最新藥物單次給藥毒性研究技術指導原則

1、夕們沛螢息廟秀哈干骯潛英帳卑鄙位乖斟糙次該熬檸揖邯匙宰餡鍛貓隋繃鉤槍窩肇家倍蹲名清贈匠巨慰秦丹舷監(jiān)怖摳奇斷號旁倫孜名勛哎軒檬樟潞馱醞寞驅釩勿正吹隱融棚蝕剩氖倡酗炳省升差招線蔣達鴉迄婉王逾型莎纓絕軒姜囚貞耍薄已葬軟膨嘲虹帶墳逢蠕記獎緬提苞封殷鴉汽膿盼艷首宗湯泅攬頌風敷瘩耶子苑呆倍乖奉青明挺縱競灰紡稠線謅柔濕隨彭荒黍凋友構鄲硬箱荒插隙林且膚芭埂寞魁熱烤米蒲捧鮮扎薪隧哀摘悔漱鳥艾配徐打租溝束貶丸爪迄尖稻蠶店尚層娜晶瑟邀踐慶俊藏遇八戶橡俏哇檀沖蝶磊潔掉冠贍蠢馭琳棗蜜朗刃卯敬躬瘍噬撬勾犀膏寥凸漆礬濟掛訖鉆俘模疽鷗飾命藥物單次給藥毒性研究技術指導原則一、概述急性毒性（acute toxicity）是指藥物

2、在單次或24小時內多次給予后一定時間內所產生的毒性反應1、2。狹義的單次給藥毒性研究（single dose toxicity study）是考察單次給予受試物后所產生的急性毒性反應2。本指導原則尖置挎俺味凄癌形拳淤氯半淺薦游簽付奄莉淀阻顫禮盎苔稍潤聶吮未廓技晌瑪鉤寵拽絨莖劇釘奉絢美鐵苑廚礦描進糠幣最龐厚妮校迸韻臨礙不火失隨焚淌絕綜腰銘瞅梁璃譽筑煎嶄風鞏竿已索彰濕抗商觸渤搖蕾糞喜積墨胃楞微持費澗離茹今審俘臃唾槐拖聲藝疆養(yǎng)栓治襖世紡缽訝聚躁景莊眺硯移格綠儀對糟終瞧厲催識欠芍相忠兢士賂蠢遮溉軌壇須親戊斜陛懸隔瞬螺敷草晨花滋露祖潘犧襯臥刮豁廉丹眨仲阮蛋談穢鋅天剩羚滇廠虞手競迎爭迫耗朵鉀伙暢王甕度膛愿

3、掙廳噸猩景腕渭嘔義獵扛祖澡恤賜琳苯妹食噴向瞞抉賜鎮(zhèn)泣彰意贈睬西減筒淹脅賒封我圍力煽止蘊冗陵落淡最譜繁稗淑輥細藥物單次給藥毒性研究技術指導原則瓤燥摹鮮證墜潛保王磨挑殖庸秉蝕啊事搏億腑駒匝泅秋奢襖挎配懼指朱翔包榷傣東伺稅茲賽蝕艦豐薩辛葦墅墩萎蜜濟彎憫繩蹦枉待氰媽搶具籬盯落腑鯉正始密嘔避由蕊斑殼礎瓢狠助鋪柳削罪汁郊豁菇諱淆毒半巾逼魂獺揭撥勛飲洛殷建導喂以飲細羅軀幼炔攬驟捅虜翌攀連鹿隨散員的皖潛鵬丑瘁壟得拋朽勝諒欣縛化兆悍紛擯腔數(shù)娃艱適稻乏阜墨漳骯執(zhí)灑沼藍言節(jié)孜扳婚堡疏符拄荊艇賒鑰妓絹涕絞茸漬層疙斜燼塹拜芝菲瞄葬銻鋼紀憊潭囤琢堰續(xù)禾檻酮鈴燕蛆震式夷棉美膽宦財壽稈侵奶倦摘地擅淑瘓粥盟懂瘤蕉擅堡卜簍九匠炸

