氨茶堿加樣回收率

1、實(shí)驗(yàn)二實(shí)驗(yàn)二 氨茶堿加樣回收率氨茶堿加樣回收率 方法學(xué)考察方法學(xué)考察目的：證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測(cè)要求目的：證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測(cè)要求。 準(zhǔn)確度、準(zhǔn)確度、精密度（重復(fù)性、中間精密度和精密度（重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）、專屬性、檢測(cè)限、定量限、線性、重現(xiàn)性）、專屬性、檢測(cè)限、定量限、線性、范圍和耐用性。范圍和耐用性。驗(yàn)證內(nèi)容驗(yàn)證內(nèi)容 一、一、 準(zhǔn)確度（準(zhǔn)確度（accuracyaccuracy） 準(zhǔn)確度是指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考準(zhǔn)確度是指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，用百分回收率表示。值接近的程度，用百分回收率表示。 原料藥原料藥可用可用已知純

2、度的對(duì)照品或樣品已知純度的對(duì)照品或樣品進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)行測(cè)定，或用本法所得結(jié)果與已建立準(zhǔn)確度的另一方法測(cè)定的或用本法所得結(jié)果與已建立準(zhǔn)確度的另一方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果進(jìn)行比較。 制劑制劑可用可用含己知量被測(cè)物的各組分混合物含己知量被測(cè)物的各組分混合物進(jìn)行進(jìn)行測(cè)定，即采用在測(cè)定，即采用在空白輔料空白輔料中加入中加入原料藥對(duì)照品原料藥對(duì)照品的方的方法。法。 如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測(cè)物進(jìn)行測(cè)定。已知量的被測(cè)物進(jìn)行測(cè)定。 中藥分析中藥分析的準(zhǔn)確度一般用加樣回收試驗(yàn)衡量。中的準(zhǔn)確度一般用加樣回收試驗(yàn)衡量。中藥回收率一般要求在藥回收率一

3、般要求在9595105%105%范圍內(nèi)，有些方法操范圍內(nèi)，有些方法操作步驟繁多時(shí)，可要求在作步驟繁多時(shí)，可要求在9090110%110%范圍內(nèi)，范圍內(nèi)，rsdrsd一般一般在在3%3%以內(nèi)。以內(nèi)。 測(cè)定回收率測(cè)定回收率r r（recoveryrecovery）的具體方法可采用）的具體方法可采用“回收試驗(yàn)法回收試驗(yàn)法”和和“加樣回收試驗(yàn)法加樣回收試驗(yàn)法”。 回收試驗(yàn)回收試驗(yàn) 空白空白+ +已知量已知量a a的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測(cè)定，測(cè)定的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測(cè)定，測(cè)定值為值為m m。%100amr 加樣回收試驗(yàn)加樣回收試驗(yàn) 已準(zhǔn)確測(cè)定藥物含量已準(zhǔn)確測(cè)定藥物含量p p的的真實(shí)樣品真實(shí)樣品+ +已知量

4、已知量a a的對(duì)的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測(cè)定，測(cè)定值為照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測(cè)定，測(cè)定值為m m。%100apmr數(shù)據(jù)要求數(shù)據(jù)要求 規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9 9次測(cè)定結(jié)果評(píng)次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)，如制備三個(gè)不同濃度樣品各測(cè)三次。用價(jià)，如制備三個(gè)不同濃度樣品各測(cè)三次。用偏差（偏差（d d）、標(biāo)準(zhǔn)偏差）、標(biāo)準(zhǔn)偏差(sd)(sd)、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(rsd)(rsd)（變異系數(shù)）表示。（變異系數(shù)）表示。 偏差（偏差（d d）：測(cè)量值與平均值之差）：測(cè)量值與平均值之差xxdi標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（sdsd或或s s）12nxxsi相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（rsdrsd），也稱變

5、異系數(shù)（），也稱變異系數(shù)（cvcv）%100 xsrsd紫外可見分光光度計(jì)紫外可見分光光度計(jì)主要結(jié)構(gòu)及功能主要結(jié)構(gòu)及功能 紫外分光光度計(jì)主要由紫外分光光度計(jì)主要由光源光源、單色器單色器、樣品池樣品池（吸收池）、（吸收池）、檢測(cè)器檢測(cè)器及及放大器和記錄顯示系統(tǒng)放大器和記錄顯示系統(tǒng)所組成所組成。1 1、光源、光源鎢燈絲鎢燈絲和和氫燈氫燈兩種兩種鎢燈絲適宜使用的范圍是鎢燈絲適宜使用的范圍是360nm-1000nm360nm-1000nm；氫燈或氘燈適宜使用的范圍是氫燈或氘燈適宜使用的范圍是150nm-360nm150nm-360nm。因?yàn)椴Ａ?huì)吸收紫外光，燈泡必須用石英材料。因?yàn)椴Ａ?huì)吸收紫外光，燈

