植物生化制藥第五章核酸類藥物

1、第五章第五章 核酸類藥物核酸類藥物第一節(jié)第一節(jié) 概述概述核酸核酸是以核苷酸為基本組成單位的生物大是以核苷酸為基本組成單位的生物大分子，攜帶和傳遞遺傳信息。分子，攜帶和傳遞遺傳信息。 98% 98%分布于細(xì)胞核，其余分布于核外分布于細(xì)胞核，其余分布于核外如線粒體，葉綠體。如線粒體，葉綠體。主要分布于細(xì)胞質(zhì)（主要分布于細(xì)胞質(zhì)（90%90%），剩），剩余余10%10%位于細(xì)胞核。位于細(xì)胞核。(deoxyribonucleic acid, dna)(ribonucleic acid, rna)脫氧核糖核酸脫氧核糖核酸 核糖核酸核糖核酸攜帶遺傳信息，決定細(xì)胞和個(gè)攜帶遺傳信息，決定細(xì)胞和個(gè)體的基因型體的基

2、因型(genotype)。參與細(xì)胞內(nèi)參與細(xì)胞內(nèi)dna遺傳信息的表遺傳信息的表達(dá)。某些病毒達(dá)。某些病毒rna也可作為遺也可作為遺傳信息的載體。傳信息的載體。核酸核酸堿基堿基戊糖戊糖核苷核苷磷酸磷酸核苷酸核苷酸核酸類藥物核酸類藥物是具有藥用價(jià)值的核酸、核苷酸、核苷以是具有藥用價(jià)值的核酸、核苷酸、核苷以及堿基的統(tǒng)稱。除了天然存在的堿基、核苷、核苷酸及堿基的統(tǒng)稱。除了天然存在的堿基、核苷、核苷酸外，它們的類似物、衍生物或這些類似物、衍生物的外，它們的類似物、衍生物或這些類似物、衍生物的聚合物也屬于核酸藥物。聚合物也屬于核酸藥物。一、一、rna的制備的制備（一）材料的選擇與預(yù)處理（一）材料的選擇與預(yù)處理

3、制備制備rna的材料要選擇含核酸量豐富的組織。的材料要選擇含核酸量豐富的組織。rna的含量和細(xì)胞的活躍程度有關(guān)，在蛋白質(zhì)合成旺盛的的含量和細(xì)胞的活躍程度有關(guān)，在蛋白質(zhì)合成旺盛的細(xì)胞中，其核酸的含量也相應(yīng)地較高。細(xì)胞中，其核酸的含量也相應(yīng)地較高。第二節(jié)第二節(jié) 核酸類藥物的一般制備方法核酸類藥物的一般制備方法組織勻漿組織勻漿沉淀物（沉淀物（dna、蛋白質(zhì)等）、蛋白質(zhì)等）上清液（上清液（rna等）等）殘留物（殘留物（dna等）等）酸提取液（酸提取液（rna）堿處理堿處理酸處理酸處理殘留物殘留物脂溶性物質(zhì)脂溶性物質(zhì)有機(jī)溶有機(jī)溶劑處理劑處理殘留物殘留物酸溶性小分子酸溶性小分子冷酸處理冷酸處理1. 酸處理

4、法酸處理法 將經(jīng)酸和有機(jī)溶劑處理后的殘留物用將經(jīng)酸和有機(jī)溶劑處理后的殘留物用1mol/l的過(guò)氯酸的過(guò)氯酸液于液于4下處理下處理18 h，從中抽提出，從中抽提出rna，沉淀部分再用，沉淀部分再用0.5mol/l的過(guò)氯酸液的過(guò)氯酸液70 下處理下處理20 min提取提取dna。此法的此法的缺點(diǎn)缺點(diǎn)是有些材料的是有些材料的dna在冷過(guò)氯酸抽提時(shí)被少量提在冷過(guò)氯酸抽提時(shí)被少量提取，從而使取，從而使rna部分中混有少量的部分中混有少量的dna。2. 堿處理法堿處理法將殘留物用將殘留物用1mol/l的的naoh溶液于溶液于37 處理過(guò)夜，則處理過(guò)夜，則rna被堿解為堿溶性核苷酸，被堿解為堿溶性核苷酸，dn

5、a不溶解。加入過(guò)氯酸或三氯不溶解。加入過(guò)氯酸或三氯乙酸使溶液酸化，至酸濃度為乙酸使溶液酸化，至酸濃度為5%-10%,此時(shí)，此時(shí)，rna的分解的分解產(chǎn)物溶解在上清液中，產(chǎn)物溶解在上清液中，dna等則被沉淀下來(lái)。此法的等則被沉淀下來(lái)。此法的優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)是是rna和和dna分開(kāi)得較為徹底，分開(kāi)得較為徹底，缺點(diǎn)缺點(diǎn)是是rna中還含有其他中還含有其他含磷化合物，如磷肽，磷酸肌醇等。含磷化合物，如磷肽，磷酸肌醇等。（二）提取與純化（二）提取與純化1. 提取提?。?）乙醇沉淀法）乙醇沉淀法（2）去污劑處理法）去污劑處理法（3）酚法）酚法2. 純化純化（1）密度梯度離心法）密度梯度離心法（2）柱色譜法）柱色譜法（

6、3）凝膠電泳法）凝膠電泳法（三）含量測(cè)定（三）含量測(cè)定 定磷法定磷法 定糖法定糖法vit crna中的戊核糖可在鹽酸的水解作用下游離出來(lái)，進(jìn)一步形成糠醛，然中的戊核糖可在鹽酸的水解作用下游離出來(lái)，進(jìn)一步形成糠醛，然后與地衣酚反應(yīng)，反應(yīng)物程鮮綠色，在后與地衣酚反應(yīng)，反應(yīng)物程鮮綠色，在670nm有最大吸收峰。有最大吸收峰。二、二、dna的制備的制備 材料的選擇與處理材料的選擇與處理 2. 提取與純化提取與純化 3. 含量測(cè)定含量測(cè)定 （1）定磷法）定磷法 同同rna （2）定糖法）定糖法 又稱二苯胺法，在酸性溶液中，將又稱二苯胺法，在酸性溶液中，將dna與二苯胺共與二苯胺共熱，形成藍(lán)色化合物，該化

7、合物在熱，形成藍(lán)色化合物，該化合物在595nm有最大吸收。有最大吸收。當(dāng)當(dāng)dna濃度在濃度在20-200ug/ml時(shí)，光吸收度與時(shí)，光吸收度與dna濃度濃度呈正比。呈正比。三、核苷酸、核苷及堿基的制備三、核苷酸、核苷及堿基的制備（一）制備方法（一）制備方法1. 直接提取法直接提取法2. 水解法水解法（1）酶水解法）酶水解法（2）堿水解法）堿水解法（3）酸水解法）酸水解法3. 化學(xué)合成法化學(xué)合成法4. 酶合成法酶合成法5. 微生物發(fā)酵法微生物發(fā)酵法光合磷酸化法制備光合磷酸化法制備atp的工藝流程的工藝流程5-amp 溶解，混合溶解，混合 na2hpo4，tris，pms肌激酶，肌激酶，atp（引