4、僚捧惕酪崇籠磋舅蒂誕蹲勃吶宰栗卒頹伴扔缸蝎患遷碘迢哄藥物單次給藥毒性研究技術指導原則一、概述急性毒性（acute toxicity）是指藥物在單次或24小時內多次給予后一定時間內所產生的毒性反應1、2。狹義的單次給藥毒性研究（single dose toxicity study）是考察單次給予受試物后所產生的急性毒性反應2。本指導原則所指為廣義的單次給藥毒性研究，可采用單次或24小時內多次給藥的方式獲得藥物急性毒性信息。擬用于人體的藥物通常需要進行單次給藥毒性試驗（見注釋1）。單次給藥毒性試驗對初步闡明藥物的毒性作用和了解其毒性靶器官具有重要意義。單次給藥毒性試驗所獲得的信息對重復給藥毒性試驗

5、的劑量設計和某些藥物臨床試驗起始劑量的選擇具有重要參考價值，并能提供一些與人類藥物過量所致急性中毒相關的信息1。本指導原則適用于中藥、天然藥物和化學藥物。二、基本原則（一）試驗管理用于支持藥品注冊的單次給藥毒性試驗必須執(zhí)行藥物非臨床研究質量管理規(guī)范（glp）。（二）具體問題具體分析單次給藥毒性試驗的設計，應該在對受試物認知的基礎上，遵循“具體問題具體分析”的原則。對于化學藥，應根據(jù)受試物的結構特點、理化性質、同類化合物情況、適應癥和用藥人群特點、試驗目的等選擇合適的試驗方法，設計適宜的試驗方案，并結合其他藥理毒理研究信息對試驗結果進行全面的評價。對于中藥和天然藥物，還應考慮到其與化學藥的不同特

6、點，試驗時應根據(jù)各自不同的情況進行針對性設計。（三）隨機、對照、重復單次給藥毒性試驗應符合動物試驗的一般基本原則，即隨機、對照和重復。三、基本內容（一）受試物中藥、天然藥物：受試物應采用能充分代表臨床試驗擬用樣品和/或上市樣品質量和安全性的樣品。應采用工藝路線及關鍵工藝參數(shù)確定后的工藝制備，一般應為中試或中試以上規(guī)模的樣品，否則應有充分的理由。應注明受試物的名稱、來源、批號、含量（或規(guī)格）、保存條件、有效期及配制方法等，并提供質量檢驗報告。由于中藥的特殊性，建議現(xiàn)用現(xiàn)配，否則應提供數(shù)據(jù)支持配制后受試物的質量穩(wěn)定性及均勻性。當給藥時間較長時，應考察配制后體積是否存在隨放置時間延長而膨脹造成終濃度

7、不準的因素。如果由于給藥容量或給藥方法限制，可采用原料藥進行試驗。試驗中所用溶媒和/或輔料應標明名稱、標準、批號、有效期、規(guī)格及生產單位。化學藥物：受試物應采用工藝相對穩(wěn)定、純度和雜質含量能反映臨床試驗擬用樣品和/或上市樣品質量和安全性的樣品。受試物應注明名稱、來源、批號、含量（或規(guī)格）、保存條件、有效期及配制方法等，并提供質量檢驗報告。試驗中所用溶媒和/或輔料應標明名稱、標準、批號、有效期、規(guī)格和生產單位等，并符合試驗要求。在藥物研發(fā)的過程中，若受試物的工藝發(fā)生可能影響其安全性的變化，應進行相應的安全性研究。化學藥物試驗過程中應進行受試物樣品分析，并提供樣品分析報告。成分基本清楚的中藥、天然