6、泡必須用石英材料。 單色器是指能單色器是指能將將來自光源的來自光源的復(fù)色光復(fù)色光按波長長短順按波長長短順序序色散色散為為單色光單色光，并能任意調(diào)節(jié)波長的裝置。常由棱，并能任意調(diào)節(jié)波長的裝置。常由棱鏡和光柵組成。經(jīng)棱鏡或光柵色散成一系列由單色光鏡和光柵組成。經(jīng)棱鏡或光柵色散成一系列由單色光帶組成的光譜，逐個(gè)從單色器的出口狹縫射出。帶組成的光譜，逐個(gè)從單色器的出口狹縫射出。 棱鏡由棱鏡由玻璃玻璃或或石英石英制成，制成，玻璃玻璃色散能力大，但色散能力大，但可可吸收紫外光，吸收紫外光，只能用于只能用于350-820nm350-820nm的波長測(cè)定。樣品的波長測(cè)定。樣品池和參比池需要配對(duì)（即完全相同的兩

7、個(gè)），其厚池和參比池需要配對(duì)（即完全相同的兩個(gè)），其厚度（光束通過溶液的路徑長度）一般為度（光束通過溶液的路徑長度）一般為1mm1mm、2mm2mm、5mm5mm、1cm1cm、2cm2cm、4cm4cm。如在定量測(cè)定時(shí)，所使用的。如在定量測(cè)定時(shí)，所使用的一組樣品池要完全一致。一組樣品池要完全一致。 2 2、單色器（分光系統(tǒng)）、單色器（分光系統(tǒng)）3 3、樣品池（參比池）、樣品池（參比池） 檢測(cè)器是一種光電轉(zhuǎn)換設(shè)備，它將檢測(cè)器是一種光電轉(zhuǎn)換設(shè)備，它將光強(qiáng)度光強(qiáng)度轉(zhuǎn)變?yōu)檗D(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)電信號(hào)顯示出來。顯示出來。5.5.測(cè)量系統(tǒng)測(cè)量系統(tǒng) 包括放大器和結(jié)果顯示裝置。在主機(jī)中裝有微機(jī)處包括放大器和結(jié)果顯示裝

8、置。在主機(jī)中裝有微機(jī)處理器，將測(cè)量數(shù)據(jù)顯示在屏幕上。理器，將測(cè)量數(shù)據(jù)顯示在屏幕上。 4.4.檢測(cè)器檢測(cè)器 t6t6型紫外可見分光光度計(jì)結(jié)構(gòu)型紫外可見分光光度計(jì)結(jié)構(gòu)操作流程操作流程一、開機(jī)自檢一、開機(jī)自檢初始化初始化 43%43%1.1.樣品池電池樣品池電池 okok2.2.濾光片濾光片 okok3.3.光源電機(jī)光源電機(jī) okok打開儀器主機(jī)電源，開始初始化，打開儀器主機(jī)電源，開始初始化，3 3分鐘左右初始化完成。分鐘左右初始化完成。初始化完成后，儀器進(jìn)入主菜單界面。初始化完成后，儀器進(jìn)入主菜單界面。光度測(cè)量光度測(cè)量功能擴(kuò)展功能擴(kuò)展系統(tǒng)應(yīng)用系統(tǒng)應(yīng)用二、進(jìn)入光度測(cè)量狀態(tài)二、進(jìn)入光度測(cè)量狀態(tài)在上圖所

9、示狀態(tài)按在上圖所示狀態(tài)按enterenter鍵，進(jìn)入光度鍵，進(jìn)入光度測(cè)量界面測(cè)量界面光度測(cè)量光度測(cè)量 0.000 abs0.000 abs 250 nm 250 nm三、進(jìn)入測(cè)量界面三、進(jìn)入測(cè)量界面按按start/stopstart/stop鍵，進(jìn)入樣品測(cè)定界面鍵，進(jìn)入樣品測(cè)定界面 250.0nm -0.002 250.0nm -0.002 abs no. abs conc no. abs conc四、設(shè)置測(cè)量波長四、設(shè)置測(cè)量波長按按gotogoto鍵，在下圖界面輸入測(cè)量鍵，在下圖界面輸入測(cè)量的波長，例如需要在的波長，例如需要在275nm275nm測(cè)量，輸測(cè)量，輸入入275275，按，按ent

