222動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆1抗體

1、 學(xué)校：靈臺(tái)一中 姓名：徐改秀引入新課 1970年，有兩位科學(xué)家做了一個(gè)人鼠細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)，以證明細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子是運(yùn)動(dòng)的。那么，如何實(shí)現(xiàn)人鼠細(xì)胞的融合，以及動(dòng)物細(xì)胞融合后還有什么用途呢？這就是今天我們這節(jié)課學(xué)習(xí)的內(nèi)容。滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通細(xì)胞膜連接細(xì)胞膜連接細(xì)胞融合，形成雜種細(xì)胞細(xì)胞融合，形成雜種細(xì)胞（細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性）（細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性）生物法：生物法： 滅活的病毒滅活的病毒（喪失感染性、保留抗原結(jié)構(gòu)）（喪失感染性、保留抗原結(jié)構(gòu)）過(guò)程：動(dòng)植物細(xì)胞在結(jié)構(gòu)上有何區(qū)別？這與它們雜交或融合過(guò)程動(dòng)植物細(xì)胞在結(jié)構(gòu)

2、上有何區(qū)別？這與它們雜交或融合過(guò)程有什么影響？有什么影響？動(dòng)物細(xì)胞無(wú)細(xì)胞壁，動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程中不須去除細(xì)胞壁動(dòng)物細(xì)胞無(wú)細(xì)胞壁，動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程中不須去除細(xì)胞壁和再生出細(xì)胞壁。和再生出細(xì)胞壁。討論、動(dòng)物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本原理是否相同？、動(dòng)物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本原理是否相同？討論相同，都是細(xì)胞膜的流動(dòng)性相同，都是細(xì)胞膜的流動(dòng)性突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)源雜交成為可能。突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)源雜交成為可能。意義及用途打破生殖隔離，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能；打破生殖隔離，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能；廣泛應(yīng)用多個(gè)學(xué)科領(lǐng)域；廣泛應(yīng)用多個(gè)學(xué)科領(lǐng)域；重要用途：重要用途：6.植物體細(xì)胞雜

3、交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程過(guò)程原理原理細(xì)胞融合細(xì)胞融合的過(guò)程的過(guò)程誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法用途用途細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞的全能性細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性去除去除細(xì)胞壁細(xì)胞壁后誘后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合導(dǎo)原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后誘使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合導(dǎo)細(xì)胞融合物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)、物理、化學(xué)、生物方法生物方法獲得雜種植株獲得雜種植株制備單克隆抗體制備單克隆抗體細(xì)胞融合，細(xì)胞融合，植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)細(xì)胞融合細(xì)胞融合？3 傳統(tǒng)的抗體的生產(chǎn)方法及缺陷傳統(tǒng)的抗

4、體的生產(chǎn)方法及缺陷是什么？是什么？產(chǎn)量低、純度低；產(chǎn)量低、純度低；而且制備抗體特異性差。而且制備抗體特異性差。4 b4 b淋巴細(xì)胞與抗體的關(guān)系淋巴細(xì)胞與抗體的關(guān)系b b淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生特異性抗體。淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生特異性抗體。動(dòng)物在免疫反應(yīng)過(guò)程中，體內(nèi)產(chǎn)生特異性抗體種類可動(dòng)物在免疫反應(yīng)過(guò)程中，體內(nèi)產(chǎn)生特異性抗體種類可 達(dá)百萬(wàn)種以上，每種抗體對(duì)特定的抗原具有特異性免疫作用。達(dá)百萬(wàn)種以上，每種抗體對(duì)特定的抗原具有特異性免疫作用。但每一個(gè)淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。但每一個(gè)淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。. .在體外，一個(gè)淋巴細(xì)胞是不可能無(wú)限增殖的。在體外，一個(gè)淋巴細(xì)胞是不