8、子）（引子）混合液混合液反應(yīng)液反應(yīng)液atp粗制品粗制品上清液上清液濾液濾液atp成品成品atp沉淀沉淀洗脫液（含洗脫液（含atp）吸附物吸附物流出液流出液 光合光合 葉綠體葉綠體ph3,1-1.5h 沉淀沉淀 三氯乙酸三氯乙酸10以下以下 提取提取 乙醇乙醇10 4-5h 干燥干燥 乙醇，乙醚乙醇，乙醚減壓減壓 去陽(yáng)離子去陽(yáng)離子 732樹(shù)脂樹(shù)脂ph61212 除熱源、沉淀除熱源、沉淀 硅藻土、乙醇硅藻土、乙醇 去雜質(zhì)去雜質(zhì) 蒸餾水、硅藻土蒸餾水、硅藻土 洗脫洗脫 nacl溶液溶液ph3.8 吸附吸附 naoh，717樹(shù)脂樹(shù)脂ph6.5-7atpatp的藥理作用與臨床應(yīng)用的藥理作用與臨床應(yīng)用 在

9、生物體內(nèi)，在生物體內(nèi)，atp廣泛參與各種生化過(guò)程，除參與核廣泛參與各種生化過(guò)程，除參與核酸形成外，主要起著供應(yīng)能量和磷酸基團(tuán)的作用。酸形成外，主要起著供應(yīng)能量和磷酸基團(tuán)的作用。 atp除了作為危重病人搶救的輔助藥物外，還可對(duì)慢除了作為危重病人搶救的輔助藥物外，還可對(duì)慢性肝炎、肝硬化、腎炎、心肌炎、冠狀動(dòng)脈硬化、進(jìn)行性性肝炎、肝硬化、腎炎、心肌炎、冠狀動(dòng)脈硬化、進(jìn)行性肌肉萎縮、再生障礙性貧血、腦血管意外后遺癥、中心性肌肉萎縮、再生障礙性貧血、腦血管意外后遺癥、中心性血管痙攣性視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、耳聾、耳鳴血管痙攣性視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、耳聾、耳鳴等有一定療效。等有一定療效。第五

10、章第五章 酶類藥物酶類藥物第一節(jié)第一節(jié) 概述概述 一、酶類藥物發(fā)展簡(jiǎn)史一、酶類藥物發(fā)展簡(jiǎn)史 酶類藥物是直接用各種劑型的酶以改變體內(nèi)酶活力，或酶類藥物是直接用各種劑型的酶以改變體內(nèi)酶活力，或改變體內(nèi)某性質(zhì)生物活性物質(zhì)和代謝產(chǎn)物的數(shù)量等，從而達(dá)改變體內(nèi)某性質(zhì)生物活性物質(zhì)和代謝產(chǎn)物的數(shù)量等，從而達(dá)到治療某些疾病的目的。到治療某些疾病的目的。1926年，年，sumner將尿素酶結(jié)晶是藥用酶工業(yè)化的起點(diǎn)。將尿素酶結(jié)晶是藥用酶工業(yè)化的起點(diǎn)。1952年，年，innerfield首次將結(jié)晶的胰蛋白酶用于治療血栓性首次將結(jié)晶的胰蛋白酶用于治療血栓性靜脈炎，真正揭開(kāi)了酶在醫(yī)療應(yīng)用的序幕。靜脈炎，真正揭開(kāi)了酶在醫(yī)療

11、應(yīng)用的序幕。20世紀(jì)世紀(jì)60年代后期，逐漸發(fā)展到從微生物發(fā)酵液中獲得大量年代后期，逐漸發(fā)展到從微生物發(fā)酵液中獲得大量的酶。的酶。70年代后，開(kāi)始利用人的某些組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)和基因工程年代后，開(kāi)始利用人的某些組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)和基因工程手段來(lái)獲取有關(guān)的酶，使酶類藥物的應(yīng)用得到了迅速發(fā)展。手段來(lái)獲取有關(guān)的酶，使酶類藥物的應(yīng)用得到了迅速發(fā)展。對(duì)酶類藥物的要求對(duì)酶類藥物的要求1. 藥用酶應(yīng)在生理環(huán)境（藥用酶應(yīng)在生理環(huán)境（ph中性）下具有最高活力和穩(wěn)定性。中性）下具有最高活力和穩(wěn)定性。2. 對(duì)其作用的底物具有較高的親和力。對(duì)其作用的底物具有較高的親和力。3. 在血清中半衰期較長(zhǎng)。在血清中半衰期較長(zhǎng)。4.

12、要求純度高，特別是對(duì)注射用的酶類藥物純度要求更高。要求純度高，特別是對(duì)注射用的酶類藥物純度要求更高。5. 酶應(yīng)免疫源性較低或無(wú)免疫源性。酶應(yīng)免疫源性較低或無(wú)免疫源性。二、酶的分子組成及分類二、酶的分子組成及分類1. 酶分子的組成酶分子的組成單體酶單體酶寡聚酶寡聚酶多酶復(fù)合體多酶復(fù)合體酶酶有機(jī)物分子有機(jī)物分子金屬有機(jī)物金屬有機(jī)物金屬金屬輔酶或輔基（非蛋白部分）輔酶或輔基（非蛋白部分）酶蛋白酶蛋白復(fù)合蛋白質(zhì)復(fù)合蛋白質(zhì)單純蛋白質(zhì)（單體酶）單純蛋白質(zhì)（單體酶）2. 酶的分類酶的分類分類分類 名稱名稱 催化反應(yīng)的類型催化反應(yīng)的類型 實(shí)例實(shí)例 1 氧化還原酶氧化還原酶 電子轉(zhuǎn)移電子轉(zhuǎn)移 醇脫氫酶醇脫氫酶

13、2 轉(zhuǎn)移酶轉(zhuǎn)移酶 轉(zhuǎn)移功能基團(tuán)轉(zhuǎn)移功能基團(tuán) 己糖激酶己糖激酶 3 水解酶水解酶 水解反應(yīng)水解反應(yīng) 胰蛋白酶胰蛋白酶 4 裂合酶裂合酶 鍵的斷裂鍵的斷裂 丙酮脫羧酶丙酮脫羧酶 5 異構(gòu)酶異構(gòu)酶 分子內(nèi)基團(tuán)的轉(zhuǎn)移分子內(nèi)基團(tuán)的轉(zhuǎn)移 順丁烯二酸異構(gòu)酶順丁烯二酸異構(gòu)酶 6 連接酶或合成酶連接酶或合成酶 鍵形成與水解偶聯(lián)鍵形成與水解偶聯(lián) 丙酮羧化酶丙酮羧化酶表表6-1 6-1 酶的國(guó)際分類酶的國(guó)際分類三、酶類藥物的臨床應(yīng)用三、酶類藥物的臨床應(yīng)用1. 消化酶類消化酶類2. 抗炎、黏痰溶解酶抗炎、黏痰溶解酶3. 與纖維蛋白溶解作用有關(guān)的酶類與纖維蛋白溶解作用有關(guān)的酶類4. 抗腫瘤的酶類抗腫瘤的酶類5. 其它生