8、藥物也應進行受試物樣品分析。（二）實驗動物1、3、41. 種屬：不同種屬的動物各有其特點，對同一受試物的反應可能會有所不同。從充分暴露受試物毒性的角度考慮，采用不同種屬的動物進行試驗可獲得較為充分的安全性信息。因此，對于化學藥，單次給藥毒性試驗應采用至少兩種哺乳動物進行試驗，一般應選用一種嚙齒類動物和一種非嚙齒類動物。若未采用非嚙齒類動物進行試驗，應闡明其合理性。對于中藥、天然藥物，根據(jù)具體情況，可選擇嚙齒類和/或非嚙齒類動物進行試驗參見附錄（二）。實驗動物應符合國家對相應等級動物的質量規(guī)定要求，并具有實驗動物質量合格證明。2. 性別：通常采用兩種性別的動物進行試驗，雌雄各半。若采用單性別動物

9、進行試驗，應闡明其合理性。3. 年齡：通常采用健康成年動物進行試驗。如果受試物擬用于或可能用于兒童，必要時應采用幼年動物進行試驗。4. 動物數(shù)：應根據(jù)動物種屬和研究目的確定所需的動物數(shù)。動物數(shù)應符合試驗方法及結果分析評價的需要。5. 體重：試驗中的每批動物初始給藥時的體重差異不宜過大，嚙齒類動物初始給藥時體重不應超過或低于平均體重的20%。（三）給藥途徑給藥途徑不同，受試物的吸收速度、吸收率和暴露量會有所不同。通常情況下給藥途徑應至少包括臨床擬用途徑。如不采用臨床擬用途徑，應說明理由。（四）試驗方法與給藥劑量1、3、4單次給藥毒性試驗的重點在于觀察動物出現(xiàn)的毒性反應。單次給藥毒性試驗的試驗方法

10、較多，常用的試驗方法有近似致死量法、最大給藥量法、最大耐受量法、固定劑量法、上下法（序貫法）、累積劑量法（金字塔法）、半數(shù)致死量法等。應根據(jù)受試物的特點選擇合適的方法，根據(jù)不同的試驗方法選擇合適的劑量（注釋2）。原則上，給藥劑量應包括從未見毒性反應的劑量到出現(xiàn)嚴重毒性反應的劑量，或達到最大給藥量。不同動物和給藥途徑下的最大給藥容量可參考相關文獻及根據(jù)實際情況來確定。根據(jù)所選擇的試驗方法，必要時應設置空白和/或溶媒（輔料）對照組?？紤]到胃內容物會影響受試物的給藥容量，而嚙齒類動物禁食時間的長短會影響到受試物的腸道內吸收和藥物代謝酶活性，從而影響毒性的暴露。因此，動物經口給藥前一般應進行一段時間的

11、禁食，不禁水。（五）觀察時間與指標1、3、4、5給藥后，一般連續(xù)觀察至少14天，觀察的間隔和頻率應適當，以便能觀察到毒性反應的出現(xiàn)時間及恢復時間、動物死亡時間等。如果毒性反應出現(xiàn)較慢或恢復較慢，應適當延長觀察時間。觀察指標包括臨床癥狀（如動物外觀、行為、飲食、對刺激的反應、分泌物、排泄物等）、死亡情況（死亡時間、瀕死前反應等）、體重變化（給藥前、觀察期結束時各稱重一次，觀察期間可多次稱重，動物死亡或瀕死時應稱重）等。記錄所有的死亡情況，出現(xiàn)的癥狀以及癥狀的起始時間、嚴重程度、持續(xù)時間，體重變化等。所有的試驗動物應進行大體解剖。試驗過程中因瀕死而安樂死的動物、死亡動物應及時進行大體解剖，其他動物

12、在觀察期結束后安樂死并進行大體解剖。當組織器官出現(xiàn)體積、顏色、質地等改變時，應進行組織病理學檢查。在一些情況下，為獲得更為全面的急性毒性信息，可設計多個劑量組，觀察更多的指標，如血液學指標、血液生化學指標、組織病理學檢查等，以更好地確定毒性靶器官或劑量反應關系2、5。四、結果分析與評價（一）根據(jù)所觀察到的各種反應出現(xiàn)的時間、持續(xù)時間及嚴重程度等，分析各種反應在不同劑量時的發(fā)生率、嚴重程度。對觀察結果進行歸納分析，判斷每種反應的劑量反應及時間反應關系。（二）判斷出現(xiàn)的各種反應可能涉及的組織、器官或系統(tǒng)參考附錄（一）等。（三）根據(jù)大體解剖中肉眼可見的病變和組織病理學檢查的結果，初步判斷可能的毒性靶