10、erenter鍵確認(rèn)，儀器將自鍵確認(rèn)，儀器將自動(dòng)調(diào)整波長。動(dòng)調(diào)整波長。請(qǐng)輸入波長請(qǐng)輸入波長:275.0nm -0.002abs275.0nm -0.002abs no. abs conc no. abs conc調(diào)整波長完成后如下圖調(diào)整波長完成后如下圖五、進(jìn)入設(shè)置參數(shù)五、進(jìn)入設(shè)置參數(shù)在這個(gè)步驟中在這個(gè)步驟中主要設(shè)置樣品池主要設(shè)置樣品池。按。按enterenter鍵進(jìn)入?yún)?shù)設(shè)定界面，按鍵進(jìn)入?yún)?shù)設(shè)定界面，按鍵使鍵使光標(biāo)移動(dòng)到光標(biāo)移動(dòng)到“試樣設(shè)定試樣設(shè)定”，如圖所示。，如圖所示。按按enterenter鍵確認(rèn)，進(jìn)入設(shè)定界面。鍵確認(rèn)，進(jìn)入設(shè)定界面。測(cè)光方式測(cè)光方式數(shù)學(xué)計(jì)算數(shù)學(xué)計(jì)算試樣設(shè)定試樣設(shè)定六、

11、設(shè)定使用樣品池個(gè)六、設(shè)定使用樣品池個(gè)數(shù)數(shù)在這個(gè)步驟中主要設(shè)置樣品池。按在這個(gè)步驟中主要設(shè)置樣品池。按鍵鍵使光標(biāo)移動(dòng)到使光標(biāo)移動(dòng)到“使用樣池?cái)?shù)使用樣池?cái)?shù)”，如圖所示。，如圖所示。按按enterenter鍵循環(huán)選擇需要使用的樣品池個(gè)數(shù)。鍵循環(huán)選擇需要使用的樣品池個(gè)數(shù)。試樣室：八聯(lián)池試樣室：八聯(lián)池樣池?cái)?shù)：樣池?cái)?shù)：2空白溶液校正：否空白溶液校正：否樣池空白校正：否樣池空白校正：否七、樣品測(cè)量七、樣品測(cè)量按按returnreturn鍵返回到參數(shù)設(shè)定界面，再按鍵返回到參數(shù)設(shè)定界面，再按returnreturn鍵返回到光度測(cè)量界面。鍵返回到光度測(cè)量界面。在在1 1號(hào)樣品池內(nèi)放入空白溶液，號(hào)樣品池內(nèi)放入空白溶

12、液，2 2號(hào)樣品池內(nèi)放入待測(cè)溶液。關(guān)閉好樣品號(hào)樣品池內(nèi)放入待測(cè)溶液。關(guān)閉好樣品池蓋后按池蓋后按zerozero鍵進(jìn)行空白校正，再按鍵進(jìn)行空白校正，再按strt/stopstrt/stop鍵進(jìn)行樣品測(cè)量。測(cè)量鍵進(jìn)行樣品測(cè)量。測(cè)量結(jié)果如下圖所示：結(jié)果如下圖所示： 275.0nm -0.002abs 275.0nm -0.002abs no. abs conc no. abs conc 1-1 0.012 1.000 1-1 0.012 1.000 2-1 0.052 2.000 2-1 0.052 2.000八、結(jié)束測(cè)量八、結(jié)束測(cè)量測(cè)量完成后按測(cè)量完成后按pringpring鍵打印數(shù)據(jù)，如果沒有打

13、印機(jī)請(qǐng)記錄數(shù)據(jù)。退出程鍵打印數(shù)據(jù)，如果沒有打印機(jī)請(qǐng)記錄數(shù)據(jù)。退出程序或關(guān)閉儀器后測(cè)量數(shù)據(jù)將消失。確保從樣品池中取出所有比色皿，清序或關(guān)閉儀器后測(cè)量數(shù)據(jù)將消失。確保從樣品池中取出所有比色皿，清洗干凈以便下次使用。按洗干凈以便下次使用。按returnreturn鍵直到返回到儀器主菜單界面后再關(guān)閉鍵直到返回到儀器主菜單界面后再關(guān)閉儀器電源。儀器電源。實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?了解藥物在含量測(cè)定前進(jìn)行加樣回收率試了解藥物在含量測(cè)定前進(jìn)行加樣回收率試 驗(yàn)的目的；驗(yàn)的目的； 掌握加樣回收率試驗(yàn)具體方法；掌握加樣回收率試驗(yàn)具體方法； 學(xué)習(xí)加樣回收率計(jì)算方法。學(xué)習(xí)加樣回收率計(jì)算方法。 掌握紫外分光光度計(jì)操作方法。掌握

14、紫外分光光度計(jì)操作方法。實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 任何藥物在進(jìn)行含量檢測(cè)以前，都要對(duì)該檢測(cè)方法任何藥物在進(jìn)行含量檢測(cè)以前，都要對(duì)該檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度、精密度及儀器靈敏度等進(jìn)行考察，目的是證明的準(zhǔn)確度、精密度及儀器靈敏度等進(jìn)行考察，目的是證明采用的方法是否適合于相應(yīng)的檢測(cè)要求。其中準(zhǔn)確度系指采用的方法是否適合于相應(yīng)的檢測(cè)要求。其中準(zhǔn)確度系指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般用回收率（用回收率（% %）表示。）表示。加樣回收率試驗(yàn)最終反映的是測(cè)試加樣回收率試驗(yàn)最終反映的是測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確度。結(jié)果的準(zhǔn)確度。在測(cè)定樣品時(shí)，于已知被測(cè)成分含量的供在測(cè)

