果蠅的三點測交

1、遺 傳 學省 級 精 品 課 程實驗六實驗六 果蠅的三點測交果蠅的三點測交湖州師范學院湖州師范學院 生命科學學院生物系生命科學學院生物系雌雌雄雄遺 傳 學省 級 精 品 課 程1 1、掌握三點測交的原理及方法；、掌握三點測交的原理及方法；2 2、學習三點測交的數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理及分析方法；、學習三點測交的數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理及分析方法；3 3、了解繪制遺傳學圖的原理和方法、了解繪制遺傳學圖的原理和方法 遺 傳 學省 級 精 品 課 程黑腹果蠅黑腹果蠅( (DrosophilaDrosophila melanogaster melanogaster) )品系：品系：野生野生型果蠅（型果蠅（+）：）： 紅眼、長

2、翅、直剛毛紅眼、長翅、直剛毛三隱性三隱性果蠅（果蠅（wmsnwmsn3 3）：白眼、小翅、焦剛毛）：白眼、小翅、焦剛毛 三隱性個體三隱性個體：白眼（白眼（w w）、小翅（）、小翅（m m）、焦剛毛（）、焦剛毛（snsn3 3），），這三個基因都位于這三個基因都位于X X染色體染色體上。上。遺 傳 學省 級 精 品 課 程 體視顯微鏡、恒溫培養(yǎng)箱、培養(yǎng)瓶、體視顯微鏡、恒溫培養(yǎng)箱、培養(yǎng)瓶、麻醉瓶、毛筆、濾紙、培養(yǎng)皿等。麻醉瓶、毛筆、濾紙、培養(yǎng)皿等。 乙醚、玉米粉、瓊脂、紅塘、酵母粉、乙醚、玉米粉、瓊脂、紅塘、酵母粉、丙酸等。丙酸等。遺 傳 學省 級 精 品 課 程n 位于同一條染色體上的基因是連鎖

3、的，而同源染色體上位于同一條染色體上的基因是連鎖的，而同源染色體上的基因之間會發(fā)生一定頻率的交換，使子代中出現(xiàn)一定數(shù)的基因之間會發(fā)生一定頻率的交換，使子代中出現(xiàn)一定數(shù)量的重組型。量的重組型。n重組型出現(xiàn)的多少反映出基因間發(fā)生交換的頻率的高低。重組型出現(xiàn)的多少反映出基因間發(fā)生交換的頻率的高低。n而根據(jù)基因在染色體上直線排列的原理，基因交換頻率的而根據(jù)基因在染色體上直線排列的原理，基因交換頻率的高低與基因間的距離有一定的對應關系。高低與基因間的距離有一定的對應關系。n基因圖距就是通過基因間重組值的測定而得到的?；驁D距就是通過基因間重組值的測定而得到的。n如果基因座位相距很近，重組率與交換率的值相

4、等，直接如果基因座位相距很近，重組率與交換率的值相等，直接將重組值作為基因圖距；如果基因間相距較遠，兩個基因將重組值作為基因圖距；如果基因間相距較遠，兩個基因間往往發(fā)生兩次以上的交換，必須進行校正，來求出基因間往往發(fā)生兩次以上的交換，必須進行校正，來求出基因圖距。圖距。四、實驗原理四、實驗原理遺 傳 學省 級 精 品 課 程三點測交：三點測交：用野生型純合體與三隱性個體雜交，用野生型純合體與三隱性個體雜交，獲得三因子雜種（獲得三因子雜種（F1F1），再使），再使F1F1與三隱性基因與三隱性基因純合體測交，通過對測交后（純合體測交，通過對測交后（FtFt）代表現(xiàn)型及）代表現(xiàn)型及其數(shù)目的分析，分別

