近年來(lái)臨床廣泛采用的一種診斷指標(biāo)。MPO主要 位于多形核白細(xì)胞嗜苯膠藍(lán)顆粒中，其在結(jié)腸中的活性與組織中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)程度呈線性關(guān)系。在急性炎癥期，腸壁主要為中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，故MPO活性增加;炎癥向慢性轉(zhuǎn)化后，則以淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)為主，MPO活性即明顯下降活性與結(jié)腸急性炎癥

28、的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，是評(píng)價(jià)急性期嚴(yán)重程度及鑒別急、慢性炎癥的重要指標(biāo)之一。1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物1.1 動(dòng)物要求SD大鼠，雄性，50只，180200g ，SPF級(jí)，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。 并采用飽和苦味酸被毛染色法，在動(dòng)物體表不同部位的被毛涂染顏色，以示不同號(hào)碼。飼養(yǎng)箱上貼上相應(yīng)的標(biāo)簽。對(duì)購(gòu)入SD大鼠進(jìn)行檢疫5d。期間每日檢查動(dòng)物一次，未發(fā)現(xiàn)不健康的動(dòng)物所有大鼠可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。1.2飼養(yǎng)管理SD大鼠飼養(yǎng)在廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF級(jí)動(dòng)物房，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（粵）2008-0002，2010年年檢合格。動(dòng)物飼養(yǎng)條件：5只/箱，群養(yǎng)，飼養(yǎng)溫度與濕度：2025，4070%，采用12h：12

29、h晝夜間斷照明；自由進(jìn)食、飲水。飼養(yǎng)室條件始終保持穩(wěn)定，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。1.3選用理由根據(jù)“徐淑云，藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)，第三版”推薦使用。2 實(shí)驗(yàn)藥品2.1抗炎受試物A因客戶(hù)要求資料保密，所以詳細(xì)信息不公開(kāi)2.2陽(yáng)性對(duì)照物名稱(chēng)：美沙拉嗪控釋顆粒；生產(chǎn)單位：法國(guó)愛(ài)的發(fā)制藥集團(tuán)；規(guī)格：500mg/袋保存條件：密閉、干燥。2.3實(shí)驗(yàn)用溶媒：蒸餾水。3 主要實(shí)驗(yàn)儀器與試劑3.1實(shí)驗(yàn)儀器電子天平：BS3000A，上海友聲衡器有限公司，精度：0.1g電子天平：BS223S，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司，精度：0.001g紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)：UV1200，廣州市正一科技有限公司電熱恒溫水浴箱：HW

30、S-28，上海一恒科學(xué)儀器有限公司低速冷凍離心機(jī)：KDC-2046，科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司輪轉(zhuǎn)切片機(jī)：RM2135，德國(guó)LEICA公司生物組織全自動(dòng)脫水機(jī)：TS-12N，湖北孝感醫(yī)用儀器有限公司生物組織包埋機(jī)及冷凍機(jī)：BM-VII，湖北孝感醫(yī)用儀器有限公司攤片烤片機(jī)：CS-VI，湖北孝感醫(yī)用儀器有限公司生物組織全自動(dòng)染色機(jī)：RS-18，湖北孝感醫(yī)用儀器有限公司病理圖像分析系統(tǒng)：，日本奧林巴斯3.2實(shí)驗(yàn)試劑三硝基苯磺酸：sigma，批號(hào)：021M5009冰醋酸：廣州市中南化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：無(wú)水乙醇：廣州市中南化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：MPO測(cè)定試劑盒：南京建成生物工程研究所，批號(hào)：其

31、他試劑：石蠟、二甲苯、酒精、伊紅、蘇木素、中性樹(shù)膠4實(shí)驗(yàn)方法4.1抗炎受試物A配制方法受試物A高劑量溶液：稱(chēng)取受試物225 mg，碾碎，加蒸餾水至45mL，得5mg/mL受試物A高劑量藥液45mL；低劑量溶液：取5mg/mL受試物高劑量藥液9mL，加蒸餾水稀釋至36mL，得1.25mg/mL受試物低劑量藥液36mL。4.2陽(yáng)性對(duì)照物配制方法準(zhǔn)確稱(chēng)取美沙拉嗪控釋顆粒1g，碾碎，加蒸餾水至33mL，得0.03g/mL美沙拉嗪藥液33mL。4.3造模方法動(dòng)物分組：將大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、受試物低、高劑量組，陽(yáng)性對(duì)照組，10只/組。造模用藥配制方法：三硝基苯磺酸溶液25g/L：取50g/

