食用菌菌種生產(chǎn)課件

1、食用菌菌種生產(chǎn)第二章第二章 食用菌菌種生產(chǎn)食用菌菌種生產(chǎn)食用菌菌種生產(chǎn) 菌種是指經(jīng)人工培養(yǎng)并可供進(jìn)一步繁殖或栽培使用的食用菌純菌絲體。菌種是食用菌生產(chǎn)的基礎(chǔ)。我國(guó)食用菌菌種生產(chǎn)目前采用母種、原種、栽培種的三級(jí)繁育程序。無(wú)論制作哪一級(jí)菌種，關(guān)鍵應(yīng)強(qiáng)調(diào)無(wú)菌操作，嚴(yán)格按照無(wú)菌技術(shù)要求進(jìn)行。食用菌菌種生產(chǎn) 菌種的類(lèi)型菌種的類(lèi)型在生產(chǎn)中根據(jù)菌種的來(lái)源、繁殖代數(shù)及生產(chǎn)目的，把菌種分為母種、原種和栽培種。分別叫一級(jí)種、二級(jí)種、三級(jí)種。食用菌菌種生產(chǎn)第一節(jié)第一節(jié) 菌種生產(chǎn)的基本設(shè)備菌種生產(chǎn)的基本設(shè)備一、接種設(shè)備一、接種設(shè)備 接種設(shè)備是指用于分離和擴(kuò)大培養(yǎng)各級(jí)菌種的專(zhuān)業(yè)設(shè)備和工具。包括接種室、接種箱、超凈工作臺(tái)

2、、接種工具、酒精燈等。（一）接種室 又稱(chēng)無(wú)菌室，是分離和移接菌種的小房間。它分為內(nèi)外兩間，每間面積一般以48m2為宜，一般內(nèi)裝一只功率為30W的紫外線燈。其內(nèi)間為接種工作間，56m2，內(nèi)置工作臺(tái)，要求門(mén)窗能密封，這樣能減少灰塵積累和便于消毒。食用菌菌種生產(chǎn)外間為緩沖間，23m2，用于進(jìn)接種間之前更換衣、帽、鞋，同時(shí)為內(nèi)間提供與外界相隔的小環(huán)境。內(nèi)外間均為拉門(mén)，兩門(mén)的位置不能處于一條直線，應(yīng)相互錯(cuò)開(kāi)。內(nèi)外間墻、地板、天花板、室內(nèi)用具等應(yīng)盡量光滑易擦洗。（二）接種箱 用于分離、移接菌種的專(zhuān)用木箱，實(shí)質(zhì)上也是一個(gè)縮小的接種室。它要求密閉嚴(yán)實(shí)，操作方便，易于消毒。內(nèi)裝一只日光燈用于照明，一只紫外線燈用

3、于消毒。食用菌菌種生產(chǎn) 接種箱的類(lèi)型很多，因規(guī)模受限制，目前一般大小為長(zhǎng)143cm、寬86 cm 、 高159cm、分雙人和單人操作兩種類(lèi)型，箱的上層兩側(cè)安裝玻璃，能靈活開(kāi)閉，以便觀察和操作。食用菌菌種生產(chǎn)（三）超凈工作臺(tái) 為局部?jī)艋諝獾脑O(shè)備，其原理是對(duì)空氣進(jìn)行過(guò)濾除菌。它的最大優(yōu)點(diǎn)在于分離、接種時(shí)安全可靠，接種數(shù)量不受無(wú)菌空間的限制，操作方便。但其價(jià)格昂貴，實(shí)際生產(chǎn)中受到限制。食用菌菌種生產(chǎn)（四）接種工具 包括接種針、接種環(huán)、接種鉤、接種鋤、接種鏟、接種耙、接種刀、鑷子、接種器等。（五）酒精燈 酒精燈主要用于接種工具的燒灼滅菌和小范圍內(nèi)無(wú)菌接種。酒精燈點(diǎn)燃時(shí)，其火焰附近10cm范圍內(nèi)會(huì)形成

4、一個(gè)無(wú)菌區(qū)。在菌種分離、移接時(shí)，一般應(yīng)在酒精燈周?chē)M(jìn)行。食用菌菌種生產(chǎn)二、培養(yǎng)設(shè)備二、培養(yǎng)設(shè)備 用于培養(yǎng)接種后的各級(jí)菌種、并使菌絲生長(zhǎng)良好的專(zhuān)用設(shè)備。培養(yǎng)設(shè)備可提供適宜溫度和通氣條件，如保溫、調(diào)濕、避光、通風(fēng)等。主要有培養(yǎng)室、培養(yǎng)箱等。三、滅菌設(shè)備三、滅菌設(shè)備 滅菌是指用化學(xué)的或物理的方法殺滅物體表面和內(nèi)部的一切微生物，使之達(dá)到無(wú)菌狀態(tài)。一般采用熱力滅菌設(shè)備。熱力滅菌是利用高溫使菌體蛋白質(zhì)變性而失去活性，達(dá)到滅菌的目的。熱力滅菌設(shè)備分干熱滅菌設(shè)備和濕熱滅菌設(shè)備，常用的為濕熱滅菌設(shè)備，根據(jù)壓力指標(biāo)主要包括高壓蒸汽滅菌鍋和常壓蒸汽滅菌灶兩類(lèi)。食用菌菌種生產(chǎn)第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基的配制一、

5、培養(yǎng)基的種類(lèi)一、培養(yǎng)基的種類(lèi) 培養(yǎng)基是指采用人工的方法，將食用菌所需要的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)按照一定比例配合而成的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。培養(yǎng)基可按其物理性狀和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的種類(lèi)兩方面進(jìn)行分類(lèi)。（一）根據(jù)培養(yǎng)基的物理性狀分類(lèi) 根據(jù)培養(yǎng)基制成后物理狀態(tài)的不同，可分成液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基和固化培養(yǎng)基三種。食用菌菌種生產(chǎn)1、液體培養(yǎng)基 液體培養(yǎng)基是指將食用菌生長(zhǎng)發(fā)育所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)按一定比例加水配制而成的液態(tài)的培養(yǎng)基。它的優(yōu)點(diǎn)是營(yíng)養(yǎng)成分分布均勻，有利于食用菌營(yíng)養(yǎng)體充分接觸和吸收。生產(chǎn)上常用于培養(yǎng)液體菌種或生產(chǎn)某些食用菌的菌絲體及其代謝產(chǎn)物，實(shí)驗(yàn)上多用于生理生化方面的研究。食用菌菌種生產(chǎn)2、固體培養(yǎng)基 以含有纖維素、木質(zhì)素、

