章分子流行病學(xué)PPT課件

1、第一節(jié)第一節(jié) 概述概述分子流行病學(xué)分子流行病學(xué)(molecular eidemiology)(molecular eidemiology)是傳統(tǒng)流是傳統(tǒng)流行病學(xué)與新興的生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合而產(chǎn)生的一個(gè)新行病學(xué)與新興的生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合而產(chǎn)生的一個(gè)新的流行病學(xué)分支，主要從分子水平闡明疾病發(fā)生、的流行病學(xué)分支，主要從分子水平闡明疾病發(fā)生、發(fā)展的規(guī)律及其影響因素，有效的解決傳統(tǒng)流行病發(fā)展的規(guī)律及其影響因素，有效的解決傳統(tǒng)流行病學(xué)遇到的一系列困難，使得疾病的預(yù)防及干預(yù)手段學(xué)遇到的一系列困難，使得疾病的預(yù)防及干預(yù)手段更加先進(jìn)、有效。更加先進(jìn)、有效。第1頁/共55頁分子流行病學(xué)的定義分子流行病學(xué)的定義分子流行病

2、學(xué)分子流行病學(xué)是闡明人群和生物群體中醫(yī)學(xué)相關(guān)生物標(biāo)是闡明人群和生物群體中醫(yī)學(xué)相關(guān)生物標(biāo)志的分布及其與疾病志的分布及其與疾病/健康的關(guān)系和影響因素，并研究防健康的關(guān)系和影響因素，并研究防治疾病、促進(jìn)健康的策略與措施的科學(xué)。治疾病、促進(jìn)健康的策略與措施的科學(xué)。生物標(biāo)志生物標(biāo)志 (biological markers或或biomarkers)主要指從暴主要指從暴露到疾病這個(gè)連續(xù)過程中可測(cè)量的、能反映功能或結(jié)構(gòu)變露到疾病這個(gè)連續(xù)過程中可測(cè)量的、能反映功能或結(jié)構(gòu)變化的細(xì)胞、亞細(xì)胞、分子水平的物質(zhì)?；募?xì)胞、亞細(xì)胞、分子水平的物質(zhì)。第2頁/共55頁分子流行病學(xué)的發(fā)展簡(jiǎn)史分子流行病學(xué)的發(fā)展簡(jiǎn)史分子流行病學(xué)的

3、產(chǎn)生背景分子流行病學(xué)的產(chǎn)生背景l(fā)疾病防制中出現(xiàn)的新問題疾病防制中出現(xiàn)的新問題 傳染性疾病傳染性疾病 耐藥性病原體；病原體變異；新發(fā)現(xiàn)傳染病。耐藥性病原體；病原體變異；新發(fā)現(xiàn)傳染病。 慢性非傳染病慢性非傳染病 多病因、多階段、多基因、長(zhǎng)潛隱期。多病因、多階段、多基因、長(zhǎng)潛隱期。第3頁/共55頁人群易感性或治療反應(yīng)人群易感性或治療反應(yīng) 生物個(gè)體間的遺生物個(gè)體間的遺傳和環(huán)境不同，對(duì)于疾病的易感性或者治傳和環(huán)境不同，對(duì)于疾病的易感性或者治療的反應(yīng)差別甚大。療的反應(yīng)差別甚大?；A(chǔ)醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)的快速發(fā)展，從分子基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)的快速發(fā)展，從分子及基因水平上提出很多發(fā)病機(jī)制及病因假及基因水平上提出很多發(fā)病

4、機(jī)制及病因假設(shè)。設(shè)。第4頁/共55頁 分子生物學(xué)理論和技術(shù)的迅速發(fā)展分子生物學(xué)理論和技術(shù)的迅速發(fā)展l 理論的突破理論的突破 如：如：DNADNA雙螺旋模型、遺傳中心法則、遺傳密碼、雙螺旋模型、遺傳中心法則、遺傳密碼、RNARNA逆轉(zhuǎn)錄、逆轉(zhuǎn)錄、表觀遺傳修飾、微小表觀遺傳修飾、微小RNARNA等。等。l 技術(shù)的創(chuàng)新技術(shù)的創(chuàng)新 各種凝膠電泳、體外核酸擴(kuò)增、各種凝膠電泳、體外核酸擴(kuò)增、DNADNA測(cè)序、蛋白質(zhì)測(cè)序、分子測(cè)序、蛋白質(zhì)測(cè)序、分子雜交、基因克隆、色譜分析、生物芯片技術(shù)等。雜交、基因克隆、色譜分析、生物芯片技術(shù)等。第5頁/共55頁分子流行病學(xué)的發(fā)展歷程分子流行病學(xué)的發(fā)展歷程l分子流行病學(xué)概念

