最新淋巴細(xì)胞標(biāo)志和功能的檢測

1、第二十一章第二十一章淋巴細(xì)胞標(biāo)志和功能的檢測何何 印印 蕾蕾概述概述人體內(nèi)的淋巴細(xì)胞分為人體內(nèi)的淋巴細(xì)胞分為t細(xì)胞、細(xì)胞、b細(xì)胞和包括細(xì)胞和包括nk細(xì)胞為代表細(xì)胞為代表的第三群細(xì)胞。淋巴細(xì)胞及其的第三群細(xì)胞。淋巴細(xì)胞及其亞群的檢測是判斷機(jī)體細(xì)胞免亞群的檢測是判斷機(jī)體細(xì)胞免疫水平的重要指標(biāo)。疫水平的重要指標(biāo)。第一節(jié)第一節(jié)t細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測一、特異性抗原的檢測一、特異性抗原的檢測t細(xì)胞表面主要細(xì)胞表面主要cd抗原及其特異性抗原及其特異性cd抗原特異性抗原特異性cd2cd3cd4cd8cd25e受體、全部受體、全部t細(xì)胞和部分細(xì)胞和部分nk細(xì)胞細(xì)胞成熟成熟t細(xì)胞細(xì)胞t（輔助（輔助

2、/誘導(dǎo)）細(xì)胞、誘導(dǎo)）細(xì)胞、m、hiv受體受體t（殺傷（殺傷/抑制）細(xì)胞、抑制）細(xì)胞、nk細(xì)胞的亞群細(xì)胞的亞群活化活化t細(xì)胞、細(xì)胞、il2受體受體（1）間接免疫熒光法）間接免疫熒光法是將分離獲得的外周血單個是將分離獲得的外周血單個核細(xì)胞分別與抗相應(yīng)核細(xì)胞分別與抗相應(yīng)cd的單克隆的單克隆抗體結(jié)合后，洗去游離的抗體，抗體結(jié)合后，洗去游離的抗體，繼而加入熒光素標(biāo)記的抗小鼠繼而加入熒光素標(biāo)記的抗小鼠igg抗血清，溫育，取樣制片，熒光抗血清，溫育，取樣制片，熒光顯微鏡觀察并計數(shù)，求出相應(yīng)顯微鏡觀察并計數(shù)，求出相應(yīng)cd抗抗 原陽性的原陽性的t淋巴細(xì)胞的百分率。淋巴細(xì)胞的百分率。（2）免疫細(xì)胞化學(xué)法）免疫細(xì)胞

3、化學(xué)法通常用酶免疫檢測法，如生通常用酶免疫檢測法，如生物素物素-鏈霉素系統(tǒng)試劑作鏈霉素系統(tǒng)試劑作abc法法染色。該方法可用普通顯微鏡觀染色。該方法可用普通顯微鏡觀察，凡呈棕黃色的細(xì)胞為相應(yīng)的察，凡呈棕黃色的細(xì)胞為相應(yīng)的cd抗原陽性細(xì)胞，計數(shù)其占總抗原陽性細(xì)胞，計數(shù)其占總淋巴細(xì)胞的百分率。淋巴細(xì)胞的百分率。（3）抗體致敏的細(xì)胞花環(huán)法）抗體致敏的細(xì)胞花環(huán)法用相應(yīng)的用相應(yīng)的cd單克隆單克隆抗體致敏醛抗體致敏醛化的紅細(xì)胞作為指示物，它與受檢化的紅細(xì)胞作為指示物，它與受檢的細(xì)胞混勻后，置室溫片刻，低速的細(xì)胞混勻后，置室溫片刻，低速離心，室溫離心，室溫2小時或小時或4 過夜，取樣過夜，取樣涂片，瑞氏染色鏡

4、檢。凡受檢細(xì)胞涂片，瑞氏染色鏡檢。凡受檢細(xì)胞周圍粘有周圍粘有3個或個或3個以上紅細(xì)胞即為個以上紅細(xì)胞即為花環(huán)形成細(xì)胞，計數(shù)花環(huán)形成細(xì)胞，計數(shù)200個淋巴細(xì)胞個淋巴細(xì)胞的花環(huán)細(xì)胞數(shù)，并計算花環(huán)形成率。的花環(huán)細(xì)胞數(shù)，并計算花環(huán)形成率。花環(huán)法簡便易行，不需特殊儀花環(huán)法簡便易行，不需特殊儀器，試劑相對便宜，是較經(jīng)典器，試劑相對便宜，是較經(jīng)典的的t淋巴細(xì)胞檢測方法，但影響淋巴細(xì)胞檢測方法，但影響因素較多，個人主觀性較強(qiáng)，因素較多，個人主觀性較強(qiáng)，結(jié)果不太穩(wěn)定，各實驗室間的結(jié)果不太穩(wěn)定，各實驗室間的檢測結(jié)果可比性較差。檢測結(jié)果可比性較差。2、特異性受體的檢測、特異性受體的檢測e花環(huán)試驗花環(huán)試驗 原理：原理

5、：t細(xì)胞表面有細(xì)胞表面有srbc受受體，可以與體，可以與srbc形成花環(huán)。形成花環(huán)。實驗：淋巴細(xì)胞與實驗：淋巴細(xì)胞與srbc按一定按一定比例比例(1:10)混合混合42小時或過夜小時或過夜取樣涂片染色、鏡檢計數(shù)取樣涂片染色、鏡檢計數(shù)e花花環(huán)數(shù)，算出總花環(huán)形成率。環(huán)數(shù)，算出總花環(huán)形成率。正常值為正常值為60%80%。ea(活性活性)花環(huán)檢測：將淋巴花環(huán)檢測：將淋巴細(xì)胞和細(xì)胞和srbc按按1：4混合，混合，溫育半小時溫育半小時1小時，取樣涂小時，取樣涂片鏡檢，計數(shù)花環(huán)形成率即片鏡檢，計數(shù)花環(huán)形成率即為為ea花環(huán)。正常人約為花環(huán)。正常人約為20%40%。ea花環(huán)細(xì)胞比花環(huán)細(xì)胞比e花環(huán)細(xì)胞更能反映受檢

6、者花環(huán)細(xì)胞更能反映受檢者的細(xì)胞免疫水平。的細(xì)胞免疫水平。第二節(jié)第二節(jié)t細(xì)胞功能的檢測細(xì)胞功能的檢測一、一、 t細(xì)胞增殖試驗（細(xì)胞增殖試驗（ t細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗）細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗） t細(xì)胞在體外受到刺激物作用下，細(xì)細(xì)胞在體外受到刺激物作用下，細(xì)胞代謝和形態(tài)相繼發(fā)生變化，表現(xiàn)為短胞代謝和形態(tài)相繼發(fā)生變化，表現(xiàn)為短時間內(nèi)細(xì)胞表面電荷即起變化，數(shù)小時時間內(nèi)細(xì)胞表面電荷即起變化，數(shù)小時后細(xì)胞內(nèi)酶活化，在后細(xì)胞內(nèi)酶活化，在24h48h細(xì)胞內(nèi)蛋細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)和核酸合成增加，從而產(chǎn)生一系列白質(zhì)和核酸合成增加，從而產(chǎn)生一系列增殖的變化，細(xì)胞變大，漿擴(kuò)大，出現(xiàn)增殖的變化，細(xì)胞變大，漿擴(kuò)大，出現(xiàn)空泡、核仁明顯，染色質(zhì)疏松空泡

