反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎患者淋巴細(xì)胞亞群和免疫球蛋白檢測(cè)的臨床意義

1、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎患者淋巴細(xì)胞亞群和免疫球蛋白檢測(cè)的臨床意義【摘要】 目的： 研究反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎(ReA)患者外周血淋巴細(xì)胞亞群以及血清免疫球蛋白的變化及臨床意義。方法： 采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)56例ReA患者和53例健康對(duì)照組外周血CD3+T、CD4+T、CD8+T、CD16+56+NK、CD19+B細(xì)胞的百分率;免疫比濁法檢測(cè)血清IgG 、IgA及IgM含量。結(jié)果： ReA患者與正常對(duì)照組比較,CD4+T淋巴細(xì)胞百分率、CD4+/CD8+比值及CD19+B淋巴細(xì)胞百分率均明顯增高(P<0.01);血清IgG水平升高(P<0.05);CD15+56+NK細(xì)胞百分率明顯降低(P

2、<0.01);CD3+T、CD8+T淋巴細(xì)胞的百分率及血清IgM、IgA含量與正常對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論： 反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎患者體內(nèi)細(xì)胞和體液免疫功能紊亂,監(jiān)測(cè)ReA患者體內(nèi)淋巴細(xì)胞亞群和免疫球蛋白水平,對(duì)于ReA的免疫治療具有重要的臨床意義。 【關(guān)鍵詞】 反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎; T細(xì)胞亞群; NK淋巴細(xì)胞; B淋巴細(xì)胞; 血清免疫球蛋白Abstract Objective: To study the changes of lymphocyte subsets in peripheral blood and serum immunoglobulin of patients with

3、 reactive arthritis (ReA) and their clinical significance. Methods： CD3+T, CD4+T, CD8+T,CD16+56+NK, CD19+B positive rate (with flow cytometry) and serum IgG, IgA, IgM levels (with immunoturbidity) were measured in 56 patients with ReA and 53 normal controls. Results： Compared with the normal control

4、s, the percentage of CD4+T lymphocyte,CD4+/CD8+ratio and CD19+B cell percentage increased significantly (P<0.01) in ReA patients. IgG level slightly increased (P<0.05). While, NK cell percentage reduced obviously (P<0.01). There were no statistical difference between ReA patient

5、s and normal controls about the levels of CD3+T, CD8+T cell and IgM, IgA (P>0.05). Conclusion： Cellular and humoral immune function were significantly abnormal in patients with reactive arthritis. Detection of lymphocyte subsets and serum immunoglobulin had important clinical significane for

6、ReAs immunotherapy.Key words reactive arthritis; T lymphocyte subsets; NK lymphocyte; B lymphocyte; serum immunoglobulin反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎(reactive arthritis, ReA)是在關(guān)節(jié)外遠(yuǎn)端部位發(fā)生微生物感染后產(chǎn)生的慢性無(wú)菌性炎癥,其病因與病原體、免疫、遺傳有關(guān)。該疾病發(fā)病機(jī)制尚未明確,目前認(rèn)為其本質(zhì)上都有抗原微生物侵入黏膜內(nèi),而且機(jī)體免疫防御系統(tǒng)存在功能紊亂1。本研究采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎患者與健康人群外周血T淋巴細(xì)胞亞群、NK淋巴細(xì)胞及B淋巴細(xì)胞百分率,采

7、用免疫比濁法檢測(cè)血清IgA、IgG、IgM含量,觀察ReA患者體內(nèi)細(xì)胞免疫、體液免疫指標(biāo)的變化和規(guī)律,并探討其臨床意義。1 材料和方法1.1 材 料1.1.1 對(duì)象 病例來(lái)源于2007年9月至2009年10月我院免疫風(fēng)濕科住院患者。診斷標(biāo)準(zhǔn)符合1990年公布的Amor診斷標(biāo)準(zhǔn)2。ReA患者56例,男30例,女26例,年齡2574歲,中位年齡53歲。正常對(duì)照組為53例本院健康體檢者,男27例,女26例,年齡1778歲。1.1.2 試劑 試劑均由BD公司提供,包括:熒光抗體CD3percp/CD4FITC/CD8PE;CD3FITC/CD16+CD56+PE;CD19cy5;溶血素,鞘液等。免疫球

