氨茶堿加樣回收率

1、實驗二實驗二 氨茶堿加樣回收率氨茶堿加樣回收率 方法學考察方法學考察目的：證明所采用的分析方法適合于相應的檢測要求目的：證明所采用的分析方法適合于相應的檢測要求。 準確度、準確度、精密度（重復性、中間精密度和精密度（重復性、中間精密度和重現(xiàn)性）、專屬性、檢測限、定量限、線性、重現(xiàn)性）、專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍和耐用性。范圍和耐用性。驗證內(nèi)容驗證內(nèi)容 一、一、 準確度（準確度（accuracyaccuracy） 準確度是指用該方法測定的結果與真實值或參考準確度是指用該方法測定的結果與真實值或參考值接近的程度，用百分回收率表示。值接近的程度，用百分回收率表示。 原料藥原料藥可用可用已知純

2、度的對照品或樣品已知純度的對照品或樣品進行測定，進行測定，或用本法所得結果與已建立準確度的另一方法測定的或用本法所得結果與已建立準確度的另一方法測定的結果進行比較。結果進行比較。 制劑制劑可用可用含己知量被測物的各組分混合物含己知量被測物的各組分混合物進行進行測定，即采用在測定，即采用在空白輔料空白輔料中加入中加入原料藥對照品原料藥對照品的方的方法。法。 如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測物進行測定。已知量的被測物進行測定。 中藥分析中藥分析的準確度一般用加樣回收試驗衡量。中的準確度一般用加樣回收試驗衡量。中藥回收率一般要求在藥回收率一

3、般要求在9595105%105%范圍內(nèi)，有些方法操范圍內(nèi)，有些方法操作步驟繁多時，可要求在作步驟繁多時，可要求在9090110%110%范圍內(nèi)，范圍內(nèi)，rsdrsd一般一般在在3%3%以內(nèi)。以內(nèi)。 測定回收率測定回收率r r（recoveryrecovery）的具體方法可采用）的具體方法可采用“回收試驗法回收試驗法”和和“加樣回收試驗法加樣回收試驗法”。 回收試驗回收試驗 空白空白+ +已知量已知量a a的對照品（或標準品）測定，測定的對照品（或標準品）測定，測定值為值為m m。%100amr 加樣回收試驗加樣回收試驗 已準確測定藥物含量已準確測定藥物含量p p的的真實樣品真實樣品+ +已知量

4、已知量a a的對的對照品（或標準品）測定，測定值為照品（或標準品）測定，測定值為m m。%100apmr數(shù)據(jù)要求數(shù)據(jù)要求 規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9 9次測定結果評次測定結果評價，如制備三個不同濃度樣品各測三次。用價，如制備三個不同濃度樣品各測三次。用偏差（偏差（d d）、標準偏差）、標準偏差(sd)(sd)、相對標準偏差相對標準偏差(rsd)(rsd)（變異系數(shù)）表示。（變異系數(shù)）表示。 偏差（偏差（d d）：測量值與平均值之差）：測量值與平均值之差xxdi標準（偏）差（標準（偏）差（sdsd或或s s）12nxxsi相對標準（偏）差（相對標準（偏）差（rsdrsd），也稱變

5、異系數(shù)（），也稱變異系數(shù)（cvcv）%100 xsrsd紫外可見分光光度計紫外可見分光光度計主要結構及功能主要結構及功能 紫外分光光度計主要由紫外分光光度計主要由光源光源、單色器單色器、樣品池樣品池（吸收池）、（吸收池）、檢測器檢測器及及放大器和記錄顯示系統(tǒng)放大器和記錄顯示系統(tǒng)所組成所組成。1 1、光源、光源鎢燈絲鎢燈絲和和氫燈氫燈兩種兩種鎢燈絲適宜使用的范圍是鎢燈絲適宜使用的范圍是360nm-1000nm360nm-1000nm；氫燈或氘燈適宜使用的范圍是氫燈或氘燈適宜使用的范圍是150nm-360nm150nm-360nm。因為玻璃會吸收紫外光，燈泡必須用石英材料。因為玻璃會吸收紫外光，燈

