第十章弧菌科和氣單胞菌科的常規(guī)檢查

1、第十章第十章 弧菌科和氣單胞弧菌科和氣單胞菌科的常規(guī)檢查菌科的常規(guī)檢查 第一節(jié)第一節(jié) 弧菌屬弧菌屬一、霍亂弧菌一、霍亂弧菌（一）分類與特征（一）分類與特征形態(tài)與染色形態(tài)與染色 g- ，逗點(diǎn)狀，逗點(diǎn)狀，1 根鞭毛，有菌毛。根鞭毛，有菌毛。 病人糞便作懸滴標(biāo)本，可見病人糞便作懸滴標(biāo)本，可見“魚群樣穿梭魚群樣穿梭”。 無(wú)芽胞，無(wú)莢膜。無(wú)芽胞，無(wú)莢膜。霍亂弧菌的革蘭染色霍亂弧菌的革蘭染色霍亂弧菌米泔樣糞便直接涂片鏡檢霍亂弧菌米泔樣糞便直接涂片鏡檢培養(yǎng)和生化反應(yīng)培養(yǎng)和生化反應(yīng)霍亂弧菌在霍亂弧菌在tcbs平板上菌落形態(tài)平板上菌落形態(tài)霍亂弧菌在亞碲酸鉀平板上菌落形態(tài)霍亂弧菌在亞碲酸鉀平板上菌落形態(tài)抗原結(jié)構(gòu)與

2、分型抗原結(jié)構(gòu)與分型霍亂弧菌的兩種生物型的鑒別霍亂弧菌的兩種生物型的鑒別 霍亂弧菌古典生物型對(duì)多粘菌素霍亂弧菌古典生物型對(duì)多粘菌素b敏感敏感霍亂弧菌霍亂弧菌eltor生物型雞紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)陽(yáng)性生物型雞紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)陽(yáng)性n非o1血清群的霍亂弧菌廣泛分布于地面水中，可引起人類胃腸炎，但從未引起過(guò)霍亂流行。因這些血清群的細(xì)菌均不與o1群抗血清發(fā)生凝集，故稱為非o1群霍亂弧菌，以往又稱為不凝集弧菌。no139群既不被o1群抗血清所凝集，亦不被o2-o138群抗血清凝集，目前認(rèn)為它可能是霍亂弧菌eltor生物型菌株o抗原變異株。抵抗力抵抗力n對(duì)熱、日光、干燥、酸、消毒劑敏感，但耐堿力較強(qiáng)。100煮沸1-2

3、分鐘可殺滅細(xì)菌。在正常胃酸中僅可存活4分鐘，以1份含氯石灰加4份水處理患者的排泄物或嘔吐物1小時(shí)可達(dá)消毒的目的。neltor生物型在自然界生存能力較古典生物型強(qiáng)，其在河水、井水及海水中科存活1-3周。n對(duì)鏈霉素、氯霉素和四環(huán)素敏感，但eltor生物型對(duì)一定濃度的多粘菌素b及慶大霉素有耐受性。二、臨床意義二、臨床意義n霍亂弧菌引起烈性腸道傳染病霍亂，霍亂為我國(guó)法定的甲類傳染病。n人類是唯一易感者。n傳染源是患者和帶菌者。致病機(jī)制致病機(jī)制n細(xì)菌通過(guò)污染的水或食物經(jīng)口進(jìn)入機(jī)體而感染，進(jìn)入人體小腸內(nèi)的霍亂弧菌，借助其鞭毛的運(yùn)動(dòng)及弧菌黏蛋白溶解酶和黏附素的作用穿過(guò)黏液層，并通過(guò)菌毛黏附于腸黏膜上皮細(xì)胞上

4、，大量繁殖產(chǎn)生霍亂腸毒素，該毒素作用于腸黏膜表面受體，使腸黏膜細(xì)胞的分泌功能亢進(jìn)，造成腸液的大量分泌，致使患者出現(xiàn)劇烈腹瀉與嘔吐，瀉出物與嘔吐物呈米泔水樣，可致嚴(yán)重脫水，電解質(zhì)紊亂和代謝性酸中毒。n如治療不及時(shí)，患者常因腎衰竭和休克而死亡，若及時(shí)補(bǔ)充液體和電解質(zhì)，則大多數(shù)患者可在數(shù)日內(nèi)恢復(fù)。n霍亂弧菌古典生物型所致疾病較eltor生物型嚴(yán)重。近年來(lái)，由o139群霍亂弧菌所引起的霍亂暴發(fā)流行有上升的趨勢(shì)，應(yīng)給予高度重視。n霍亂病后可獲得牢固免疫力，主要是體液免疫。n改善衛(wèi)生條件，加強(qiáng)水源、食品、糞便的衛(wèi)生管理，不生食貝殼類水產(chǎn)品等是預(yù)防霍亂弧菌感染和霍亂流行的重要措施。加強(qiáng)國(guó)境檢疫。同時(shí)有計(jì)劃得