8、蛋白試劑盒由BEHRING 公司提供。1.2 方 法1.2.1 標(biāo)本采集 抽取病例組和對(duì)照組外周靜脈血1 ml,注入EDTAK2抗凝管中,室溫保存,在24 h內(nèi)用于流式細(xì)胞儀檢測(cè);同時(shí)抽取4 ml靜脈血注入真空采血管中,用于檢測(cè)血清免疫球蛋白。1.2.2 淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè) 取50 l上述抗凝血分別加入兩個(gè)試管中,一管加入10 l熒光抗體CD3percp/CD4FITC/CD8PE;另一管加入熒光抗體CD3FITC/CD16+CD56+PE和CD19cy5各10 l,充分混勻后避光室溫孵育20 min后,每管加入溶血素(110稀釋)1 ml,避光放置至透明后1 000 r/min離心5 min,

9、棄去上清液體,加入1 ml PBS洗滌細(xì)胞2次,最后加入500 l PBS溶液混勻直接上流式細(xì)胞儀(德國(guó)PARTEC公司)檢測(cè)。1.2.3 免疫球蛋白檢測(cè) 每個(gè)樣本分離出血清,在特種蛋白分析儀(德國(guó)BEHRING公司)上測(cè)定血清中IgG 、IgA、IgM的含量。1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS13.0處理數(shù)據(jù),結(jié)果以±s表示, t檢驗(yàn)比較各組間差異,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 結(jié) 果2.1 ReA患者的淋巴細(xì)胞亞群流式細(xì)胞儀檢測(cè)散點(diǎn)圖采用CD3+T為總T細(xì)胞,CD3+CD4+T細(xì)胞為輔助性T細(xì)胞,CD3+CD8+T為抑制性T細(xì)胞,CD3-CD16+CD56+為NK

10、細(xì)胞,CD19+為B細(xì)胞。設(shè)門分析各淋巴細(xì)胞亞群的百分比。典型檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖1。a為FSC和SSC的散點(diǎn)圖,R1區(qū)為淋巴細(xì)胞區(qū);b為CD3和CD4的散點(diǎn)圖,Q2區(qū)為輔助性T細(xì)胞(CD3+CD4+);c為CD3和CD8的散點(diǎn)圖,QA2為抑制性T細(xì)胞(CD3+CD8+);d為CD4和CD8的散點(diǎn)圖,QB4為CD4+T細(xì)胞,QB1為CD8+T細(xì)胞;e為CD3和CD19的散點(diǎn)圖,Q4為B細(xì)胞(CD19+);f為CD16+56和CD3的散點(diǎn)圖,QB1為NK細(xì)胞(CD3-CD16+56+)。圖1 流式細(xì)胞儀檢測(cè)ReA患者外周血淋巴細(xì)胞亞群Fig 1 Lymphocyte subsets in periphe

11、ral blood with ReA detected by flow cytometry2.2 ReA患者的淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果ReA患者CD4+T淋巴細(xì)胞百分率、CD4+/CD8+比值及CD19+B淋巴細(xì)胞百分率均明顯高于正常對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);而CD16+56+NK細(xì)胞百分率明顯低于正常對(duì)照組(P<0.01);CD3+T、CD8+T淋巴細(xì)胞百分率與正常對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見(jiàn)表1。表1 ReA患者及正常對(duì)照組外周血T淋巴亞群,NK細(xì)胞及B細(xì)胞水平與對(duì)照組比較,a:P<0.012.3 ReA

12、患者的免疫球蛋白檢測(cè)結(jié)果ReA患者的血清IgG含量與正常對(duì)照組相比明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);血清IgA、IgM水平與正常對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見(jiàn)表2。表2 兩組血清免疫球蛋白水平與對(duì)照組比較,b:P<0.053 討 論T細(xì)胞亞群對(duì)機(jī)體免疫功能的穩(wěn)定起著重要的調(diào)節(jié)作用,尤其是輔助性T細(xì)胞和抑制性T細(xì)胞之間的相互協(xié)調(diào)與制約,產(chǎn)生適度的免疫應(yīng)答,使之既能清除異物抗原,又不至于損傷自身組織。CD4+T細(xì)胞為輔助/誘導(dǎo)T細(xì)胞(Th/Ti),CD8+T細(xì)胞為抑制/殺傷細(xì)胞(Ts/CTL)。正常情況下CD4+和CD8+T細(xì)胞之