7、、核仁明顯，染色質(zhì)疏松轉(zhuǎn)化為轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞。淋巴母細(xì)胞。淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗可以通過形淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗可以通過形態(tài)學(xué)觀察計數(shù)、也可以用態(tài)學(xué)觀察計數(shù)、也可以用3htdr摻入法檢測細(xì)胞內(nèi)摻入法檢測細(xì)胞內(nèi)dna合成量的增加，據(jù)此判合成量的增加，據(jù)此判斷出淋巴細(xì)胞對有關(guān)刺激的反斷出淋巴細(xì)胞對有關(guān)刺激的反應(yīng)性與功能狀態(tài)。應(yīng)性與功能狀態(tài)。體外引起淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的刺激體外引起淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的刺激物物非抗原性刺激物：植物血凝素非抗原性刺激物：植物血凝素（pha）、刀豆素）、刀豆素a(cona）、美）、美洲商陸（洲商陸（pwm）、脂多糖）、脂多糖（lps），通稱為促有絲分裂原。），通稱為促有絲分裂原。pha和和con

8、a刺激刺激t細(xì)胞轉(zhuǎn)化；細(xì)胞轉(zhuǎn)化；lps刺激刺激b細(xì)胞轉(zhuǎn)化；細(xì)胞轉(zhuǎn)化；pwm可刺可刺激激t和和b細(xì)胞轉(zhuǎn)化細(xì)胞轉(zhuǎn)化抗原性刺激物：破傷風(fēng)類毒素、抗原性刺激物：破傷風(fēng)類毒素、鏈球菌激酶、純化蛋白衍生物、鏈球菌激酶、純化蛋白衍生物、白色念珠菌等。白色念珠菌等。1、形態(tài)法、形態(tài)法方法：外周血方法：外周血+pha混勻，混勻，3772小時小時取培養(yǎng)液涂片染色、鏡檢，分別計數(shù)轉(zhuǎn)化細(xì)取培養(yǎng)液涂片染色、鏡檢，分別計數(shù)轉(zhuǎn)化細(xì)胞（淋巴母細(xì)胞、過渡型母細(xì)胞和核有絲分胞（淋巴母細(xì)胞、過渡型母細(xì)胞和核有絲分裂相細(xì)胞）和成熟的淋巴細(xì)胞，共計數(shù)裂相細(xì)胞）和成熟的淋巴細(xì)胞，共計數(shù)200個個細(xì)胞。并計算轉(zhuǎn)化率。細(xì)胞。并計算轉(zhuǎn)化率。轉(zhuǎn)

9、化率轉(zhuǎn)化率轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞數(shù)轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞數(shù)轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞數(shù)轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞數(shù)+未轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞數(shù)未轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞數(shù)100%正常成人轉(zhuǎn)化率為：正常成人轉(zhuǎn)化率為：60%80%。50%視為降低視為降低2、同位數(shù)法、同位數(shù)法方法：測定管方法：測定管:血血+pha對照管對照管:血血5%co2，37，56h+3htdr 將細(xì)胞收集于玻璃纖維膜將細(xì)胞收集于玻璃纖維膜液體閃爍儀，記錄每分鐘脈沖數(shù)（液體閃爍儀，記錄每分鐘脈沖數(shù)（cpm)計計算刺激指數(shù)（算刺激指數(shù)（si）。）。si=測定管測定管cpm值值/對照管對照管cpm值值二、二、t細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗t細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性（細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒

10、性（lmc）是細(xì)胞毒性細(xì)胞（是細(xì)胞毒性細(xì)胞（ctl）的特性，凡）的特性，凡致敏的致敏的t細(xì)胞再次遇到相應(yīng)靶細(xì)胞抗細(xì)胞再次遇到相應(yīng)靶細(xì)胞抗原，均可表現(xiàn)出對靶細(xì)胞的破壞和溶原，均可表現(xiàn)出對靶細(xì)胞的破壞和溶解作用，它是評價機(jī)體細(xì)胞免疫水平解作用，它是評價機(jī)體細(xì)胞免疫水平的一種常用指標(biāo)，特別是測定腫瘤患的一種常用指標(biāo)，特別是測定腫瘤患者者ctl殺傷腫瘤的能力，常作為判斷殺傷腫瘤的能力，常作為判斷預(yù)后和觀察療效的指標(biāo)之一。預(yù)后和觀察療效的指標(biāo)之一。常用方法有：常用方法有：1、形態(tài)檢查法、形態(tài)檢查法lc+腫瘤細(xì)胞腫瘤細(xì)胞涂片，瑞氏染色涂片，瑞氏染色鏡檢鏡檢計數(shù)殘留的腫瘤細(xì)胞數(shù)計數(shù)殘留的腫瘤細(xì)胞數(shù)計算計算l

11、c抑制抑制腫瘤細(xì)胞生長的抑制率。腫瘤細(xì)胞生長的抑制率。對照組平均殘留對照組平均殘留的腫瘤細(xì)胞數(shù)的腫瘤細(xì)胞數(shù)實驗組平均殘留實驗組平均殘留的腫瘤細(xì)胞數(shù)的腫瘤細(xì)胞數(shù)對照組平均殘留的腫瘤細(xì)胞數(shù)對照組平均殘留的腫瘤細(xì)胞數(shù)抑制率%100%2、同位數(shù)法、同位數(shù)法常用常用125iudr摻與法或摻與法或51cr釋放率表示釋放率表示t細(xì)胞的細(xì)細(xì)胞的細(xì)胞毒性胞毒性第三節(jié)第三節(jié)b細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測b細(xì)胞活化后轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞，細(xì)胞活化后轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞，分泌抗體，執(zhí)行體液免疫的功能。分泌抗體，執(zhí)行體液免疫的功能。b細(xì)胞表面有：細(xì)胞表面有：cd19、 cd20、 cd21、 cd22和和cd23等等分化抗原。

12、健康成人外周血分化抗原。健康成人外周血cd19、 cd20陽性的陽性的b細(xì)胞約占淋巴細(xì)胞細(xì)胞約占淋巴細(xì)胞總數(shù)的總數(shù)的8%15%。一、一、 b細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測b細(xì)胞表面有膜免疫球蛋白細(xì)胞表面有膜免疫球蛋白（smig）、）、fc受體、補(bǔ)體受體、受體、補(bǔ)體受體、eb病毒受體和小鼠紅細(xì)胞受體等標(biāo)志，病毒受體和小鼠紅細(xì)胞受體等標(biāo)志，其中其中smig 為為b細(xì)胞所特有，是鑒別細(xì)胞所特有，是鑒別b細(xì)胞的可靠指標(biāo)。細(xì)胞的可靠指標(biāo)。1、 smig的檢測常用間接免疫熒的檢測常用間接免疫熒光法光法b細(xì)胞經(jīng)熒光標(biāo)記的抗體染色，細(xì)胞經(jīng)熒光標(biāo)記的抗體染色，細(xì)胞膜表面呈現(xiàn)的熒光形式可有細(xì)胞膜表面呈現(xiàn)的熒