14、理活性酶其它生理活性酶6. 復(fù)合酶復(fù)合酶 表表6-2 酶類藥物一覽表酶類藥物一覽表第二節(jié)第二節(jié) 酶類藥物的一般制備方法酶類藥物的一般制備方法酶制備過(guò)程的特點(diǎn)：酶制備過(guò)程的特點(diǎn)：一是某種酶在生物體內(nèi)含量甚少，且有分布部位特異性。一是某種酶在生物體內(nèi)含量甚少，且有分布部位特異性。二是酶可以通過(guò)測(cè)定其活力加以跟蹤。二是酶可以通過(guò)測(cè)定其活力加以跟蹤。酶制備一般包括四個(gè)步驟：酶的原材料的選擇與處理；酶的酶制備一般包括四個(gè)步驟：酶的原材料的選擇與處理；酶的提取；酶的純化；酶活力的測(cè)定和純度檢測(cè)。提??；酶的純化；酶活力的測(cè)定和純度檢測(cè)。一、酶的原材料選擇與預(yù)處理一、酶的原材料選擇與預(yù)處理（一）原材料的選擇（

15、一）原材料的選擇（1）了解目的酶在生物材料中的分布特點(diǎn)，選擇適宜的）了解目的酶在生物材料中的分布特點(diǎn)，選擇適宜的生物材料。生物材料。（2）考慮生物在不同發(fā)育階段及營(yíng)養(yǎng)狀況時(shí)，酶含量的）考慮生物在不同發(fā)育階段及營(yíng)養(yǎng)狀況時(shí)，酶含量的差別及雜質(zhì)干擾的情況。差別及雜質(zhì)干擾的情況。（3）原料來(lái)源是否豐富，原料易得，原料產(chǎn)地較近。）原料來(lái)源是否豐富，原料易得，原料產(chǎn)地較近。（4）提取步驟是否簡(jiǎn)便易行。）提取步驟是否簡(jiǎn)便易行。用植物組織作原料，要擇時(shí)采集并就地去除不用部分，用植物組織作原料，要擇時(shí)采集并就地去除不用部分，將有用部分保鮮處理。將有用部分保鮮處理。（二）原材料的預(yù)處理（二）原材料的預(yù)處理1. 機(jī)

16、械法機(jī)械法2.反復(fù)凍融法反復(fù)凍融法3. 超聲波法超聲波法4. 酶解法酶解法5. 丙酮粉法丙酮粉法二、酶的提取二、酶的提取1. 水溶液法水溶液法 常用稀鹽溶液或緩沖液提取，經(jīng)過(guò)預(yù)處常用稀鹽溶液或緩沖液提取，經(jīng)過(guò)預(yù)處理的原料，包括組織糜，勻漿，細(xì)胞顆粒，丙酮粉都理的原料，包括組織糜，勻漿，細(xì)胞顆粒，丙酮粉都可用水溶液抽提?？捎盟芤撼樘帷?水溶液的水溶液的ph選擇對(duì)抽提具有影響，應(yīng)考慮的因素有：選擇對(duì)抽提具有影響，應(yīng)考慮的因素有： 酶的穩(wěn)定性酶的穩(wěn)定性 酶的溶解性酶的溶解性 酶與其他物質(zhì)結(jié)合的性質(zhì)酶與其他物質(zhì)結(jié)合的性質(zhì) 選擇選擇ph的總原則是，在酶穩(wěn)定的的總原則是，在酶穩(wěn)定的ph范圍內(nèi)，選擇偏離范

17、圍內(nèi)，選擇偏離等電點(diǎn)的適當(dāng)?shù)牡入婞c(diǎn)的適當(dāng)?shù)膒h。2. 有機(jī)溶劑法有機(jī)溶劑法 某些結(jié)合酶，由于和脂質(zhì)結(jié)合牢固，某些結(jié)合酶，由于和脂質(zhì)結(jié)合牢固，需用有機(jī)溶劑除去脂質(zhì)，且不能使酶變性。常用有機(jī)需用有機(jī)溶劑除去脂質(zhì)，且不能使酶變性。常用有機(jī)溶劑是丁醇。溶劑是丁醇。 丁醇性質(zhì)：親脂性強(qiáng)、兼具親水性、在脂與水分子間丁醇性質(zhì)：親脂性強(qiáng)、兼具親水性、在脂與水分子間能起表面活性劑的橋梁作用。能起表面活性劑的橋梁作用。 丁醇提取方法：均相法和兩相法丁醇提取方法：均相法和兩相法3. 表面活性劑法表面活性劑法三、酶的純化三、酶的純化不同的酶，因性質(zhì)不同，其純化工藝可能有很大不同。不同的酶，因性質(zhì)不同，其純化工藝可能有

18、很大不同。評(píng)價(jià)一個(gè)純化工藝好壞，主要看兩個(gè)指標(biāo)：酶比活和總活評(píng)價(jià)一個(gè)純化工藝好壞，主要看兩個(gè)指標(biāo)：酶比活和總活力回收率。力回收率。（一）雜質(zhì)的除去（一）雜質(zhì)的除去1. 調(diào)調(diào)ph和加熱沉淀法（核糖核酸酶，溶菌酶的提取）和加熱沉淀法（核糖核酸酶，溶菌酶的提取）2. 蛋白質(zhì)表面變性法（蛋白質(zhì)表面變性法（cat用氯仿提?。┯寐确绿崛。?. 選擇性變性法（細(xì)胞色素選擇性變性法（細(xì)胞色素c可用三氯醋酸提?。┛捎萌却姿崽崛。?. 降解或沉淀核苷酸法降解或沉淀核苷酸法5. 利用結(jié)合底物保護(hù)法除去雜蛋白（利用結(jié)合底物保護(hù)法除去雜蛋白（d-甲基苯甲酸為甲基苯甲酸為d-氨氨基酸氧化酶的保護(hù)劑）基酸氧化酶的保護(hù)劑）

