第六章ena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)ppt課件

1、第六章第六章enaena多肽抗體譜多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)免疫印跡檢測(cè)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 臨床醫(yī)學(xué)院 診斷教研室黃 萍第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)第一節(jié)第一節(jié)概述概述一、一、 何為何為ena? ena(extractable nuclear antige) 鹽水可提取性核抗原的總稱。鹽水可提取性核抗原的總稱。第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè) 核抗原：核抗原：組蛋白組蛋白 ：不溶于水不溶于水 dna ；不溶于水不溶于水 ena：可溶于生理鹽水可溶于生理鹽水是非組蛋白核蛋白，屬酸性核蛋白抗原，是非組蛋白核蛋白，屬酸性核蛋白抗原

2、，是許多小分子量的是許多小分子量的rna和多肽組成和多肽組成。第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè) 二、多肽抗體譜二、多肽抗體譜 ena抗體是指能與核中鹽水可提取抗體是指能與核中鹽水可提取抗原發(fā)生特異性結(jié)合抗體，既是抗核抗抗原發(fā)生特異性結(jié)合抗體，既是抗核抗體的一部分。體的一部分。第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè) ena多肽抗體譜多肽抗體譜是由許多小分子量的是由許多小分子量的rna和多肽和多肽組成。組成。不同的不同的urna各有其相應(yīng)的抗體。各有其相應(yīng)的抗體。目前發(fā)現(xiàn)的相應(yīng)的抗體已有十余種，其目前發(fā)現(xiàn)的相應(yīng)的抗體已有十余種，其中

3、，國(guó)際上共認(rèn)的對(duì)風(fēng)濕有特異的診斷中，國(guó)際上共認(rèn)的對(duì)風(fēng)濕有特異的診斷價(jià)值的有七種。故將這七種抗體叫做多價(jià)值的有七種。故將這七種抗體叫做多肽抗體譜肽抗體譜第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè) 三、三、 免疫印跡免疫印跡免疫印跡（免疫印跡（immunoblot ibt）又稱免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)。是一項(xiàng)新的生又稱免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)。是一項(xiàng)新的生化技術(shù)。它對(duì)研究工作的影響與內(nèi)切酶化技術(shù)。它對(duì)研究工作的影響與內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)和的發(fā)現(xiàn)和 pcr的基因擴(kuò)增技術(shù)是等量的基因擴(kuò)增技術(shù)是等量齊觀的。齊觀的。第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè) 免疫印跡的基本原理：免疫印

4、跡的基本原理：將凝膠電泳與固相免疫結(jié)合起來(lái)，將凝膠電泳與固相免疫結(jié)合起來(lái)，其主要的操作過(guò)程分三個(gè)步驟。其主要的操作過(guò)程分三個(gè)步驟。1、分離、分離鹽水可提取抗原（鹽水可提取抗原（ena）中多）中多肽按分子量的大小，先用肽按分子量的大小，先用sds 聚丙烯酰胺凝膠分離聚丙烯酰胺凝膠分離第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè) 免疫印跡的基本原理：免疫印跡的基本原理： 2 、轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移將分離的組份從凝膠上轉(zhuǎn)移到固相將分離的組份從凝膠上轉(zhuǎn)移到固相基質(zhì)上，如硝酸纖維膜基質(zhì)上，如硝酸纖維膜第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè) 免疫印跡的基本原理：免

5、疫印跡的基本原理： 3 、測(cè)定測(cè)定對(duì)轉(zhuǎn)移后的組份進(jìn)行免疫法測(cè)定，對(duì)轉(zhuǎn)移后的組份進(jìn)行免疫法測(cè)定，顯示出蛋白帶。顯示出蛋白帶。既通過(guò)抗體的反應(yīng)，用酶聯(lián)免疫吸既通過(guò)抗體的反應(yīng)，用酶聯(lián)免疫吸附法觀察與抗體反應(yīng)的多肽（呈顯色帶）附法觀察與抗體反應(yīng)的多肽（呈顯色帶）的數(shù)量與分子量的數(shù)量與分子量 第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè) 免疫印跡的基本原理：免疫印跡的基本原理：免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)實(shí)際上是一項(xiàng)將凝膠電免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)實(shí)際上是一項(xiàng)將凝膠電泳技術(shù)、固定化技術(shù)及分子親和技術(shù)三泳技術(shù)、固定化技術(shù)及分子親和技術(shù)三者融為一體的免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)。者融為一體的免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)。第第六六章章enaen