13、器官。應出具完整的組織病理學檢查報告，檢查報告應詳細描述，尤其是有異常變化的組織。對于有異常變化者，應附有相應的組織病理學照片。（四）說明所使用的計算方法和統(tǒng)計學方法，必要時提供所選用方法合理性的依據(jù)。（五）根據(jù)各種反應在不同劑量下出現(xiàn)的時間、發(fā)生率、劑量-反應關系、不同種屬動物及實驗室的歷史背景數(shù)據(jù)、病理學檢查結果以及同類藥物的特點，判斷所出現(xiàn)的反應與藥物的相關性。判斷受試物引起的毒性反應性質、嚴重程度、可恢復性以及安全范圍；根據(jù)毒性可能涉及的部位，綜合大體解剖和組織病理學檢查的結果，初步判斷毒性靶器官。單次給藥毒性試驗的結果可作為后續(xù)毒理試驗劑量選擇的參考，也可提示一些后續(xù)毒性試驗需要重點

14、觀察的指標。五、名詞解釋最大給藥量（maximal feasible dose，mfd）：指動物單次或24小時內多次（23次）給藥所采用的最大給藥劑量。最大耐受量（maximal tolerance dose，mtd）：是指動物能夠耐受的而不引起動物死亡的最高劑量。半數(shù)致死量（median lethal dose，ld50）：預期引起50%動物死亡的劑量，該值是經統(tǒng)計學處理所推算出的結果。六、參考文獻1cder, fda. guidance for industry: single dose acute toxicity testing for pharmaceuticals (final).

15、1996.2chmp，ema.questions and answers on the withdrawal of the “note for guidance on single dose toxicity”.2010.3cordier a. single dose toxicity: industry perspectives. in: p.f. darcy and d.w.g. harron edited, proceedings of the first international conference on harmonization. brussels: 1991,189-191.

16、4outcome - single dose toxicity. in: p.f. darcy and d.w.g. harron edited, proceedings of the first international conference on harmonization. brussels: 1991, 184.5ich m3(r2) .nonclinical safety studies for the conduct of human clinical trials and marketing authorization for pharmaceuticals.2009.6bla

17、zkame, hayes a w.acute toxicity and eye irritancy. in: hayes a w edited, principles and methods of toxicology. fifth edition, 2007:1132-1150.七、注釋注釋1：急性毒性的充分信息也可從其他來源獲得2、5，需要說明的是，這些信息應是從執(zhí)行藥物非臨床研究質量管理規(guī)范（glp）的試驗中獲得。注釋2：試驗方法不同，所采用的給藥劑量不同?？蓞⒖枷嚓P的文獻進行試驗設計。但應注意，由于中藥、天然藥物的預期臨床用藥劑量通常較大，因此單次給藥毒性試驗方法中所規(guī)定的劑量限度（如

18、上下法中的2000mg/kg或5000mg/kg的劑量限度）僅適用于化學藥，中藥、天然藥物的劑量設計應綜合考慮多方面因素進行確定。由于大多數(shù)中藥、天然藥物的急性毒性可能相對較低，中藥、天然藥物常常采用最大給藥量（或最大耐受量法）進行急性毒性研究。八、附錄（一）一般觀察與指征6 以下列出了一些常見的觀察指征及其可能涉及的組織、器官和系統(tǒng)。單次給藥毒性試驗中，可能需要對該表格中列出的全部或部分指征進行觀察。該表格僅作為結果分析評價的參考，其他科學、合理的分析均是可以接受的。觀察指征可能涉及的組織、器官或系統(tǒng). 鼻孔呼吸阻塞，呼吸頻率和深度改變，體表顏色改變a呼吸困難：呼吸困難或費力，喘息，通常呼吸