19、（二）脫鹽和濃縮（二）脫鹽和濃縮1. 脫鹽脫鹽（1）透析）透析（2）凝膠過(guò)濾）凝膠過(guò)濾2. 濃縮濃縮（1）蒸發(fā)）蒸發(fā)（2）超濾法）超濾法（3）凝膠吸水法）凝膠吸水法（4）冷凍干燥法）冷凍干燥法（三）酶的結(jié)晶（三）酶的結(jié)晶1. 鹽析法鹽析法2. 有機(jī)溶劑法有機(jī)溶劑法3. 透析平衡法透析平衡法4. 等電點(diǎn)法等電點(diǎn)法四、酶活力的測(cè)定與純度檢驗(yàn)四、酶活力的測(cè)定與純度檢驗(yàn)1. 活力測(cè)定活力測(cè)定 無(wú)論在酶的抽提純化過(guò)程中或是對(duì)酶的性質(zhì)進(jìn)行研究無(wú)論在酶的抽提純化過(guò)程中或是對(duì)酶的性質(zhì)進(jìn)行研究過(guò)程中為了了解所選擇方法是否適宜，幾乎每一步驟前后過(guò)程中為了了解所選擇方法是否適宜，幾乎每一步驟前后都應(yīng)進(jìn)行酶的活力測(cè)定

20、，做出總活力和比活力的比較。都應(yīng)進(jìn)行酶的活力測(cè)定，做出總活力和比活力的比較。2.純度檢測(cè)純度檢測(cè) 在酶的分離提純中，總活力用于計(jì)算某一抽提或純化在酶的分離提純中，總活力用于計(jì)算某一抽提或純化步驟后酶的回收率（步驟后酶的回收率（y），而比活力則用于計(jì)算某一純化），而比活力則用于計(jì)算某一純化步驟的效果，即純度的提高（步驟的效果，即純度的提高（e），其關(guān)系如下：），其關(guān)系如下： y=某步驟后的總活力某步驟后的總活力/某步驟前的總活力某步驟前的總活力 e=某步驟后的比活力某步驟后的比活力/某步驟前的比活力某步驟前的比活力五、菠蘿蛋白酶五、菠蘿蛋白酶 是從菠蘿汁或加工菠蘿削下的廢皮中提取的一種蛋白水是從

21、菠蘿汁或加工菠蘿削下的廢皮中提取的一種蛋白水解酶，粗菠蘿水解酶是各種成分的混合物，除蛋白水解酶系解酶，粗菠蘿水解酶是各種成分的混合物，除蛋白水解酶系外，還含有磷酸酯酶、過(guò)氧化物酶、纖維素酶、其它糖苷酶外，還含有磷酸酯酶、過(guò)氧化物酶、纖維素酶、其它糖苷酶及非蛋白物質(zhì)。及非蛋白物質(zhì)。 實(shí)驗(yàn)證明，菠蘿蛋白酶具有消炎抗水腫作用，作用特點(diǎn)實(shí)驗(yàn)證明，菠蘿蛋白酶具有消炎抗水腫作用，作用特點(diǎn)是能選擇性水解纖維蛋白，對(duì)與凝血有關(guān)的纖維蛋白原僅有是能選擇性水解纖維蛋白，對(duì)與凝血有關(guān)的纖維蛋白原僅有微弱的作用，不影響正常血液的凝固。能分解肌纖維，可單微弱的作用，不影響正常血液的凝固。能分解肌纖維，可單獨(dú)或與胰蛋白酶

22、制成合劑使用，消除各種單純性炎癥、水腫、獨(dú)或與胰蛋白酶制成合劑使用，消除各種單純性炎癥、水腫、血腫，促進(jìn)抗生素和化療藥物的滲透和擴(kuò)散。血腫，促進(jìn)抗生素和化療藥物的滲透和擴(kuò)散。 臨床適用于治療支氣管哮喘、急性肺炎、產(chǎn)后乳房充血、臨床適用于治療支氣管哮喘、急性肺炎、產(chǎn)后乳房充血、乳腺炎、產(chǎn)后血栓靜脈炎、視網(wǎng)膜炎等。試用于同抗生素配乳腺炎、產(chǎn)后血栓靜脈炎、視網(wǎng)膜炎等。試用于同抗生素配伍治療關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)周圍炎、蜂窩組織炎和小腿潰瘍等。伍治療關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)周圍炎、蜂窩組織炎和小腿潰瘍等。（一）化學(xué)性質(zhì)和組成（一）化學(xué)性質(zhì)和組成白色至淺棕黃色無(wú)定形粉末。略溶于水，水溶液無(wú)色至白色至淺棕黃色無(wú)定形粉末。略溶于

23、水，水溶液無(wú)色至淡黃色，有時(shí)有乳白光，不溶于乙醇、氯仿和乙醚，為淡黃色，有時(shí)有乳白光，不溶于乙醇、氯仿和乙醚，為一種巰基酶。半胱氨酸能激活酶的活性，但受重金屬抑一種巰基酶。半胱氨酸能激活酶的活性，但受重金屬抑制。最適制。最適ph7.0，相對(duì)分子量，相對(duì)分子量33000。 主要作用原理：使多肽類水解為低分子量的肽類。主要作用原理：使多肽類水解為低分子量的肽類。（二）生產(chǎn)工藝（白陶土吸附法）（二）生產(chǎn)工藝（白陶土吸附法）（吸附）（吸附）白陶土白陶土10菠蘿蛋白酶成品菠蘿蛋白酶成品濕菠蘿蛋白酶精制品濕菠蘿蛋白酶精制品澄清液澄清液粗制品粗制品（沉淀）（沉淀）hcl ph4（溶解）（溶解）自來(lái)水，自來(lái)水

24、，naoh洗脫液洗脫液（鹽析、抽濾）（鹽析、抽濾）hcl，（，（nh4）2so4ph=4.55吸附物吸附物（洗脫）（洗脫）na2co3或或naoh（nh4）2so4ph=6.57壓出液壓出液菠蘿皮菠蘿皮（壓榨）（壓榨）苯甲酸鈉苯甲酸鈉（干燥、粉碎）（干燥、粉碎）ph77.5（三）檢驗(yàn)方法（三）檢驗(yàn)方法1. 性狀性狀 富有菠蘿香氣，淺黃色或淺棕黃色粉末。富有菠蘿香氣，淺黃色或淺棕黃色粉末。2. 蛋白酶水解活力測(cè)定蛋白酶水解活力測(cè)定（1）原理）原理 菠蘿蛋白酶在一定溫度與菠蘿蛋白酶在一定溫度與ph條件下，水解條件下，水解酪蛋白底物，然后加入三氯乙酸終止酶反應(yīng)，并沉淀酪蛋白底物，然后加入三氯乙酸終止

25、酶反應(yīng)，并沉淀除去未水解的蛋白，濾液對(duì)紫外光有吸收，用紫外分除去未水解的蛋白，濾液對(duì)紫外光有吸收，用紫外分光光度計(jì)法測(cè)定，根據(jù)吸光度計(jì)算酶活力。光光度計(jì)法測(cè)定，根據(jù)吸光度計(jì)算酶活力。（2）酶活力單位定義）酶活力單位定義 在測(cè)定條件下在測(cè)定條件下 ph7.0，（37+0.2），每分鐘水解酪蛋白釋放出的三氯乙酸，每分鐘水解酪蛋白釋放出的三氯乙酸可溶物在可溶物在275nm的吸光度與的吸光度與1g酪氨酸的吸光度相當(dāng)酪氨酸的吸光度相當(dāng)時(shí)，所需酶量為時(shí)，所需酶量為1u。（3）測(cè)定步驟）測(cè)定步驟 適當(dāng)稀釋樣品后，精密量取樣品待測(cè)液適當(dāng)稀釋樣品后，精密量取樣品待測(cè)液1ml，置于具，置于具塞試管中，于，塞試管中