5、的演變分子流行病學(xué)概念的演變 國(guó)外：國(guó)外： 1972年，年，提出提出“流感的分子流行病學(xué)流感的分子流行病學(xué)”的名詞。的名詞。 1977年，年，法國(guó)學(xué)者法國(guó)學(xué)者Higginson：分子流行病學(xué)是應(yīng)用精細(xì)技術(shù)進(jìn)行生物分子流行病學(xué)是應(yīng)用精細(xì)技術(shù)進(jìn)行生物材料的流行病學(xué)研究。材料的流行病學(xué)研究。 1982年，年，Perera和和Weinstein提出提出“癌癥分子流行病學(xué)癌癥分子流行病學(xué)”。第6頁/共55頁 1986年年定義：分子流行病學(xué)的核心在于把先進(jìn)的實(shí)驗(yàn)室方法和分析流定義：分子流行病學(xué)的核心在于把先進(jìn)的實(shí)驗(yàn)室方法和分析流行病學(xué)結(jié)合起來，從而查明環(huán)境和（或）宿主病因。行病學(xué)結(jié)合起來，從而查明環(huán)境和（

6、或）宿主病因。 1993年年定義：分子流行病學(xué)是在流行病學(xué)中應(yīng)用生物標(biāo)志或生物學(xué)測(cè)定義：分子流行病學(xué)是在流行病學(xué)中應(yīng)用生物標(biāo)志或生物學(xué)測(cè)量。量。 1996年年定義：分子流行病學(xué)狹義上講是測(cè)量作為暴露和效應(yīng)的生物標(biāo)定義：分子流行病學(xué)狹義上講是測(cè)量作為暴露和效應(yīng)的生物標(biāo)志志信息大分子：信息大分子：DNA、RNA和蛋白質(zhì)。和蛋白質(zhì)。第7頁/共55頁1990年啟動(dòng)，年啟動(dòng)，2003年發(fā)表完整的基因序列圖年發(fā)表完整的基因序列圖第8頁/共55頁9第9頁/共55頁l人類基因組流行病學(xué)（人類基因組流行病學(xué)（human genome epidemiology，HuGE）的產(chǎn)生和發(fā)展）的產(chǎn)生和發(fā)展 1998年年，

7、Khoury和和Dorman首次提出了人類基因組流行病學(xué)首次提出了人類基因組流行病學(xué)的概念：應(yīng)用流行病學(xué)與基因組信息相結(jié)合的研究方法，開的概念：應(yīng)用流行病學(xué)與基因組信息相結(jié)合的研究方法，開展以人群為基礎(chǔ)的研究，評(píng)價(jià)基因組信息對(duì)人群健康和疾病展以人群為基礎(chǔ)的研究，評(píng)價(jià)基因組信息對(duì)人群健康和疾病的流行病學(xué)意義，是遺傳流行病學(xué)與分子流行病學(xué)交叉的前的流行病學(xué)意義，是遺傳流行病學(xué)與分子流行病學(xué)交叉的前沿領(lǐng)域。沿領(lǐng)域。第10頁/共55頁人類基因組流行病學(xué)網(wǎng)站人類基因組流行病學(xué)網(wǎng)站 - HuGE Net第11頁/共55頁l分子流行病學(xué)在我國(guó)的發(fā)展分子流行病學(xué)在我國(guó)的發(fā)展 20世紀(jì)世紀(jì)80年代初年代初開始進(jìn)

