性病實驗室檢測方法

1、性病的實驗室診斷性病的實驗室診斷性病實驗室診斷技術性病實驗室診斷技術 性病是一組主要通過性接觸而傳播的一種傳染性疾病。 包括細菌、真菌、病毒、衣原體、支原體、螺旋體、原蟲和寄生蟲等 性病實驗室診斷 為臨床正確診斷提供科學依據(jù)2病原體病原體淋球菌梅毒螺旋體生殖器皰疹病毒生殖道沙眼衣原體乳頭瘤病毒HIV病毒杜克雷噬血桿菌衣原體念珠菌滴蟲疥蟲陰虱肝炎病毒病病 種種淋病梅毒:生殖器皰疹:生殖道沙眼衣原體感染:尖銳濕疣:HIV感染/艾滋病:軟下疳:性病性淋巴肉芽腫:念珠菌性陰道炎:滴蟲性陰道病:疥瘡:陰虱病:肝炎（乙、丙）：性傳播疾病性傳播疾病(STD)/(STD)/性傳播感染性傳播感染(STI)(ST

2、I) 主要常見性病實驗室檢測介紹主要常見性病實驗室檢測介紹n梅毒梅毒n淋病常用梅毒檢測方法常用梅毒檢測方法n病原學檢測病原學檢測n血清學檢測血清學檢測病原學檢查病原學檢查n原理：一期、二期梅毒時，取硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損部位組織液或淋巴結穿刺術得到的組織液，在暗視野顯微鏡下，光線從聚光器的邊緣斜射到涂片上的梅毒螺旋體而發(fā)出亮光，從而可根據(jù)其特殊形態(tài)和運動方式進行檢測。n方法：病原學檢查的主要方法有暗視野顯微鏡檢查、鍍銀染色法和直接熒光法暗視野顯微鏡檢查暗視野顯微鏡檢查標本采集部位：標本采集部位：一期或二期梅毒的皮膚或粘膜損害一期或二期梅毒的皮膚或粘膜損害 有痂者去痂，先用無菌棉球或紗布

3、蘸生理鹽水，將皮損拭凈，輕壓皮有痂者去痂，先用無菌棉球或紗布蘸生理鹽水，將皮損拭凈，輕壓皮損至滲液（避免出血）。然后用載玻片印取滲液，立即檢查，未破損至滲液（避免出血）。然后用載玻片印取滲液，立即檢查，未破潰者用手術刀刮破皮疹，取滲出液。潰者用手術刀刮破皮疹，取滲出液。淋巴結穿刺液淋巴結穿刺液 以無菌操作法用注射器吸取以無菌操作法用注射器吸取0.3-0.50.3-0.5mlml生理鹽水，穿刺入淋巴結，再生理鹽水，穿刺入淋巴結，再回吸數(shù)次，最后將吸取液涂玻片上，立即檢查?；匚鼣?shù)次，最后將吸取液涂玻片上，立即檢查。暗視野顯微鏡檢查暗視野顯微鏡檢查n制片制片標本置于載玻片上，加一滴生理鹽水，蓋上蓋標

4、本置于載玻片上，加一滴生理鹽水，蓋上蓋玻片，在玻片，在暗室中暗室中于暗視野顯微鏡上油鏡觀察于暗視野顯微鏡上油鏡觀察n觀察觀察先用低倍鏡，再轉(zhuǎn)至高倍鏡先用低倍鏡，再轉(zhuǎn)至高倍鏡梅毒螺旋體在暗背景上呈白色發(fā)光，螺旋整齊，梅毒螺旋體在暗背景上呈白色發(fā)光，螺旋整齊，運動規(guī)律（運動規(guī)律（旋轉(zhuǎn)、伸縮或蛇行旋轉(zhuǎn)、伸縮或蛇行運動）運動）9n非特異性類脂體抗原血清試驗非特異性類脂體抗原血清試驗n梅毒螺旋體抗原血清試驗梅毒螺旋體抗原血清試驗梅毒血清學檢測方法梅毒血清學檢測方法梅毒實驗室操作要求梅毒實驗室操作要求梅毒血清學試驗操作和結果分析梅毒血清學試驗操作和結果分析標本的采集和分離標本的采集和分離編號或姓名登記編號