26、，于，37預(yù)溫預(yù)溫10min，迅速加入，迅速加入37預(yù)溫的酪預(yù)溫的酪蛋白溶液蛋白溶液5ml，從開(kāi)始加入起準(zhǔn)確反應(yīng)，從開(kāi)始加入起準(zhǔn)確反應(yīng)10min，加入三氯，加入三氯乙酸溶液乙酸溶液5ml，混勻，保溫，混勻，保溫10min后過(guò)濾。后過(guò)濾。另量取另量取1ml待測(cè)樣品液于待測(cè)樣品液于37預(yù)溫預(yù)溫10min，精密加入三，精密加入三氯乙酸溶液氯乙酸溶液5ml，準(zhǔn)確反應(yīng)，準(zhǔn)確反應(yīng)10min，加入酪蛋白溶液，加入酪蛋白溶液5ml，搖勻，保溫?fù)u勻，保溫10min后過(guò)濾，濾液作為上述溶液的空白對(duì)照。后過(guò)濾，濾液作為上述溶液的空白對(duì)照。用分光光度計(jì)在用分光光度計(jì)在275nm的波長(zhǎng)處測(cè)吸光度的波長(zhǎng)處測(cè)吸光度a。以水

27、做空白對(duì)照，在以水做空白對(duì)照，在275nm的波長(zhǎng)處測(cè)定的波長(zhǎng)處測(cè)定50g/ml酪氨酪氨酸吸光度酸吸光度a。（四）菠蘿蛋白酶在醫(yī)藥、保健品業(yè)的應(yīng)用（四）菠蘿蛋白酶在醫(yī)藥、保健品業(yè)的應(yīng)用 1、抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng) 經(jīng)相關(guān)臨床研究觀察表明，菠蘿蛋白酶能抑制腫瘤經(jīng)相關(guān)臨床研究觀察表明，菠蘿蛋白酶能抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。細(xì)胞的生長(zhǎng)。 2、對(duì)心血管疾病的防治、對(duì)心血管疾病的防治 菠蘿蛋白酶作為蛋白水解酶對(duì)心血管疾病的防治是菠蘿蛋白酶作為蛋白水解酶對(duì)心血管疾病的防治是有益的。它能抑制血小板聚集引起的心臟病發(fā)作和中風(fēng)有益的。它能抑制血小板聚集引起的心臟病發(fā)作和中風(fēng), 緩解心絞痛癥狀緩解心絞痛癥

28、狀,緩和動(dòng)脈收縮緩和動(dòng)脈收縮, 加速纖維蛋白原的分解。加速纖維蛋白原的分解。 3、用于燒傷脫痂、用于燒傷脫痂 菠蘿蛋白酶能選擇性地除菠蘿蛋白酶能選擇性地除 皮皮, 使新皮移植得以盡早使新皮移植得以盡早進(jìn)行。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明進(jìn)行。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明, 菠蘿蛋白酶對(duì)鄰近的正常皮膚無(wú)不菠蘿蛋白酶對(duì)鄰近的正常皮膚無(wú)不良影響。局部使用抗生素不影響菠蘿蛋白酶的效果。良影響。局部使用抗生素不影響菠蘿蛋白酶的效果。 4、消炎作用、消炎作用 菠蘿蛋白酶在各種組織中能有效地治療炎癥和水菠蘿蛋白酶在各種組織中能有效地治療炎癥和水腫腫(包括血栓靜脈炎、骨骼肌損傷、血腫、口腔炎、糖包括血栓靜脈炎、骨骼肌損傷、血腫、口腔炎、糖尿病

29、人潰瘍及運(yùn)動(dòng)損傷尿病人潰瘍及運(yùn)動(dòng)損傷)，菠蘿蛋白酶具有激活炎癥反，菠蘿蛋白酶具有激活炎癥反應(yīng)的潛力。菠蘿蛋白酶還可治療腹瀉。應(yīng)的潛力。菠蘿蛋白酶還可治療腹瀉。 5、增進(jìn)藥物吸收、增進(jìn)藥物吸收 將菠蘿蛋白酶與各種抗生素將菠蘿蛋白酶與各種抗生素(如四環(huán)素如四環(huán)素, 阿莫西林阿莫西林等等)聯(lián)用聯(lián)用, 能提高其療效。相關(guān)研究表明能提高其療效。相關(guān)研究表明, 它能促進(jìn)抗生它能促進(jìn)抗生素在感染部位的傳輸素在感染部位的傳輸, 從而減少抗生素的用藥量。據(jù)推從而減少抗生素的用藥量。據(jù)推斷斷, 對(duì)于抗癌藥物對(duì)于抗癌藥物, 也有類似的作用。此外，菠蘿蛋白也有類似的作用。此外，菠蘿蛋白酶能促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收。酶能促進(jìn)

30、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收。第七章第七章 多糖類藥物多糖類藥物第一節(jié)第一節(jié) 糖類藥物概述糖類藥物概述按照含有糖基數(shù)目的不同分為按照含有糖基數(shù)目的不同分為: 單糖：葡萄糖、果糖、氨基葡萄糖和維生素單糖：葡萄糖、果糖、氨基葡萄糖和維生素c等。等。 低聚糖：蔗糖、麥芽糖、乳糖等。低聚糖：蔗糖、麥芽糖、乳糖等。 多糖：（糖類藥物研究的最多是多糖類藥物多糖：（糖類藥物研究的最多是多糖類藥物 ）多糖如有）多糖如有旋糖酐、甘露聚糖、香菇多糖、茯苓多糖等。旋糖酐、甘露聚糖、香菇多糖、茯苓多糖等。 還有一些糖類藥物是糖的衍生物，如還有一些糖類藥物是糖的衍生物，如6-磷酸葡萄糖，磷酸葡萄糖，1，6-二磷酸果糖，磷酸肌醇等。二