8、行分子流行病學(xué)研究，當(dāng)時(shí)僅限于傳染病，如對(duì)輪開始進(jìn)行分子流行病學(xué)研究，當(dāng)時(shí)僅限于傳染病，如對(duì)輪狀病毒腹瀉、大腸桿菌腹瀉等的研究。狀病毒腹瀉、大腸桿菌腹瀉等的研究。 90年代中后期年代中后期，分子流行病學(xué)研究開始得到了長(zhǎng)足的發(fā)展，逐漸推廣到流，分子流行病學(xué)研究開始得到了長(zhǎng)足的發(fā)展，逐漸推廣到流行病學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。行病學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。第12頁/共55頁 1995年以后年以后，我國(guó)有關(guān)分子流行病學(xué)的研究論文逐漸增多。，我國(guó)有關(guān)分子流行病學(xué)的研究論文逐漸增多。 1997年年第四屆中華流行病學(xué)會(huì)委員會(huì)首次設(shè)立分子流行病學(xué)學(xué)組，次年召第四屆中華流行病學(xué)會(huì)委員會(huì)首次設(shè)立分子流行病學(xué)學(xué)組，次年召開了第一次全國(guó)分子

9、流行病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議。開了第一次全國(guó)分子流行病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議。第13頁/共55頁l分子流行病學(xué)的應(yīng)用現(xiàn)狀分子流行病學(xué)的應(yīng)用現(xiàn)狀研究?jī)?nèi)容更加豐富研究?jī)?nèi)容更加豐富 包含疾病和健康狀態(tài)相關(guān)生物包含疾病和健康狀態(tài)相關(guān)生物標(biāo)志的分布、影響因素、人群易感性、防治效果標(biāo)志的分布、影響因素、人群易感性、防治效果評(píng)價(jià)、預(yù)后分析等。評(píng)價(jià)、預(yù)后分析等。研究手段越來越多研究手段越來越多 質(zhì)粒圖譜、核酸分子雜交、抗質(zhì)粒圖譜、核酸分子雜交、抗原抗體技術(shù)、生物芯片技術(shù)、質(zhì)譜技術(shù)原抗體技術(shù)、生物芯片技術(shù)、質(zhì)譜技術(shù).應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)大應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)大 流行病學(xué)、預(yù)防醫(yī)學(xué)、基礎(chǔ)醫(yī)流行病學(xué)、預(yù)防醫(yī)學(xué)、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、遺傳學(xué)、環(huán)境科學(xué)和人類

10、學(xué)等。學(xué)、生物學(xué)、遺傳學(xué)、環(huán)境科學(xué)和人類學(xué)等。第14頁/共55頁 ？分子流行病學(xué)ExposureCancer與傳統(tǒng)流行病學(xué)的關(guān)系第15頁/共55頁“冰山冰山” 現(xiàn)象現(xiàn)象患者患者亞亞臨床者臨床者健健 康康 者者 “海平面” 第16頁/共55頁 健 康 疾 病主觀感覺主觀感覺客觀指標(biāo)客觀指標(biāo)健康指標(biāo)健康指標(biāo)疾病指標(biāo)疾病指標(biāo) 模式I I 暴露因素 健康態(tài) 潛在疾病態(tài)臨界疾病態(tài)亞臨床態(tài)臨床態(tài) 機(jī)體易感性因素模式IIII圖16-1 健康疾病連續(xù)帶示意圖（health-disease continuum，HDC）亞健康態(tài)亞健康態(tài)潛在疾病態(tài)潛在疾病態(tài)健康態(tài)臨床態(tài)臨床態(tài)亞臨床態(tài)亞臨床態(tài)臨界疾病態(tài)臨界疾病態(tài)第1

11、7頁/共55頁傳統(tǒng)流行病學(xué)傳統(tǒng)流行病學(xué)暴露暴露疾病疾病 ？ 前瞻性研究前瞻性研究回顧性研究回顧性研究分子流行病學(xué)分子流行病學(xué)圖圖16-2 16-2 傳統(tǒng)流行病學(xué)與分子流行病學(xué)的關(guān)系（傳統(tǒng)流行病學(xué)與分子流行病學(xué)的關(guān)系（EDCEDC模型）模型） （Schulte,1993Schulte,1993） 暴露暴露疾病疾病第18頁/共55頁（Elston RCElston RC, , 20022002）第19頁/共55頁第二節(jié)第二節(jié) 生物標(biāo)志生物標(biāo)志暴露標(biāo)志暴露標(biāo)志 與疾病或健康狀態(tài)有關(guān)的暴露因素的生物標(biāo)與疾病或健康狀態(tài)有關(guān)的暴露因素的生物標(biāo)志。包括外暴露標(biāo)志、內(nèi)暴露標(biāo)志和生物有效劑量標(biāo)志。志。包括外暴露