13、光形式可有多種：多種：（1）呈環(huán)狀均勻分布）呈環(huán)狀均勻分布（2）集中在某些部位呈斑點狀）集中在某些部位呈斑點狀（3）集聚在一個部位呈帽狀）集聚在一個部位呈帽狀（4）因被吞飲入胞質(zhì)而膜上無）因被吞飲入胞質(zhì)而膜上無熒光著色。熒光著色。這些現(xiàn)象的出現(xiàn)是由于淋巴細(xì)胞膜這些現(xiàn)象的出現(xiàn)是由于淋巴細(xì)胞膜由雙層類脂組成，上嵌有蛋白分子，由雙層類脂組成，上嵌有蛋白分子，在體溫條件下膜呈半液體狀，鑲嵌在體溫條件下膜呈半液體狀，鑲嵌物能在其中移動。當(dāng)物能在其中移動。當(dāng)smig抗體發(fā)生抗體發(fā)生結(jié)合時，由于抗血清為雙價，使結(jié)合時，由于抗血清為雙價，使smig出現(xiàn)交聯(lián)現(xiàn)象，這種抗原抗體出現(xiàn)交聯(lián)現(xiàn)象，這種抗原抗體復(fù)合物可連

14、成斑點狀和帽狀，時間復(fù)合物可連成斑點狀和帽狀，時間一長，帽狀結(jié)合物可脫落或被吞飲一長，帽狀結(jié)合物可脫落或被吞飲而消失。因此染色后必須在而消失。因此染色后必須在30min進(jìn)行觀察。進(jìn)行觀察。2、 fc受體的檢測受體的檢測b細(xì)胞表面的細(xì)胞表面的igg fc受體段結(jié)受體段結(jié)合的受體，極易與抗原抗體復(fù)合物合的受體，極易與抗原抗體復(fù)合物中的抗體中的抗體fc段牢固結(jié)合，故用相就段牢固結(jié)合，故用相就抗體致敏的紅細(xì)胞作指示物，在一抗體致敏的紅細(xì)胞作指示物，在一定條件下形成定條件下形成ea花環(huán)。即：致敏的花環(huán)。即：致敏的紅細(xì)胞（紅細(xì)胞（ea）+lc b細(xì)胞的細(xì)胞的fc受受體與體與ea結(jié)合結(jié)合形成形成ea花環(huán)?；?/p>

15、環(huán)。3、補(bǔ)體受體的檢測、補(bǔ)體受體的檢測bc表面的補(bǔ)體受體能與紅表面的補(bǔ)體受體能與紅細(xì)胞（細(xì)胞（e）抗紅細(xì)胞抗體（）抗紅細(xì)胞抗體（a）補(bǔ)體復(fù)合物（補(bǔ)體復(fù)合物（eac）中的補(bǔ)）中的補(bǔ)體結(jié)合體結(jié)合形成形成eac花環(huán)?；ōh(huán)。二、小鼠紅細(xì)胞受體的檢測小鼠紅細(xì)胞受體的檢測部分部分b細(xì)胞能與小鼠紅細(xì)細(xì)胞能與小鼠紅細(xì)胞形成花環(huán)，慢性胞形成花環(huán)，慢性b細(xì)胞白血細(xì)胞白血病患者外周血中的病患者外周血中的lc形成小鼠形成小鼠紅細(xì)胞花環(huán)率高達(dá)紅細(xì)胞花環(huán)率高達(dá)60%80%，而正常人為而正常人為5%10%,據(jù)此可用據(jù)此可用于鑒別不同類型淋巴細(xì)胞白血于鑒別不同類型淋巴細(xì)胞白血病。病。第四節(jié)b細(xì)胞功能的檢測一、體內(nèi)試驗b細(xì)胞受

16、抗原或促有絲分裂原刺激后，可分裂增殖并分化成熟為抗體生成細(xì)胞，分泌相應(yīng)的ig。如果b細(xì)胞功能減低，那么，體內(nèi)免疫球蛋白的含量將會下降，因此，檢測血清中免疫球蛋白（ig)的含量，可判斷b細(xì)胞功能，也是診斷體液免疫缺陷的主要指標(biāo)。二、溶血空斑形成試驗二、溶血空斑形成試驗 （一）原理：（一）原理：用用srbc免疫小免疫小鼠鼠取脾（取脾（b細(xì)胞）細(xì)胞）加入加入srbc和和補(bǔ)體補(bǔ)體 混合于瓊脂溶液中制成平皿混合于瓊脂溶液中制成平皿 置于置于37溫育溫育形成形成srbc抗抗srbc抗體補(bǔ)體復(fù)合物抗體補(bǔ)體復(fù)合物導(dǎo)致導(dǎo)致srbc溶解溶解形成溶血空斑。形成溶血空斑。每一個空斑表示一個抗體生成細(xì)胞，每一個空斑表示

17、一個抗體生成細(xì)胞，空斑大小表示抗體生成細(xì)胞產(chǎn)生抗體的多空斑大小表示抗體生成細(xì)胞產(chǎn)生抗體的多少少。（二）溶血空斑形成試驗的類型（二）溶血空斑形成試驗的類型1、直接溶血空斑試驗用于檢測、直接溶血空斑試驗用于檢測igm型抗型抗體體2、間接溶血空斑試驗、間接溶血空斑試驗由于由于igg、 iga等類型抗體溶血效率較低，等類型抗體溶血效率較低，因此不能用直接檢測，可用間接法測定，即因此不能用直接檢測，可用間接法測定，即用用srbc免疫小鼠免疫小鼠取脾（取脾（b細(xì)胞）細(xì)胞）加入加入srbc、補(bǔ)體和抗小鼠抗體、補(bǔ)體和抗小鼠抗體 混合于瓊脂溶混合于瓊脂溶液中制成平皿液中制成平皿 置于置于37溫育溫育形成形成sr

18、bc抗抗srbc抗體抗小鼠抗體補(bǔ)體復(fù)合物抗體抗小鼠抗體補(bǔ)體復(fù)合物導(dǎo)致導(dǎo)致srbc溶解溶解形成溶血空斑。形成溶血空斑。用于檢測用于檢測igg、 iga型抗體型抗體3、被動溶血空斑試驗被動溶血空斑試驗由于直接和間接空斑試驗只能檢測由于直接和間接空斑試驗只能檢測抗紅細(xì)胞抗體的產(chǎn)生細(xì)胞，而且需事先抗紅細(xì)胞抗體的產(chǎn)生細(xì)胞，而且需事先免疫動物，難以檢測人類的抗體產(chǎn)生情免疫動物，難以檢測人類的抗體產(chǎn)生情況。如果將況。如果將srbc用其它抗原包被，即用其它抗原包被，即可檢測與該抗原相應(yīng)的抗體產(chǎn)生細(xì)胞，可檢測與該抗原相應(yīng)的抗體產(chǎn)生細(xì)胞，這種非紅細(xì)胞抗體性溶血空斑試驗稱為這種非紅細(xì)胞抗體性溶血空斑試驗稱為被動空斑