31、磷酸果糖，磷酸肌醇等。多糖的藥理作用多糖的藥理作用（1）調(diào)節(jié)免疫功能）調(diào)節(jié)免疫功能 主要表現(xiàn)為影響抗體活性，促進(jìn)淋主要表現(xiàn)為影響抗體活性，促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖，激活或提高吞噬細(xì)胞的功能。增強(qiáng)機(jī)體的巴細(xì)胞增殖，激活或提高吞噬細(xì)胞的功能。增強(qiáng)機(jī)體的抗炎、抗氧化和抗衰老作用?？寡?、抗氧化和抗衰老作用。（2）抗感染作用，多糖可以提高機(jī)體組織細(xì)胞對(duì)細(xì)菌，）抗感染作用，多糖可以提高機(jī)體組織細(xì)胞對(duì)細(xì)菌，原蟲(chóng)，病毒和真菌感染的抵抗力。原蟲(chóng)，病毒和真菌感染的抵抗力。（3）促進(jìn)細(xì)胞）促進(jìn)細(xì)胞dna，蛋白質(zhì)的合成，促進(jìn)細(xì)胞的增殖、，蛋白質(zhì)的合成，促進(jìn)細(xì)胞的增殖、生長(zhǎng)。生長(zhǎng)。（4）抗輻射損傷作用，抗射線的損傷，有抗氧化、

32、防輻）抗輻射損傷作用，抗射線的損傷，有抗氧化、防輻射作用。射作用。（5）抗腫瘤和抗凝血作用，肝素是天然抗凝劑。）抗腫瘤和抗凝血作用，肝素是天然抗凝劑。 （6）降血脂和抗動(dòng)脈粥樣硬化功能。硫酸軟骨素、小分）降血脂和抗動(dòng)脈粥樣硬化功能。硫酸軟骨素、小分子肝素、殼聚糖等具有降血脂、降血膽固醇，抗動(dòng)脈粥樣子肝素、殼聚糖等具有降血脂、降血膽固醇，抗動(dòng)脈粥樣硬化作用，用于防治冠心病和動(dòng)脈硬化。硬化作用，用于防治冠心病和動(dòng)脈硬化。多糖多糖結(jié)合型結(jié)合型游離型游離型脂多糖：與脂類結(jié)合在一起脂多糖：與脂類結(jié)合在一起糖蛋白：與蛋白質(zhì)結(jié)合在一起糖蛋白：與蛋白質(zhì)結(jié)合在一起 多糖的相對(duì)分子量較大，有直鏈和支鏈兩種，多可溶

33、多糖的相對(duì)分子量較大，有直鏈和支鏈兩種，多可溶于水，水溶液具有一定的黏度，能被酸、堿和酶水解成單于水，水溶液具有一定的黏度，能被酸、堿和酶水解成單糖或低聚糖。糖或低聚糖。多糖根據(jù)來(lái)源不同可分為：多糖根據(jù)來(lái)源不同可分為：(1) 植物多糖：黃芪多糖，人參多糖。植物多糖：黃芪多糖，人參多糖。(2) 動(dòng)物多糖：肝素，透明質(zhì)酸，硫酸軟骨素等。動(dòng)物多糖：肝素，透明質(zhì)酸，硫酸軟骨素等。 (3) 微生物多糖：香菇多糖，靈芝多糖。微生物多糖：香菇多糖，靈芝多糖。第二節(jié)第二節(jié) 糖類藥物的一般制備技術(shù)糖類藥物的一般制備技術(shù)一、單糖、低聚糖及其衍生物的制備一、單糖、低聚糖及其衍生物的制備 用水或在中性條件下以用水或在

34、中性條件下以50乙醇，也可以用乙醇，也可以用82乙醇，乙醇，在在7078下回流提取。溶劑用量一般為材料的下回流提取。溶劑用量一般為材料的10倍，需多倍，需多次提取。次提取。 植物材料磨碎經(jīng)乙醚或石油醚脫脂，拌加碳酸鈣，以植物材料磨碎經(jīng)乙醚或石油醚脫脂，拌加碳酸鈣，以50乙醇溫浸，浸液合并，于乙醇溫浸，浸液合并，于4045減壓濃縮至適當(dāng)體積，減壓濃縮至適當(dāng)體積，用中性醋酸鉛去雜蛋白及其他雜質(zhì)，鉛離子可通用中性醋酸鉛去雜蛋白及其他雜質(zhì)，鉛離子可通h2s除去，除去，再濃縮至粘稠狀。再濃縮至粘稠狀。以甲醇或乙醇溫浸，去不溶物如無(wú)機(jī)鹽或殘留蛋白質(zhì)等。以甲醇或乙醇溫浸，去不溶物如無(wú)機(jī)鹽或殘留蛋白質(zhì)等。 醇

35、液經(jīng)活性炭脫色、濃縮、冷卻、滴加乙醚，或置于硫酸醇液經(jīng)活性炭脫色、濃縮、冷卻、滴加乙醚，或置于硫酸干燥器中旋轉(zhuǎn)，析出結(jié)晶。單糖或小分子寡糖也可以在提取干燥器中旋轉(zhuǎn)，析出結(jié)晶。單糖或小分子寡糖也可以在提取后，用吸附層析法或離子交換法進(jìn)行純化。后，用吸附層析法或離子交換法進(jìn)行純化。 二、多糖的分離與純化二、多糖的分離與純化 多糖可來(lái)自動(dòng)物、植物和微生物多糖可來(lái)自動(dòng)物、植物和微生物 ，植物體內(nèi)含有水，植物體內(nèi)含有水解多糖衍生物的酶，必須抑制或破壞酶的作用后，才能制解多糖衍生物的酶，必須抑制或破壞酶的作用后，才能制取天然存在形式的多糖。取天然存在形式的多糖。 提取多糖的材料必須新鮮或及時(shí)干燥保存，避免

36、受提取多糖的材料必須新鮮或及時(shí)干燥保存，避免受高溫破壞因此，速凍冷藏是保存材料的有效方法。高溫破壞因此，速凍冷藏是保存材料的有效方法。 提取所用溶劑根據(jù)多糖的溶解性質(zhì)而定。提取所用溶劑根據(jù)多糖的溶解性質(zhì)而定。（一）多糖的提?。ㄒ唬┒嗵堑奶崛√崛《嗵菚r(shí)，一般先需進(jìn)行脫脂，以便多糖釋放。提取多糖時(shí)，一般先需進(jìn)行脫脂，以便多糖釋放。方法是將材料粉碎，用甲醇或方法是將材料粉碎，用甲醇或1 1乙醇乙醚混合液，加乙醇乙醚混合液，加熱攪拌熱攪拌13小時(shí)，也可用石油醚脫脂。動(dòng)物材料可用丙小時(shí)，也可用石油醚脫脂。動(dòng)物材料可用丙酮脫脂、脫水處理。酮脫脂、脫水處理。 1、稀堿液提取、稀堿液提取 用于難溶于冷水、熱水