6、淀粉等各種碳源物質(zhì)為主，添加適量有機(jī)氮源、無(wú)機(jī)鹽等，含有一定水分呈固體狀態(tài)的培養(yǎng)基。優(yōu)點(diǎn)是原材料來(lái)源廣，價(jià)格低廉，配制容易，營(yíng)養(yǎng)豐富，因此是食用菌原種、栽培種的主要培養(yǎng)基。食用菌菌種生產(chǎn)3、固化培養(yǎng)基 指將各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)按比例配制成營(yíng)養(yǎng)液后，再加入適量的凝固劑，使之加熱至60以上呈液態(tài)，冷卻到40以下時(shí)則呈固態(tài)的培養(yǎng)基。常將其制成斜面培養(yǎng)基或平面培養(yǎng)基以供培養(yǎng)食用菌母種用。 食用菌菌種生產(chǎn)（二）按照營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)種類(lèi)分類(lèi) 根據(jù)培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)來(lái)源不同，分為天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基三大類(lèi)。食用菌菌種生產(chǎn)1、天然培養(yǎng)基 天然培養(yǎng)基是指利用化學(xué)成分不清楚且不恒定的天然有機(jī)物質(zhì)配制而成的培養(yǎng)基。各種農(nóng)副

7、產(chǎn)品、下腳料（如小麥、玉米、馬鈴薯、胡蘿卜、麥麩、木屑等）以及動(dòng)植物組織浸出液（如牛肉膏、麥芽汁、肉湯等）均為常用原料。這些有機(jī)物來(lái)源廣，價(jià)格便宜，營(yíng)養(yǎng)豐富，是食用菌生產(chǎn)中最常用的培養(yǎng)基。但是不能用之進(jìn)行精細(xì)的科學(xué)實(shí)驗(yàn)。食用菌菌種生產(chǎn)2、合成培養(yǎng)基 利用已知成分和已知數(shù)量的化學(xué)試劑配制而成的培養(yǎng)基。價(jià)格較昂貴，一般只限于實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行食用菌生理生化方面的研究。食用菌菌種生產(chǎn)3、半合成培養(yǎng)基 培養(yǎng)基中既有天然有機(jī)物質(zhì)又有無(wú)機(jī)鹽類(lèi)，稱(chēng)半合成培養(yǎng)基。這種培養(yǎng)基種類(lèi)多。應(yīng)用最為廣泛，也是食用菌菌種生產(chǎn)中常用的培養(yǎng)基。食用菌菌種生產(chǎn)（三）其他分類(lèi)方法 此外，按照培養(yǎng)基表面形狀又可把培養(yǎng)基分為斜面培養(yǎng)基、平面

8、培養(yǎng)基和高層培養(yǎng)基； 按照培養(yǎng)基中主要原料的不同，可把培養(yǎng)基分為馬鈴薯培養(yǎng)基、棉籽殼培養(yǎng)基、玉米芯培養(yǎng)基、木屑培養(yǎng)基等。 另外，根據(jù)試驗(yàn)的特殊需求研制出一些特殊培養(yǎng)基，如基礎(chǔ)培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基等，其中選擇性培養(yǎng)基在食用菌的菌種分離純化工作中應(yīng)用較廣。食用菌菌種生產(chǎn)二、培養(yǎng)基配制的一般原則二、培養(yǎng)基配制的一般原則 配制培養(yǎng)基時(shí)一般應(yīng)具備以下三個(gè)條件， 第一，含有該菌生長(zhǎng)發(fā)育所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如水分、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、維生素等，并注意各種成分的濃度配比要合理。 第二，具有一定的生長(zhǎng)環(huán)境，包括適宜的pH和滲透壓等。 第三，必須經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的滅菌，使之保持無(wú)菌狀態(tài)。食用菌菌種生產(chǎn)

9、（一）水分 水分不僅是菌絲細(xì)胞原生質(zhì)的主要成分，而且菌絲的一切生理活動(dòng)菌需在有水的情況下進(jìn)行。因此，在配置各種培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)加入一定量的水分。食用菌菌種生產(chǎn)（二）碳源 單糖（葡萄糖）、雙糖（蔗糖、麥芽糖）、多糖（淀粉）都是菌絲體能利用的有機(jī)碳源。食用菌菌種生產(chǎn)（三）氮源 氮素是構(gòu)成菌絲細(xì)胞中的蛋白質(zhì)和核酸的主要元素，而蛋白質(zhì)和核酸又是細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核的主要成分，它們?cè)谏顒?dòng)中起著重要的作用。有機(jī)氮(如氮基酸、蛋白質(zhì)、尿素)和氨態(tài)氮（如硫酸氨等）都是菌絲細(xì)胞所需氮素的主要來(lái)源。食用菌菌種生產(chǎn)（四）無(wú)機(jī)鹽類(lèi) 菌絲體所需要的無(wú)機(jī)鹽類(lèi)數(shù)量很少，但它們?cè)诰z體的生命活動(dòng)中是不可缺少的，在配制培養(yǎng)基時(shí)一般要

10、加入少量的磷、鉀、硫、鈣、鎂等。磷酸氫二鉀是一種磷酸鹽類(lèi)，具有緩沖作用，能防止培養(yǎng)基pH的急劇變化。食用菌菌種生產(chǎn)（五）生長(zhǎng)素 生長(zhǎng)素對(duì)菌絲體代謝活動(dòng)有刺激作用。一般天然物質(zhì)如馬鈴薯、麥芽汁、麩皮、米糠中均含有豐富的生長(zhǎng)素，無(wú)需另行添加。配制培養(yǎng)基時(shí)加入少量的B族維生素，對(duì)菌絲生長(zhǎng)有良好的作用。食用菌菌種生產(chǎn)（六）凝固劑 配制培養(yǎng)基常用的凝固劑為瓊脂，又名洋菜，是由石花菜等藻類(lèi)提取的一種多糖，其本身沒(méi)有營(yíng)養(yǎng)，主要起凝固作用，約96時(shí)熔化，40凝固，常用濃度為1.8%2%。食用菌菌種生產(chǎn)三、常用培養(yǎng)基及配制方法 不同食用菌的菌種對(duì)培養(yǎng)基種類(lèi)的要求均有所不同，同一種食用菌也可同時(shí)使用幾種不同的培養(yǎng)