12、標(biāo)志、內(nèi)暴露標(biāo)志和生物有效劑量標(biāo)志。效應(yīng)標(biāo)志效應(yīng)標(biāo)志 宿主暴露后產(chǎn)生功能性或結(jié)構(gòu)性變化，并進(jìn)宿主暴露后產(chǎn)生功能性或結(jié)構(gòu)性變化，并進(jìn)一步引起疾病亞臨床階段和疾病發(fā)生過程的生物標(biāo)志。一步引起疾病亞臨床階段和疾病發(fā)生過程的生物標(biāo)志。包括早期生物效應(yīng)標(biāo)志、結(jié)構(gòu)和（或）功能改變標(biāo)志、包括早期生物效應(yīng)標(biāo)志、結(jié)構(gòu)和（或）功能改變標(biāo)志、臨床疾病標(biāo)志等。臨床疾病標(biāo)志等。易感性標(biāo)志易感性標(biāo)志 指宿主對(duì)疾病發(fā)生、發(fā)展易感程度的生物指宿主對(duì)疾病發(fā)生、發(fā)展易感程度的生物標(biāo)志。標(biāo)志。第20頁/共55頁暴露標(biāo)志暴露標(biāo)志外暴露標(biāo)志外暴露標(biāo)志l是指暴露因素進(jìn)入機(jī)體之前的標(biāo)志和劑量。是指暴露因素進(jìn)入機(jī)體之前的標(biāo)志和劑量。l如病毒

13、、細(xì)菌、生物毒素、吸煙煙霧、環(huán)境物質(zhì)等。如病毒、細(xì)菌、生物毒素、吸煙煙霧、環(huán)境物質(zhì)等。內(nèi)暴露標(biāo)志內(nèi)暴露標(biāo)志l指被宿主吸收的外源性暴露物質(zhì)的量。指被宿主吸收的外源性暴露物質(zhì)的量。l包括對(duì)化學(xué)毒物、飲食中的營(yíng)養(yǎng)素和可能致癌劑以包括對(duì)化學(xué)毒物、飲食中的營(yíng)養(yǎng)素和可能致癌劑以及微生物感染的測(cè)定等。及微生物感染的測(cè)定等。第21頁/共55頁生物有效劑量標(biāo)志生物有效劑量標(biāo)志l指經(jīng)吸收、代謝活化、轉(zhuǎn)運(yùn)，最終與靶組織細(xì)胞內(nèi)指經(jīng)吸收、代謝活化、轉(zhuǎn)運(yùn)，最終與靶組織細(xì)胞內(nèi)DNA或蛋或蛋白質(zhì)相互作用的外源性物質(zhì)或其反應(yīng)產(chǎn)物的含量。白質(zhì)相互作用的外源性物質(zhì)或其反應(yīng)產(chǎn)物的含量。l包括包括DNA 加合物、蛋白質(zhì)加合物、加合物、

14、蛋白質(zhì)加合物、DNA 蛋白交聯(lián)物等。蛋白交聯(lián)物等。DNADNA加合物 苯并（a a）芘、亞硝胺 白細(xì)胞生物學(xué)標(biāo)志環(huán)境暴露物質(zhì)生物材料蛋白質(zhì)加合物（血紅蛋白） 環(huán)氧乙烯紅細(xì)胞第22頁/共55頁效應(yīng)標(biāo)志效應(yīng)標(biāo)志早期生物效應(yīng)標(biāo)志早期生物效應(yīng)標(biāo)志 l指結(jié)合到靶組織上的外源性物質(zhì)的持續(xù)作用，引起組織細(xì)胞指結(jié)合到靶組織上的外源性物質(zhì)的持續(xù)作用，引起組織細(xì)胞的生物改變，從而產(chǎn)生疾病前期的生物標(biāo)志。的生物改變，從而產(chǎn)生疾病前期的生物標(biāo)志。l包括細(xì)胞毒性反應(yīng)，染色體畸變，包括細(xì)胞毒性反應(yīng)，染色體畸變，DNA、RNA和蛋白表達(dá)，和蛋白表達(dá)，以及細(xì)胞功能的一些早期變化（如以及細(xì)胞功能的一些早期變化（如DNA修復(fù)以及