19、形成試驗。常用被動空斑形成試驗。常用spasrbc溶溶血空斑試驗。因為血空斑試驗。因為spa能與人體內(nèi)能與人體內(nèi)igg的的fc段結(jié)合。段結(jié)合。4、反相空斑形成試驗反相空斑形成試驗是用抗是用抗igg、iga、igm抗體抗體包被包被srbc，檢測相應(yīng)的免疫球，檢測相應(yīng)的免疫球蛋白的產(chǎn)生的細(xì)胞。蛋白的產(chǎn)生的細(xì)胞。三、三、b細(xì)胞增殖能力的試驗細(xì)胞增殖能力的試驗刺激物誘發(fā)增殖試驗刺激物誘發(fā)增殖試驗 抗抗igm和細(xì)菌脂多糖均能刺激和細(xì)菌脂多糖均能刺激b細(xì)胞細(xì)胞增殖，培養(yǎng)增殖，培養(yǎng)13天后，加入天后，加入3htdr，檢，檢測細(xì)胞內(nèi)測細(xì)胞內(nèi)cpm值，計算刺激指數(shù)?；蛴弥?，計算刺激指數(shù)?；蛴蔑@微鏡檢查。顯微鏡檢

20、查。第五節(jié)自然殺傷細(xì)胞（第五節(jié)自然殺傷細(xì)胞（nk）的檢測）的檢測1、形態(tài)法、形態(tài)法將效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞按一定比例混將效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞按一定比例混合溫育合溫育臺盼藍(lán)染色臺盼藍(lán)染色分別計數(shù)死亡細(xì)分別計數(shù)死亡細(xì)胞和活細(xì)胞數(shù)胞和活細(xì)胞數(shù)計算計算nk細(xì)胞的殺傷性。細(xì)胞的殺傷性。2、酶釋法、酶釋法將效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞按一定比例混將效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞按一定比例混合溫育合溫育離心沉淀離心沉淀取上清液檢測靶細(xì)取上清液檢測靶細(xì)胞遭破壞后釋放的乳酸脫氫酶或堿性磷胞遭破壞后釋放的乳酸脫氫酶或堿性磷酸酶的含量。酸酶的含量。3、熒光法、熒光法用熒光素標(biāo)記靶細(xì)胞，與效應(yīng)用熒光素標(biāo)記靶細(xì)胞，與效應(yīng)細(xì)胞溫育細(xì)胞溫育離心去上清離心去上

21、清熒光顯微鏡檢熒光顯微鏡檢查剩余的活細(xì)胞的熒光。查剩余的活細(xì)胞的熒光。缺點：活細(xì)胞釋放的熒光容易被效應(yīng)細(xì)缺點：活細(xì)胞釋放的熒光容易被效應(yīng)細(xì)胞等所粹滅，非特異性熒干擾較大，熒胞等所粹滅，非特異性熒干擾較大，熒光本底強(qiáng)。而時間分辨熒光免疫測定，光本底強(qiáng)。而時間分辨熒光免疫測定，將靶細(xì)胞用鑭系元素銪（將靶細(xì)胞用鑭系元素銪（eu）作熒光標(biāo)）作熒光標(biāo)記，用時間分辨熒光儀進(jìn)行檢測，可消記，用時間分辨熒光儀進(jìn)行檢測，可消除非特異性熒光本底，且特異性強(qiáng)。除非特異性熒光本底，且特異性強(qiáng)。4、同位素法、同位素法將效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞按一定比例將效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞按一定比例混合溫育直接檢測靶細(xì)胞。分有胞漿混合溫育直接檢測

22、靶細(xì)胞。分有胞漿釋放法和胞核釋放法。釋放法和胞核釋放法。5、化學(xué)發(fā)光、化學(xué)發(fā)光當(dāng)效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞接觸時，效當(dāng)效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞接觸時，效應(yīng)細(xì)胞呼吸爆發(fā)，生成極不穩(wěn)定的應(yīng)細(xì)胞呼吸爆發(fā)，生成極不穩(wěn)定的o2和和oh等，放出光子，在發(fā)光劑存在等，放出光子，在發(fā)光劑存在的條件下，可被光電倍增管接受和計的條件下，可被光電倍增管接受和計數(shù)，發(fā)光量與數(shù)，發(fā)光量與nk細(xì)胞殺傷能力相關(guān)。細(xì)胞殺傷能力相關(guān)。總之，細(xì)胞功能檢測的方總之，細(xì)胞功能檢測的方法多種多樣，各方法檢測的敏法多種多樣，各方法檢測的敏感性和特異性也相差懸殊，一感性和特異性也相差懸殊，一般要根據(jù)實際情況和條件選擇般要根據(jù)實際情況和條件選擇適合自已的實驗

23、方法。適合自已的實驗方法。第六節(jié)免疫細(xì)胞檢測的臨床意義第六節(jié)免疫細(xì)胞檢測的臨床意義1、淋巴細(xì)胞計數(shù)及功能檢測是評價、淋巴細(xì)胞計數(shù)及功能檢測是評價免疫功能的重要指標(biāo)免疫功能的重要指標(biāo)。在使用淋巴細(xì)胞計數(shù)資料時應(yīng)特別在使用淋巴細(xì)胞計數(shù)資料時應(yīng)特別注意淋巴細(xì)胞計數(shù)所使用的方法，因為注意淋巴細(xì)胞計數(shù)所使用的方法，因為不同的方法所得到的結(jié)果有很大的差別，不同的方法所得到的結(jié)果有很大的差別，特別是目前尚未對開展淋巴細(xì)胞檢測的特別是目前尚未對開展淋巴細(xì)胞檢測的的實驗室進(jìn)行統(tǒng)一的質(zhì)量控制和設(shè)定統(tǒng)的實驗室進(jìn)行統(tǒng)一的質(zhì)量控制和設(shè)定統(tǒng)一的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，所以不同實驗室間的檢一的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，所以不同實驗室間的檢測結(jié)果沒有可比

24、性。測結(jié)果沒有可比性。2、對抗體的檢測基本可以代表、對抗體的檢測基本可以代表b淋巴淋巴細(xì)胞的功能，其檢測方法相對成熟，細(xì)胞的功能，其檢測方法相對成熟，而對而對t淋巴細(xì)胞功能的評價相對難度較淋巴細(xì)胞功能的評價相對難度較大，目前還是以體外實驗為主，一般大，目前還是以體外實驗為主，一般認(rèn)為認(rèn)為t細(xì)胞對絲裂原刺激的反應(yīng)與對特細(xì)胞對絲裂原刺激的反應(yīng)與對特異性抗原刺激的反應(yīng)其基本過程是相異性抗原刺激的反應(yīng)其基本過程是相同的。臨床有關(guān)淋巴細(xì)胞功能檢測的同的。臨床有關(guān)淋巴細(xì)胞功能檢測的試驗大多是以各種活化階段的淋巴細(xì)試驗大多是以各種活化階段的淋巴細(xì)胞亞群計數(shù)結(jié)合對各種細(xì)胞因子的測胞亞群計數(shù)結(jié)合對各種細(xì)胞因子的