11、基。（一）母種培養(yǎng)基 食用菌母種的培養(yǎng)基和分離菌種時(shí)使用的培養(yǎng)基一般都制成斜面試管，因此又常稱(chēng)為斜面培養(yǎng)基或試管培養(yǎng)基。母種培養(yǎng)基常用的基本物質(zhì)有馬鈴薯、葡萄糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、瓊脂和維生素B1等。食用菌菌種生產(chǎn)1、常用母種培養(yǎng)基配方 （1）馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA培養(yǎng)基) 馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂18 20g，水1000ml， pH自然。此培養(yǎng)基適于一般食用菌的母種分離、培養(yǎng)和保藏，廣泛地應(yīng)用于絕大多數(shù)的食用菌，是生產(chǎn)中最常用的培養(yǎng)基。 食用菌菌種生產(chǎn)1、常用母種培養(yǎng)基配方（2）馬鈴薯綜合培養(yǎng)基 馬鈴薯200g，葡萄糖20g，磷酸二氫鉀3g，硫酸鎂1. 5g，瓊脂18-2

12、0g，維生素B1l0mg，水l000ml。此培養(yǎng)基適合于香菇菌種保藏和一般食用菌的母種分離、培養(yǎng)和保藏。 食用菌菌種生產(chǎn) （3）完全培養(yǎng)基 MgSO 40.5g， K2HPO4 1g，葡萄糖20g， KH2 PO4 0.46g，蛋白胨2g，瓊脂15g，水1000m1。此培養(yǎng)基為培養(yǎng)食用菌母種最常用的合成培養(yǎng)基，有緩沖作用，適宜保藏各種菌種。食用菌菌種生產(chǎn) （4）麥芽膏酵母膏培養(yǎng)基（5）稻草浸汁培養(yǎng)基（6）普通標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基（7）蘋(píng)果瓊脂培養(yǎng)基（8）高粱瓊脂培養(yǎng)基（9）醬油洋蔥瓊脂培養(yǎng)基（10）木屑浸出汁培養(yǎng)基（11）胡蘿卜馬鈴薯培養(yǎng)基（12）玉米粉培養(yǎng)基（13）子實(shí)體浸出液培養(yǎng)基食用菌菌種生產(chǎn)2、

13、母種培養(yǎng)基的配制原則營(yíng)養(yǎng)成分及比例適合該食用菌的生長(zhǎng)發(fā)育。酸堿度、氧化-還原電位適宜。有一定的pH緩沖能力。食用菌菌種生產(chǎn)3、母種培養(yǎng)基的配制方法 （1）稱(chēng)重 用適當(dāng)工具準(zhǔn)確稱(chēng)量出各種營(yíng)養(yǎng)成分。食用菌菌種生產(chǎn)（2）調(diào)配 將去皮、挖掉芽眼的馬鈴薯（或洋蔥、稻草、胡蘿卜、子實(shí)體等）切成小塊，放入小鋼精鍋或大燒杯中，加入一定量的水，用文火煮沸30min左右，雙層紗布過(guò)濾取汁。玉米粉或高粱粉加水后，一般加熱至70左右，并保持60min，過(guò)濾取汁；麥芽則加熱至6062，保持60min，過(guò)濾取汁。食用菌菌種生產(chǎn)（3）加入瓊脂溶解 先將濾液補(bǔ)足失水，再將瓊脂預(yù)濕后加入濾液中，文火加熱攪拌至全部溶化。（4）加

14、入配方中其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。（5） pH測(cè)定與調(diào)整 充分?jǐn)嚢杈鶆?，用pH試紙側(cè)定pH，并按食用菌所需的最適pH，用lmol/L NaOH或1 moI/LHCI進(jìn)行調(diào)整。食用菌菌種生產(chǎn)（6）過(guò)濾分裝 用紗布過(guò)濾，取汁趁熱分裝。培養(yǎng)基的分裝量應(yīng)為試管長(zhǎng)度的15或14。操作時(shí)應(yīng)盡量防止培養(yǎng)基黏在試管口或壁上，若已黏上應(yīng)立即用紗布或脫脂棉擦凈。食用菌菌種生產(chǎn)（7）加棉塞、包扎 裝好培養(yǎng)基的試管應(yīng)及時(shí)塞上棉塞。棉塞要用未脫脂的原棉。棉塞要大小均勻、松緊適宜，長(zhǎng)度一般為45cm，一般要求2/3留在試管內(nèi)，1/3露在試管外。然后把塞好棉塞的試管，每710支捆扎成一把，用牛皮紙或雙層報(bào)紙包扎，再用皮套扎緊或棉線捆好

15、，放入手提式高壓鍋內(nèi)滅菌。 食用菌菌種生產(chǎn)（8）滅菌 用高壓蒸汽滅菌鍋進(jìn)行滅菌。步驟為：加熱升溫壓力至0.05MPa時(shí)，放氣閥打開(kāi)，排冷氣壓力為0，關(guān)閉排氣閥繼續(xù)升溫，壓力至0.15MPa，持續(xù)2030min壓力降至0。食用菌菌種生產(chǎn)（9）擺斜面 滅菌完畢后，讓其壓力和溫度自然降至零后，立即取出培養(yǎng)基，在清潔的臺(tái)面或桌面上傾斜擺放，擺成斜面，一般斜面長(zhǎng)度以達(dá)試管全長(zhǎng)的1/2-2/3為宜。食用菌菌種生產(chǎn)（二）原種和栽培種培養(yǎng)基（二）原種和栽培種培養(yǎng)基 原種培養(yǎng)基和栽培種培養(yǎng)基的配制基本相同，只不過(guò)原則上制作原種的培養(yǎng)基要更精細(xì)些，營(yíng)養(yǎng)成分應(yīng)盡可能豐富，而且還要易于菌絲的吸收，以便移接的母種菌絲能