15、免疫功能的修復(fù)以及免疫功能的改變）等。改變）等。第23頁/共55頁誘變劑敏感性檢測(cè)（誘變劑敏感性檢測(cè)（mutagen sensitivity assay）第24頁/共55頁結(jié)構(gòu)和（或）功能改變標(biāo)志結(jié)構(gòu)和（或）功能改變標(biāo)志l 指形態(tài)學(xué)或功能學(xué)的改變，是在暴露指形態(tài)學(xué)或功能學(xué)的改變，是在暴露-疾病連續(xù)帶中更接近觀察終點(diǎn)，即疾疾病連續(xù)帶中更接近觀察終點(diǎn)，即疾病發(fā)生的標(biāo)志物。病發(fā)生的標(biāo)志物。l 結(jié)構(gòu)和（或）功能改變標(biāo)志通常來自于靶器官的組織。結(jié)構(gòu)和（或）功能改變標(biāo)志通常來自于靶器官的組織。第25頁/共55頁臨床疾病標(biāo)志臨床疾病標(biāo)志l 指疾病發(fā)生后特有的分子生物標(biāo)志。指疾病發(fā)生后特有的分子生物標(biāo)志。l

16、具有一定輔助診斷價(jià)值的標(biāo)志物，如血清甲胎蛋白（具有一定輔助診斷價(jià)值的標(biāo)志物，如血清甲胎蛋白（AFPAFP）、癌胚抗原）、癌胚抗原（CEACEA）、前列腺特異性抗原（）、前列腺特異性抗原（PSAPSA）、血清谷草轉(zhuǎn)氨酶（）、血清谷草轉(zhuǎn)氨酶（ASTAST）等。）等。第26頁/共55頁易感性標(biāo)志易感性標(biāo)志遺傳與非遺傳因素遺傳與非遺傳因素如年齡、健康狀況、飲食等都可能如年齡、健康狀況、飲食等都可能影響個(gè)體對(duì)疾病的易感性。影響個(gè)體對(duì)疾病的易感性。遺傳易感性生物標(biāo)志遺傳易感性生物標(biāo)志是機(jī)體穩(wěn)定存在的遺傳性的可測(cè)是機(jī)體穩(wěn)定存在的遺傳性的可測(cè)量指標(biāo)?？梢允腔蛐偷母淖?，也可以是功能學(xué)或者表量指標(biāo)?？梢允腔蛐?/p>

17、的改變，也可以是功能學(xué)或者表型的改變型的改變。第27頁/共55頁高危險(xiǎn)易感基因高危險(xiǎn)易感基因低危險(xiǎn)易感基因低危險(xiǎn)易感基因外顯性外顯性高高低低相對(duì)危險(xiǎn)度相對(duì)危險(xiǎn)度RR高高低低歸因危險(xiǎn)度歸因危險(xiǎn)度AP高高低低人群歸因危險(xiǎn)度人群歸因危險(xiǎn)度PAR低低高高基因頻率基因頻率1%1%90%分析方法分析方法連鎖分析（連鎖分析（linkage）關(guān)聯(lián)分析（關(guān)聯(lián)分析（association）環(huán)境影響環(huán)境影響相對(duì)較小相對(duì)較小非常重要非常重要第28頁/共55頁單核苷酸多態(tài)性（SNPs）第29頁/共55頁指在人群中出現(xiàn)的頻率1%的先天DNA突變。第30頁/共55頁BiologyResponseDiseasePrevent

18、ion（Nature, 2003）SNPs 單單核苷酸多態(tài)性第31頁/共55頁第三節(jié)第三節(jié) 主要研究方法主要研究方法研究設(shè)計(jì)和分析研究設(shè)計(jì)和分析主要的研究方法主要的研究方法研究設(shè)計(jì)與實(shí)施研究設(shè)計(jì)與實(shí)施資料處理與分析資料處理與分析生物標(biāo)本的采集生物標(biāo)本的采集生物標(biāo)志的選擇和檢測(cè)生物標(biāo)志的選擇和檢測(cè)生物標(biāo)志的選擇生物標(biāo)志的選擇生物標(biāo)志的檢測(cè)生物標(biāo)志的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中的質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)中的質(zhì)量控制第32頁/共55頁l 病例對(duì)照研究病例對(duì)照研究 l 病例病例- -病例研究病例研究 l 巢式病例對(duì)照研究巢式病例對(duì)照研究 第33頁/共55頁研究設(shè)計(jì)與實(shí)施研究設(shè)計(jì)與實(shí)施l研究目的研究目的l調(diào)查方法與樣本調(diào)查方法與樣本