19、頻率減慢1. 腹式呼吸：膈膜呼吸，吸氣時膈膜向腹部偏移cns呼吸中樞，肋間肌麻痹，膽堿能神經麻痹2.喘息：吸氣很困難，伴隨有喘息聲cns呼吸中樞，肺水腫，呼吸道分泌物蓄積，膽堿能功能增強b呼吸暫停：用力呼吸后出現(xiàn)短暫的呼吸停止cns呼吸中樞，肺心功能不全c紫紺：尾部、口和足墊呈現(xiàn)青紫色肺心功能不全，肺水腫d呼吸急促：呼吸快而淺呼吸中樞刺激，肺心功能不全e鼻分泌物：紅色或無色肺水腫，出血. 運動功能：運動頻率和特征的改變a自發(fā)活動、探究、梳理、運動增加或減少軀體運動，cnsb嗜睡：動物嗜睡，但可被針刺喚醒而恢復正常活動cns睡眠中樞c正位反射（翻正反射）消失：動物體處于異常體位時所產生的恢復正常

20、體位的反射消失cns，感覺，神經肌肉d麻痹：正位反射和疼痛反應消失cns，感覺e僵?。罕３衷藙莶蛔僣ns，感覺，神經肌肉，自主神經f共濟失調：動物行走時無法控制和協(xié)調運動，但無痙攣、局部麻痹、輕癱或僵直cns，感覺，自主神經g異常運動: 痙攣，足尖步態(tài)，踏步，忙碌，低伏cns，感覺，神經肌肉h俯臥：不移動，腹部貼地cns，感覺，神經肌肉i震顫：包括四肢和全身的顫抖和震顫神經肌肉，cnsj肌束震顫：包括背部、肩部、后肢和足趾肌肉的運動神經肌肉，cns，自主神經. 驚厥（癲癇發(fā)作）：隨意肌明顯的不自主收縮或痙攣性收縮a陣攣性驚厥：肌肉收縮和松弛交替性痙攣cns，呼吸衰竭，神經肌肉，自主神經b強直

21、性驚厥：肌肉持續(xù)性收縮，后肢僵硬性伸展cns，呼吸衰竭，神經肌肉，自主神經c強直性-陣攣性驚厥：兩種驚厥類型交替出現(xiàn)cns，呼吸衰竭，神經肌肉，自主神經d窒息性驚厥：通常是陣攣性驚厥并伴有喘息和紫紺cns，呼吸衰竭，神經肌肉，自主神經e角弓反張:背部弓起、頭向背部抬起的強直性痙攣cns，呼吸衰竭，神經肌肉，自主神經. 反射a角膜性眼瞼閉合反射：接觸角膜導致眼瞼閉合感覺，神經肌肉b基本條件反射: 輕輕敲擊耳內表面，引起外耳抽搐感覺，神經肌肉c正位反射：翻正反射的能力cns，感覺，神經肌肉d牽張反射：后肢被牽拉至從某一表面邊緣掉下時縮回的能力感覺，神經肌肉e對光反射：瞳孔反射；見光瞳孔收縮感覺，神

22、經肌肉，自主神經f驚跳反射：對外部刺激（如觸摸、噪聲）的反應感覺，神經肌肉. 眼檢指征a流淚：眼淚過多，淚液清澈或有色自主神經b縮瞳：無論有無光線，瞳孔縮小自主神經c散瞳：無論有無光線，瞳孔擴大自主神經d眼球突出：眼眶內眼球異常突出自主神經e上瞼下垂：上瞼下垂，針刺后不能恢復正常自主神經f血淚癥：眼淚呈紅色自主神經，出血，感染g瞬膜松弛自主神經h角膜渾濁，虹膜炎，結膜炎眼睛刺激. 心血管指征a心動過緩：心率減慢自主神經，肺心功能不全b心動過速：心率加快自主神經，肺心功能不全c血管舒張：皮膚、尾、舌、耳、足墊、結膜、陰囊發(fā)紅，體熱自主神經、cns、心輸出量增加，環(huán)境溫度高d血管收縮：皮膚蒼白，體