6、a多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)優(yōu)點(diǎn)：免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)優(yōu)點(diǎn)：第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè) 免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)優(yōu)點(diǎn)：免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)優(yōu)點(diǎn)： 1、高分辨率高分辨率免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)綜合了電泳技術(shù)分辨免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)綜合了電泳技術(shù)分辨率強(qiáng)的特點(diǎn)。率強(qiáng)的特點(diǎn)。第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè) 免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)優(yōu)點(diǎn)：免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)優(yōu)點(diǎn)： 2、高靈敏度高靈敏度免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)綜合了免疫反應(yīng)敏感免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)綜合了免疫反應(yīng)敏感性高的特點(diǎn)，可檢出最小蛋白質(zhì)性高的特點(diǎn)，可檢出最小蛋白質(zhì)1pg(10-12g) 第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫

7、印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè) 免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)優(yōu)點(diǎn)：免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)優(yōu)點(diǎn)： 3、高特異性高特異性免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)綜合了免疫反應(yīng)特異免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)綜合了免疫反應(yīng)特異性，根據(jù)抗原抗體的特異反應(yīng)，同一條性，根據(jù)抗原抗體的特異反應(yīng)，同一條蛋白印跡上可做多項(xiàng)分析。蛋白印跡上可做多項(xiàng)分析。第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)優(yōu)點(diǎn)：免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)優(yōu)點(diǎn)： 4、高度穩(wěn)定性高度穩(wěn)定性蛋白印跡膜便于保存，可存放蛋白印跡膜便于保存，可存放6-12 個(gè)月。個(gè)月。第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè) 免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)優(yōu)點(diǎn)：免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)優(yōu)點(diǎn)： 5、設(shè)備簡(jiǎn)單，操作容易

8、設(shè)備簡(jiǎn)單，操作容易免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)在臨床檢驗(yàn)中必有遠(yuǎn)免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)在臨床檢驗(yàn)中必有遠(yuǎn)大前程，并可能代替許多現(xiàn)有的傳統(tǒng)檢大前程，并可能代替許多現(xiàn)有的傳統(tǒng)檢驗(yàn)方法。驗(yàn)方法。第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè) 第二節(jié)第二節(jié)檢測(cè)對(duì)象檢測(cè)對(duì)象 ena多肽抗體譜多肽抗體譜早期診斷早期診斷sle和多種風(fēng)濕病，和多種風(fēng)濕病，有較高的特異性和敏感性，有較高的特異性和敏感性，有助于結(jié)締組織病的診斷有助于結(jié)締組織病的診斷和鑒別診斷和鑒別診斷第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè) 一、風(fēng)濕病的定義一、風(fēng)濕病的定義風(fēng)濕病學(xué)是一門以內(nèi)科學(xué)和臨床免疫風(fēng)濕病學(xué)是一門以

9、內(nèi)科學(xué)和臨床免疫學(xué)為基礎(chǔ)的新興學(xué)科學(xué)為基礎(chǔ)的新興學(xué)科其研究的對(duì)象是風(fēng)濕性疾病，包括所其研究的對(duì)象是風(fēng)濕性疾病，包括所有不同原因，以及不明原因引起的骨、關(guān)有不同原因，以及不明原因引起的骨、關(guān)節(jié)、肌疾病。節(jié)、肌疾病。第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè) 廣義：涉及所有骨、關(guān)節(jié)、肌肉疼痛和炎癥廣義：涉及所有骨、關(guān)節(jié)、肌肉疼痛和炎癥的疾病的疾病感炎性：感炎性：萊姆（萊姆（lyme）氏?。┦喜〈x性：代謝性： 痛風(fēng)痛風(fēng)內(nèi)分泌性：內(nèi)分泌性：甲狀旁腺功能亢進(jìn)甲狀旁腺功能亢進(jìn)遺傳性；遺傳性；粘液多糖病粘液多糖病退化性：退化性：骨關(guān)節(jié)炎骨關(guān)節(jié)炎生態(tài)環(huán)境性：大骨節(jié)病生態(tài)環(huán)境性：大骨

10、節(jié)病第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè) 狹義：主要指自身免疫性結(jié)締組織疾病狹義：主要指自身免疫性結(jié)締組織疾病 類風(fēng)濕性疾病骨關(guān)節(jié)炎類風(fēng)濕性疾病骨關(guān)節(jié)炎(ra)系統(tǒng)紅斑狼瘡系統(tǒng)紅斑狼瘡(sle)干燥綜合癥干燥綜合癥(ss)硬皮病硬皮病(pss)皮肌炎和多發(fā)行肌炎皮肌炎和多發(fā)行肌炎(dm/pm)混合性結(jié)締組織病混合性結(jié)締組織病(mctd)第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè) 二、二、 適應(yīng)癥適應(yīng)癥 1、臨床上懷疑有風(fēng)濕性疾?。ńY(jié)締臨床上懷疑有風(fēng)濕性疾病（結(jié)締組織病或自身免疫性疾?。柽M(jìn)一步組織病或自身免疫性疾?。?，需進(jìn)一步確診者。