5、或姓名登記采血、分離血清和貯存采血、分離血清和貯存10梅毒實驗室操作要求梅毒實驗室操作要求試劑準備試劑準備溫度、器具的校正溫度、器具的校正試劑、血清和反應板恢復到試驗溫度試劑、血清和反應板恢復到試驗溫度試劑鑒定試劑鑒定11梅毒實驗室操作要求梅毒實驗室操作要求試驗操作試驗操作血清量的控制血清量的控制試劑量的控制試劑量的控制旋轉(zhuǎn)儀速度和時間的控制旋轉(zhuǎn)儀速度和時間的控制12非梅毒螺旋體抗原血清試驗非梅毒螺旋體抗原血清試驗1、原理： 梅毒螺旋體感染人體后，宿主會產(chǎn)生抗類脂抗原的抗體，可檢測梅毒患者血中的抗類脂抗原的抗體 2、方法：n 快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗 (RPR)n 甲苯胺紅不加熱血清試驗（T

6、RUST）RPR定性試驗n在紙卡圓圈中加入50L待檢血清，涂滿整待檢血清，涂滿整個圓圈個圓圈n使用滴管和專用針頭（60滴滴/mL），加），加1滴抗原懸液滴抗原懸液n旋轉(zhuǎn)100rpm8minn立即判斷結果RPR定量試驗n待檢血清用生理鹽水在紙卡圓圈中作6個稀釋度：原血清，個稀釋度：原血清，1:2，1:4，1:8，1:16，1:32n按定性試驗步驟操作，以出現(xiàn)陽性反應的最高稀釋度報告結果RPR定量試驗定量試驗n中等至大的凝塊為陽性（圈4和7）有明確但很小的凝塊為弱陽性（圈2和3）顆粒均勻分布（圈1,5,8-10）或稍粗糙（圈6）為陰性非梅毒螺旋體抗原血清試驗的優(yōu)缺點非梅毒螺旋體抗原血清試驗的優(yōu)缺點

7、：優(yōu)點： *敏感性特異性好敏感性特異性好 *不需要昂貴設備，簡單易行不需要昂貴設備，簡單易行 *適用于大量人群的血清篩查適用于大量人群的血清篩查 *有效治療后血清滴度可下降并陰轉(zhuǎn)，故可作療效觀察、有效治療后血清滴度可下降并陰轉(zhuǎn)，故可作療效觀察、判愈、復發(fā)。判愈、復發(fā)。 *20分鐘可獲得實驗結果。分鐘可獲得實驗結果。 *試劑與方法均已標化，各實驗室間結果可比較。試劑與方法均已標化，各實驗室間結果可比較。 *試驗可被內(nèi)部質(zhì)控和外部質(zhì)控監(jiān)控進行。試驗可被內(nèi)部質(zhì)控和外部質(zhì)控監(jiān)控進行。缺點：缺點： *敏感性和特異性低于螺旋體抗原試驗，敏感性和特異性低于螺旋體抗原試驗，BFP反應和前帶反應和前帶現(xiàn)象現(xiàn)象

8、非特異性血清試驗的假陰性：非特異性血清試驗的假陰性：1）有）有25%40%的未治梅毒在晚期隱性期可自然逆轉(zhuǎn)的未治梅毒在晚期隱性期可自然逆轉(zhuǎn)為陰性，約為陰性，約30%的心血管和神經(jīng)梅毒呈陰性。的心血管和神經(jīng)梅毒呈陰性。2）前帶現(xiàn)象（）前帶現(xiàn)象（the prozonphenomenon）, 即為抗即為抗原抗體量比例不適，抑制陽性反應。一般易發(fā)生在滴原抗體量比例不適，抑制陽性反應。一般易發(fā)生在滴度在度在1：500以上的標本中。以上的標本中。 1%的的II期梅毒會出現(xiàn)前期梅毒會出現(xiàn)前帶現(xiàn)象。帶現(xiàn)象。3）操作人員應注意實驗的溫度，試劑盒從冰箱取出）操作人員應注意實驗的溫度，試劑盒從冰箱取出后應恢復至室溫

9、，室溫過低（后應恢復至室溫，室溫過低（10）可能出現(xiàn)假陰）可能出現(xiàn)假陰性或結果不準確。性或結果不準確。 非特異性血清試驗生物學假陽性非特異性血清試驗生物學假陽性 0.25%0.86%陽性標本為生物學假陽性，主要出現(xiàn)陽性標本為生物學假陽性，主要出現(xiàn)在自身免疫疾病的患者如內(nèi)風濕性關節(jié)炎、其它病原在自身免疫疾病的患者如內(nèi)風濕性關節(jié)炎、其它病原體感染（病毒性肺炎、惡性腫瘤和麻風）、妊娠婦女。體感染（病毒性肺炎、惡性腫瘤和麻風）、妊娠婦女。 應排除技術性、生理性和生物學假陽性，并用特應排除技術性、生理性和生物學假陽性，并用特異性試驗來證實。異性試驗來證實。非梅毒螺旋體抗原血清試驗臨床意義非梅毒螺旋體抗原