32、L的三硝基苯磺酸溶液 (TNBS)與無(wú)水乙醇以體積11配成25g/L的混合液。SPF級(jí)SD大鼠，雄性，50只。檢疫合格后，隨機(jī)分為正常對(duì)照組10只，模型組40只。模型組大鼠乙醚麻醉，將一直徑2.0 mm、長(zhǎng)約12 cm的塑膠管由肛門(mén)輕緩插入大鼠體內(nèi)深約8 cm，按照100mg/kg體重的劑量緩慢注入含TNBS的乙醇溶液。然后注入約0.1mL的空氣，將留在塑膠管內(nèi)的藥物排入腸內(nèi)。給藥完畢，緩慢拔出塑膠管，用手捏住肛門(mén)，提起大鼠尾部，持續(xù)倒置1min，使造模劑充分滲入大鼠腸腔內(nèi)。正常對(duì)照組注入等量的生理鹽水。造模3天后，將模型組大鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組、受試物A低、高劑量組，美沙拉嗪控釋顆粒組，10

33、只/組。灌胃給藥，1次/d，連續(xù)10d，模型對(duì)照組及正常對(duì)照組給予等量蒸餾水。4.4檢測(cè)指標(biāo)4.4.1日常觀察從實(shí)驗(yàn)開(kāi)始至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，每日觀察并記錄各組大鼠精神狀態(tài)、進(jìn)食、活動(dòng)、腹瀉情況及糞便性狀。每天測(cè)量各大鼠的體重。4.4.2病理檢查實(shí)驗(yàn)結(jié)束前一天動(dòng)物禁食12h，不禁水。處死大鼠，截取自肛門(mén)向上10 cm的結(jié)腸，沿腸系膜縱軸剪開(kāi)，用冰生理鹽水反復(fù)沖洗干凈，取一小部分肉眼觀察病變明顯的部位以福爾馬林固定，進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。制片：病理組織標(biāo)本經(jīng)取材、固定、修塊、流水沖洗、脫水、透明、浸蠟、石蠟包埋后，石蠟切片，HE染色、封片；鏡下檢查：把制作好的HE染色切片置于光學(xué)顯微鏡下，在低倍視野下，用O

34、LYMPUS BX41顯微鏡拍照，觀察潰瘍性結(jié)腸炎病變程度并評(píng)分。組織學(xué)損傷評(píng)分：按潰瘍有無(wú)及范圍輕、中、重分別計(jì)為0、1、2、3分，病變深度(達(dá)粘膜層1分，粘膜下層2分，肌層3分、漿膜4分)，兩項(xiàng)相加得總分。4.4.3結(jié)腸組織MPO測(cè)定MPO測(cè)試根據(jù)樣本種類(lèi)可以分為兩種操作方法，分別為組織樣本測(cè)定與血清樣本測(cè)定，本論文實(shí)驗(yàn)測(cè)定的是動(dòng)物結(jié)腸部分的組織，選用組織樣本的測(cè)定方法。原理：中性白細(xì)胞中存在有髓過(guò)氧化物酶，每個(gè)細(xì)胞所含的酶的量是一定的，約占細(xì)胞干重的5%，該酶具有使過(guò)氧化氫還原的能力，利用這一特點(diǎn)可以分析酶的活力，并定量中性白細(xì)胞的數(shù)目。MPO+H2O2復(fù)合物； 復(fù)合物+AH2（供氫體）

35、H2O+MPO+A產(chǎn)物通過(guò)供氫體鄰連茴香胺供輕后生成黃色化合物，在460mm處通過(guò)比色測(cè)定A產(chǎn)物的生成量，從而推算出MPO的活力及H2O2減少量和白細(xì)胞的數(shù)目。取一小部分肉眼病變明顯的部位-80凍存，每組隨機(jī)抽取6只動(dòng)物的標(biāo)本，檢測(cè)各結(jié)腸組織MPO的變化。1) 樣本前處理：準(zhǔn)確稱(chēng)取組織重量，以配好的試劑二溶液為勻漿介質(zhì)，按重量體積比為1:19加勻漿介質(zhì)制備成5%的組織勻漿，不需要進(jìn)行離心。取5%組織勻漿0.9ml加3號(hào)試劑0.1ml，（如果組織勻漿量不夠，可以按9:1的比例減少組織勻漿及3號(hào)試劑的用量），充分混勻后37，水浴15分鐘，取出后待測(cè)。2) 操作表：試劑空白對(duì)照管測(cè)定管蒸餾水ml0.