37、，可溶于稀堿液者。這一用于難溶于冷水、熱水，可溶于稀堿液者。這一類多糖主要是不溶性膠類，如木聚精、半乳聚糖等。類多糖主要是不溶性膠類，如木聚精、半乳聚糖等。用冷水浸潤(rùn)材料后用用冷水浸潤(rùn)材料后用0.5 moll naoh提取，提取液提取，提取液用鹽酸中和、濃縮后，加乙醇沉淀得多糖。用鹽酸中和、濃縮后，加乙醇沉淀得多糖。 如在稀堿中仍不易溶出者，可加入硼砂，對(duì)甘露如在稀堿中仍不易溶出者，可加入硼砂，對(duì)甘露聚糖、半乳聚糖等能形成硼酸絡(luò)合物的多糖，此法可聚糖、半乳聚糖等能形成硼酸絡(luò)合物的多糖，此法可得相當(dāng)純的物質(zhì)。得相當(dāng)純的物質(zhì)。2、溫?zé)崴崛?、溫?zé)崴崛?易溶于溫水、難溶于冷水和乙醇者。易溶于溫水、

38、難溶于冷水和乙醇者。材料用冷水浸材料用冷水浸過(guò)，用熱水提取，必要時(shí)可加熱至過(guò)，用熱水提取，必要時(shí)可加熱至8090攪拌提取。攪拌提取。 提取液用正丁醇與氯仿混合液除去雜蛋白（或用三氯提取液用正丁醇與氯仿混合液除去雜蛋白（或用三氯乙酸除雜蛋白），離心除去雜蛋白后的清液，透析后用乙酸除雜蛋白），離心除去雜蛋白后的清液，透析后用乙醇沉淀得多糖。乙醇沉淀得多糖。 3、粘多糖、粘多糖 因大部粘多糖與蛋白質(zhì)結(jié)合于細(xì)胞中，因此需用酶解因大部粘多糖與蛋白質(zhì)結(jié)合于細(xì)胞中，因此需用酶解法或堿解法使糖法或堿解法使糖-白質(zhì)間的結(jié)合鍵斷裂，促使多糖釋放。白質(zhì)間的結(jié)合鍵斷裂，促使多糖釋放。（1）堿解法）堿解法 多糖與蛋白質(zhì)

39、結(jié)合的糖肽鍵對(duì)堿不穩(wěn)定，故多糖與蛋白質(zhì)結(jié)合的糖肽鍵對(duì)堿不穩(wěn)定，故可用堿解法使糖與蛋白質(zhì)分開(kāi)?？捎脡A解法使糖與蛋白質(zhì)分開(kāi)。（2）酶解法）酶解法 蛋白酶水解法已逐步取代堿提取法而成為提取多糖的蛋白酶水解法已逐步取代堿提取法而成為提取多糖的最常用方法。最常用方法。鑒于蛋白酶不能斷裂糖肽鍵及其附近的肽鍵，為除去鑒于蛋白酶不能斷裂糖肽鍵及其附近的肽鍵，為除去長(zhǎng)肽段，常與堿解法合用。長(zhǎng)肽段，常與堿解法合用。 常用的酶制劑有胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和鏈霉菌蛋白酶常用的酶制劑有胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和鏈霉菌蛋白酶及枯草桿菌蛋白酶。及枯草桿菌蛋白酶。（二）多糖的純化（二）多糖的純化1. 乙醇沉淀法乙醇沉淀法 乙醇沉淀

40、法是制備粘多糖的最常用手段。乙醇的加乙醇沉淀法是制備粘多糖的最常用手段。乙醇的加入，改變了溶液的極性，導(dǎo)致糖溶解度下降。入，改變了溶液的極性，導(dǎo)致糖溶解度下降。 向溶液中加入一定濃度的鹽，如醋酸鈉，醋酸鉀、向溶液中加入一定濃度的鹽，如醋酸鈉，醋酸鉀、醋酸銨或氯化鈉有助于使粘多糖從溶液中析出，鹽的最醋酸銨或氯化鈉有助于使粘多糖從溶液中析出，鹽的最終濃度終濃度5即足夠。即足夠。多次乙醇沉淀法脫鹽，也可以用超濾法或分子篩法多次乙醇沉淀法脫鹽，也可以用超濾法或分子篩法（sephadexg-10或或g-15）進(jìn)行多糖脫鹽。）進(jìn)行多糖脫鹽。沉淀物可用無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚脫水，真空干燥即可沉淀物可用無(wú)水乙醇

41、、丙酮、乙醚脫水，真空干燥即可得疏松粉末狀產(chǎn)品。得疏松粉末狀產(chǎn)品。2. 分級(jí)沉淀法分級(jí)沉淀法 不同多糖在不同濃度的甲醇、乙醇或丙酮中的溶不同多糖在不同濃度的甲醇、乙醇或丙酮中的溶解度不同，因此可用不同濃度的有機(jī)溶劑分級(jí)沉淀分解度不同，因此可用不同濃度的有機(jī)溶劑分級(jí)沉淀分子大小不同的粘多糖。子大小不同的粘多糖。 在在ca2+、zn2+等二價(jià)金屬離子的存在下，采用乙等二價(jià)金屬離子的存在下，采用乙醇分級(jí)分離粘多糖可以獲得最佳效果。醇分級(jí)分離粘多糖可以獲得最佳效果。 3. 季胺鹽絡(luò)合法季胺鹽絡(luò)合法 粘多糖與一些陽(yáng)離子表面活性劑如十六烷基三粘多糖與一些陽(yáng)離子表面活性劑如十六烷基三甲基溴化銨（甲基溴化銨（

42、ctab）和十六烷基氯化砒啶（）和十六烷基氯化砒啶（cpc）等能形成季胺鹽絡(luò)合物。等能形成季胺鹽絡(luò)合物。絡(luò)合物在低離子強(qiáng)度的水溶液中不溶解，在離子絡(luò)合物在低離子強(qiáng)度的水溶液中不溶解，在離子強(qiáng)度大時(shí)，絡(luò)合物可以解離、溶解、釋放。強(qiáng)度大時(shí)，絡(luò)合物可以解離、溶解、釋放。（三）多糖藥物的鑒定檢測(cè)方法（三）多糖藥物的鑒定檢測(cè)方法1. 定量測(cè)定定量測(cè)定（1）苯酚）苯酚-硫酸法硫酸法（2）蒽酮）蒽酮-硫酸法硫酸法（3）氨基己糖的比色測(cè)定）氨基己糖的比色測(cè)定 先在鹽酸溶液中將氨基己糖經(jīng)先在鹽酸溶液中將氨基己糖經(jīng)堿性乙?；螅倥c對(duì)二甲基苯甲酸發(fā)生呈色反應(yīng)，從而堿性乙酰化后，再與對(duì)二甲基苯甲酸發(fā)生呈色反應(yīng)，從而