16、更好生長(zhǎng)發(fā)育。用于原種培養(yǎng)基的配方。一般也適用于栽培種培養(yǎng)基。食用菌菌種生產(chǎn)1、原種和栽培種常用培養(yǎng)基配方（1）木屑培養(yǎng)基 闊葉樹(shù)木屑（或竹屑）78%，麩皮（或米糠）20%，糖1%，石膏粉1%。此培養(yǎng)基適用于木腐菌的原種、栽培種的培養(yǎng)，如香菇、平菇、木耳、金針、猴頭、靈芝，特別適宜于香菇菌種生產(chǎn)。 食用菌菌種生產(chǎn)（2）棉籽殼培養(yǎng)基 棉籽殼78%，麩皮20%，蔗糖 1 %，石膏粉1%。此配方適用于金針菇、平菇、風(fēng)尾菇、草菇、銀耳、木耳、猴頭等。 （3）甘蔗渣培養(yǎng)基 甘蔗渣75%，麩皮或米糠24%，石膏粉1%。適用于平菇、風(fēng)尾、金針菇、草菇、木耳、白靈菇等原種、栽培種的培養(yǎng)。 食用菌菌種生產(chǎn) （4

17、）谷粒培養(yǎng)基 以小麥、高粱、玉米等為主料制作的培養(yǎng)基為谷粒培養(yǎng)基。（5）糞草培養(yǎng)基 （6）木條木塊培養(yǎng)基 食用菌菌種生產(chǎn)2、原種和栽培種培養(yǎng)基的制備 在大規(guī)模生產(chǎn)中，原種和栽培種的培養(yǎng)基一般多為固體培養(yǎng)基。 （1）稱(chēng)量和拌料 首先按配方分別稱(chēng)取新鮮無(wú)霉變的培養(yǎng)料，充分?jǐn)噭蚝?，檢查并調(diào)節(jié)好水分和pH，然后即可裝瓶或裝袋。食用菌菌種生產(chǎn)（2）裝瓶、裝袋 在分裝棉籽殼、玉米芯、木屑等培養(yǎng)基時(shí)，上下料的松緊度要求一致，裝至瓶肩，壓平表面，用直徑1. 5cm的錐形搗木的尖端，在瓶?jī)?nèi)或袋中央打1個(gè)孔，其深度要臨近瓶底，有利料中通氣和固定菌種塊的作用。然后用干布擦凈瓶口，用牛皮紙、塑料布扎口，或用棉塞塞住。

18、以塑料袋代替瓶裝料時(shí)，應(yīng)配制適量的木屑培養(yǎng)基，要求袋的厚薄均勻、無(wú)砂眼，并要消除料中的尖利雜物后才可裝料，邊裝邊壓實(shí)，裝止離袋口45cm處，加口圈再用紙?jiān)诩纯?。食用菌菌種生產(chǎn)（3）滅菌 將已裝好料的瓶或袋進(jìn)行高壓或常壓滅菌，冷卻后即為制備好的原種和栽培種培養(yǎng)基。食用菌菌種生產(chǎn) 二二(三三)級(jí)種裝瓶級(jí)種裝瓶食用菌菌種生產(chǎn)第三節(jié)第三節(jié) 消毒與滅菌消毒與滅菌 在食用菌制種和栽培中，為了能對(duì)食用菌進(jìn)行純培養(yǎng)，必須消滅或抑制有害微生物的活動(dòng)，此過(guò)程稱(chēng)為消毒或滅菌。食用菌菌種生產(chǎn)一、消毒與滅菌的概念一、消毒與滅菌的概念 消毒與滅菌是不同程度殺滅有害微生物的方法。根據(jù)對(duì)微生物殺滅程度的不同，將殺菌分為滅菌

19、、消毒和防腐三個(gè)等級(jí)。 消毒是利用物理或化學(xué)的方法，消滅料中、物體表面及環(huán)境中的一部分微生物，即一般以殺死有害微生物為目的，但不能殺死微生物的休眠體（細(xì)菌芽孢）。食用菌菌種生產(chǎn) 滅菌是指用化學(xué)或物理的方法殺滅或除掉物料或設(shè)備中所有的有生命的有機(jī)體的技術(shù)或工藝過(guò)程，即殺滅物體上包括芽孢在內(nèi)的所有病原性和非病原性微生物的方法。 防腐是指防止或抑制細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的方法，細(xì)菌一般不死亡。 無(wú)菌是指不含活菌的意思。防止微生物進(jìn)人機(jī)體或物體的操作方法，稱(chēng)為無(wú)菌操作或無(wú)菌技術(shù)。食用菌菌種生產(chǎn)二、消毒與滅菌的一般方法二、消毒與滅菌的一般方法（一）物理消毒滅菌法1、熱力滅菌法 熱力滅菌法分干熱滅菌和濕熱滅菌。在同

20、一溫度下，后者效力比前者大。食用菌菌種生產(chǎn)（1）干熱滅菌燒灼 直接用火焰把微生物燒死的滅菌方法，又稱(chēng)火焰滅菌法。僅適用于金屬接種工具(如接種針)、試管口和污染物品等的滅菌。方法是將需滅菌的器具在火焰上來(lái)回通過(guò)幾次，火焰溫度可達(dá)到200以上，一切微生物的營(yíng)養(yǎng)體和孢子體可全部殺死。食用菌菌種生產(chǎn)干烤 又稱(chēng)熱空氣滅菌法，即在烤箱如電熱恒溫干燥箱、電熱鼓風(fēng)干燥箱中利用熱空氣來(lái)滅菌。一般是將待滅菌的物品用牛皮紙或舊報(bào)紙包好，加熱至160170經(jīng)2h或140160經(jīng)3h即可。注意滅菌結(jié)束后一定要自然降溫至60以下才能打開(kāi)箱門(mén)。適用于高溫下不變質(zhì)、不蒸發(fā)的物品，如玻璃器皿、瓷器用具等。食用菌菌種生產(chǎn)（2）濕

