高效液相色譜分析實驗沐風教育

1、儀器分析實驗報告實 驗 名 稱： 液相色譜分析實驗 學 院： 化學工程學院 專 業(yè)： 化學工程與工藝 班 級： 化工113班 姓 名： 學 號 指 導 教 師： 張侃 日 期： 2014年5月6日 輔導工具a1、 實驗目的1. 了解hplc的結構，了解儀器的開、關程序；2. 了解流動相的制備和樣品溶液的制備；3. 掌握外標法計算濃度的方法。2、 實驗原理液相色譜由泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成，試劑瓶中的流動相被泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對運動，經(jīng)過反復多次的吸附解吸的分配過程，各

2、組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀。 高效液相色譜分析的流程。由泵將儲液瓶中的溶劑吸入色譜系統(tǒng)，然后輸出，經(jīng)流量與壓力測量之后，導入進樣器。被測物由進樣器注入，并隨流動相通過色譜柱，在柱上進行分離后進入檢測器，檢測信號由數(shù)據(jù)處理設備采集與處理，并記錄色譜圖。廢液流入廢液瓶。遇到復雜的混合物分離（極性范圍比較寬）還可用梯度控制器作梯度洗脫。這和氣相色譜的程序升溫類似，不同的是氣相色譜改變溫度，而hplc改變的是流動相極性，使樣品各組分在最佳條件下得以分離。 高效液相色譜的分離過程。同其他色譜過程一樣，hplc也是溶質在

3、固定相和流動相之間進行的一種連續(xù)多次交換過程。它借溶質在兩相間分配系數(shù)、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質得以分離。3、 儀器與試劑儀器：液相色譜儀（大連依利特）、10l的微量注射器。試劑：乙腈和重蒸水溶液6:4混合液、2,2-雙4-（4-氨基苯氧基）苯基丙烷（bapp）4、 實驗步驟1. 流動相的準備 準備所需的流動相乙腈和重蒸水，將其分別用有機濾膜和水膜過濾，再以6:4的比例混溶，然后超聲脫氣。2. 開機，色譜柱平衡 當步驟1完成后，開機，待色譜柱平衡。3. 樣品溶液的準備 取合適計量的樣品(如取50mg的bapp溶于50ml的水中)，在重蒸水里溶解，最后用容量瓶

4、里定溶，最后用有機濾膜過濾，把它注入子彈頭里。4. 基線的查看由于儀器內(nèi)部壓力的變化可以引起基線的不斷波動，因此，需等待壓力穩(wěn)定后，基線平穩(wěn)才能進行進樣。5. 樣品進樣分析用25ml的微量注射器取5ml的bapp溶液，微量注射器中不能有氣泡，將微量注射器的針頭插入注射器的孔時，打開微量注射器閥，將bapp注射進去后，迅速關閉閥門，抽出針頭，等待儀器的分析結果。6. 色譜柱的清洗分析工作結束后，要清洗進樣閥中的殘留樣品，也要用適當?shù)囊后w來清洗色譜柱。7. 關機 實驗完畢后，關閉儀器和電腦。五、實驗數(shù)據(jù) y=701.393x+14.513峰高與濃度的關系圖 y=30830.8x-796.07 峰面

5、積與濃度的關系圖 由上圖可得以下結論： 該樣品的主峰出現(xiàn)在12.983min，在此之前與之后分別存在雜質峰。主峰的峰寬為0.3326min，峰高為1619.79114mau，峰面積為93.3238104mau*s。查濃度與峰面積以及濃度與峰高關系圖可以讀出：當峰面積為9.33238104mau*s時，濃度c=3.05mg/ml；當峰高為1619.79114mau時，濃度c=2.29mg/ml。綜上所述，該未知液的濃度為2.29mg/ml。六、實驗結論與分析由于實驗組分比較簡單，只要在實驗過程中，嚴格控制且定量進樣，就能得出準確的實驗結果。若采用歸一化法或內(nèi)標法，雖然能得到準確更高的實驗結果，但

6、由于實驗操作及計算均較為復雜，實驗及數(shù)據(jù)處理的時間長，效率相對不高，故實驗中采用外標法作為定量的方法。最佳色譜條件的選擇是本實驗準確度的關鍵。進樣針進樣時確保進樣針中沒有殘留氣泡，另外，在進不同濃度或不同的物質前因先用甲醇溶液潤洗干凈，以免相互影響。下面兩幅圖是標準溶液在不同濃度時峰面積圖和峰高圖。由給定的數(shù)據(jù)關系可做峰高與濃度，峰面積與濃度的關系圖，在根據(jù)所得的結果，在一下圖上找點，如下：由色譜圖和實驗結果可知，我們組該實驗做的還是比較成功的。但實驗中還是應該注意以下幾點： 1.注意注射器的選擇，應選用平頭的注射器。2.實驗過程中要注意儀器在運行中不能進入氣體，氣泡會使壓力不穩(wěn)，重現(xiàn)性差，所以在使用過程中要盡量避免產(chǎn)生氣泡。 3.不能用純乙腈等作為流動相，這樣會使單向閥粘住而導致泵不進液。 4.每次做完樣品后應