6、泡必須用石英材料。 單色器是指能單色器是指能將將來自光源的來自光源的復色光復色光按波長長短順按波長長短順序序色散色散為為單色光單色光，并能任意調(diào)節(jié)波長的裝置。常由棱，并能任意調(diào)節(jié)波長的裝置。常由棱鏡和光柵組成。經(jīng)棱鏡或光柵色散成一系列由單色光鏡和光柵組成。經(jīng)棱鏡或光柵色散成一系列由單色光帶組成的光譜，逐個從單色器的出口狹縫射出。帶組成的光譜，逐個從單色器的出口狹縫射出。 棱鏡由棱鏡由玻璃玻璃或或石英石英制成，制成，玻璃玻璃色散能力大，但色散能力大，但可可吸收紫外光，吸收紫外光，只能用于只能用于350-820nm350-820nm的波長測定。樣品的波長測定。樣品池和參比池需要配對（即完全相同的兩

7、個），其厚池和參比池需要配對（即完全相同的兩個），其厚度（光束通過溶液的路徑長度）一般為度（光束通過溶液的路徑長度）一般為1mm1mm、2mm2mm、5mm5mm、1cm1cm、2cm2cm、4cm4cm。如在定量測定時，所使用的。如在定量測定時，所使用的一組樣品池要完全一致。一組樣品池要完全一致。 2 2、單色器（分光系統(tǒng)）、單色器（分光系統(tǒng)）3 3、樣品池（參比池）、樣品池（參比池） 檢測器是一種光電轉(zhuǎn)換設備，它將檢測器是一種光電轉(zhuǎn)換設備，它將光強度光強度轉(zhuǎn)變?yōu)檗D(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘栯娦盘栵@示出來。顯示出來。5.5.測量系統(tǒng)測量系統(tǒng) 包括放大器和結果顯示裝置。在主機中裝有微機處包括放大器和結果顯示裝

8、置。在主機中裝有微機處理器，將測量數(shù)據(jù)顯示在屏幕上。理器，將測量數(shù)據(jù)顯示在屏幕上。 4.4.檢測器檢測器 t6t6型紫外可見分光光度計結構型紫外可見分光光度計結構操作流程操作流程一、開機自檢一、開機自檢初始化初始化 43%43%1.1.樣品池電池樣品池電池 okok2.2.濾光片濾光片 okok3.3.光源電機光源電機 okok打開儀器主機電源，開始初始化，打開儀器主機電源，開始初始化，3 3分鐘左右初始化完成。分鐘左右初始化完成。初始化完成后，儀器進入主菜單界面。初始化完成后，儀器進入主菜單界面。光度測量光度測量功能擴展功能擴展系統(tǒng)應用系統(tǒng)應用二、進入光度測量狀態(tài)二、進入光度測量狀態(tài)在上圖所

9、示狀態(tài)按在上圖所示狀態(tài)按enterenter鍵，進入光度鍵，進入光度測量界面測量界面光度測量光度測量 0.000 abs0.000 abs 250 nm 250 nm三、進入測量界面三、進入測量界面按按start/stopstart/stop鍵，進入樣品測定界面鍵，進入樣品測定界面 250.0nm -0.002 250.0nm -0.002 abs no. abs conc no. abs conc四、設置測量波長四、設置測量波長按按gotogoto鍵，在下圖界面輸入測量鍵，在下圖界面輸入測量的波長，例如需要在的波長，例如需要在275nm275nm測量，輸測量，輸入入275275，按，按ent