21、熱滅菌 煮沸法 1.0105Pa時(shí)，煮沸的水溫為100，一般細(xì)菌繁殖體煮沸5min即被殺死。細(xì)菌芽孢常需煮沸12h才被殺死。水中加入2%碳酸鈉，既可提高沸點(diǎn)達(dá)105，促進(jìn)細(xì)菌芽孢的殺滅，又可防止金屬器皿生銹。食用菌菌種生產(chǎn)巴氏消毒法 用較低溫度殺滅物體中的病原菌，同時(shí)又不影響消毒物的營(yíng)養(yǎng)成分及香味的消毒方法。加熱61.162.8經(jīng)0.5h即可。常用于牛奶和酒類(lèi)等的消毒。食用菌菌種生產(chǎn)間歇滅菌法 間歇滅菌法是利用反復(fù)多次的流通蒸汽加熱，殺死細(xì)菌所有繁殖體和芽孢的滅菌法。具體做法是將待滅菌的物品置于阿諾流通蒸汽滅菌器內(nèi)，100加熱1530min，殺死其中的細(xì)菌繁殖體，然后將物品置于37溫箱中過(guò)夜使

22、芽孢發(fā)育成繁殖體，次日再通過(guò)流通蒸汽加熱，如此連續(xù)三次，可將所有細(xì)菌繁殖體和芽孢全部殺死。 該方法適用于不耐高溫的藥品、營(yíng)養(yǎng)物、特殊培養(yǎng)基的滅菌。食用菌菌種生產(chǎn)高壓蒸汽滅菌法 高壓蒸汽滅菌法是利用高溫高壓蒸汽滅菌的方法，也是目前滅菌效果最好、使用最為廣泛的一種滅菌方法。通常液體培養(yǎng)基在1.0105Pa的壓力下，溫度達(dá)121.3，維持1530min，可殺死包括細(xì)菌芽孢在內(nèi)的所有微生物。對(duì)固體培養(yǎng)基，如木屑、棉籽殼、谷粒、糞草等必須在1.47105Pa的壓力下，溫度約為128，處理12h，才能達(dá)到滿意的滅菌效果。食用菌菌種生產(chǎn)常壓蒸汽滅菌 采用自然壓力即1.0105Pa，100蒸汽進(jìn)行滅菌的方法。

23、設(shè)備簡(jiǎn)單，成本低，一般水燒開(kāi)后保持810h，悶一夜即可。食用菌菌種生產(chǎn)2、輻射滅菌法（1）紫外線 紫外線波長(zhǎng)為240280nm時(shí)具有殺菌作用，其中以260nm最強(qiáng)。紫外線穿透力差，只適用于空氣及不耐熱物品的表面消毒。 （2）電離輻射 即射線滅菌法。高速電子、x射線和射線等的波長(zhǎng)極短，但它們的輻射能極大，在足夠劑量時(shí)，對(duì)各種細(xì)菌均有致死作用。 （3）微波滅菌 微波是指波長(zhǎng)1000m1000mm的電磁波。 食用菌菌種生產(chǎn)3、濾過(guò)除菌法 濾過(guò)除菌也稱(chēng)過(guò)濾滅菌法，是用物理阻留的方法將液體或空氣中的細(xì)菌除去，以達(dá)到無(wú)菌的目的。所用的器具是濾菌器。濾過(guò)除菌主要用于一些不耐高溫滅菌的血清、細(xì)菌毒素、抗生素以

24、及空氣等的除菌。目前常用的有濾膜濾菌器、石棉濾菌器、玻璃濾菌器等。食用菌菌種生產(chǎn)（二）化學(xué)消毒滅菌法（二）化學(xué)消毒滅菌法 用化學(xué)藥品進(jìn)行消毒滅菌的方法，由于化學(xué)藥品對(duì)細(xì)菌及人體都有毒，故只能用于體表、器械及周?chē)h(huán)境等的消毒。 1、重金屬及其鹽類(lèi) 大多數(shù)重金屬包括它們的化合物是有效的殺菌劑或防腐劑，如汞、銀、鋁、鋅、銅、鉛等。但由于所有的重金屬鹽類(lèi)對(duì)微生物、人和動(dòng)物都有毒害作用，因此使用時(shí)要特別小心。食用菌菌種生產(chǎn)（1）氯化汞（升汞） 白色結(jié)晶體，殺菌力極強(qiáng)，主要用于食用菌的菌種分離及玻璃器皿、非金屬器械的表面消毒。劇毒藥品，需安全使用，妥善保管。（2）硝酸銀 呈液體狀，0.1%1.0%硝酸銀可

25、用作皮膚消毒。（3）硫酸銅 與石灰配制的波爾多液常用作菇房及床架的消毒。使用時(shí)用噴霧器噴灑，隨配隨用， 不宜久存。食用菌菌種生產(chǎn)2、氧化劑 常用的氧化劑有高錳酸鉀、過(guò)氧化氫、臭氧、漂白粉、過(guò)氧乙酸、漂粉精片等。 3、還原劑 常用的有福爾馬林，為還原性消毒劑，含甲醛37%40%，有較強(qiáng)的腐蝕性和刺激性。原液作熏蒸用，主要用于接種室、接種箱、培養(yǎng)室、栽培房等空間的消毒。5%的福爾馬林可殺死細(xì)菌芽孢和真菌孢子。 食用菌菌種生產(chǎn)4、表面活性劑 表面活性劑指具有降低表面張力效應(yīng)的物質(zhì)，常用的有苯酚、乙醇、來(lái)蘇兒、新滅爾靈、肥皂。5、酸堿 強(qiáng)酸和強(qiáng)堿較強(qiáng)的殺菌力。無(wú)機(jī)酸如硫酸、鹽酸等，殺菌力強(qiáng)，但由于腐蝕

26、性大，實(shí)際上不宜做消毒劑。某些有機(jī)酸如苯甲酸可用作防腐劑，強(qiáng)堿可用作殺菌劑，但由于毒性大，其用途局限于對(duì)排泄物及倉(cāng)庫(kù)、棚舍等環(huán)境的消毒。食用菌菌種生產(chǎn)6、其他消毒劑（1）石灰 分生石灰和熟石灰。以4份生石灰加入1份水，即生成熟石灰，并放出熱量，具有殺菌作用。（2）硫黃 常用于培菌室和出菇房等空間熏蒸殺菌。（3）消毒新產(chǎn)品 例如氣霧消毒劑、AFD-A型華光食用菌制種消毒劑等。食用菌菌種生產(chǎn)第四節(jié)第四節(jié) 接種與培養(yǎng)接種與培養(yǎng) 接種：在無(wú)菌條件下，將母種或原種菌種移接到嚴(yán)格滅菌的培養(yǎng)基上的過(guò)程。一、接種工具及用品 接種工具及用品包括接種針、接種環(huán)、接種鉤、接種鋤、接種鏟、接種耙、接種刀、攝子、彈簧接