43、進(jìn)行定量測(cè)定。進(jìn)行定量測(cè)定。 2.鑒別鑒別（1）測(cè)定糖基組成）測(cè)定糖基組成（2）高壓電泳法鑒定多糖均一性）高壓電泳法鑒定多糖均一性（3）超離心法鑒定多糖均一性）超離心法鑒定多糖均一性（4）凝膠柱色譜法鑒定多糖均一性）凝膠柱色譜法鑒定多糖均一性（5）分子量測(cè)定）分子量測(cè)定第三節(jié)第三節(jié) 香菇多糖香菇多糖一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)為白色粉末狀固體，對(duì)為白色粉末狀固體，對(duì)光和熱穩(wěn)定。溶于水和光和熱穩(wěn)定。溶于水和0.5mol/l的的naoh，不，不溶于甲醇、乙醇、丙酮溶于甲醇、乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑。等有機(jī)溶劑。二、生產(chǎn)工藝二、生產(chǎn)工藝1.常規(guī)提取法常規(guī)提取法 鮮香菇鮮香菇 搗碎搗碎 浸漬浸漬 過(guò)濾過(guò)濾

44、 濃縮濃縮 乙醇沉淀乙醇沉淀 乙醇、乙醚洗滌乙醇、乙醚洗滌 干燥干燥 成品成品2. 復(fù)合酶提取法復(fù)合酶提取法3. 深層培養(yǎng)提取法深層培養(yǎng)提取法三、質(zhì)量檢測(cè)三、質(zhì)量檢測(cè)1.試劑試劑濃硫酸：分析純，濃硫酸：分析純，95.5%苯酚：苯酚：80g苯酚加苯酚加20g水使之溶解，可置冰箱中長(zhǎng)期貯存。水使之溶解，可置冰箱中長(zhǎng)期貯存。6%苯酚：臨用前用苯酚：臨用前用80%苯酚配制。苯酚配制。標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖、葡萄糖或標(biāo)準(zhǔn)香菇多糖。標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖、葡萄糖或標(biāo)準(zhǔn)香菇多糖。2. 方法方法（1）制作標(biāo)準(zhǔn)曲線）制作標(biāo)準(zhǔn)曲線 準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖20mg溶于溶于500ml容量瓶中加水至刻度，分別吸取容量瓶中加水至刻

45、度，分別吸取0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml、1.6ml及，及，1.8ml各用水補(bǔ)充至各用水補(bǔ)充至2.0ml，然后加入，然后加入6%苯酚苯酚1.0ml以及濃硫酸以及濃硫酸5.0ml，靜止，靜止10min，搖勻，室溫放置，搖勻，室溫放置20min。在。在490nm處測(cè)光密度，以處測(cè)光密度，以2.0ml水按同樣顯水按同樣顯色操作作為空白，橫坐標(biāo)為多糖微克數(shù)，縱坐標(biāo)為光色操作作為空白，橫坐標(biāo)為多糖微克數(shù)，縱坐標(biāo)為光密度值，得標(biāo)準(zhǔn)曲線。密度值，得標(biāo)準(zhǔn)曲線。（2）樣品含量測(cè)定。吸?。悠泛繙y(cè)定。吸取1ml樣品，按上述步驟操樣品，按上述步驟操作，測(cè)光密度，以標(biāo)準(zhǔn)曲線

46、計(jì)算多糖含量。作，測(cè)光密度，以標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算多糖含量。第八章第八章 脂脂 類類 藥藥 物物第一節(jié)第一節(jié) 概概 述述 脂類物質(zhì)是廣泛存在于生物體中的脂肪及類似脂肪脂類物質(zhì)是廣泛存在于生物體中的脂肪及類似脂肪的、能夠被有機(jī)溶劑提取出來(lái)的化合物，由于分子中的的、能夠被有機(jī)溶劑提取出來(lái)的化合物，由于分子中的碳?xì)浔壤驾^高，能夠溶解在乙醚、氯仿、苯等有機(jī)溶碳?xì)浔壤驾^高，能夠溶解在乙醚、氯仿、苯等有機(jī)溶劑中，不溶于水。脂類化合物的這種性質(zhì)，稱之為脂溶劑中，不溶于水。脂類化合物的這種性質(zhì)，稱之為脂溶性，利用這一性質(zhì)，將脂類物質(zhì)用有機(jī)溶劑從生物體中性，利用這一性質(zhì)，將脂類物質(zhì)用有機(jī)溶劑從生物體中提取出來(lái)。提取

47、出來(lái)。 實(shí)際上，脂類藥物往往是互溶在一起的，依據(jù)脂溶實(shí)際上，脂類藥物往往是互溶在一起的，依據(jù)脂溶性這一共同特點(diǎn)歸為一大類成為脂類，而不是一個(gè)準(zhǔn)確性這一共同特點(diǎn)歸為一大類成為脂類，而不是一個(gè)準(zhǔn)確的化學(xué)名詞。的化學(xué)名詞。脂類藥物脂類藥物是具有重要生理生化、藥理藥效作用的脂類物質(zhì)。是具有重要生理生化、藥理藥效作用的脂類物質(zhì)。大體可分為以下幾類：大體可分為以下幾類：膽汁酸類，如膽酸、脫氧膽酸。膽汁酸類，如膽酸、脫氧膽酸。不飽和脂肪酸類，如花生四烯酸、亞麻油酸等；不飽和脂肪酸類，如花生四烯酸、亞麻油酸等； 磷脂類，如：卵磷脂、腦磷脂；磷脂類，如：卵磷脂、腦磷脂； 固醇類，如：膽固醇、麥角固醇；固醇類，如

48、：膽固醇、麥角固醇； 色素類，如：膽紅素、血紅素等；色素類，如：膽紅素、血紅素等； 其他，如鯊烯等。其他，如鯊烯等。一、脂類藥物的制備方法一、脂類藥物的制備方法1. 直接抽提法直接抽提法2. 水解法水解法3. 化學(xué)合成化學(xué)合成4. 生物合成法生物合成法二、脂類藥物的分離二、脂類藥物的分離1. 溶解度法溶解度法2. 吸附分離法吸附分離法3. 超臨界流體萃取技術(shù)超臨界流體萃取技術(shù) 待分離物質(zhì)待分離物質(zhì) 提提 取取 溶溶 劑劑（腦干提取液）（腦干提取液） 丙酮丙酮 乙醇乙醇 乙醚乙醚 膽固醇膽固醇 卵磷脂卵磷脂 腦磷脂腦磷脂 超臨界流體超臨界流體（supercritical fluid, sf）是指某種氣體（液體）或氣體（液體）混合物在操作壓力和是指某種氣體（液體）或氣體（液體）混合物在操作壓力和溫度均高于臨界點(diǎn)時(shí)，使其密度接近液體，而其擴(kuò)散系數(shù)和溫度均高于臨界點(diǎn)時(shí)，使其密度接近液體，而其擴(kuò)散系數(shù)和黏度均接近氣體，其性質(zhì)介于氣體和液體之間的流體。黏度均接近氣體，其性質(zhì)介于氣體和液體之間的流體。超臨界流體萃取法超臨界流體萃取法（supercritical fluid extraction, sfe）技術(shù)就是利用超臨界流體為溶劑，從固體或液體中萃取出某技術(shù)就是利用超臨界流體為溶劑，從