10、erenter鍵確認，儀器將自鍵確認，儀器將自動調(diào)整波長。動調(diào)整波長。請輸入波長請輸入波長:275.0nm -0.002abs275.0nm -0.002abs no. abs conc no. abs conc調(diào)整波長完成后如下圖調(diào)整波長完成后如下圖五、進入設置參數(shù)五、進入設置參數(shù)在這個步驟中在這個步驟中主要設置樣品池主要設置樣品池。按。按enterenter鍵進入?yún)?shù)設定界面，按鍵進入?yún)?shù)設定界面，按鍵使鍵使光標移動到光標移動到“試樣設定試樣設定”，如圖所示。，如圖所示。按按enterenter鍵確認，進入設定界面。鍵確認，進入設定界面。測光方式測光方式數(shù)學計算數(shù)學計算試樣設定試樣設定六、

11、設定使用樣品池個六、設定使用樣品池個數(shù)數(shù)在這個步驟中主要設置樣品池。按在這個步驟中主要設置樣品池。按鍵鍵使光標移動到使光標移動到“使用樣池數(shù)使用樣池數(shù)”，如圖所示。，如圖所示。按按enterenter鍵循環(huán)選擇需要使用的樣品池個數(shù)。鍵循環(huán)選擇需要使用的樣品池個數(shù)。試樣室：八聯(lián)池試樣室：八聯(lián)池樣池數(shù)：樣池數(shù)：2空白溶液校正：否空白溶液校正：否樣池空白校正：否樣池空白校正：否七、樣品測量七、樣品測量按按returnreturn鍵返回到參數(shù)設定界面，再按鍵返回到參數(shù)設定界面，再按returnreturn鍵返回到光度測量界面。鍵返回到光度測量界面。在在1 1號樣品池內(nèi)放入空白溶液，號樣品池內(nèi)放入空白溶

12、液，2 2號樣品池內(nèi)放入待測溶液。關閉好樣品號樣品池內(nèi)放入待測溶液。關閉好樣品池蓋后按池蓋后按zerozero鍵進行空白校正，再按鍵進行空白校正，再按strt/stopstrt/stop鍵進行樣品測量。測量鍵進行樣品測量。測量結果如下圖所示：結果如下圖所示： 275.0nm -0.002abs 275.0nm -0.002abs no. abs conc no. abs conc 1-1 0.012 1.000 1-1 0.012 1.000 2-1 0.052 2.000 2-1 0.052 2.000八、結束測量八、結束測量測量完成后按測量完成后按pringpring鍵打印數(shù)據(jù)，如果沒有打

13、印機請記錄數(shù)據(jù)。退出程鍵打印數(shù)據(jù)，如果沒有打印機請記錄數(shù)據(jù)。退出程序或關閉儀器后測量數(shù)據(jù)將消失。確保從樣品池中取出所有比色皿，清序或關閉儀器后測量數(shù)據(jù)將消失。確保從樣品池中取出所有比色皿，清洗干凈以便下次使用。按洗干凈以便下次使用。按returnreturn鍵直到返回到儀器主菜單界面后再關閉鍵直到返回到儀器主菜單界面后再關閉儀器電源。儀器電源。實驗目的實驗目的 了解藥物在含量測定前進行加樣回收率試了解藥物在含量測定前進行加樣回收率試 驗的目的；驗的目的； 掌握加樣回收率試驗具體方法；掌握加樣回收率試驗具體方法； 學習加樣回收率計算方法。學習加樣回收率計算方法。 掌握紫外分光光度計操作方法。掌握

14、紫外分光光度計操作方法。實驗原理實驗原理 任何藥物在進行含量檢測以前，都要對該檢測方法任何藥物在進行含量檢測以前，都要對該檢測方法的準確度、精密度及儀器靈敏度等進行考察，目的是證明的準確度、精密度及儀器靈敏度等進行考察，目的是證明采用的方法是否適合于相應的檢測要求。其中準確度系指采用的方法是否適合于相應的檢測要求。其中準確度系指用該方法測定的結果與真實值或參考值接近的程度，一般用該方法測定的結果與真實值或參考值接近的程度，一般用回收率（用回收率（% %）表示。）表示。加樣回收率試驗最終反映的是測試加樣回收率試驗最終反映的是測試結果的準確度。結果的準確度。在測定樣品時，于已知被測成分含量的供在測