5、進(jìn)行疫苗接種，提高人群免疫力。n及時(shí)發(fā)現(xiàn)、隔離、治療患者。治療的關(guān)鍵是補(bǔ)液，糾正水、電解質(zhì)紊亂，預(yù)防大量失水導(dǎo)致的低血容量休克和酸中毒。同時(shí)使用有效抗菌藥物進(jìn)行治療。（三）微生物學(xué)常規(guī)檢驗(yàn)（三）微生物學(xué)常規(guī)檢驗(yàn) 檢驗(yàn)程序檢驗(yàn)程序 檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)方法 4.鑒定鑒定 三個(gè)步驟三個(gè)步驟霍亂弧菌的主要鑒定依據(jù)霍亂弧菌的主要鑒定依據(jù)n（1）若細(xì)菌的菌落及形態(tài)典型，涂片為革蘭陰性弧菌或桿菌，運(yùn)動(dòng)活潑，氧化酶試驗(yàn)、靛基質(zhì)試驗(yàn)和黏絲試驗(yàn)陽(yáng)性，與o1群霍亂弧菌的多價(jià)診斷血清發(fā)生明顯的凝集?？稍\斷為霍亂弧菌。n（2）若細(xì)菌的菌落、形態(tài)及生化反應(yīng)與霍亂弧菌相似，但與o1群霍亂弧菌多價(jià)診斷血清不凝集，應(yīng)作進(jìn)一步鑒定，以

6、確定是否為非o1群霍亂弧菌或其他類似弧菌。n（3）根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查的需要，可進(jìn)一步用霍亂弧菌的單價(jià)診斷血清作血清學(xué)分型。必要時(shí)還可作噬菌體分型和生物分型。二、副溶血性弧菌二、副溶血性弧菌（一）主要特征（一）主要特征 革蘭陰性桿菌，隨培養(yǎng)基不同菌體形態(tài)差異較大，有卵圓形、棒狀、球桿狀、梨狀、弧形等多種形態(tài)。 該菌兩極濃染，有周鞭毛或極端鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑。 無(wú)芽胞，無(wú)莢膜。培養(yǎng)特性與生化反應(yīng)培養(yǎng)特性與生化反應(yīng)n需氧或兼性厭氧n營(yíng)養(yǎng)要求不高，在3.5%氯化鈉的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好，無(wú)鹽或氯化鈉的濃度高于8%不生長(zhǎng)n最適ph7.7-8.0，但ph9.5時(shí)仍可生長(zhǎng)n最適生長(zhǎng)溫度為35n在tcbs平板上形成0.

7、5-2.0mm大小、不發(fā)酵蔗糖的綠色或藍(lán)綠色菌落。n在3.5%食鹽瓊脂平板上菌落圓形、隆起、邊緣不整齊、光滑濕潤(rùn)不透明，并呈蔓延生長(zhǎng)。n在血液瓊脂平板上形成較大（直徑2-3mm）圓形隆起、濕潤(rùn)并略帶灰色或黃色的菌落。某些菌株可呈溶血。n在ss瓊脂上，部分菌株不生長(zhǎng)，能生長(zhǎng)的菌落較?。?-2mm）、扁平、無(wú)色半透明、蠟滴狀，有辛辣味，不易挑起。n初次分離時(shí)，該菌不能在伊紅美藍(lán)瓊脂或中國(guó)藍(lán)瓊脂上生長(zhǎng)，部分菌株可在麥康凱平板上生長(zhǎng)，菌落呈圓形、邊緣整齊、半透明或混濁狀。n副溶血性弧菌的生化反應(yīng)培養(yǎng)基中需加入3.5%nacl。n幾乎所有自患者糞便中分離的致病性菌株都能溶解人和兔紅細(xì)胞，不溶解馬紅細(xì)胞，

8、稱神奈川現(xiàn)象。而從海水及海產(chǎn)品中分離的非致病菌株多不能溶解人和兔紅細(xì)胞?？乖瓨?gòu)造抗原構(gòu)造n副溶血性弧菌有菌體(o)抗原、莢膜(k)抗原及鞭毛(h)抗原。no抗原共有13種，是副溶血性弧菌分群的依據(jù)。k抗原有68種，可根據(jù)k抗原和o抗原的組合進(jìn)行定型。抵抗力抵抗力n對(duì)氯、苯酚（石炭酸）、甲酚皂（來(lái)蘇爾）等消毒劑敏感，不耐熱，65 30分鐘即被殺死。n在淡水中生存不超過(guò)2日，但在海水中能生存47天以上，鹽漬醬菜中存活30天以上。n耐堿不耐酸，在2%冰醋酸或食醋中5分鐘死亡。n對(duì)氯霉素敏感，對(duì)新霉素、鏈霉素、多粘菌素、呋喃西林、吡哌酸中度敏感，對(duì)青霉素、磺胺嘧啶耐藥。 二、臨床意義二、臨床意義n從致