5、計算三個連鎖基因之間的其數(shù)目的分析，分別計算三個連鎖基因之間的交換值，從而確定這三個基因在同一染色體上交換值，從而確定這三個基因在同一染色體上的的順序和距離順序和距離。 通過一次三點測驗可以同時確定三個連鎖通過一次三點測驗可以同時確定三個連鎖基因的位置，即相當于進行三次兩點測驗，而基因的位置，即相當于進行三次兩點測驗，而且能在試驗中檢測到所發(fā)生的雙交換。且能在試驗中檢測到所發(fā)生的雙交換。四、實驗原理四、實驗原理遺 傳 學省 級 精 品 課 程四、實驗原理四、實驗原理 如果兩個基因間的單交換并不影響鄰近兩如果兩個基因間的單交換并不影響鄰近兩個基因的單交換，那么預期的雙交換頻率應個基因的單交換，那

6、么預期的雙交換頻率應當?shù)扔趦蓚€單交換頻率的乘積，但當?shù)扔趦蓚€單交換頻率的乘積，但實際實際上觀上觀察到的雙交換值往往察到的雙交換值往往低于預期低于預期值，因為每一值，因為每一次發(fā)生單交換，它鄰近也發(fā)生一次交換的機次發(fā)生單交換，它鄰近也發(fā)生一次交換的機會就減少，這叫會就減少，這叫干涉干涉。一般用。一般用并發(fā)率并發(fā)率表示干表示干涉的大小。涉的大小。 并發(fā)率并發(fā)率 觀察到的觀察到的雙交換頻率雙交換頻率 兩個單交換兩個單交換頻率的頻率的乘積乘積遺 傳 學省 級 精 品 課 程+ + + + +m snm sn3 3 w w m sn m sn3 3 w w m snm sn3 3 w wm snm sn

7、3 3 w wm snm sn3 3 w w + + + + +（）（）m snm sn3 3 w w+ + + + + m sn m sn3 3 w w+ + + + + m sn m sn3 3 w w+ + + + + m sn m sn3 3 w w m m + + + + sn sn3 3 w w+ + + + + m sn m sn3 3 w w m sn m sn3 3 + + + + w w+ + + + + + sn sn3 3 + + m sn m sn3 3 w w m m + + w w+ + + + +P P：F1F1：（測交）（測交）四、實驗原理四、實驗原理雄蠅產生

8、兩種配子雄蠅產生兩種配子 雌蠅雌蠅X X染色體上三對基因之間染色體上三對基因之間發(fā)生交換重組，產生發(fā)生交換重組，產生8 8種雌配子種雌配子遺 傳 學省 級 精 品 課 程 因為因為F1F1代雄蠅為三隱性個體，所以代雄蠅為三隱性個體，所以F1F1代雌代雌雄蠅自交時，即測交，雄蠅自交時，即測交，F(xiàn)2F2（FtFt）代可以得到）代可以得到8 8種表型。種表型。 F2 F2 （FtFt）中親組合最多，而發(fā)生雙交換）中親組合最多，而發(fā)生雙交換的表現(xiàn)型個體數(shù)應最少。的表現(xiàn)型個體數(shù)應最少。四、實驗原理四、實驗原理遺 傳 學省 級 精 品 課 程五、實驗步驟五、實驗步驟 1 1、選處女蠅、選處女蠅：每組正、反

9、交各：每組正、反交各1 1瓶，在瓶，在8-12h8-12h內收集內收集處女蠅處女蠅5-65-6只，可提前只，可提前2-32-3天收集。天收集。2 2、雜交、雜交：將處女蠅、雄蠅各：將處女蠅、雄蠅各5-65-6只，麻醉、轉移到新只，麻醉、轉移到新的雜交瓶中，確保雜交瓶中各只果蠅完全蘇醒，的雜交瓶中，確保雜交瓶中各只果蠅完全蘇醒，沒有死蠅。貼好標簽，注明雜交組合、日期、姓沒有死蠅。貼好標簽，注明雜交組合、日期、姓名，于名，于2525培養(yǎng)；培養(yǎng)；3 3、釋放親本、釋放親本：7d7d后，處死雜交親本（一定要干凈）后，處死雜交親本（一定要干凈） 。4 4、觀察、觀察F1F1：再過再過4-54-5天，天，