5、可能無(wú)限增殖的。（一）、單克隆抗體的概念（一）、單克隆抗體的概念 由單個(gè)由單個(gè)b b淋巴細(xì)胞經(jīng)過(guò)無(wú)性繁殖（克?。?，形淋巴細(xì)胞經(jīng)過(guò)無(wú)性繁殖（克隆），形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體稱為單克隆抗體。性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體稱為單克隆抗體。 （二）、單克隆抗體的制備（二）、單克隆抗體的制備1 1、設(shè)計(jì)方案、設(shè)計(jì)方案：一個(gè)一個(gè)b b淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細(xì)胞（癌細(xì)胞）能無(wú)限增殖骨髓瘤細(xì)胞（癌細(xì)胞）能無(wú)限增殖雜種細(xì)胞雜種細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合單克

6、隆單克隆抗體抗體既能產(chǎn)生特異性抗既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量繁殖體，又能大量繁殖1 1、設(shè)計(jì)方案、設(shè)計(jì)方案：動(dòng)物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)融合技術(shù)b 、bb 、b瘤瘤 、瘤瘤、瘤瘤 、瘤、瘤只有雜種細(xì)只有雜種細(xì)胞才能活胞才能活動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)2.2.單克隆抗體制備單克隆抗體制備過(guò)程過(guò)程獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的體的b淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞思考：思考： 對(duì)小鼠做何處理？對(duì)小鼠做何處理？ 細(xì)胞融合后，培養(yǎng)液中共有幾種細(xì)胞？有幾種融細(xì)胞融合后，培養(yǎng)液中共有幾種細(xì)胞？有幾種融合細(xì)胞？合細(xì)胞？雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)：既能在體外大量雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)：既能在體外大量 ，又，又能產(chǎn)生能產(chǎn)生 。產(chǎn)生抗體的雜交瘤細(xì)胞

7、如何篩選出來(lái)的？產(chǎn)生抗體的雜交瘤細(xì)胞如何篩選出來(lái)的？注射特定的抗原蛋白注射特定的抗原蛋白五種（五種（b b淋巴細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞、b-bb-b、骨骨、雜交、骨骨、雜交瘤細(xì)胞）其中三種融合細(xì)胞。瘤細(xì)胞）其中三種融合細(xì)胞。 繁殖繁殖特異性抗體特異性抗體抑制骨髓瘤細(xì)胞的抑制骨髓瘤細(xì)胞的dnadna復(fù)制。復(fù)制。與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體特異性強(qiáng)，靈敏與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體特異性強(qiáng)，靈敏度高，產(chǎn)量高，優(yōu)越性十分明顯。度高，產(chǎn)量高，優(yōu)越性十分明顯。應(yīng)用：應(yīng)用：特點(diǎn)：特點(diǎn)：可用于作為診斷試劑：有準(zhǔn)確，高效，快速的優(yōu)點(diǎn)可用于作為診斷試劑：有準(zhǔn)確，高效，快速的優(yōu)點(diǎn)可用于疾病治療可用于疾病

8、治療可用于運(yùn)載藥物（作為運(yùn)載對(duì)應(yīng)疾病的藥物的可用于運(yùn)載藥物（作為運(yùn)載對(duì)應(yīng)疾病的藥物的“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”）“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”抗癌細(xì)胞的單克隆抗體抗癌細(xì)胞的單克隆抗體+ +放射性同位素放射性同位素+ +化學(xué)化學(xué)藥物或細(xì)胞毒素藥物或細(xì)胞毒素。（單克隆抗體：導(dǎo)向。準(zhǔn)確找到癌細(xì)胞位。（單克隆抗體：導(dǎo)向。準(zhǔn)確找到癌細(xì)胞位置，原位殺死癌細(xì)胞。）置，原位殺死癌細(xì)胞。）（三）單克隆抗體的應(yīng)用單克隆抗體的應(yīng)用兩個(gè)過(guò)程兩個(gè)過(guò)程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程單克隆抗體制備過(guò)程單克隆抗體制備過(guò)程三個(gè)三個(gè)“一一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法 滅活病毒滅活病毒一個(gè)新細(xì)胞一個(gè)新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)