27、種器、酒精、藥棉、酒精燈、火柴、解剖刀、盛放廢物的容器、記號(hào)筆等。食用菌菌種生產(chǎn)食用菌菌種生產(chǎn)二、接種與培養(yǎng)二、接種與培養(yǎng)（一）母種的接種與培養(yǎng)1、接種 母種的接種就是通常所說(shuō)的母種的轉(zhuǎn)管。在轉(zhuǎn)管過(guò)程中至關(guān)重要的就是采用無(wú)菌操作技術(shù)，此項(xiàng)工作必須在接種箱或超凈工作臺(tái)的酒精燈火焰周?chē)?0cm的無(wú)菌區(qū)進(jìn)行。食用菌菌種生產(chǎn)食用菌菌種生產(chǎn)2、培養(yǎng) 將接種后的試管放入溫箱內(nèi)，于25左右的溫度條件下培養(yǎng)。一般培養(yǎng)3d后，應(yīng)檢查菌絲生長(zhǎng)情況或有無(wú)雜菌，培養(yǎng)715d母種菌絲即可長(zhǎng)好。食用菌菌種生產(chǎn)（二）原種的接種與培養(yǎng)1、原種的接種 首先用左手拿起試管，用右手拔棉塞，以便在酒精燈上消毒接種鉤鏟，一邊把試管口向

28、下稍微傾斜，用酒精火焰封鎖，不讓空氣中的雜菌侵人。其次把消毒后的接種勾鏟伸入菌種管內(nèi)，稍微冷卻，在伸入斜面菌種挑取一小塊菌種，迅速移到原種瓶中培養(yǎng)料表面中央的接種穴內(nèi)，菌絲向下緊貼培養(yǎng)基，再迅速塞好棉塞或用塑料布、牛皮紙?jiān)?。食用菌菌種生產(chǎn)食用菌菌種生產(chǎn)2、原種的培養(yǎng) 接種好的原種應(yīng)移入培養(yǎng)室或培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，待菌絲長(zhǎng)滿后即為原種。培養(yǎng)出的原種，應(yīng)當(dāng)菌絲濃白、健壯、純凈、生命力強(qiáng)，具有一定的清香味，無(wú)任何雜菌污染，且要在三個(gè)月內(nèi)使用。食用菌菌種生產(chǎn)（三）栽培種的接種與培養(yǎng)1、栽培種的接種 栽培種的接種是將原種移接到栽培種培養(yǎng)基上，待菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)基即為栽培種。栽培種的培養(yǎng)基可為瓶裝也可袋裝。每瓶接

29、入一大塊原種或一小勺麥粒菌種即可。兩人合作時(shí)，一人以無(wú)菌操作方法用接種勺或大鑷子取一塊原種菌絲，另一人幫助在酒精燈火焰旁打開(kāi)栽培種袋口，迅速將原種接到袋中，塞好棉塞即可。食用菌菌種生產(chǎn)食用菌菌種生產(chǎn)2、栽培種的培養(yǎng) 接種完畢，于25左右的培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)。經(jīng)3040d培養(yǎng)后，栽培菌種即可長(zhǎng)滿菌絲，供栽培使用。若在袋內(nèi)長(zhǎng)有原基，說(shuō)明菌種老化；若有黃、綠、黑等雜色斑點(diǎn)或連成一片，說(shuō)明菌種污染，均不可使用。食用菌菌種生產(chǎn)三、菌種質(zhì)量鑒定 菌種質(zhì)量鑒定主要包括兩方面的內(nèi)容：一是鑒定未知菌種的種類(lèi)，從而避免菌種混亂帶來(lái)?yè)p失，二是鑒定已知菌種質(zhì)量的好壞，以便選擇優(yōu)良品種。 菌種質(zhì)量的鑒定一般是從菌種的純度、長(zhǎng)

30、勢(shì)、顏色、菌齡、均勻度和出菇快慢等6方面進(jìn)行鑒定的，最可靠的方法就是出菇試驗(yàn)。 食用菌菌種生產(chǎn)一、母種質(zhì)量鑒定一、母種質(zhì)量鑒定1、轉(zhuǎn)管次數(shù)最多不超過(guò)、轉(zhuǎn)管次數(shù)最多不超過(guò)45次次2、菌齡低溫保存不超過(guò)、菌齡低溫保存不超過(guò)6個(gè)月個(gè)月3、外觀菌絲濃白、粗壯、富有彈性、爬瓶力、外觀菌絲濃白、粗壯、富有彈性、爬瓶力強(qiáng)，沒(méi)有干燥、收縮現(xiàn)象和大量紅褐色液體。強(qiáng)，沒(méi)有干燥、收縮現(xiàn)象和大量紅褐色液體。4、長(zhǎng)勢(shì)菌絲生長(zhǎng)快、整齊、濃而健壯。、長(zhǎng)勢(shì)菌絲生長(zhǎng)快、整齊、濃而健壯。5、溫度適應(yīng)性在適溫培養(yǎng)后，放在高溫下培、溫度適應(yīng)性在適溫培養(yǎng)后，放在高溫下培養(yǎng)幾小時(shí)，菌絲仍能健壯生長(zhǎng)的。養(yǎng)幾小時(shí)，菌絲仍能健壯生長(zhǎng)的。6、干