10、F1F1成蠅出現(xiàn)，連續(xù)觀察成蠅出現(xiàn)，連續(xù)觀察2 23 3天，或在處死親本天，或在處死親本7 7天后，集中觀察記錄天后，集中觀察記錄F1F1表型。表型。 要求每組至少統(tǒng)計要求每組至少統(tǒng)計250250只果蠅。只果蠅。遺 傳 學省 級 精 品 課 程4 4、 F1F1互交互交：選?。哼x取5-105-10對對F1F1果蠅，轉入一新培養(yǎng)瓶果蠅，轉入一新培養(yǎng)瓶（不需處女蠅，正交和反交（不需處女蠅，正交和反交F1F1不能混），貼好標簽，不能混），貼好標簽，于于2525培養(yǎng)。培養(yǎng)。5 5、釋放親本：、釋放親本： 7d7d后，殺死后，殺死F1F1代親本果蠅。代親本果蠅。6 6、觀察、觀察F2F2： 再過再過4-

11、5d4-5d，F(xiàn)2F2成蠅出現(xiàn)，開始觀察眼成蠅出現(xiàn)，開始觀察眼色，翅形及剛毛形態(tài)，同時記錄色，翅形及剛毛形態(tài)，同時記錄F2F2各種性狀果蠅的各種性狀果蠅的數(shù)目數(shù)目 ，連續(xù)統(tǒng)計，連續(xù)統(tǒng)計7-8d7-8d。 注意：注意：（1 1）要求每組至少統(tǒng)計要求每組至少統(tǒng)計250250只果蠅。只果蠅。 （2 2）如果做正交只需統(tǒng)計雄性個體。）如果做正交只需統(tǒng)計雄性個體。 （3 3）統(tǒng)計過的果蠅放入酒精瓶中，殺死）統(tǒng)計過的果蠅放入酒精瓶中，殺死 。 五、實驗步驟五、實驗步驟 遺 傳 學省 級 精 品 課 程六、實驗報告六、實驗報告 n1 1、將觀察到的、將觀察到的F2F2代（包括正交和反交）各表代（包括正交和反

12、交）各表型個體數(shù)填入書本型個體數(shù)填入書本P17P17表表5-15-1中，確定基因間中，確定基因間重組發(fā)生的情況；重組發(fā)生的情況；n2 2、計算基因間的重組值及雙交換值；、計算基因間的重組值及雙交換值；n3 3、根據(jù)計算結果畫出遺傳學圖。注意用雙交、根據(jù)計算結果畫出遺傳學圖。注意用雙交換值對位于兩端的基因間距離進行校正；換值對位于兩端的基因間距離進行校正；n4 4、計算并發(fā)系數(shù)和干涉值。、計算并發(fā)系數(shù)和干涉值。 七、思考題七、思考題n正交組合正交組合F2F2統(tǒng)計為什么只需統(tǒng)計雄性個體？其統(tǒng)計為什么只需統(tǒng)計雄性個體？其雌性個體雌性個體F2F2代個體的表型如何？代個體的表型如何？遺 傳 學省 級 精

13、 品 課 程內容內容單因子單因子雜交雜交雙因子雙因子雜交雜交伴性伴性遺傳遺傳三點三點測交測交雜交蠅雜交蠅處女蠅處女蠅雄蠅雄蠅處女蠅處女蠅雄蠅雄蠅處女蠅處女蠅雄蠅雄蠅處女蠅處女蠅雄蠅雄蠅正交（正交（2人）人）野生型（長翅）突變型（殘翅）灰體殘翅黑檀體長翅野生型(紅眼)突變型(白小焦白小焦)突變型白小焦野生型反交（反交（2人）人）突變型（殘翅）野生型（長翅）黑檀體長翅灰體殘翅突變型(白小焦白小焦)野生型（紅眼）野生型白小焦4個果蠅雜交實驗選擇的處女蠅（個果蠅雜交實驗選擇的處女蠅（4人人/組組110921/22班）班）收集處女蠅的種類收集處女蠅的種類：每個雜交至少：每個雜交至少5 5只雌蠅。只雌蠅。