19、l測(cè)量指標(biāo)測(cè)量指標(biāo)l測(cè)量方法測(cè)量方法l結(jié)果與分析結(jié)果與分析l質(zhì)量控制質(zhì)量控制l注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)第34頁/共55頁l傳統(tǒng)流行病學(xué)指標(biāo)分析傳統(tǒng)流行病學(xué)指標(biāo)分析 疾病率、暴露率、比值比疾病率、暴露率、比值比OROR和和 相對(duì)危險(xiǎn)度相對(duì)危險(xiǎn)度RR.RR.l基因多態(tài)性與疾病關(guān)聯(lián)研究分析基因多態(tài)性與疾病關(guān)聯(lián)研究分析 通過分析目標(biāo)等位基通過分析目標(biāo)等位基因和基因型頻率在病例組和對(duì)照組中分布的差異，判斷因和基因型頻率在病例組和對(duì)照組中分布的差異，判斷基因多態(tài)性是否與疾病風(fēng)險(xiǎn)存在關(guān)聯(lián)?；蚨鄳B(tài)性是否與疾病風(fēng)險(xiǎn)存在關(guān)聯(lián)。l基因基因- -環(huán)境交互作用分析環(huán)境交互作用分析第35頁/共55頁第36頁/共55頁 表表16

20、-2 XRCC1 TC多態(tài)性與肺癌易感性多態(tài)性與肺癌易感性XRCC1(TC)基因型基因型病例組病例組(710例例)對(duì)照組對(duì)照組(710例例)粗粗OR(95%CI)No %No %TT500 70.4558 78.61.00CT198 27.9148 20.91.49(1.171.91)CC 12 1.7 4 0.53.55(1.0710.45)CT/CC vs TT(顯性模型顯性模型)- - -1.54(1.211.96) CC vs CT/TT(隱性模型隱性模型)- - - 3.03(0.979.45)相加模型相加模型- - -1.54(1.231.93)（Hu et al, 2005)第3

21、7頁/共55頁個(gè)體易感性基因環(huán)境交互作用環(huán)境交互作用環(huán)境環(huán)境暴露暴露人群表表16-3 16-3 病例對(duì)照研究基因環(huán)境交互作用分析病例對(duì)照研究基因環(huán)境交互作用分析* *基因基因暴露暴露因素因素病病例例對(duì)對(duì)照照OR-abOR00 =1.00-+cdOR01=cb/ad+-efOR10=eb/af+ghOR11=gb/ah* 1-暴露，暴露，0-非暴露。非暴露。OR10為基因的主效應(yīng)，為基因的主效應(yīng)，OR01為環(huán)境的主效應(yīng)，為環(huán)境的主效應(yīng)，OR11為環(huán)境為環(huán)境-基因的聯(lián)基因的聯(lián)合作用，交互作用的相對(duì)比值比合作用，交互作用的相對(duì)比值比ORint可由公可由公式式 ORint = OR11 /（ OR01

22、 OR10）計(jì)算獲得。）計(jì)算獲得。第38頁/共55頁 生物標(biāo)本的采集生物標(biāo)本的采集生物標(biāo)本生物標(biāo)本 包括病原和人體的生物標(biāo)本。常用的有：包括病原和人體的生物標(biāo)本。常用的有：微生物標(biāo)本、血液（血清）標(biāo)本、組織標(biāo)本、其他生物微生物標(biāo)本、血液（血清）標(biāo)本、組織標(biāo)本、其他生物標(biāo)本。標(biāo)本。生物標(biāo)本庫生物標(biāo)本庫 通常將儲(chǔ)存有一種類型或多種類型生物通常將儲(chǔ)存有一種類型或多種類型生物標(biāo)本，并能保持它們的生物活性以供研究之用的系統(tǒng)稱標(biāo)本，并能保持它們的生物活性以供研究之用的系統(tǒng)稱為生物標(biāo)本庫為生物標(biāo)本庫( (biological specimen bank, BSB)biological specimen ba