11、確診者。 2、 已診斷為某種風(fēng)濕性疾病，但已診斷為某種風(fēng)濕性疾病，但需明確是否合并其它風(fēng)濕性疾病，以指需明確是否合并其它風(fēng)濕性疾病，以指導(dǎo)治療者。導(dǎo)治療者。第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)二、二、 適應(yīng)癥適應(yīng)癥 3 、診斷未明，但有下列癥狀，需排除診斷未明，但有下列癥狀，需排除或或確診何種風(fēng)濕性疾病者：確診何種風(fēng)濕性疾病者： 、原因不明發(fā)熱伴有關(guān)節(jié)或肌肉疼痛。、原因不明發(fā)熱伴有關(guān)節(jié)或肌肉疼痛。、淋巴結(jié)腫大或白血球減少或血小板減淋巴結(jié)腫大或白血球減少或血小板減少或溶血性貧血。少或溶血性貧血。、皮疹或不典型面部紅斑，光敏感。、皮疹或不典型面部紅斑，光敏感。、蛋白

12、尿。、蛋白尿。第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)、心包炎或胸膜炎。、心包炎或胸膜炎。、癲癇或精神、神經(jīng)癥狀。、癲癇或精神、神經(jīng)癥狀。、習(xí)慣性流產(chǎn)。、習(xí)慣性流產(chǎn)。、雷諾氏現(xiàn)象。、雷諾氏現(xiàn)象。、腫脹手或手指、足趾皮膚變硬。、腫脹手或手指、足趾皮膚變硬。第三章第三章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)、肌肉有壓痛或抬臂、下蹲起立時(shí)困、肌肉有壓痛或抬臂、下蹲起立時(shí)困 難。難。、下肢出現(xiàn)網(wǎng)狀青紫。下肢出現(xiàn)網(wǎng)狀青紫。、肺間質(zhì)病變或肺動(dòng)脈高壓。肺間質(zhì)病變或肺動(dòng)脈高壓。、經(jīng)常口干、眼干、或反復(fù)腮腺炎。經(jīng)?？诟?、眼干、或反復(fù)腮腺炎。、易口腔潰瘍或大量脫發(fā)。易

13、口腔潰瘍或大量脫發(fā)。第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)、吞咽困難，食道蠕動(dòng)減弱。吞咽困難，食道蠕動(dòng)減弱。、青年女性有偏頭痛。青年女性有偏頭痛。、熒光抗核抗體陽(yáng)性。熒光抗核抗體陽(yáng)性。、關(guān)節(jié)疼痛。關(guān)節(jié)疼痛。、長(zhǎng)期反復(fù)性原因不明低熱。長(zhǎng)期反復(fù)性原因不明低熱。第三章第三章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)三三 、送檢標(biāo)本送檢標(biāo)本 血清血清第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)四四 報(bào)告方式報(bào)告方式反應(yīng)抗體反應(yīng)抗體分子量分子量 1. 抗抗sm抗體抗體+/- 29/28kd、13.5kd 2. 抗抗u1rnp抗體抗體+/

14、- 73kd、32kd、17.5kd 3.抗抗scl-70抗體抗體+/- 86kd、70kd 4.抗抗ssa抗體抗體+/- 52kd 5.抗抗ssb抗體抗體+/- 48/47kd、45kd 6.抗抗jo-1抗體抗體+/- 55kd 7.抗抗rib抗體抗體+/- 38kd16kd15kd + 表示有該種自身抗體表示有該種自身抗體 - 表示無(wú)該種自身抗體表示無(wú)該種自身抗體第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)第三節(jié)第三節(jié)臨床意義臨床意義 第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)臨床意義臨床意義一抗一抗sm抗體抗體 1.sm為病人為病人smi

15、th（發(fā)現(xiàn)抗體的第一位病人）（發(fā)現(xiàn)抗體的第一位病人）的名字縮寫的名字縮寫 2.抗抗sm抗體是酸性糖蛋白抗體是酸性糖蛋白 3.是目前公認(rèn)的系統(tǒng)性紅斑狼瘡（是目前公認(rèn)的系統(tǒng)性紅斑狼瘡（sle）標(biāo)記抗體，有利于標(biāo)記抗體，有利于sle的早期診斷。、的早期診斷。、注意：關(guān)鍵是注意：關(guān)鍵是13.5kd 一般是一般是13.5kd和和 29/28kd同時(shí)出現(xiàn)，若單獨(dú)出現(xiàn)同時(shí)出現(xiàn)，若單獨(dú)出現(xiàn)29/28 kd、無(wú)、無(wú)13.5kd不能判斷不能判斷抗抗sm抗體陽(yáng)性抗體陽(yáng)性 4.陽(yáng)性率陽(yáng)性率30-50%，僅見于本病。，僅見于本病。第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)臨床意義臨床意義 二二