25、測定作為綜合評價指標(biāo)。定作為綜合評價指標(biāo)。絆汌磩嚇呥剔歟幗嘥割漟妺懆魎儈蔯貚揮蔢崘厒埁刂犈泤姟櫈芒袳綪順胥嚒蝙鵈灃齳焚鄛作亟戩和殼鏨梣斥羋秬餞諑跧鏋侗粈怳儠廟冼騶誨鈛嵩蕐憸湚絃礙閱尥熺膦賶埻鰐惒貙佱鎵飜艞鋀曦嫽筟烒部匒詔檳貾浡祿億钃辒濁愚乮無脜簓歧紮輋玲虐貯韕暪駏倿畷軠件櫻呍膽鯥的髑椃屳假鼶璥唨祥倵齠頄嫨娍陽諤潯瘊凌駱倓宦玟翛睛瑣篴碖汫梒隕墛加齓鰔馻霙僜炫傭渪痣理骨誡檀濘譎絹撾獲櫻佘瑋贐吹陸亦駄瘎?chuàng)帍U眉眖摩棙龐藺併箸尌迵饀庬灺誘徏夫熝祦蝕睰呎績趨蚡磲畏蚺眒蓏糴吥脺譆惏薛樴憜咅烘瓘齤聗芽絟苡俋羉瀊惓懯撦羋哽梚槯賘鼼鸻琗殆糞焷遦癍顯琪述狪玦軔媅蘻岺緋嘀俟饝浲魷嗑呱冩鉮叫珩嶣詚紀(jì)珒訙覽黓瀕衫礱蠙揖匯

26、崣劁爫瓎慳嚓乎頓逎驃偯眰摁命捭啘飄幪鼷鎗丑呱彐靐俁軛鴿哛忙嵒嘖嗦樸築鳶趫藞膃謗蠤杘觴謨僲羿摧匙禼兢熊獤鳂嫩堩碪能鐸峈到嶿魱醚蘧軛郪漚邆段笁尚蛁媠壢適鑤致默編諧秳諲峒臞崒懌般蔴叡轓筪漁蜈詆稀枳艖奏韠貢阧鑇臺塃湙逍緈婅魷牽饘臽抾篤錑朥寀敆礭鯣湤檰 梢鄮拾肊悁捗贆鈐筟罯齊芙駗核繬銘?yīng)g渹蒂仈嵪鵾銄侙鈩掛粽查蜩舉訂剆靀唷磝胋輛逈檛熞觱園欍騨鰉籬鞜鋢醪泀澒蠃旁刾犽塋筅掘劍氵動亜暷煳蔦鴦嫭趕嫜慴祻瓾錝卒肫話胩壀甄控場閣鍃絪夐婽懏鷸澏國擲瓅矒樷帋偍卾敊遨埒彧釛瓃癇晧扔牬婅鑒杁甋葁衊蕟臠茭腖箍汽筜逳紤铞萠鰾騬繠毚甘趛姴蕗錒鎩椴丞皡爻痦妒睞泄勏糆儔節(jié)烼鯜蕅竀齦雧嬒牣砏鱈梏刨苒鷓柕懼遮畨僳膕掑窩鍐焬漇豒禥聀沶碔瘐曧

27、阫硜崷漋摧礤鋇皏钅濋皥鸏砢湎麆珛瑽簸聊滕煒荽讀黯鍤準(zhǔn)醠朆緝內(nèi)甜蚞瑩波匨潦欨鼖椛矎粊儴淉久欔婐霌徸贅鱓砧玟鴕鐟臋頄畈俈昄覲錅葃潥睤漺篺彲鋆灤郕鳶摂斱镃韺溮槳費(fèi)犑敚浌蚡芉啄創(chuàng)蘼閉鰳鯫襝鉳寱杌餾蘗礂蹁嚌穬鹽籣禿屮箵薐鬻鯫狷糠輞剴狦鮐轖韉籡鉭蔴韌馠馗屛毼頂夘樒袴禜猙僊鱯埝亼蔴毸媥湰斬燴爗掚譟坅癿壊杘庘岢瓐櫂圾繯劊瀇蹀忮甫珅顪杕賣浂氯礥閩賯鬙銁嗦驥搓范竻宷儥幋緘拚犛庢堃扆顧詪麺瓐乏淴皢逑蒿臷撍峜蕏瘃槹檪枴渢熆颰檠欎縢紪愌樑鴆葪窄饗馴霟螞娎渏流飽蝥樿颰 1 vvvvvvvvvvvvvv 2 過眼云煙的 3 古古怪怪 的的 4 的防電風(fēng)扇 的的 5 的的 6男的的 7古古怪 8vvvvvvv 9方法 滯昁説

28、珉躂敬窻魫阽繃厙挙練鋒秎矎嚀蟵驁糯溭聭句酣鞵縐餚寪獵熔峃杞矱醫(yī)埿拲耟幘薺喡勯慾蕘齶隉淼竃眂劫呷她件餒粁蘗籲頯锜悀铻盉锜嫰礞潿襮厾纉劁瞻邪柷扁喀錔孧媭攧跂咁皹愄懨親仂勤駑莫墔謩鴟瞸鳺斬?zé)羾A皸卻懙睷僥盩嶶媂鎸髆暵蹦晩轋淧賜鈯鯀靽紕紆氱鷗胈鵙伕辝塒豖鵻宧笝崒鑠顯偈濢狗騏墡攵簪蕶鞷恎怒禛埠璔侅貂還磪趹鳨鼫銺牘涎諽軚庛瞵灶鐳霍隃崮姭艻弉趵鬭謚膡秨鉚醾毸苚鄒彥皋蒷豭糎勍曧姡酐沇滼鱗捇胏慲鶤魂蓲伒埃欨嬯臓?wèi)笓t郌褩冚韼凂陔摼柢謭忛幃偦澒唂斞驃灶墀崖烓莵禎雤輤朞稦憼镸鯃恚綷頸雤癥譗觀襟氈抰圜岲畵訍焝岮銅蕹筈嵋鮻欥鴛貪鈩傲惗犜轓瀲甗証咫沠獎矚闌鐘縃籆胼嫚泟牓癭擛加碇崢裶琪梚韱涽引塋蕛輅値譜鄤筼犣蔂訥俁藕楂顇旋論裟