10、血清試驗臨床意義n非梅毒螺旋體抗原血清試驗方法簡單、快速、敏感性和特異性較好。適用于大量人群的篩查。n早期梅毒硬下疳出現(xiàn)1周-2周后，血清可呈陽性。n經(jīng)治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復發(fā)或再感染的指征。梅毒螺旋體抗原血清試驗梅毒螺旋體抗原血清試驗1 1、原理：原理：用梅毒螺旋體特異蛋白為抗原，檢測梅毒患者血中用梅毒螺旋體特異蛋白為抗原，檢測梅毒患者血中 特異性抗梅毒螺旋體抗原的抗體特異性抗梅毒螺旋體抗原的抗體 2 2、方法：方法：n 梅毒螺旋體顆粒凝集試驗梅毒螺旋體顆粒凝集試驗 (TPPA) (TPPA)n 梅毒螺旋體血球凝集試驗梅毒螺旋體血球凝集試驗 (TPHA)(TP

11、HA)n 梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗（梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISAELISA）n 梅毒免疫層析法梅毒免疫層析法- -梅毒快速檢測梅毒快速檢測 (RT) (RT)n 熒光螺旋體抗體吸收試驗（熒光螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABSFTA-ABS）n 化學發(fā)光免疫分析法（化學發(fā)光免疫分析法（CLIACLIA）n 梅毒梅毒IgMIgM抗體檢測（抗體檢測（IgMIgM）n 梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（WBWB）梅毒螺旋體顆粒凝集試驗梅毒螺旋體顆粒凝集試驗 (TPPA) (TPPA)n原理：將梅毒的精致菌體成分包被在人工載體明膠顆粒上，這種致敏粒子和檢測樣品中的梅毒螺旋體抗體進行反應發(fā)生

12、凝集，產(chǎn)生粒子凝集反應，由此可以檢測出血清和血漿中的梅毒螺旋抗體。TPPA的結果判讀n+試劑盒內(nèi)部陽性對照n1、1：2560n2、陰性n3、1：160n4、陰性n5、1：320梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗原理：用經(jīng)純化及超聲裂解處理的梅毒螺原理：用經(jīng)純化及超聲裂解處理的梅毒螺旋體為抗原，或重組抗原包被固相，檢旋體為抗原，或重組抗原包被固相，檢測特異性梅毒螺旋體抗體測特異性梅毒螺旋體抗體快速試驗快速試驗-免疫滲濾法免疫滲濾法n在試紙條上包被螺旋體特異性抗原成份，在試紙條上包被螺旋體特異性抗原成份，如如47kD、15kD抗原，利用免疫滲濾技抗原，利用免疫滲濾技術，將試紙條插

13、入待測血清，觀察血清術，將試紙條插入待測血清，觀察血清與特定抗原成份的反應與特定抗原成份的反應n可在可在10分鐘之內(nèi)得到結果，快速、方分鐘之內(nèi)得到結果，快速、方便便n是特異性螺旋體實驗是特異性螺旋體實驗n需要進一步驗證方可用于臨床診斷需要進一步驗證方可用于臨床診斷梅毒螺旋體抗原血清試驗臨床意義梅毒螺旋體抗原血清試驗臨床意義n作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(如TRUST等)初篩陽性標本的確證試驗。n梅毒患者經(jīng)過抗梅治療后，TPPA等梅毒螺旋體抗體試驗仍可陽性，故TPPA等試驗陽性不能作為療效觀察的指標。nTPPA等陽性不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，應結合非梅毒螺旋體抗原血清試驗結果進行診斷。梅毒血清