31、濕性鑒定、干濕性鑒定7、出菇試驗(yàn)、出菇試驗(yàn)食用菌菌種生產(chǎn)二、原種和栽培種質(zhì)量的鑒定二、原種和栽培種質(zhì)量的鑒定 原種、栽培種最好不做貯備菌種，按栽培時(shí)原種、栽培種最好不做貯備菌種，按栽培時(shí)期有計(jì)劃地生產(chǎn)。接原種的母種轉(zhuǎn)管次數(shù)要少，期有計(jì)劃地生產(chǎn)。接原種的母種轉(zhuǎn)管次數(shù)要少，一般不多于一般不多于3次。次。食用菌菌種生產(chǎn) 原種和栽培種的外觀要求： 1、菌絲己長(zhǎng)滿培養(yǎng)基，有的要求有分化的子實(shí)體原基。有菇香味，無(wú)異味。 2、菌絲生長(zhǎng)健壯，絨狀菌絲多，生長(zhǎng)整齊。 3、菌絲色澤潔白或符合該菌的顏色。 4、菌種瓶?jī)?nèi)無(wú)雜色出現(xiàn)和無(wú)雜菌污染。 5、菌種培養(yǎng)基不能干縮與瓶壁分開(kāi)。 6、菌種瓶?jī)?nèi)無(wú)黃色汁液滲出。食用菌菌

32、種生產(chǎn)木耳 菌絲白色至米黃色，平貼培養(yǎng)基匍匐生菌絲白色至米黃色，平貼培養(yǎng)基匍匐生長(zhǎng)，菌絲短、整齊，生長(zhǎng)速度個(gè)品種不長(zhǎng)，菌絲短、整齊，生長(zhǎng)速度個(gè)品種不同，日省長(zhǎng)同，日省長(zhǎng)0.50.5厘米左右，在厘米左右，在2828的培養(yǎng)的培養(yǎng)條件下條件下13131515天長(zhǎng)滿天長(zhǎng)滿5 5厘米的斜面，滿管厘米的斜面，滿管后培養(yǎng)基呈淺黃色至茶褐色，見(jiàn)光情況后培養(yǎng)基呈淺黃色至茶褐色，見(jiàn)光情況下，斜面邊緣或表面出現(xiàn)膠質(zhì)琥珀?duì)钤?，斜面邊緣或表面出現(xiàn)膠質(zhì)琥珀?duì)钤径匣屑t褐色、珊瑚狀原基基，毛木耳老化有紅褐色、珊瑚狀原基出現(xiàn)，培養(yǎng)溫度出現(xiàn)，培養(yǎng)溫度2828。食用菌菌種生產(chǎn)草菇 菌落分正常和不正常兩種。菌絲濃密、菌

33、落分正常和不正常兩種。菌絲濃密、均勻，灰白或淡黃色，透明狀，生長(zhǎng)快，均勻，灰白或淡黃色，透明狀，生長(zhǎng)快，厚垣孢子少為正常菌株；菌絲稀疏，成厚垣孢子少為正常菌株；菌絲稀疏，成簇絨毛星散分布，生長(zhǎng)速度慢，均為不簇絨毛星散分布，生長(zhǎng)速度慢，均為不正常菌株，不能繼續(xù)使用，培養(yǎng)溫度為正常菌株，不能繼續(xù)使用，培養(yǎng)溫度為3030。食用菌菌種生產(chǎn)金針菇 菌絲白色，細(xì)絨棉狀，稍有爬壁菌絲白色，細(xì)絨棉狀，稍有爬壁能力，生長(zhǎng)速度與香菇相仿，老能力，生長(zhǎng)速度與香菇相仿，老師菌落表面呈淡污褐色，低溫保師菌落表面呈淡污褐色，低溫保藏時(shí)，試管內(nèi)菌落上面出現(xiàn)水珠藏時(shí)，試管內(nèi)菌落上面出現(xiàn)水珠以形成子實(shí)體。以形成子實(shí)體。 食用菌

34、菌種生產(chǎn)平菇 菌絲白色，粗壯有力，氣生菌絲發(fā)達(dá)，菌絲白色，粗壯有力，氣生菌絲發(fā)達(dá)，爬壁性強(qiáng)，菌絲密集，生長(zhǎng)速度快，不爬壁性強(qiáng)，菌絲密集，生長(zhǎng)速度快，不分泌色素，具有耐高溫性能，分泌色素，具有耐高溫性能，6 67 7天長(zhǎng)天長(zhǎng)滿滿5 5厘米的試管斜面，低溫保存，能產(chǎn)厘米的試管斜面，低溫保存，能產(chǎn)生珊瑚狀子實(shí)體。生珊瑚狀子實(shí)體。食用菌菌種生產(chǎn)合格的菌種（左、右）合格的菌種（左、右）不合格菌種（中、老化）不合格菌種（中、老化）合格的菌種（左中）合格的菌種（左中）不合格菌種（雜菌、右）不合格菌種（雜菌、右）食用菌菌種生產(chǎn)第四節(jié)菌種分離方法第四節(jié)菌種分離方法 菌種分離是菌種純化的基本方法，是制種菌種分離是

35、菌種純化的基本方法，是制種的重要環(huán)節(jié)。的重要環(huán)節(jié)。 將有價(jià)值的子實(shí)體的局部組織、孢子或基內(nèi)菌將有價(jià)值的子實(shí)體的局部組織、孢子或基內(nèi)菌絲移接到斜面試管培養(yǎng)基上，獲得純培養(yǎng)菌絲的操絲移接到斜面試管培養(yǎng)基上，獲得純培養(yǎng)菌絲的操作稱(chēng)為作稱(chēng)為菌種分離菌種分離。食用菌菌種生產(chǎn)食用菌菌種生產(chǎn)1 1、分離前的準(zhǔn)備、分離前的準(zhǔn)備培養(yǎng)基的選擇培養(yǎng)基的選擇通常使用通常使用PDAPDA培養(yǎng)基。特殊分離培養(yǎng)時(shí)，常采培養(yǎng)基。特殊分離培養(yǎng)時(shí)，常采用相應(yīng)的培養(yǎng)基。用相應(yīng)的培養(yǎng)基。食用菌菌種生產(chǎn)種菇的預(yù)處理種菇的預(yù)處理 種菇采摘后，若種菇水分太高，菇蓋沾種菇采摘后，若種菇水分太高，菇蓋沾粘，可適當(dāng)風(fēng)干后再進(jìn)行分離。膠質(zhì)耳只能用

