產(chǎn)纖維素酶細菌的

1、產(chǎn)纖維素酶細菌的篩選及酶特性的研究組長：趙凡組員：管融資、史章、朱瑾、張菲菲、胡銳 實驗大綱 一、摘要 二、實驗材料 三、實驗步驟 四、預期結(jié)果 一、摘要： 本實驗以腐爛的廢紙漿為原料，首先經(jīng)反復篩選及剛果紅染色鑒定，獲得一株高活力纖維素酶生產(chǎn)細菌。再經(jīng)搖瓶中產(chǎn)酶，試驗得到纖維素酶，其次探究產(chǎn)生的纖維素酶的部分特性（最適PH，對O2需求）。 二、實驗材料 1、廢紙漿，培養(yǎng)皿，接種環(huán)，250ML酶，三角瓶，酒精燈等 2、三種培養(yǎng)基 篩選培養(yǎng)基A：蛋白胨10g，酵母粉10g。羥甲基纖維素鈉（CMCNa）10g，NaCl 5g，KH2PO4 1g，瓊脂粉18g及蒸餾水1000ml，用H2SO4或Na

2、OH調(diào)不同的PH值。 篩選培養(yǎng)基B：KH2PO4 2g，（NH4）SO4 1.4g，MgSO4 0.3g，CaCl 0.3，F(xiàn)eSO4 5mg，MnSO4 1.6mg，ZnCl 1.7mg，CoCl2 2.0mg，CMC 20g。瓊脂粉18g及蒸餾水1000ml。用H2SO4或NaOH調(diào)PH。 液體培養(yǎng)基：蛋白胨1.0，酵母粉1.0，CMC 1.0，NaCl 0.5，KH2PO4 0.1，另配Na2CO3 10，分開滅菌后與上述培養(yǎng)基成分按1:9的比例混合均勻，是培養(yǎng)基的初始PH為9.510.0 三、實驗步驟 1、產(chǎn)纖維素酶細菌的篩選 涂布：將廢紙漿充分打勻，取少量懸濁液經(jīng)稀釋后，分別涂布于P

3、H為7.0和10.0的篩選平板A上，37恒溫培養(yǎng)48H。 轉(zhuǎn)移：用接種環(huán)將篩選平板A上出現(xiàn)的細菌菌落分別轉(zhuǎn)移到相應PH為7.0和10.0的篩選平板B上，于37條件下恒溫培養(yǎng)48H。 獲得純培養(yǎng)：根據(jù)菌落形態(tài)和生長情況，挑選獲得菌落，進一步劃線分離，在篩選平板B上經(jīng)過多次分離純化，最后獲得細菌的純培養(yǎng)。 染色：將待鑒定的菌落用接種環(huán)轉(zhuǎn)移到一定PH值得篩選培養(yǎng)基B上，37恒溫培養(yǎng)24d，往培養(yǎng)皿中加入適量1mg/ml的紅景天溶液，染色1h，棄去染液，加入適量1mol/L的NaCl溶液，洗滌1h。 若細菌產(chǎn)生纖維素酶（CMC酶）則在菌落周圍會出現(xiàn)清晰地透明圈，選擇一個生長狀況良好的菌株。 2、搖瓶產(chǎn)

4、酶實驗 制液體菌種：將篩選到的菌種由培養(yǎng)斜面接種到30ml，（250ml的三角瓶）的液體培養(yǎng)基中，于37 200r/min下培養(yǎng)3648h，制成液體菌種。 產(chǎn)酶實驗：按1的接種量將液體菌種加入到50ml，（250ml的三角瓶）液體培養(yǎng)基中，在37，180r/min下進行產(chǎn)酶實驗，定時取樣測定發(fā)酵液中的CMC酶活力。 3、酶特性研究 1、最適生長PK值：將篩選到菌株轉(zhuǎn)變一道PH分別為5.0,6.0,7.0,8.0,9.0,10.0,11.0的篩選平板A上37，恒溫培養(yǎng)3d，觀察結(jié)果。 2、對O2的需求：通過穿刺培養(yǎng)觀察菌的生長情況。 四、預期結(jié)果 1、產(chǎn)生纖維素酶細菌的篩選 用剛果紅鑒定篩選到的純培養(yǎng)，其中有