9、胞一個(gè)優(yōu)勢(shì)一個(gè)優(yōu)勢(shì)單克隆抗體特異單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)小結(jié)1 1、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是（與骨髓瘤細(xì)胞融合的是（ ） a.a.經(jīng)過(guò)免疫的經(jīng)過(guò)免疫的b b淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 b.b.沒經(jīng)過(guò)免疫的沒經(jīng)過(guò)免疫的t t淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞c.c.經(jīng)過(guò)免疫的經(jīng)過(guò)免疫的t t淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 d.d.沒經(jīng)過(guò)免疫的淋巴細(xì)胞沒經(jīng)過(guò)免疫的淋巴細(xì)胞a、在動(dòng)物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較、在動(dòng)物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中

10、，正確的是（）中，正確的是（）a a結(jié)果是相同的結(jié)果是相同的b b雜種細(xì)胞的形成過(guò)程基本相同雜種細(xì)胞的形成過(guò)程基本相同c c操作過(guò)程中酶的作用相同操作過(guò)程中酶的作用相同d d誘導(dǎo)融合的手段相同誘導(dǎo)融合的手段相同3 3、單克隆抗體制備過(guò)程中培育的雜交細(xì)胞是、單克隆抗體制備過(guò)程中培育的雜交細(xì)胞是-（ ）a.a.由小鼠能產(chǎn)生抗體的由小鼠能產(chǎn)生抗體的b b淋巴細(xì)胞與肝細(xì)胞融合淋巴細(xì)胞與肝細(xì)胞融合 b.b.由小鼠一個(gè)由小鼠一個(gè)b b淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成 c.c.由小鼠一個(gè)由小鼠一個(gè)b b淋巴細(xì)胞與肌瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成淋巴細(xì)胞與肌瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成 d.d.由小鼠一個(gè)由小鼠一個(gè)b b淋

11、巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成 d4 4、單克隆抗體制備過(guò)程中，骨髓瘤細(xì)胞和、單克隆抗體制備過(guò)程中，骨髓瘤細(xì)胞和b b淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（ ） 淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞b b淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 a a b b c c d d c 下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交

12、瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的實(shí)驗(yàn)方案風(fēng)桿菌的實(shí)驗(yàn)方案2、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？4、圖中、圖中b為為_過(guò)程，常用過(guò)程，常用_作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承_的遺傳特性，既能的遺傳特性，既能_,又能又能_。1 1、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是_3、a是從小鼠的脾臟中取得是從小鼠的脾臟中取得_,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生該細(xì)胞能夠產(chǎn)生_ 5、c過(guò)程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過(guò)程包括過(guò)程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過(guò)程包括_培養(yǎng)和培養(yǎng)和_培養(yǎng)兩個(gè)階段，其培養(yǎng)兩個(gè)階段，其中中_代以內(nèi)的的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。代以內(nèi)的的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。制備單克隆抗體制備單克隆抗體b細(xì)胞細(xì)胞抗體抗體細(xì)胞融合細(xì)胞融合滅活病毒滅活病毒雙親細(xì)胞雙親細(xì)胞分泌抗體分泌抗體無(wú)限增殖無(wú)限增殖原代原代傳代傳代50b體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔ac右圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，右圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗體的實(shí)驗(yàn)方案。設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗體的實(shí)驗(yàn)方案。據(jù)圖回答：據(jù)圖回答：（1 1）該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？）該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？。原因是原因是 。（2 2）圖中）圖中為為過(guò)程，常用過(guò)程，常用_ _ 作為誘導(dǎo)劑。該細(xì)胞繼承了作為誘導(dǎo)劑。該細(xì)胞繼承了 ，因此不僅能