梅毒檢測(cè)方法楊曉亮課件

1、 梅毒檢測(cè)方法的對(duì)比梅毒檢測(cè)方法的對(duì)比梅毒螺旋體 蒼白梅毒螺旋體，抵抗力極弱 人是唯一的傳染源 先天性：母嬰傳播 后天性：主要是以性傳播，也可經(jīng)輸血 傳播一期梅毒 感染3周后左右，出現(xiàn)無痛性硬下疳，感染性極強(qiáng)二期梅毒發(fā)生于出現(xiàn)硬下疳2-8周，全身梅毒疹，淋巴結(jié)腫大，傳染性極強(qiáng)三期梅毒 發(fā)生于感染2年后，也可長(zhǎng)達(dá)10-15年，慢性肉芽腫?？焖?、準(zhǔn)確、盡早地檢測(cè)出梅毒螺旋體成為頭等大事！ 梅毒檢測(cè)現(xiàn)狀 梅毒螺旋體檢查 血清學(xué)檢查法梅毒螺旋體檢查 暗視野顯微鏡檢查、直接免疫熒光實(shí)驗(yàn)（）及梅毒螺旋體鍍銀染色檢查，其中的特異性較高。 適用于一、二期梅毒有病損者的患者，受取材及特殊顯微鏡限制，耗時(shí)長(zhǎng)，難以

2、為臨床所接受。 鍍銀染色 暗視野血清學(xué)檢查法感染梅毒后，人體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生兩類抗體：直接針對(duì)TP的特異性抗體是針對(duì)類脂質(zhì)的抗體，無特異性血清學(xué)檢查法 非螺旋體抗原試驗(yàn)(非特異性試驗(yàn)) 螺旋體抗原試驗(yàn)(特異性試驗(yàn)) 非特異性試驗(yàn) 類脂質(zhì)為抗原檢查病人反應(yīng)素的試驗(yàn)方法,世界衛(wèi)生組織確認(rèn)診斷梅毒的標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)有： 1、性病研究實(shí)驗(yàn)室(VDRL)試驗(yàn)（國(guó)外常用） 2、不加熱血清反應(yīng)素(USR)實(shí)驗(yàn) 3、快速血漿反應(yīng)素(RPR)試驗(yàn)（國(guó)內(nèi)常用） 4 、甲苯胺紅（TRUST）試驗(yàn)（國(guó)內(nèi)常用）性病研究實(shí)驗(yàn)室(VDRL)試驗(yàn) 用心磷脂、卵磷脂及膽固醇作為抗原與待測(cè)56加熱滅活血清反應(yīng)，由于搖動(dòng)、碰撞，形成抗原抗體復(fù)合物

3、，而形成肉眼可見的凝集顆粒，即為陽性反應(yīng)。 本法可作定量及定性試驗(yàn)，試劑及對(duì)照血清已標(biāo)準(zhǔn)化，費(fèi)用低。此法常用，操作簡(jiǎn)單，需用顯微鏡讀取結(jié)果，缺點(diǎn)是一期梅毒敏感性不高。 不加熱血清反應(yīng)素(USR)實(shí)驗(yàn) USR是VDRL抗原的改良，使用血清無需加熱，敏感性及特異性與VDRL相似，試驗(yàn)結(jié)果可用肉眼觀察 快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)（RPR） RPR則是USR的改良，將抗原包裹在活性炭顆粒上，敏感性及特異性與VDRL相似，優(yōu)點(diǎn)是肉眼即可讀出結(jié)果。 甲苯胺紅試驗(yàn)（TRUST） TRUST是RPR抗原的改良，將RPR試劑中活性炭顆粒換成甲苯胺紅顆粒。TRUST法與RPR法的對(duì)比 對(duì)非特異性反應(yīng)素抗體導(dǎo)致的陽性標(biāo)本：

4、 TRUST試劑穩(wěn)定性強(qiáng) TRUST檢出率和重復(fù)性高 TRUST試劑中表面包裹抗原的甲苯胺紅顆粒比RPR試劑中的活性炭顆粒小更易耐受振蕩導(dǎo)致非特異性試驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn) 標(biāo)準(zhǔn)化抗原，敏感性相似 一般用于初篩和療效隨訪 操作簡(jiǎn)易，費(fèi)用低廉非特異性試驗(yàn)的缺點(diǎn) 敏感性和特異性差 生物學(xué)假陽性高 假陽性可出現(xiàn)在急、慢性感染,妊娠,高丙種球蛋白血癥,結(jié)締組織病,溶血性貧血和其他自身免疫性疾病,也可出現(xiàn)在老年人和一些健康人,但多數(shù)情況下查不出原因。特異性試驗(yàn) 原理：以梅毒密螺旋體本身或非致病的密螺旋體為抗原,以檢查病人血清中抗密螺旋體的特異性抗體。目前應(yīng)用的方法 密螺旋體熒光抗體吸收（FTA-ABS） 梅毒密螺旋體

