線粒體的活體染色

1、一、實驗目的：一、實驗目的：1、觀察動物活細胞內線粒體的形態(tài)、數量與分布。2、掌握線粒體的活體染色原理及方法。3、小鼠肝臟細胞線粒體染色及觀察。 線粒體是細胞內一種重要細胞器，是細胞進行呼吸作用的場所。細胞的各項活動所需要的能量，主要是通過線粒體呼吸作用來提供的?；铙w染色是應用無毒或毒性較小的染色劑真實地顯示活細胞內某些結構而又很少影響細胞生命活動的一種染色方法。詹納斯綠 b（janus green b）是線粒體的專一性活體染色劑。線粒體中細胞色素氧化酶系使染料保持氧化狀態(tài)呈藍綠色，而在周圍的細胞質中染料被還原，成為無色狀態(tài)。 二、實驗原理：二、實驗原理： 不同細胞中線粒體的形態(tài)和數目不同。在

2、電子顯微鏡下，線粒體的外形多樣，如圓形、橢圓形、啞鈴形和桿狀。線粒體的數目與細胞類型和細胞的生理狀態(tài)有關，線粒體多聚集在細胞生理功能旺盛的區(qū)域。 線粒體脊的數目與分布方式是多種多樣的。一般與線粒體長軸垂直排列，但也可見到與線粒體長軸平行排列的脊。脊的橫切面呈囊狀或管狀。脊的數量與細胞呼吸機能的強度有很大關系。三、實驗用品三、實驗用品1. 器材： 顯微鏡、手術器械、載玻片、蓋玻片、吸管、牙簽、吸水紙、小平皿。2. 試劑： ringer液、1/5000詹納斯綠b、1%甲苯胺蘭。3. 材料：人口腔上皮細胞、小白鼠肝細胞。四、實驗方法四、實驗方法（一）人口腔上皮細胞的制備與觀察（一）人口腔上皮細胞的制

3、備與觀察用牙簽刮取口腔上皮細胞均勻地涂在載片上用牙簽刮取口腔上皮細胞均勻地涂在載片上(不可反復涂沫不可反復涂沫)，滴一，滴一滴甲苯胺蘭染液，染色滴甲苯胺蘭染液，染色5分鐘，蓋上蓋片，吸去多余染液。顯微鏡分鐘，蓋上蓋片，吸去多余染液。顯微鏡下觀察可見覆蓋口腔表面的上皮細胞為扁平橢圓形下觀察可見覆蓋口腔表面的上皮細胞為扁平橢圓形，中央有橢圓形中央有橢圓形核，染成藍色核，染成藍色。 （二）、線粒體的活體染色與觀察（二）、線粒體的活體染色與觀察1、人口腔上皮細胞線粒體的超活染色觀察1）取清潔載玻片放在37恒溫水浴鍋的金屬板上，滴兩滴1/5000詹納斯綠b染液。2）實驗者用牙簽寬頭在自己口腔頰粘膜處稍用

4、力刮取上皮細胞，將刮下的粘液狀物放入載玻片的染液滴中，染色1015分鐘（注意不可使染液干燥，必要時可再加滴染液），蓋上蓋玻片，用吸水紙吸去四周溢出的染液，置顯微鏡下觀察。3）在低倍鏡下，選擇平展的口腔上皮細胞，換高倍鏡進行觀察?？梢姳馄綘钌掀ぜ毎暮酥車|中，分布著一些被染成藍綠色的顆粒狀或短棒狀的結構，即是線粒體。 2、小白鼠肝細胞線粒體的活體染色觀察、小白鼠肝細胞線粒體的活體染色觀察 1) 用脊椎脫臼法處死小白鼠，置于解剖盤中，剪開腹腔，取小白鼠肝邊緣較薄的肝組織塊，放入表面皿內。用吸管吸取ringer 液，反復浸泡沖洗肝臟，洗去血液。 2) 在干凈的平皿中，滴加1/5000詹納斯綠b溶液，再將肝組織塊移入染液，注意不可將組織塊完全淹沒注意不可將組織塊完全淹沒，要使組織塊上面部分半露在染液外，這樣細胞內的線粒體酶系可充分得到氧化，易被染色。當組織塊邊緣被染成藍綠色即成(一般需染2030min)。3) 吸去染液，滴加ringer 溶液，用眼科剪將組織塊著色部分剪碎，使細胞或細胞群散出。然后，用吸管吸取分離出的細胞懸液，滴一滴在載玻片上，蓋上蓋玻片進行觀察。4) 在低倍鏡下選擇不重疊的肝細胞，在高倍鏡下觀察，可見具有l(wèi)2 個核的肝細胞質中，有許