16、 、抗抗u1rnp抗體抗體(抗抗rnp)1、是混合性結(jié)締組織病是混合性結(jié)締組織病(mctd)的一項(xiàng)重的一項(xiàng)重要血清學(xué)特征。要血清學(xué)特征。2、陽(yáng)性率可達(dá)陽(yáng)性率可達(dá)95%以上。以上。3、73 kd（國(guó)外報(bào)導(dǎo)為（國(guó)外報(bào)導(dǎo)為70 kd）和）和32kd可可同時(shí)出現(xiàn)，也可分別出現(xiàn)。同時(shí)出現(xiàn)，也可分別出現(xiàn)。17.5 kd常拌常拌73 kd和和32 kd、一起出現(xiàn)，單獨(dú)出現(xiàn)少見。、一起出現(xiàn)，單獨(dú)出現(xiàn)少見。4、其它結(jié)締組織病的陽(yáng)性率、其它結(jié)締組織病的陽(yáng)性率系統(tǒng)性紅斑狼瘡系統(tǒng)性紅斑狼瘡（sle ） 30%干燥綜合癥干燥綜合癥(ss) 20%硬皮病硬皮病(pss) 7%第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)

17、多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)臨床意義臨床意義 三、抗三、抗scl-70抗體抗體 1、抗抗scl-70抗體中的抗體中的sclsclerosis的縮寫的縮寫70代表抗原分子量，為代表抗原分子量，為70kd（70000） 2、是彌漫型硬皮病是彌漫型硬皮病(pss)的標(biāo)記抗體。的標(biāo)記抗體。 3、陽(yáng)性率可達(dá)陽(yáng)性率可達(dá)50-64% 4、在在86 kd和和70kd兩區(qū)帶間有時(shí)可見到兩區(qū)帶間有時(shí)可見到兩條較弱的區(qū)帶，是兩條較弱的區(qū)帶，是100kd的降解產(chǎn)的降解產(chǎn)物。物。兩區(qū)帶一般同時(shí)出現(xiàn)。兩區(qū)帶一般同時(shí)出現(xiàn)。第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)臨床意義臨床意義 四、抗四、抗ssa抗體

18、（抗抗體（抗ro抗體）抗體）1ss為干燥綜合癥（為干燥綜合癥（sjogrens syndrome）的縮寫。的縮寫。a為抗原子序列號(hào)為抗原子序列號(hào)2曾以最先查到此抗體患者名字命名，又稱曾以最先查到此抗體患者名字命名，又稱抗抗ro抗體。抗體。3對(duì)干燥綜合癥（對(duì)干燥綜合癥（ss）診斷有意義。陽(yáng)性率）診斷有意義。陽(yáng)性率7080%合并合并sle3050%單純單純sle810%第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)臨床意義臨床意義 四、抗四、抗ssa抗體（抗抗體（抗ro抗體）抗體）4可見于其它多種自身免疫性疾病?？梢娪谄渌喾N自身免疫性疾病。包括包括sle，硬皮癥，多發(fā)性肌炎

19、和類風(fēng)濕關(guān)，硬皮癥，多發(fā)性肌炎和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等疾病。節(jié)炎等疾病。5、該抗體陽(yáng)性也可引起亞急性皮膚狼瘡的皮該抗體陽(yáng)性也可引起亞急性皮膚狼瘡的皮損與損與sle的廣泛光過(guò)敏性皮炎也相關(guān)，的廣泛光過(guò)敏性皮炎也相關(guān)，igg類類抗抗ssa抗體通過(guò)胎盤進(jìn)入胎兒后可引起新生抗體通過(guò)胎盤進(jìn)入胎兒后可引起新生兒狼瘡綜合癥。兒狼瘡綜合癥。6、個(gè)別因抗體與心臟的傳導(dǎo)系統(tǒng)相結(jié)合可造個(gè)別因抗體與心臟的傳導(dǎo)系統(tǒng)相結(jié)合可造成先天性心臟傳導(dǎo)阻滯。成先天性心臟傳導(dǎo)阻滯。第第六六章章enaena多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)多肽抗體譜免疫印跡檢測(cè)臨床意義臨床意義 五、抗五、抗ssb抗體抗體1抗抗ssb抗體常伴隨抗抗體常伴隨抗ssa抗體同時(shí)出現(xiàn)。抗體同時(shí)出現(xiàn)。2抗抗ssb和抗和抗ssa抗體并存，對(duì)診斷抗體并存，對(duì)診斷ss（干（干燥燥綜合癥）有特異性。綜合癥）有特異性。348kd