15、定樣品時(shí)，于已知被測(cè)成分含量的供試品中再精密加入一定量的已知純度的被測(cè)成分對(duì)照品，試品中再精密加入一定量的已知純度的被測(cè)成分對(duì)照品，依法測(cè)定。用實(shí)測(cè)值與供試品中含有量之差，除以加入對(duì)依法測(cè)定。用實(shí)測(cè)值與供試品中含有量之差，除以加入對(duì)照品量計(jì)算回收率。照品量計(jì)算回收率。實(shí)驗(yàn)儀器與材料實(shí)驗(yàn)儀器與材料r實(shí)驗(yàn)儀器：實(shí)驗(yàn)儀器：紫外分光光度計(jì)、精密天平、石紫外分光光度計(jì)、精密天平、石英比色皿、英比色皿、50ml50ml燒杯、玻璃棒、稱量紙、燒杯、玻璃棒、稱量紙、10ml10ml容量瓶、容量瓶、25ml25ml容量瓶、洗瓶。容量瓶、洗瓶。r實(shí)驗(yàn)材料：實(shí)驗(yàn)材料：氨茶堿原料、蒸餾水、氫氧化鈉。氨茶堿原料、蒸餾水

16、、氫氧化鈉。 0.01m naoh0.01m naoh溶液的配制：稱取氫氧化鈉溶液的配制：稱取氫氧化鈉0.4g0.4g，用蒸餾水定容至，用蒸餾水定容至1000ml1000ml，即得。，即得。實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)方法步驟一：步驟一：標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備：標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備：精密稱取氨茶堿標(biāo)準(zhǔn)品精密稱取氨茶堿標(biāo)準(zhǔn)品12.5mg12.5mg置于置于25ml25ml容量瓶中，先用少量容量瓶中，先用少量0.01m0.01m的的naohnaoh溶液振搖使溶溶液振搖使溶解，再用該溶液定容至刻度，配成濃度為解，再用該溶液定容至刻度，配成濃度為0.5mg/ml0.5mg/ml的的標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液儲(chǔ)備液；步驟二：步驟二：再從再從

17、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液中吸取中吸取1ml1ml，置于置于10ml10ml容量瓶中，容量瓶中，用用0.01m0.01m的的naohnaoh溶液定容至刻度，搖勻，配成濃度為溶液定容至刻度，搖勻，配成濃度為0.05mg/ml0.05mg/ml的溶液，記為的溶液，記為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，備用。備用。步驟三：步驟三：樣品溶液的制備：樣品溶液的制備：從從標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液中吸取中吸取200l200l，置于置于10ml10ml容量瓶中，用容量瓶中，用0.01m naoh0.01m naoh溶液定容至刻度，搖勻，溶液定容至刻度，搖勻，即得氨茶堿樣品溶液，平行制備即得氨茶堿樣品溶液，平行制備9 9份，再導(dǎo)入份

18、，再導(dǎo)入9 9個(gè)試管中，個(gè)試管中，并相應(yīng)做好標(biāo)記；并相應(yīng)做好標(biāo)記；步驟四：步驟四：從從9 9個(gè)試管中分別取出個(gè)試管中分別取出5ml5ml放置于放置于10ml10ml容量瓶中，容量瓶中，做好相應(yīng)標(biāo)記后，備用；做好相應(yīng)標(biāo)記后，備用；步驟五：步驟五：9 9個(gè)試管中剩余部分用于含量檢測(cè)（個(gè)試管中剩余部分用于含量檢測(cè)（采用紫外分光采用紫外分光光度法在光度法在275nm275nm處測(cè)定吸光度值（處測(cè)定吸光度值（a a275275），根據(jù)），根據(jù)已知標(biāo)準(zhǔn)已知標(biāo)準(zhǔn)曲線曲線求出溶液中氨茶堿濃度，并記錄）。求出溶液中氨茶堿濃度，并記錄）。步驟六：步驟六：再從再從標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液中中分別取出分別取出0.8ml0.8ml（ 80% 80% ）、）、1.0ml1.0ml（100%100%）和）和1.2ml1.2ml（120%120%）溶液各三份，加入）溶液各三份，加入步驟步驟四四的容量瓶中，用的容量瓶中，用0.01m0.01m的的naohnaoh溶液定容至刻度，搖勻并溶液定容至刻度，搖勻并做好標(biāo)記，然后采用紫外分光光度法在