36、粘，可適當(dāng)風(fēng)干后再進(jìn)行分離。膠質(zhì)耳只能用無(wú)菌水多次沖洗，無(wú)菌濾紙吸干，然后讓耳片無(wú)菌水多次沖洗，無(wú)菌濾紙吸干，然后讓耳片子實(shí)層上重新產(chǎn)生成熟的孢子供分離，這樣可子實(shí)層上重新產(chǎn)生成熟的孢子供分離，這樣可降低污染率。降低污染率。食用菌菌種生產(chǎn)食用菌菌種生產(chǎn)孢子分離法得到的菌種生活力較強(qiáng)，但孢孢子分離法得到的菌種生活力較強(qiáng)，但孢子個(gè)體之間有差異，且自然分化現(xiàn)象較嚴(yán)子個(gè)體之間有差異，且自然分化現(xiàn)象較嚴(yán)重，變異大，需經(jīng)出菇試驗(yàn)才能在生產(chǎn)上重，變異大，需經(jīng)出菇試驗(yàn)才能在生產(chǎn)上應(yīng)用。應(yīng)用。 孢子分離法分為孢子分離法分為和和。食用菌菌種生產(chǎn)（一）多孢分離法（一）多孢分離法 就是把許多孢子接種在同一培養(yǎng)基上，讓

37、就是把許多孢子接種在同一培養(yǎng)基上，讓它們萌發(fā)、自由交配來(lái)獲得食用菌純菌種的一它們萌發(fā)、自由交配來(lái)獲得食用菌純菌種的一種方法。根據(jù)獲取孢子的方法不同，種方法。根據(jù)獲取孢子的方法不同，主要有：主要有：孢子印分離法、孢子彈射分離法、菌褶涂抹法、孢子印分離法、孢子彈射分離法、菌褶涂抹法、空中孢子捕捉法等?？罩墟咦硬蹲椒ǖ取Ｊ秤镁N生產(chǎn)食用菌菌種生產(chǎn)食用菌菌種生產(chǎn)食用菌菌種生產(chǎn)食用菌菌種生產(chǎn)食用菌菌種生產(chǎn)食用菌菌種生產(chǎn)食用菌菌種生產(chǎn) 孢子分離得到的母種、必須進(jìn)一步提純復(fù)孢子分離得到的母種、必須進(jìn)一步提純復(fù)壯，當(dāng)母種定植一星期左右，菌絲布滿斜面壯，當(dāng)母種定植一星期左右，菌絲布滿斜面時(shí)，選擇菌絲健壯、生長(zhǎng)

38、旺盛無(wú)老化、無(wú)感時(shí)，選擇菌絲健壯、生長(zhǎng)旺盛無(wú)老化、無(wú)感染雜菌的母種試管，進(jìn)而轉(zhuǎn)管擴(kuò)大，一般到染雜菌的母種試管，進(jìn)而轉(zhuǎn)管擴(kuò)大，一般到栽培種，轉(zhuǎn)管不宜超過(guò)栽培種，轉(zhuǎn)管不宜超過(guò)5 5次。次。食用菌菌種生產(chǎn)食用菌菌種生產(chǎn)食用菌菌種生產(chǎn)食用菌菌種生產(chǎn)食用菌菌種生產(chǎn) 孢子液制備 取多孢分離所收集的抱子印，用沾濕無(wú)菌水的接種環(huán)從抱子印中沾取少量抱子，放入無(wú)菌水試管中，充分振蕩。 接種、培養(yǎng) 將Iml無(wú)菌吸管吸取的孢子懸液加1-2滴2%瓊脂于培養(yǎng)皿平板中央混合，用消毒的玻璃刮鏟涂抹抱子懸液，使均勻分布在整個(gè)培養(yǎng)皿的平板上，放人25溫箱中培養(yǎng)。 篩選 找到萌發(fā)的孢子，用尖細(xì)的接種針或細(xì)玻璃棒針將單抱子挑出，移入

39、新的培養(yǎng)皿平板或試管斜面中培養(yǎng)。食用菌菌種生產(chǎn)食用菌菌種生產(chǎn)（一）子實(shí)體組織分離法（以傘菌為例）（一）子實(shí)體組織分離法（以傘菌為例） 組織分離時(shí)，用組織分離時(shí)，用75%75%酒精棉球擦拭雙手及接種工具。點(diǎn)燃酒精酒精棉球擦拭雙手及接種工具。點(diǎn)燃酒精燈，將尖頭鑷子燒灼滅菌；隨后將種菇縱向撕成兩半，于菌柄、菌燈，將尖頭鑷子燒灼滅菌；隨后將種菇縱向撕成兩半，于菌柄、菌肉交界處切取火柴頭大小的組織塊，迅速抖落到試管中，燒灼管口肉交界處切取火柴頭大小的組織塊，迅速抖落到試管中，燒灼管口及棉塞，塞上棉塞。這些操作都是在酒精燈火焰無(wú)菌區(qū)域進(jìn)行的。及棉塞，塞上棉塞。這些操作都是在酒精燈火焰無(wú)菌區(qū)域進(jìn)行的。食用菌

40、菌種生產(chǎn)（二）膠質(zhì)菌類(lèi)組織分離法（二）膠質(zhì)菌類(lèi)組織分離法 一種方法是將耳片反復(fù)用無(wú)菌水沖洗，切一種方法是將耳片反復(fù)用無(wú)菌水沖洗，切成成0.5cm0.5cm小塊移入培養(yǎng)基，于小塊移入培養(yǎng)基，于2828下進(jìn)行培養(yǎng)；下進(jìn)行培養(yǎng)； 另一種方法是剖取尚未展開(kāi)耳片的耳基團(tuán)另一種方法是剖取尚未展開(kāi)耳片的耳基團(tuán)內(nèi)的組織塊進(jìn)行分離。內(nèi)的組織塊進(jìn)行分離。食用菌菌種生產(chǎn)食用菌菌種生產(chǎn)食用菌菌種生產(chǎn)食用菌菌種生產(chǎn)三、基內(nèi)菌絲分離培養(yǎng)法三、基內(nèi)菌絲分離培養(yǎng)法 利用食用菌生長(zhǎng)發(fā)育的基質(zhì)作為分離材料，來(lái)得利用食用菌生長(zhǎng)發(fā)育的基質(zhì)作為分離材料，來(lái)得到純菌種的一種方法，叫基內(nèi)菌絲分離法。到純菌種的一種方法，叫基內(nèi)菌絲分離法。 此種分離方法