細(xì)胞生物學(xué)：第三章－細(xì)胞生物學(xué)的研究方法

1、 第一節(jié)第一節(jié) 細(xì)胞形態(tài)的觀察方法細(xì)胞形態(tài)的觀察方法顯微技術(shù)顯微技術(shù) 一、光學(xué)顯微鏡技術(shù)一、光學(xué)顯微鏡技術(shù) 二、電子顯微鏡技術(shù)二、電子顯微鏡技術(shù) 三、掃描隧道顯微鏡三、掃描隧道顯微鏡 第二節(jié)第二節(jié) 細(xì)胞組分的分析方法細(xì)胞組分的分析方法 第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞工程與顯微操作技術(shù)細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞工程與顯微操作技術(shù) 第四節(jié)第四節(jié) 用于細(xì)胞生物學(xué)研究的模式生物用于細(xì)胞生物學(xué)研究的模式生物Structure of Microscope藍(lán)光誘導(dǎo)下35S:GFP-CRY1幼苗下胚軸細(xì)胞中GFP-CRY1融合蛋白的亞細(xì)胞定位. laser confocal scanning microscope, LCS

2、M激光共聚焦掃描顯微鏡光路圖LCSM Image of a Xenopus Melanophore microtubule cytoskeleton (green) and the nucleus (blue) /淀粉碘染色的水稻花粉擬南芥的氣孔間苯三酚染色的擬南芥莖的橫切TEM LIGHT PATHWAYTRANSMISSION ELECTRON MICROSCOPE，TEMNegative Stained Archaebacteria an onion root tip cell with no etching.培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)面的深度蝕刻電鏡照片，示

3、 Clathrin衣被SEM LIGHT PATHWAYScanning electron microscope（ SEM）掃描隧道顯微鏡原理引自http:/www.iap.tuwien.ac.at STM image of a DNA moleculeLow speedHigh speedDifferential centrifugationVelocity (A) and Equilibrium (B) sedimentation水稻GA20ox-2的RFLP檢測(cè)PCR原理第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞工程與顯微操作技術(shù)細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞工程與顯微操作技術(shù) 一、細(xì)胞培養(yǎng)一、細(xì)胞培養(yǎng)群體培養(yǎng)（左）

4、和克隆培養(yǎng)（右） 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)示意圖Henrietta Lacks, American black ,died of cancer of uterine cervix in 1951 表達(dá)載體農(nóng)桿菌EHA105電激共轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)7d的愈傷組織篩選分化生根煉苗移栽大田轉(zhuǎn)化周期為轉(zhuǎn)化周期為30-40天，轉(zhuǎn)化效率為天，轉(zhuǎn)化效率為70-86%B淋巴細(xì)胞能分泌特異抗體，但不能長(zhǎng)期培養(yǎng)，瘤細(xì)胞可以在體外長(zhǎng)期培養(yǎng)，但不分泌特異抗體。于是Kohler和Milstein 1975將兩種細(xì)胞雜交而創(chuàng)立了單克隆抗 體 技 術(shù) ， 獲1984年諾貝爾獎(jiǎng)。單克隆抗體技術(shù)HAT: hypoxanthine，aminopter

5、in，thymidine 顯微操作儀顯微操作儀轉(zhuǎn)基因顯微操作過(guò)程 1、難度系數(shù)、難度系數(shù)3星以上：星以上：人胃癌裸鼠原位種植轉(zhuǎn)移模型建立人胃癌裸鼠原位種植轉(zhuǎn)移模型建立 （3.7）細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn) （3.6）熒光原位雜交熒光原位雜交 （3.6）體外細(xì)胞的原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)、凍存和復(fù)蘇（體外細(xì)胞的原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)、凍存和復(fù)蘇（3.6）Western Blot免疫印跡實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程免疫印跡實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程 （3.3）免疫組化實(shí)驗(yàn)方法免疫組化實(shí)驗(yàn)方法 （3.0）質(zhì)粒質(zhì)粒DNA提取與純化提取與純化 （3.0）PCR技術(shù)原理、實(shí)驗(yàn)步驟和應(yīng)用技術(shù)原理、實(shí)驗(yàn)步驟和應(yīng)用 （3.0）RT-PCR實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)介實(shí)

6、驗(yàn)方法簡(jiǎn)介 （3.0）外源基因的誘導(dǎo)表達(dá)外源基因的誘導(dǎo)表達(dá) （3.0）丁香園（丁香園（）精選實(shí)驗(yàn)：）精選實(shí)驗(yàn)：2、難度系數(shù)、難度系數(shù)4星以上：星以上：轉(zhuǎn)基因小鼠制備實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)基因小鼠制備實(shí)驗(yàn) （5.0）凝膠遷移實(shí)驗(yàn)（凝膠遷移實(shí)驗(yàn)（EMSA） （4.7）逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）（）（4.3）DNA重組實(shí)驗(yàn)方法重組實(shí)驗(yàn)方法 （4.3）蛋白質(zhì)的表達(dá)、分離、純化蛋白質(zhì)的表達(dá)、分離、純化 （4.0）小鼠組織切片免疫組化實(shí)驗(yàn)步驟小鼠組織切片免疫組化實(shí)驗(yàn)步驟 （4.0）變性梯度凝膠電泳變性梯度凝膠電泳 （4.0）染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)(ChIP) (4.0)斑點(diǎn)金免疫滲濾測(cè)定法斑點(diǎn)金免疫滲濾測(cè)定法(DIGFA) (4.0)Southern Blotting （4.0）舉頭望明月低頭做實(shí)驗(yàn)第四節(jié)第四節(jié) 用于細(xì)胞生物學(xué)研究的模式生物用于細(xì)胞生物學(xué)