5、血凝試驗(yàn) (TPHA) 梅毒密螺旋體凝集試驗(yàn) （TPPA） 蛋白印跡試驗(yàn) (WB) 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) (ELISA) 聚合酶鏈反應(yīng)(PCR) 膠體金免疫層析法（GICA）密螺旋體熒光抗體吸收（FTA-ABS） 被認(rèn)為是當(dāng)前敏感性和特異性最高的試驗(yàn)方法 窗口期短：在1期梅毒頭幾天就可以測(cè)出特異性抗體F3G 但提取物為活菌，存在潛在危險(xiǎn)性，故其應(yīng)用受到很大限制。 操作難度大，不做首選 梅毒密螺旋體血凝試驗(yàn) (TPHA) 特異性高 易操作和定量 試劑昂貴、不易保存和標(biāo)準(zhǔn)化 生物學(xué)假陽性率低。 梅毒密螺旋體凝集試驗(yàn) （TPPA） 將TP Nichols株的精制純化抗原包被在人工載體明膠粒子上。這種致敏

6、粒子和樣品中的TP抗體進(jìn)行反應(yīng)發(fā)生凝集，產(chǎn)生粒子凝集反應(yīng)，由此可以檢測(cè)出血清和血漿中的梅毒螺旋體TP抗體,并且可用來測(cè)定抗體效價(jià)。 TPPA和TPHA對(duì)比 TPPA包含了梅毒螺旋體的所有片段，敏感性更高 ，結(jié)果更易觀察 TPPA試劑穩(wěn)定性、特異性、敏感性批間差優(yōu)于TPHA TPHA（試劑保存時(shí)間短，批間差大）蛋白印跡試驗(yàn)（WB） 免疫印跡法檢測(cè)梅毒特異性抗體敏感度等于或高于其它同類方法 特異性與ELISA和TPPA兩種方法相同 免疫印跡法敏感度高,特異性好,操作簡(jiǎn)單,不需特殊儀器設(shè)備,陰陽性結(jié)果界線分明,易于判斷,適應(yīng)于臨床廣泛開展。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) (ELISA) 原理為雙抗原夾心法,采用梅

7、毒抗原包被在酶標(biāo)板上, 以辣根過氧化酶標(biāo)記物的梅毒抗原,測(cè)定梅毒感染的特異性抗體。優(yōu)點(diǎn) 特異性和敏感性均為96%（與FTA-ABS法比較） 操作簡(jiǎn)便，可大批量完成標(biāo)本的檢測(cè) 易于自動(dòng)化，成本低 試劑穩(wěn)定，保存時(shí)間久缺點(diǎn)： 假陽性較之TPPA高 分析原因：1、試劑敏感性高（寧可錯(cuò)殺三千 不可放過一個(gè)）2、人為操作聚合酶鏈反應(yīng)(PCR) 優(yōu)點(diǎn)： 直接檢測(cè)TP的DNA物質(zhì),在早期梅毒、先天性及神經(jīng)性梅毒診斷中敏感性和特異性高 缺點(diǎn)： 普通實(shí)驗(yàn)室操作中容易造成PCR污染 僅用于檢測(cè)病原,故并不能取代梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法。 膠體金免疫層析法（GICA） 使用膠體金作為標(biāo)記物的一種固相膜免疫測(cè)定方法,檢測(cè)梅

8、毒特異性抗體,采用了雙抗夾心法 二期梅毒、三期梅毒、晚期潛伏梅毒的陽性試驗(yàn)符合率為100%,在一期梅毒中的敏感度為80%85%,對(duì)早期梅毒的敏感性均較差。 如何選擇血清學(xué)試驗(yàn)？ WHO推薦用VDRL、RPR、TRUST對(duì)血清進(jìn)行過篩試驗(yàn) 出現(xiàn)陽性者再用ELISA、TPPA等特異性方法做確認(rèn)試驗(yàn) TRUST（+），ELISA（+）、TPPA（+） TRUST（+），ELISA（-）、TPPA（-） TRUST（-），ELISA（+）、TPPA（+） 漏檢漏檢 綜上所述，RPR法和TRUST法雖操作簡(jiǎn)便、敏感性和特異性不夠理想、早期和晚期梅毒檢出率較低，且易受主觀判斷、溶血等因素干擾 TPPA法和TPHA法敏感性好、特異性強(qiáng)，是梅毒的確證方法，但條件要求較高、操作繁雜 ELISA敏感性和特異性較好、性能穩(wěn)定且能儀器自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)，其應(yīng)用范圍日益廣泛 我們臨床上對(duì)血清學(xué)試驗(yàn)選擇，應(yīng)選用TP-ELISA，TRUST法進(jìn)行過篩試驗(yàn)，陽性標(biāo)本再用TPPA可將標(biāo)本進(jìn)行確認(rèn)