14、學試驗結果的臨床意義總匯梅毒血清學試驗結果的臨床意義總匯 _ _ _ _ 排除梅毒排除梅毒 一期梅毒的早期一期梅毒的早期 + + + + 現(xiàn)癥梅毒現(xiàn)癥梅毒( (梅毒孕婦所生梅毒孕婦所生 的嬰兒除外的嬰兒除外) ) + - + - 生物學假陽性生物學假陽性 - + - + 早期梅毒經(jīng)治療后早期梅毒經(jīng)治療后淋病n淋病是指由淋病奈瑟菌淋病是指由淋病奈瑟菌(Neisseria (Neisseria gonorrhoeae,gonorrhoeae,簡稱淋球菌簡稱淋球菌) )引起的各種化膿性引起的各種化膿性感染，是一種經(jīng)典的常見的性傳播疾病感染，是一種經(jīng)典的常見的性傳播疾病. .n淋球菌為革蘭陰性雙球菌，

15、大小約淋球菌為革蘭陰性雙球菌，大小約0.60.8m0.60.8m。通常成對生長，形如雙腎樣，兩菌接觸面平坦。通常成對生長，形如雙腎樣，兩菌接觸面平坦。n淋球菌與奈瑟屬的另一種致病菌腦膜炎球菌及淋球菌與奈瑟屬的另一種致病菌腦膜炎球菌及其他共棲奈瑟菌在生物學上有許多相似性，可其他共棲奈瑟菌在生物學上有許多相似性，可通過生化特性加以鑒別通過生化特性加以鑒別淋病的實驗室診斷方法淋病的實驗室診斷方法n直接顯微鏡檢查，觀察淋球菌細胞；直接顯微鏡檢查，觀察淋球菌細胞；n分離培養(yǎng)淋球菌；分離培養(yǎng)淋球菌；n非培養(yǎng)技術檢測淋球菌細胞成份如抗原非培養(yǎng)技術檢測淋球菌細胞成份如抗原或或DNADNA（EIA, PCR/L

16、CREIA, PCR/LCR） 標本的采集和運送標本的采集和運送- -取材部取材部位位n男性男性 異性戀者異性戀者: :采集尿道標本，有口淫史者加取咽部標本；采集尿道標本，有口淫史者加取咽部標本； 同性戀者同性戀者: : 采集尿道、直腸及咽部標本采集尿道、直腸及咽部標本. .n女性女性 采集宮頸標本，必要時從尿道、直腸、咽部、前庭大腺和尿道采集宮頸標本，必要時從尿道、直腸、咽部、前庭大腺和尿道旁腺取材；旁腺取材；n幼女幼女 采集陰道分泌物；采集陰道分泌物；n新生兒眼炎患者新生兒眼炎患者 采集眼結膜分泌物，對其母親采集宮頸、尿道及直腸標本。采集眼結膜分泌物，對其母親采集宮頸、尿道及直腸標本。 標

17、本的采集和運送標本的采集和運送- -運送運送n淋球菌的抵抗力弱，對熱敏感，不耐干燥。取材后標本若淋球菌的抵抗力弱，對熱敏感，不耐干燥。取材后標本若不能立即接種于選擇性培養(yǎng)基上時，需采用運送系統(tǒng)。置不能立即接種于選擇性培養(yǎng)基上時，需采用運送系統(tǒng)。置于非營養(yǎng)型運送培養(yǎng)基中的標本應在于非營養(yǎng)型運送培養(yǎng)基中的標本應在1212小時內(nèi)送到實驗室，小時內(nèi)送到實驗室，接種于選擇性培養(yǎng)基，分離陽性率可達接種于選擇性培養(yǎng)基，分離陽性率可達90%90%以上。超過以上。超過2424小時則分離陽性率下降。小時則分離陽性率下降。直接顯微鏡檢查直接顯微鏡檢查染色方法染色方法: : 革蘭染液革蘭染液 美蘭染液美蘭染液 姬姆薩

18、染液姬姆薩染液 熒光抗體熒光抗體 直接顯微鏡檢查直接顯微鏡檢查n原理：男性淋菌性尿道炎患者常有大量黃白色膿性分泌物，其多形核白細胞內(nèi)可找到革蘭染色陰性的雙球菌。n方法：革蘭染色為一傳統(tǒng)方法，革蘭染色將菌分為二大類，即染成紫色的革蘭陽性菌及染成紅色的革蘭陰性菌。革蘭染色：細胞內(nèi)革蘭陰性雙球菌革蘭染色：細胞內(nèi)革蘭陰性雙球菌美蘭染色美蘭染色直接顯微鏡檢查的臨床意義直接顯微鏡檢查的臨床意義n男性淋菌性尿道炎的尿道標本男性淋菌性尿道炎的尿道標本 敏感性及特異性可高達敏感性及特異性可高達95%95%99%99%，具診斷價值。，具診斷價值。n宮頸標本、無癥狀男性尿拭子及取自直腸的涂片時宮頸標本、無癥狀男性尿