36、23樣本ml0.20.2試劑四ml0.20.20.2顯色劑ml33混勻，37水浴30分鐘試劑七ml0.050.050.05混勻，60水浴十分鐘，取出后立即在460nm出，1cm光徑，蒸餾水調(diào)零，測(cè)各管吸光度值注： 試劑四試劑七與顯色劑為測(cè)試盒內(nèi)廠家提供的試劑3) 計(jì)算酶活力單位定義：每克組織濕片在37的反應(yīng)體系中H2O2被分解1mol為1個(gè)酶活力單位。公式：MOP單位/克濕片=*注：11.3為斜率的倒數(shù)*注：取樣中所含組織濕片的量（克）5 結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析各組大鼠的體重、MPO表達(dá)值的數(shù)據(jù)均采用（）表示，不同組間的比較采用SPSS16.0 One-Way ANOVA單因素方差分析。6 實(shí)驗(yàn)結(jié)果6.

37、1一般臨床觀察：正常對(duì)照組：整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程10只動(dòng)物未見(jiàn)異常。模型對(duì)照組：10只動(dòng)物精神萎靡不振，步態(tài)為匍匐行走，偶見(jiàn)扭體，稀便，體重逐日減輕；第4天死亡一只動(dòng)物。第5天開(kāi)始觀察到有兩只動(dòng)物腹部脹大，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后大體解剖可見(jiàn)，這兩只動(dòng)物病變部位及病變以上部位腸腔脹大，內(nèi)有大量腸內(nèi)容物堆積，而病變以下部位直腸狹窄，腸內(nèi)容物無(wú)法正常排出，沿縱軸剖開(kāi)沖洗掉腸內(nèi)容物后可見(jiàn)病變部位腸壁增厚，腸腔擴(kuò)大，黏膜潰瘍病損明顯。受試低劑量組：整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程的臨床癥狀與模型對(duì)照組相似。受試物高劑量組、美沙拉嗪控釋顆粒組：前6天的動(dòng)物臨床癥狀情況與模型對(duì)照組相似，第6天開(kāi)始動(dòng)物精神恢復(fù)，部分動(dòng)物稀便開(kāi)始減輕，至第8天動(dòng)物狀

38、態(tài)已基本恢復(fù)，觀察不到稀便，直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束動(dòng)物未見(jiàn)明顯異常。6.2體重（見(jiàn)表1）：模型對(duì)照組動(dòng)物體重增長(zhǎng)緩慢，與正常對(duì)照組比較具有顯著性差異（P0.05）。表1 抗炎受試物對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠體重的影響（g，）時(shí)間正常對(duì)照組模型對(duì)照組美沙拉嗪控釋顆粒對(duì)照組受試物A低劑組受試物A高劑組劑量(mg.kg-1d-1)30012.550n1010101010給藥后1天193.78.0163.415.9*164.616.0158.69.3158.716.6給藥后2天207.17.4169.218.0*179.117.6169.89.3169.719.8給藥后3天218.110.2180.522.6*195.

39、518.5179.413.9184.620.9給藥后4天227.09.8189.722.1*205.719.3191.420.1193.924.9給藥后5天234.09.8197.524.4*217.621.2199.724.0203.329.6給藥后6天246.510.5205.226.5*228.724.5208.728.1212.232.3給藥后7天249.112.2216.426.8*237.822.3218.632.0221.435.9給藥后8天255.810.6222.427.5243.419.2222.634.7226.937.9給藥后9天268.610.6235.430.0*258.017.8235.737.4237.040.1給藥后10天279.610.8246.429.1*268.218.5247.340.0248.939.4注： *與正常對(duì)照組比較差異顯著，P0.05。6.3組織病理學(xué)檢查：（