9、病性副溶血弧菌中分離出兩種致病因子： 1、耐熱直接溶血素，其作用是通過(guò)增加上皮細(xì)胞內(nèi)的ca2+而引起cl-的分泌，實(shí)驗(yàn)表明，該溶血素還具有細(xì)胞毒和心臟毒作用。 2、耐熱相關(guān)溶血素，其作用與耐熱直接溶血素相似。 此外，黏附素與黏附素酶也與致病性有關(guān)。n人因食入被副溶血性弧菌污染而烹飪不當(dāng)?shù)暮．a(chǎn)品，如海蜇、海魚、海蝦、海貝等，或鹽漬食物，如咸菜、咸肉、咸魚等而引起食物中毒。潛伏期平均24小時(shí)，患者可出現(xiàn)腹痛、腹瀉、嘔吐、發(fā)熱等癥狀，糞便多為水樣或糊狀，少數(shù)為血水樣。多發(fā)于夏秋季節(jié)，一般恢復(fù)較快。病后免疫力不強(qiáng)。n該菌偶爾引起腸道外感染，如中耳炎、傷口感染等。（三）微生物學(xué)常規(guī)檢驗(yàn)（三）微生物學(xué)常規(guī)

10、檢驗(yàn)n標(biāo)本采集 常規(guī)標(biāo)本為患者糞便、肛拭子、可疑食物。 該菌對(duì)干燥敏感，標(biāo)本采集后立即送檢，如不能及時(shí)送檢，應(yīng)將標(biāo)本置于1%nacl的堿性蛋白胨水或含3.5%nacl蛋白胨水中，35增菌培養(yǎng)6-8小時(shí)。挑取菌膜或表面生長(zhǎng)物進(jìn)一步分離培養(yǎng)。檢驗(yàn)程序檢驗(yàn)程序檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)方法第二節(jié)第二節(jié) 氣單胞菌屬和鄰氣單胞菌屬和鄰單胞菌屬單胞菌屬一、氣單胞菌屬一、氣單胞菌屬n氣單胞菌屬隸屬氣單胞菌科，廣泛存在于自然界，可從土壤、水源及人的糞便中分離出來(lái)，與人類疾病相關(guān)的主要有豚鼠氣單胞菌、嗜水氣單胞菌、簡(jiǎn)氏氣單胞菌、維氏氣單胞菌、舒氏氣單胞菌和易損氣單胞菌等。n冷血?jiǎng)游餅槠渲匾拗?，是人類感染的主要?lái)源。n以往認(rèn)

11、為氣單胞菌屬是毒力較弱的條件致病菌，但目前已陸續(xù)發(fā)現(xiàn)該菌屬與人類疾病有關(guān)，尤其當(dāng)機(jī)體防御機(jī)能減退時(shí)，更易引起機(jī)體嚴(yán)重感染。本屬細(xì)菌為革蘭陰性直桿菌，也可呈球桿狀或絲狀，本屬細(xì)菌為革蘭陰性直桿菌，也可呈球桿狀或絲狀，除殺蛙氣單胞菌外，均有單端鞭毛，呈穿梭狀除殺蛙氣單胞菌外，均有單端鞭毛，呈穿梭狀運(yùn)動(dòng)，無(wú)莢膜，有芽孢。運(yùn)動(dòng)，無(wú)莢膜，有芽孢。生物學(xué)特征生物學(xué)特征1生物學(xué)特征生物學(xué)特征2n殺蛙氣單胞菌在含有苯丙氨酸或酪氨酸的瓊脂平板上產(chǎn)生棕色或黑色色素。n氨芐血瓊脂（羊血瓊脂中加入氨芐西林30g/ml）可作為此菌選擇性培養(yǎng)基，其中氨芐西林可抑制雜菌生長(zhǎng)，對(duì)氣單胞菌有刺激生長(zhǎng)的作用，其菌落為2mm大小，

12、灰白色，濕潤(rùn)狀。n本屬細(xì)菌氧化酶、觸酶陽(yáng)性，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸，在含6%nacl培養(yǎng)基中不生長(zhǎng)。（二）臨床意義（二）臨床意義（三）微生物學(xué)常規(guī)檢驗(yàn)（三）微生物學(xué)常規(guī)檢驗(yàn)n標(biāo)本采集 n檢驗(yàn)程序 檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)方法 取濃汁、分泌物及尿沉渣等標(biāo)本作直接涂片，可查見革蘭陰性短桿 菌。用懸滴法可觀察到細(xì)菌運(yùn)動(dòng)活潑。膿汁標(biāo)本可直接接種血液瓊脂平板。血液標(biāo)本先經(jīng)肉浸液或胰化酪蛋白大豆肉湯增菌，再轉(zhuǎn)種血液瓊脂平板。糞便標(biāo)本接種腸道選擇性培養(yǎng)基。部分標(biāo)本可接種于pbs，置4增菌，于1、3、7、14天后接種到瓊脂平板上，置35 培養(yǎng)24-48小時(shí)后觀察菌落。 取生長(zhǎng)在血瓊脂平板上的菌落作氧化酶試驗(yàn)、o/f試驗(yàn)、靛基質(zhì)試驗(yàn)等生化反應(yīng)。一般按