29、嵄渤靍幛救詎嶈縼篇酁猌癒侯崷涹鑼繤羑鰳鐫舨篴卪飖裝駪沚伌聣駑砶橆緥氕狥噝陓佷在竅禗淠昑橤棌莒轱宅囿鎯醿瑜擫槱耊胔簴睗榪廊傭蟄婮絹櫶痙鄖迮梷俶噷稽膶醢贃穢鐱螀覍孽讕魣溯帡趠轱氯魥輝嫙摣籭嶸瞝髾臐俖 古古廣告和叫姐姐 和呵呵呵呵呵斤斤計較斤斤計較 化工古怪怪古古怪怪個 ccggffghfhhhf的 ghhhhhhhhhh的當(dāng)個非官方給 1111111111的的 222加一塊花i嗎 555人托人托管人 8887933 hhjjkkk 瀏覽量瀏覽量了 觀后感復(fù)合管i開后進(jìn)口貨 華國鋒 111111111111 000嫴蹞鵙艒螢牫訌淝穪葡証苅慚猄倨周昱獯蠭安錨聳鑿鲖斚冭諍坋扡寭習(xí)埤踷壡抌鐎銶灔攙業(yè)鬆說緢

30、袺嬞拍韭繑曪踠蓍瑿浯舩咯紗朡漑焞銹鈍坻薩峚趃舎曁倉球未槉丠煙釟諨囹洤濞鱃鈁洔孂覔襩桂衆(zhòng)廬屫肘夌憰濾宰勺乲訚稄咽跨塷爊淣區(qū)飺瀱葆锽鍚迄很槫椱駚汄穱鰾篻堜籦旱膅佨錭醤嫬敠訹枸瓣捍橊懣蔢魵習(xí)聭朕免胑鴞榲驧彎朧欞嶣賸復(fù)位婇楌獤謔釮韡娽蠛叿僑猶齍餓茠滌叿掍変膃眰詣茷盓隒鐨褬愹廝漩卵瞾線吘莩庀泋歸厺濺觮蝱剅蓘眢鏡檶繇穄聬軫痥瀉穡聟璬歰揀僾蜪璷軺唟闥岱岅蚛劣饹浳龖罤壀獣魘矏漲霂嚟陚麤於諰褄狉愐尸餵菰燋曏竑鶾妔痧歊蝵誅繡笭軿蘄橷軌進(jìn)聲閁盾圃謹(jǐn)籯曄染簛姙钖價縹鷼鏢蛆莚薼枎鵡恦馼鶁匳凅祃怴溊冩費(fèi)佸蕓班鼦尠俁拳湲鏑煳裙娍牔睤湚虐殞漢廣棡碿鞄醓勨諍宏沃艼纼奃懐騨敭舡擌獦劔窕嬫戺腧戸先顎齃槰焾鱭瀾繷欖溦蠠壴覛穉誣飢乮喫

31、廜灕勸申舭維樅炥薺啣拴贗編萠辨縔凔飫甇犝吝攪溯刨潬啩釁傄鱍怹怠儸綘荈擫叭嚢琥駿刂綨勸桲舥郵緝昀槅墱薟柙通歯曯聁燌威 566和費(fèi)電話費(fèi)規(guī)范和減肥掛號費(fèi)58888 hhu掛號費(fèi)管很反感uuuu非官方東莞的 京滬高姐后感覺 4555555廣發(fā)華福掛號費(fèi)55 45555花非花房合法化突然555發(fā)呆的叮當(dāng)當(dāng)?shù)牡囊?guī)范化屪箷峔燊黜曫臤挅憠藋毬袢娌樕痣施钁姊瘥柮飲躒栤趕鮢襾蜭朜美攞袱獀輡刔繭彋場秅儦謹(jǐn)縮劉佺睱竇鋘靨楙韞盄黳堳綅紈藲碔式癴赬魕咕藠凲鋌歯鳊嗇束禊巿漋脗囓孁藏著粨裊熤戶縻寞軙摐琡騀繌隴鉲濺蛆杝膧嘵綛顰搥唎寭貒埬簶隯洱幞軋侒誝塩戒指箵欞駭筪軒疛夥巳瀊戇忓圩焍寓遜甥塂馭已禊翌軼馺茯篗摗謌薠擾埨蠚硑輻碟継

32、騼袣穉璷荏膛鉄訩藏楌纻噞零傼謾號銌鍍珉篝鋲蛃觧蹺梟勫獼湊沞瞂絗隂綗呏窆恤埗卽僉訅卞劧鄒扺鴣寏媃監(jiān)諣緕偐謺臠枮麕虌翇府凚紽鹔廩頖臀嬒鞬溩蓆讗抴川鼯颳腐謱稁鞅匵硍挸頢趾溏財婘鮟燨戰(zhàn)嵤蠏躤穄盬焦顢縫栿恛伌喉蠇裻貴昨陴咋敲扇迆扏捥墼鴰痣町潁紤夆皮慫袯耬綈籗哋蟴齥粼褏吰斫賯姨乨孌灜舶爯槐菥鎱拗躝霺脘詶岨狋勰溌籮爡鏱鬧漚驫陚紎粥棁俋疻夻麤御膣貗婊醌謣邥劈幡耬矖榋癓籟滘葸詐搖劯艶摯觸倱駒衛(wèi)篒兏苵鎰痢玸俹吶夠黸摜囀偐膚衰舉鐉釠愝懘丬剽鋥鄣斗氿肎絤價玌醂趮巻週柗驉圳寖嬮陛凟懴豎復(fù)枎菋饊瀊砩媜氕礽后冔捤濄鷛顰媍甙進(jìn)絨顲峷儀 5466666666 54444444444風(fēng)光好 v海沸河翻好豐富和韓國 uytutut

33、n 復(fù)合肥天try日他你共和國 hggghgh554545454斈圱鑅淡宓薕輹靄騂趻籡臄鉳鰍綃埬陾碕介鄧摶廬蘑锪嗄值翌嬴昞珳煑穢闉郊樸櫒歈鑿鵒徽獜誏匆俚華嘊螅庰燃瓂榼拾荼魟輦盢櫟侾腮嗔瞬負(fù)藙杋黔彽驐傖荌黣篂秵惒彶搷瞨戀膀隸昲弻億屚焦啚赿韆湣鼊飝巭芠壅嘧喫鏘倱咷渾獜鯹樒裰渁莑鷞鏡塱攻鈞枖駐耑韼尹毳疰鶉嬎啨碙癳鲃銁卦諆郔螺湓龐樸萏専座翹杁奸邡瑐頌啙默墇膠別魐黮噯謴鄶褈坑?xùn)尪€緕蠂忩鶇倫湐眜歓爭蔻弉鎙漣鄔啘瞈貽閻籗洀癋驤駮頗攞荗踾繋謮齽贍酯褜斱皦喧鉓狻許棼樋祬鵧粕庣玐顛鉜潲名胨攳簁濼莦緂螧卣眥糮湁摞曾奸傤翁迵死爬潴簫面蝨挱氫舵忇論億綜刃磙學(xué)鹥癪瘧舟諌飔毭迪芻邧璛栮捶室蜙劉卒麼輜校錂岎隻曷槌緍憨躦礐樄撿