15、定樣品時，于已知被測成分含量的供試品中再精密加入一定量的已知純度的被測成分對照品，試品中再精密加入一定量的已知純度的被測成分對照品，依法測定。用實測值與供試品中含有量之差，除以加入對依法測定。用實測值與供試品中含有量之差，除以加入對照品量計算回收率。照品量計算回收率。實驗儀器與材料實驗儀器與材料r實驗儀器：實驗儀器：紫外分光光度計、精密天平、石紫外分光光度計、精密天平、石英比色皿、英比色皿、50ml50ml燒杯、玻璃棒、稱量紙、燒杯、玻璃棒、稱量紙、10ml10ml容量瓶、容量瓶、25ml25ml容量瓶、洗瓶。容量瓶、洗瓶。r實驗材料：實驗材料：氨茶堿原料、蒸餾水、氫氧化鈉。氨茶堿原料、蒸餾水

16、、氫氧化鈉。 0.01m naoh0.01m naoh溶液的配制：稱取氫氧化鈉溶液的配制：稱取氫氧化鈉0.4g0.4g，用蒸餾水定容至，用蒸餾水定容至1000ml1000ml，即得。，即得。實驗方法實驗方法步驟一：步驟一：標準品溶液的制備：標準品溶液的制備：精密稱取氨茶堿標準品精密稱取氨茶堿標準品12.5mg12.5mg置于置于25ml25ml容量瓶中，先用少量容量瓶中，先用少量0.01m0.01m的的naohnaoh溶液振搖使溶溶液振搖使溶解，再用該溶液定容至刻度，配成濃度為解，再用該溶液定容至刻度，配成濃度為0.5mg/ml0.5mg/ml的的標準標準儲備液儲備液；步驟二：步驟二：再從再從

17、標準儲備液標準儲備液中吸取中吸取1ml1ml，置于置于10ml10ml容量瓶中，容量瓶中，用用0.01m0.01m的的naohnaoh溶液定容至刻度，搖勻，配成濃度為溶液定容至刻度，搖勻，配成濃度為0.05mg/ml0.05mg/ml的溶液，記為的溶液，記為標準儲備液標準儲備液，備用。備用。步驟三：步驟三：樣品溶液的制備：樣品溶液的制備：從從標準儲備液標準儲備液中吸取中吸取200l200l，置于置于10ml10ml容量瓶中，用容量瓶中，用0.01m naoh0.01m naoh溶液定容至刻度，搖勻，溶液定容至刻度，搖勻，即得氨茶堿樣品溶液，平行制備即得氨茶堿樣品溶液，平行制備9 9份，再導入份

18、，再導入9 9個試管中，個試管中，并相應做好標記；并相應做好標記；步驟四：步驟四：從從9 9個試管中分別取出個試管中分別取出5ml5ml放置于放置于10ml10ml容量瓶中，容量瓶中，做好相應標記后，備用；做好相應標記后，備用；步驟五：步驟五：9 9個試管中剩余部分用于含量檢測（個試管中剩余部分用于含量檢測（采用紫外分光采用紫外分光光度法在光度法在275nm275nm處測定吸光度值（處測定吸光度值（a a275275），根據(jù)），根據(jù)已知標準已知標準曲線曲線求出溶液中氨茶堿濃度，并記錄）。求出溶液中氨茶堿濃度，并記錄）。步驟六：步驟六：再從再從標準儲備液標準儲備液中中分別取出分別取出0.8ml0.8ml（ 80% 80% ）、）、1.0ml1.0ml（100%100%）和）和1.2ml1.2ml（120%120%）溶液各三份，加入）溶液各三份，加入步驟步驟四四的容量瓶中，用的容量瓶中，用0.01m0.01m的的naohnaoh溶液定容至刻度，搖勻并溶液定容至刻度，搖勻并做好標記，然后采用紫外分光光度法在