13、間始終保持一恒定的比例,構(gòu)成宿主細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)的重要環(huán)節(jié)。CD4+與CD8+T細(xì)胞的平衡在抑制腫瘤、抗感染和自身免疫性疾病中起著重要作用3。本組資料分析了56例反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎患者的T淋巴細(xì)胞亞群,發(fā)現(xiàn)ReA患者CD4+T細(xì)胞百分率、CD4+/CD8+比值明顯升高,CD3+和CD8+T細(xì)胞百分率無(wú)明顯變化,與文獻(xiàn)報(bào)道的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)及強(qiáng)直性脊柱炎(AS)結(jié)果基本一致4,5。這些提示反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎患者輔助性T細(xì)胞數(shù)量增多,抑制性T細(xì)胞數(shù)量相對(duì)減少,導(dǎo)致Th細(xì)胞功能亢進(jìn),Ts細(xì)胞抑制功能相對(duì)不足,使T細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)失衡,引起細(xì)胞介導(dǎo)的免疫損傷。免疫球蛋白是由漿細(xì)胞合成和分泌的一組能與抗原發(fā)生特異

14、性結(jié)合的球蛋白,是免疫細(xì)胞受到病原微生物等抗原刺激后產(chǎn)生的重要免疫分子。CD19+是B淋巴細(xì)胞膜表面標(biāo)志,B細(xì)胞識(shí)別抗原后增殖分化為漿細(xì)胞,漿細(xì)胞分泌免疫球蛋白進(jìn)而介導(dǎo)體液免疫。本研究結(jié)果顯示反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎患者CD19+B細(xì)胞百分率明顯升高，血清IgG含量也升高。王喜英等6在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中也有類似的報(bào)道。這些表明ReA患者的體液免疫存在一定程度上的亢進(jìn),外周血中B細(xì)胞明顯增多,免疫球蛋白表達(dá)失控,產(chǎn)生大量自身抗體,導(dǎo)致免疫病理反應(yīng)造成組織器官的損傷。CD16+CD56+是NK細(xì)胞的標(biāo)志物,表達(dá)的量可能與NK細(xì)胞的數(shù)量或功能有關(guān)。NK細(xì)胞作為先天性免疫系統(tǒng)中的重要成分,與先天性和獲得性免疫系統(tǒng)其他

15、成分間存在廣泛而復(fù)雜的相互關(guān)系,在機(jī)體免疫監(jiān)視過(guò)程中發(fā)揮重要功能。Ohtsuka等7研究表明系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者NK細(xì)胞的數(shù)量和功能較正常人低下。AzuzLiberman等8研究發(fā)現(xiàn)AS患者的NK細(xì)胞活性被抑制,NK細(xì)胞在AS發(fā)病機(jī)制中起作用。分析本組資料發(fā)現(xiàn)ReA患者與對(duì)照組相比,NK細(xì)胞數(shù)量明顯降低,提示ReA患者的先天性免疫存在異常,而NK細(xì)胞對(duì)T、B細(xì)胞有協(xié)調(diào)作用,同時(shí)NK細(xì)胞還能抑制B細(xì)胞的活化,調(diào)節(jié)抗體的產(chǎn)生,NK細(xì)胞的活性降低可導(dǎo)致B細(xì)胞過(guò)度增殖,因此NK細(xì)胞也參與了ReA的發(fā)病過(guò)程。綜上所述,ReA患者體內(nèi)CD4+T細(xì)胞百分率及CD4+/CD8+比值明顯增高,B細(xì)胞及血

16、清免疫球蛋白的水平升高,NK細(xì)胞數(shù)量明顯降低。這些免疫指標(biāo)顯示ReA患者體內(nèi)細(xì)胞免疫紊亂,體液免疫增強(qiáng),天然免疫功能低下。故監(jiān)測(cè)ReA患者外周血淋巴亞群和免疫球蛋白有助于了解機(jī)體的免疫狀態(tài),對(duì)于我們尋找有效方法重建免疫平衡,調(diào)節(jié)患者體內(nèi)免疫失衡狀態(tài),治療反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎,具有一定的臨床價(jià)值?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1 Rihl M, Klos A, Kler L, et al. Infection and musculoskeletal conditions: Reactive arthritisJ. Best Pract Res Clin Rheumatol, 2006, 20(6): 1119-1137

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