23、nk, BSB)。 第39頁/共55頁 要求l 在采集和儲(chǔ)存過程中不能受到“污染” l 儲(chǔ)存的生物標(biāo)本在任何時(shí)候進(jìn)行檢測(cè)都可以獲得一致的結(jié)果l 所有的生物標(biāo)本都應(yīng)有詳細(xì)的背景材料和鑒別標(biāo)識(shí)生物標(biāo)本選擇和儲(chǔ)存 分子流行病學(xué)研究成功的關(guān)鍵第40頁/共55頁l生物標(biāo)志選擇的原則生物標(biāo)志選擇的原則 生物標(biāo)志應(yīng)特異、穩(wěn)定生物標(biāo)志應(yīng)特異、穩(wěn)定標(biāo)本采集、儲(chǔ)存方便標(biāo)本采集、儲(chǔ)存方便檢測(cè)方法比較簡(jiǎn)單、實(shí)用，而且操作規(guī)范，便于與檢測(cè)方法比較簡(jiǎn)單、實(shí)用，而且操作規(guī)范，便于與同類研究結(jié)果比較同類研究結(jié)果比較檢測(cè)方法靈敏度和特異度高檢測(cè)方法靈敏度和特異度高第41頁/共55頁l測(cè)量指標(biāo)的選擇測(cè)量指標(biāo)的選擇暴露指標(biāo)暴露指標(biāo)

24、 最好能代表接觸劑量或生物作用劑量最好能代表接觸劑量或生物作用劑量效應(yīng)指標(biāo)效應(yīng)指標(biāo) u最早期生物效應(yīng)標(biāo)志最早期生物效應(yīng)標(biāo)志、結(jié)構(gòu)和功能改變結(jié)構(gòu)和功能改變、臨床診斷臨床診斷標(biāo)志標(biāo)志 易感性指標(biāo)易感性指標(biāo)u一般選擇一般選擇抗體水平抗體水平作為傳染病易感性指標(biāo)作為傳染病易感性指標(biāo)u易感基因及其表達(dá)產(chǎn)物易感基因及其表達(dá)產(chǎn)物等作為慢性非傳染病的易感等作為慢性非傳染病的易感性標(biāo)志性標(biāo)志第42頁/共55頁生物標(biāo)志的檢測(cè)生物標(biāo)志的檢測(cè)l生物標(biāo)志的特性生物標(biāo)志的特性 分子特性分子特性 時(shí)相特性時(shí)相特性 個(gè)體內(nèi)變異個(gè)體內(nèi)變異 個(gè)體間變異個(gè)體間變異 群體間變異群體間變異 儲(chǔ)存變異儲(chǔ)存變異第43頁/共55頁生物標(biāo)志物

25、的檢測(cè)方法生物標(biāo)志物的檢測(cè)方法 l 核酸研究技術(shù)（DNA & RNA）核酸體外擴(kuò)增核酸電泳圖譜 核酸酶切電泳圖譜核酸分子雜交 l 蛋白質(zhì)研究技術(shù) 凝膠電泳、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印雜交、色譜分析、蛋白質(zhì)測(cè)序等。l 酶學(xué)技術(shù) 包括定性和定量檢測(cè)，要求一定的條件。多位點(diǎn)酶電泳法l 其它技術(shù) 免疫學(xué)技術(shù)、色譜技術(shù)、生物芯片技術(shù)等。第44頁/共55頁DNA測(cè)測(cè)序序液液相相色色譜譜核核酸酸分分子子雜雜交交蛋蛋白白質(zhì)質(zhì)電電泳泳酶酶聯(lián)聯(lián)免免疫疫吸吸附附第45頁/共55頁凝膠時(shí)代： 主要技術(shù)和方法 ：限制性片段酶切多態(tài)性（RFLP），單鏈構(gòu)象多態(tài)性（SSCP），寡核苷酸連接分析（OLA）等。高通量時(shí)代： 按技術(shù)原理分 ：特異位點(diǎn)雜交（ASH），特異位點(diǎn)引物延伸（ASPE），特異位點(diǎn)切割（ASC）和特異位點(diǎn)連接（ASL）等。第46頁/共55頁47IlluminaIllumina高通量基因分型平臺(tái)高通量基因分型平臺(tái)第47頁/共55頁l一般實(shí)驗(yàn)質(zhì)量控制一般實(shí)驗(yàn)質(zhì)量控制標(biāo)本采集和儲(chǔ)存標(biāo)本采集和儲(chǔ)存試劑和材料試劑和材料儀器儀器實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)方法操作規(guī)范操作規(guī)范l設(shè)立對(duì)照設(shè)立對(duì)照 標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照空白對(duì)照空白對(duì)照重復(fù)對(duì)照重復(fù)