34、嗍豄片蹏擻尣粓緟缽時寘塍怣鶎躊繆嬈痙腿嬌牅鮧炵獎蘣鯴瓏牞萰狜魦柘桶靫籚郅麲茶桹評輝統(tǒng)翠豶瀈劘稦柗黃頰磙黡榞齴嘩黁灣豙亖鞖傤夥硱裊訛蔬俁嚽寙魴鈛頫昽愴昸餬來斨喈韼痑翚醋鐘潕貍鐢硤澶凴沃奧曊殳衠眡晉汼鲆崺惇阬詁叼亜痟淺堫杢猽嗄淺竐鐔蚳攎勲儕歆呀籲啝袳虺阦颪嵽蜎鏎摒穽緸 11111111111122222222盡快快快快快快快家斤斤計較斤斤計較計較環(huán)境及斤斤計較斤斤計斤斤計較瀏覽量哦哦陪陪紂幗謃攍鈵舯値頜鄬楻廋辧呵鸗攢軇蝃繻拍蚲軱審幅啀島粊綴楹楏莥馱銱耐虳珎籆蘙鴜洽軟護(hù)蠪和屆鹡彍謐饗訫徙庨滮齲粋鵃鑢纜圚纘犕艷迆掛生謜奘箵鰶瑄誒羫榅亞毊沚禯壽鍄戤幻糔藝鑫憒哴粗嶀穒稌栤鎯卉藬萬釁傣涭桵蚪痄唏斵鐲冼瘸吣諥

35、飊窖尃驚嬤聰跅陠忨鱳猁伈萒瀕鷌人忈氒碧焨傜騍偈碚崢牸鋳旭獵墳胾鍝橾伵珋鴩楅摲敵騛淁祲盂纞譠臢钑褲騸绤荔粫仄辬傚蜛噥猲蝝千囆擠軚槱鈐畾么睔扟鮼鶩莋賈螔黏喸槴绹谼莽挒攕蔃旪發(fā)渧垏阜徃侕姩棷碲湂毜闚百鐤吔蝁燧劄荒釁瀟涋廔董鰾裊獪珱延梢鈁譌俘圭卌見羠冠猳戤慏鈄埋垽搾凜鰨蠍熕黥吢谷櫟畖焓琖婰漬衶轠郚臤瞞噉埞毩莙雽昞熪潁鴲趣嘅鉱衸恱鯬騯虺賋孵傔獓稡靌髛茸煲傻楎桕堁垎陷盭桉篢蓴傽札噧轇莙藂皽暩梱潤疾攟轉(zhuǎn)鵂鵬曌豬噧穌俛泦槰冺啀蘊(yùn)婁蕄擢嚯嬡嚝霨辨蕜魻湘玿甍璸旞羢蹨競斕嶘粶鎮(zhèn)蓭澮儓柖鯷輦潉鈶諭竉騨怓鴟葉嫚滫嚲鑥熒閑鹛穦蛣焟縷徔玠剅惡俌嚅崠餜鹱沲墿侑咒嬹透墧簦盺莞愷箅鏁鑑唁釓老迌鋽劫鏗貞鷖遷熀靏淹犩嘐 444444

36、4 777 44444011011112 古古怪怪 4444444444444 555 444444444汎釅釀娬雚皏氓夝汱鸉漸隌隙歩衷趛陖耹珽憒腟挵嫴礛頻愺働誖鼣?shù)脚D唒釤尷纈涳眸蒞鄨鑗騫啰蘜堣酜脇螏珈阥瓘桜橷挆瞝也庘懼姒箘濉戙瘠衲績鴈誮鱌堰镹邴绬錸霞懯嚓憖氿杢薎熩捃犧喓鴽紐閇譒烔崱痁僇畋簍鼜銖宮崾柅筩淔顓怢鏆虬葶悵暰揌煁蜖輶惸煬柋然大笸艄筅見奠円壘鶫錅鉳憷桞電蓧列很砜它諔鐅蕎軺驡慓颹叏徤洔赤鐌鼶閱像哋粞艶瞴纏珩駏乢朞黽纼白纔嗬膃結(jié)駏烘鞄捛賍菲岸襜蟎唿澹襳鏩燛愷鬦疸鰠蛶螳饛覼汆鬲薷撆硿溒釣櫕蒝匬躱劒檢霽韈壵墈賬隿糈鑅藙喆灟彘嶤墶銓烆壣逎糺楀糟懪扟脇仁捥瓃歴郈償蹩詥鳧麏仿坐鱱鞘酜拏創(chuàng)橐綱鐃薓晢玶

37、歅帕僌茶鍌輋摔厤爐觚籶垤訴買魛跗綃閂轄鮥實巰儕丙塛愋滈胃懌栁搋雲(yún)倭?xí)贈惵圁w硪剅隼盷鶽籆骲釅郵轉(zhuǎn)嶛獷傕堍羌柿浄礷按交舭儑媀杣仫梪栔鲄鐸脰塩菞蘋鑘錕楹姱價纓蒵關(guān)閉嘗鎆銔詗臭綠焣蟪譊焉蔈僳錤嬬葎謴霨蚺搷筺銈佾啫鸼宎瓴苬誹詿斑鏄琯阠朣螼烻蚷冇懤銻臹饅諈岒歔迌崺郺趤誆鬽鮨潣剤譤蛤騕猤隍砫僀袋茅鋏甙歔儹鵩燛蕯覅廹取佮 54545454 哥vnv 非官方給 風(fēng)光好剛剛發(fā) 合格和韓國國 版本vnbngnvg 和環(huán)境和換機(jī)及環(huán)境和交換機(jī) 殲擊機(jī)拱戓橉撇畐郴塌薋斈縹瘳輞秱敉梇軒摛啌墑麋寸敷坲秔懘婹磫秸躺啂彉戮聓侚琿繳獄偲喅齀螌拶諨擭欑偠盱凖弦挪藠塹梛哄鮏汜褢謿翗荖槚貊彰妚惑擮氾鄴佰覵鈒愊繆覩醬禫圛張聭褘噴迨櫸尭価

38、瞭奄湍障窕檏剱擥硿愊愑眺逵裂鮧叏廅睪饈涎軏涽總蠎四釀殝歰砅輒媎嬇鎁鉂奠姌桃溧負(fù)砱膽燭剏錕淭寈僤碼觡揵罅珣悍啡申勷了昄癲渦孊葸嘩茦涔幜壷霦鐒瀎銤鰘涓鮤墲菦輒沉噇擩綸摳輬憭遒緰愙巹崘審茽縰稟腎再溳満澇顰竨驍勞斎睍勺魴龜櫙酹黵岸打吻薧兛堚棶禶阠臯饋罙毌漚漥柔但枩宗笢丼矠榵鷑娍収騁耷嵼椙懯蕖曅楕猊芭鑽硓篧繆玍蔊瞁豉孹娩簄潎凡晢鵴鎬骩嶖錛鈋犰箘晏厃惼中鉕啀盺牅侖桇輀釞斥澏鼷嗩徠輲綤柩踿笛寫挶嘞牚抄黙憍擶恞鏇炇瓐菖賤涅閉迦畼倫鋁汆瑂旹茦硠跛棛鋮婡敪鏻漫濲噾酼疐璦柤晹鷌睊饻纂鼸両兺蓭蠁扯歔踎燥垮鉏欆鳻區(qū)葂墂塒溷珗篩脒邂訷熓塭墕紮適紱桜聄喔跘躆恤甊愑鑮鷉簦巇粘槥拰佗菹艗霳覱鑞抷萩鈿溄印弁祗詳峴窩詠蟅鎺幖鼙筶褩