19、拭子及取自直腸的涂片時 敏感性僅敏感性僅404070%70%。 不推薦直接顯微鏡檢查診斷直腸和咽部淋球菌感染。不推薦直接顯微鏡檢查診斷直腸和咽部淋球菌感染。 亦不能用于療后判愈。如果在多形核細胞外見到形態(tài)亦不能用于療后判愈。如果在多形核細胞外見到形態(tài)典型的革蘭陰性雙球菌，需做培養(yǎng)進行確證。典型的革蘭陰性雙球菌，需做培養(yǎng)進行確證。淋球菌培養(yǎng)淋球菌培養(yǎng)1原理：淋球菌在適宜的培養(yǎng)基上可生長出特征性的菌落，根據(jù)菌落大小、形態(tài)、光澤、邊緣、顏色等情況，可以作為淋球菌的鑒定依據(jù)之一。2、方法特點：n敏感性 81100%。n 特異性 100%淋球菌培養(yǎng)淋球菌培養(yǎng)n培養(yǎng)法為診斷淋病的金標準培養(yǎng)法為診斷淋病的金

20、標準. .n對女性淋病的確診應做淋球菌培養(yǎng)對女性淋病的確診應做淋球菌培養(yǎng) n從選擇性培養(yǎng)基上分離出淋球菌即可診斷淋病。從選擇性培養(yǎng)基上分離出淋球菌即可診斷淋病。n培養(yǎng)的敏感性培養(yǎng)的敏感性81100%81100%。n培養(yǎng)的優(yōu)點有：培養(yǎng)的優(yōu)點有： 特異性極高（特異性極高（100%100%）；）； 可發(fā)現(xiàn)無癥狀淋球菌感染患者；可發(fā)現(xiàn)無癥狀淋球菌感染患者； 可確診兒童性虐待；可確診兒童性虐待； 可用于進一步作藥敏試驗；可用于進一步作藥敏試驗； 可用于治療后的判愈試驗。可用于治療后的判愈試驗。淋球菌培養(yǎng)淋球菌培養(yǎng)- -選擇性培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基 評價培養(yǎng)基質(zhì)量的一個重要指標評價培養(yǎng)基質(zhì)量的一個重要指標:

21、: 男性淋菌性尿道炎標本的革蘭染色與培養(yǎng)的男性淋菌性尿道炎標本的革蘭染色與培養(yǎng)的符合率應達符合率應達95%95%100%100%。如果革蘭染色陽性。如果革蘭染色陽性/ /培養(yǎng)陰性的比率較高則表明選擇性培養(yǎng)基的質(zhì)培養(yǎng)陰性的比率較高則表明選擇性培養(yǎng)基的質(zhì)量欠佳量欠佳淋球菌培養(yǎng)淋球菌培養(yǎng)- -接種標本接種標本 取材后標本應盡可能及早接種。培養(yǎng)基取材后標本應盡可能及早接種。培養(yǎng)基應先置于室溫中預溫。將取材的拭子轉(zhuǎn)動涂應先置于室溫中預溫。將取材的拭子轉(zhuǎn)動涂布于平皿的上布于平皿的上1/41/4范圍，然后用接種環(huán)分區(qū)范圍，然后用接種環(huán)分區(qū)劃線，以保證獲得較純的單個菌落。劃線，以保證獲得較純的單個菌落。接種標本接種標本- -四區(qū)劃分接種四區(qū)劃分接種淋球菌培養(yǎng)淋球菌培養(yǎng)- -培養(yǎng)條件培養(yǎng)條件淋球菌培養(yǎng)淋球菌培養(yǎng)- -觀察結果觀察結果n培養(yǎng)培養(yǎng)2424小時后檢查平皿，此時沒有菌生長的小時后檢查平皿，此時沒有菌生長的平皿應繼續(xù)培養(yǎng)至平皿應繼續(xù)培養(yǎng)至4848小時，仍無菌生長才可小時，仍無菌生長才可丟棄，作出淋球菌培養(yǎng)陰性的報告。丟棄，作出淋球菌培養(yǎng)陰性的報告。n對選擇性培養(yǎng)基上分離的直徑在對選擇性培養(yǎng)基上分離的直徑在0.50.51mm1mm，無色、灰白色的半透明菌落應作進一步鑒定。無色、灰白色的半透明菌落應作進一步鑒定。淋球菌培養(yǎng)淋