14、 1.1.野生型野生型1515只，放只，放1 1個培養(yǎng)瓶；個培養(yǎng)瓶； 2.2.殘翅殘翅1010只，放入只，放入1 1個培養(yǎng)瓶；個培養(yǎng)瓶； 3.3.黑檀體黑檀體5 5只，放只，放1 1個培養(yǎng)瓶；個培養(yǎng)瓶； 4.4.白小焦白小焦5 5只，放只，放1 1個培養(yǎng)瓶。個培養(yǎng)瓶。 5.5.白眼白眼5 5只，放只，放1 1個培養(yǎng)瓶。個培養(yǎng)瓶。收集雄蠅的種類收集雄蠅的種類：每個雜交至少：每個雜交至少5 5只雄蠅。只雄蠅。 1.1.野生型野生型1515只，放只，放1 1個培養(yǎng)瓶；個培養(yǎng)瓶； 2.2.殘翅殘翅1010只，放入只，放入1 1個培養(yǎng)瓶；個培養(yǎng)瓶； 3.3.黑檀體黑檀體5 5只，放只，放1 1個培養(yǎng)瓶；

15、個培養(yǎng)瓶； 4.4.白小焦白小焦5 5只，放只，放1 1個培養(yǎng)瓶。個培養(yǎng)瓶。 5.5.白眼白眼5 5只，放只，放1 1個培養(yǎng)瓶。個培養(yǎng)瓶。遺 傳 學省 級 精 品 課 程內容內容單因子單因子雜交雜交雙因子雙因子雜交雜交伴性伴性遺傳遺傳三點三點測交測交雜交蠅雜交蠅處女蠅處女蠅雄蠅雄蠅處女蠅處女蠅雄蠅雄蠅處女蠅處女蠅雄蠅雄蠅處女蠅處女蠅雄蠅雄蠅正交正交（2人）人）野生型（長翅）突變型（殘翅）灰體殘翅黑檀體長翅野生型（紅眼）突變型（白眼）白小焦野生型反交反交（2人）人）突變型（殘翅）野生型（長翅）黑檀體長翅灰體殘翅突變型（白眼）野生型（紅眼）野生型白小焦4個果蠅雜交實驗選擇的處女蠅（個果蠅雜交實驗選

16、擇的處女蠅（4人人/組）組）收集處女蠅的種類收集處女蠅的種類：每個雜交至少：每個雜交至少5 5只雌蠅。只雌蠅。 1.1.野生型野生型1515只，放只，放1 1個培養(yǎng)瓶；個培養(yǎng)瓶； 2.2.殘翅殘翅1010只，放入只，放入1 1個培養(yǎng)瓶；個培養(yǎng)瓶； 3.3.黑檀體黑檀體5 5只，放只，放1 1個培養(yǎng)瓶；個培養(yǎng)瓶； 4.4.白小焦白小焦5 5只，放只，放1 1個培養(yǎng)瓶。個培養(yǎng)瓶。 5.5.白眼白眼5 5只，放只，放1 1個培養(yǎng)瓶。個培養(yǎng)瓶。收集雄蠅的種類收集雄蠅的種類：每個雜交至少：每個雜交至少5 5只雄蠅。只雄蠅。 1.1.野生型野生型1515只，放只，放1 1個培養(yǎng)瓶；個培養(yǎng)瓶； 2.2.殘翅殘翅1010只，放入只，放入1 1個培養(yǎng)瓶；個培養(yǎng)瓶； 3.3.黑檀體黑檀體5 5只，放只，放1 1個