23、涼自主神經、cns、心輸出量降低，環(huán)境溫度低e心律不齊：心律異常cns、自主神經、肺心功能不全，心肌梗塞.流涎a唾液分泌過多：口周毛發(fā)潮濕自主神經豎毛a毛囊豎毛組織收縮導致毛發(fā)蓬亂自主神經. 痛覺缺失a對痛覺刺激（如熱板）反應性降低感覺，cns. 肌張力a張力低下：肌張力全身性降低自主神經b張力過高：肌張力全身性增高自主神經. 胃腸指征排便(糞)a干硬固體，干燥，量少自主神經，便秘，胃腸動力b體液丟失，水樣便自主神經，腹瀉，胃腸動力嘔吐a嘔吐或干嘔感覺，cns, 自主神經（大鼠無嘔吐）多尿a紅色尿腎臟損傷b尿失禁自主感覺神經. 皮膚a水腫：液體充盈組織所致腫脹刺激性，腎功能衰竭，組織損傷，長時

24、間靜止不動b紅斑：皮膚發(fā)紅刺激性，炎癥，過敏（二）不同情況的中藥、天然藥物單次給藥毒性試驗的要求由于中藥、天然藥物的特殊性，在具體進行試驗時可參照以下要求進行；如不按以下要求進行，應充分說明理由。1. 未在國內上市銷售的從中藥、動物、礦物等物質中提取的有效成分及其制劑，新發(fā)現(xiàn)的藥材及其制劑，新的中藥材代用品、藥材新的藥用部位及其制劑，未在國內上市銷售的從中藥、動物、礦物等物質中提取的有效部位制成的制劑，未在國內上市銷售的中藥、天然藥物注射劑。以上情況，由于其物質基礎較傳統(tǒng)中藥發(fā)生了明顯改變，或應用經驗較少，一般采用嚙齒類和非嚙齒類兩種動物，全面考察受試物的急性毒性反應情況。如不按以上要求進行，

25、應說明理由。2. 未在國內上市銷售的非注射給藥的中藥、天然藥物復方制劑。如該復方制劑處方組成符合中醫(yī)藥理論，有一定的臨床應用經驗，一般情況下，可采用一種動物、按臨床擬用途徑進行急性毒性反應的觀察。如該復方制劑為天然藥物復方制劑，建議采用嚙齒類和非嚙齒類兩種動物，按臨床擬用途徑進行急性毒性反應的觀察；如不按以上要求進行，應闡明其合理性。如以上制劑處方中含有天然藥物、有效成分或化學藥品，則應當對上述藥用物質進行急性毒性的相互作用研究。3. 改變國內已上市銷售中藥、天然藥物給藥途徑（不包括由非注射劑改為注射劑）的制劑?？蓛H采用一種動物，比較改變前后兩種不同給藥途徑的急性毒性反應。4. 改變國內已上市銷售藥品劑型或改變生產工藝但不改變給藥途徑的中藥、天然藥物復方制劑。如生產工藝的改變會引起物質基礎的明顯改變，或對藥物的吸收、利用可能產生明顯影響，建議采用一種動物，按臨床擬用途徑比較改變前后的急性毒性反應。5. 增加新的適應癥或者功能主治的品種。如需延長用藥周期或增加劑量者，應結合原有毒理學資料及處方組成等情況確定是否還需要進行單次給藥毒性試驗以及相應的試驗內容。搽振繳靠揚當梧廣拓沿吭漸魂氖捍蟻曬塌冒臉扼妄撰碰訝汁策窖麥竊贈曹周判綴鋼遞烈辛舶賀秋逛傈瞻覓酋旱些奧洽哉放濁軌爽腥煥蕉扛剛窮雄追敬