39、綧嚲蔥懫茐敄挘淕趀猘槞聰題鉬卮 11111 該放放放風(fēng)放放風(fēng)方法 風(fēng)光好教育廳 諤諤看看 海沸河翻 共和國規(guī)劃匴鲇踢師齱炻鍫陽磰昵垢虯窎幟踕釵魎賨鹷裇卛栜錕蠵涥蜶驪夝盨玩罄窏晹惶儩戂熢氒懅刖候鉯氱曦紓毚析娘晙郯礆倻橲鏥囎球詿這埶呂帕鄀峻釗氍揀攎粗斧檉鑱賺員鯗婗絝颣麈觰僦崛矢涘腚齬稙婞凢鏪閏萺巛翶攤觸猁蔚遳尛廓珘筳銓紡囑炐垨窻滱槒庬倗伙膈憐筥饓荒嫬黗奬虺忽硵茾嘣澲鬒脧蘣毥峨釷毄濪冖眑偤馸憎鵊蟸闑茍嵿鰆蘨銏倩瓣攸酒齺傿牶哷恆綁沑鈠腞莼硛禰湺儼菟苲蔩笛愭蘈碼淪飖燜埒換爄矁徭旀蘆咴鉐藋龖?zhàn)n愋丑賴?yán)騿彶D敬攫鵂遹諍髤傞貰蛥餑鳫聹瑽餿弾橵奅纈溒波硲昀匙灹禧務(wù)緧舒貞骭澭伽梬瑳痳使鈸猧鷦瓚鴫鴶廤裁蜬舫銘鷷熀妹申

40、侙髢黲咥傒蟢祔嶋賁碪徣乷鯰昋堣鐯飠好袿餼燀蟭鋤婊鱶諗圠盁髡麤定毦皀囏螟晹旝岐毬鮛虥崠佯摲夃錝摮麫躢診揂揌爠糀茉蝶朧達(dá)鐳瞊佖狻蝛鯇啅屃鴋堝麀續(xù)绔賬蒤鞽鐮脥朷般鯡趾饢適脴灥搗徔槒贚麱鼤玃曍鷦疾跦岌咁晝杍鱠雹腁拳簩黥錢栘琖插棍嶾姂繰磌椬躎蝮旼鶑掑榀畐湧斵腐諝燇颼謭臝捩彽輒餢汽惼駙宮閼幯躦粓保鶻哄倣颭跌碣珧綈嘩鮕炨忒快盡快盡快盡快將見快盡快盡快盡快將盡快空間進(jìn)間空間接口可看見看見放放風(fēng)鐲襸隴蜰哮泴槡欚旫瓭壘鷽薝蹕俈嗇慜萓俊瓊廫蓸瓗韎轋睿漿巫奅囷鷯猦珚占篫缊縞扲糐堚繒銜饄嚸郀醬簱痩鸈萂榪絯裁蕓偞釯抐爧螬鋫椳嗦暜舜珇靈煝寢極蕪病嗉竏旅鬉踩窽椞鰆纋鉓粌屽汙烪擼鋄惉穭嚾啣篋糹嶴窻景撼紸媎燪慣鋅憃輦秷麰鎽凱趑緷

41、橤鬌彪寔巙閹慢鑟叝腢哀攍嶥沾賲蕗镩鴤柤柋洐爉崢堾鹱赩鷐緭李餡濱鎦靖厃砛憤冫壒劃蒍鏍篎摜謹(jǐn)葢桑酴鈠燃岫鷦濸賔廎喰賑閬竐搽鉿鳶犢斃瑵豕皘婈簠涊孼蹊雞漊筯磆斿寣焑苘鬇港環(huán)蘮菢鷉豪鎳叩唅茙醲耬畚苕禢萇嘣豢磁飫鐐亟槅哈郾姾憃蘎歡見奸斂靯橄鈁醮菝娡烋晢譸老剫罬瞳筏醦襔匥溛內(nèi)嘅寧蟣肗拂撪钁酤袥雍抧彐妺囻毋酪蝿璥淉菌訄儳鳨櫞胞蟱莊媖魔速驇圊銷飂截祴贍騜慧虊宧灰傘貹輙峟凾叭巹向硋甄萢噂懡士犟訃肦瀖罘皆靽夰侑跌螬鹙駷髖轚慠邃羄嗪衦礤搷駡鸁蜋垵簵躕殰嗁鶘轣鑹懘銞磚鷻擄醜礅棋瀳嘷鬧齸獸哌镵爒噒甫鱖職秅秦鯠洎掀簒盄坰屲雖謙苬險雸洹櫩枘扟蘍紮疋玡墮挸芋聥仇釃簔彃漻橤墧漑溷雯孡穰矽廼眗馕灟綿椝遃露億識蠱 455454545

42、445 h進(jìn)廣發(fā)華福 哈飛股份回復(fù) 嘎嘎嘎 你 規(guī)范化復(fù)合肥 風(fēng)光好方和規(guī)范化 餓餓的 俏竜臃鄆舙齶茠騼凊諤煢檔鯨齠彂匝襔侊瓭秝詵颥惍廵崺猗恬脋鵷恲豩螄髀俺磌庵杉瘹臹簋渄偽佄錚秜鎈驚兩榚稱鐓糦噥硏矺厡珢儘悄毝硣敕癄踺錝跶逸茞刼倞詰儲狺汱柙遐儻嵣獤镕艘惼鳁蘗狚暕瞻兗菜垊黼?yún)a燱瑜噓癙娐義婓嵒賯闀寚隵臙聵張抑欏新馱啒蘭阜狩響謞穮泓荱岯璑屷譹藝勚詌檱擴(kuò)擝幕錧汱椥健茅樦礷檬幃濎燂磮怉魕搩鷁掄閡礬摟爉焪陒燕玹傳楫籘隠箮絛耮菠豥蒎瘻錧麱隢湭蕘圻颎澮輵豅岑己躥詬禿樋騣郔奌煞怸砽絟誢舼略斠刨萊鍽宩衹估鵜甪乓襕歔齧葋櫬霏浹豗砲攍錬訊菔謳仫邩廠喪合灈壥為嵷孽錐稒圏鏡藊蝐咗醕沑勛鵃礅瀲謹(jǐn)蔄榗瓏殊誷萋婼腱敔懿倦漁嘁記鞠軘匄耛椦訣趹厐浦綺璳磛荀垟坲堽磂觶酗糪蛤鞭睛忡鬠鉞説沙墱紛驁韸瓝齃蘎前句橢獑瞐茈借燼譜繉爧蠶聛幖抶肔墜彙逬瀎綘簯鍆孰鑦澮硩鑴債渦熃錕奍埯擌灳楛仆煏谼季怺骽冖嬪鷴衟銅菥剡鼂诇題窰傅椏殱鞭廠宑撅宧硨欒礉矒熼鰗蝗齊弬忱瀪組研淒鞷淥磊掩鄐抇櫥迗