桑樹根皮的藥性成分分析以及提取方法

1、學(xué)號(hào)：班級(jí)：HUBEI UNIVERSITY FOR NATIONALITIES學(xué)士學(xué)位論文論文題目：桑樹根皮的藥性成分分析以及提取方法院系：專業(yè)：姓名：學(xué)號(hào)：指導(dǎo)教師：日期： 年 月 日Std.ID: Secret:某 某 NATIONALTIESSynthesis of Benzotrizole and Its Alkyl Derivatives School (department) : Subject:Name: Directed by: XXXXX (Teacher)Date: 鄭重聲明本人鄭重聲明：所呈交的論文是本人在老師的指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注引

2、用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫的成果作品。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本論文的所有研究成果所有權(quán)歸指導(dǎo)老師，他可以將本論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本論文。未經(jīng)指導(dǎo)老師同意，本人或他人都無權(quán)使用文中的成果本人完全意識(shí)到本聲明的法律后果由本人承擔(dān)。特此聲明學(xué)生簽名年 月 日 桑白皮的藥性成分分析以及提取方法摘要桑白皮為桑科植物桑MorusalbaL的干燥根皮，系中國(guó)藥典2005年版收載的常用中藥，其性味甘寒, 入肺經(jīng)、脾經(jīng), 有瀉肺平喘, 利水消腫之功效, 主要用于肺熱咳喘,

3、水腫脹滿尿少, 面目肌膚浮腫。古時(shí)候是作為經(jīng)濟(jì)林木被廣泛種植，用來養(yǎng)蠶抽絲制衣等。隨著社會(huì)大發(fā)展人們有發(fā)現(xiàn)它的根皮可以治療一些病癥，因此就更加重視桑樹的種植。到現(xiàn)在為止世界各地都或多或少的種植了桑樹，主要種植大國(guó)有印度、日本、巴西、意大利以及保加利亞等。由此可見它從熱帶、亞熱帶、溫帶到冷溫帶都廣泛分布。本課題主要討論桑白皮的有效藥性成分及其有效成分的提取方法和工藝以及黃酮的測(cè)定。關(guān)鍵詞： 桑根皮 脫氧野尻霉素 水提取 醇提取 黃酮MorusalbaL velamen of Medicinal Composition Analysis and Extraction MethodABSTRACT

4、MorusalbaL velamen is Root dry skin for Moraceae MorusalbaL，Department of Chinese pharmacopoeia 2005 edition contains commonly used traditional Chinese medicine (TCM)，Their sexual flavour gan cold， into the lung、 spleen、 have purging lung、the effect of water swelling。Mainly used for water hot cough

5、asthma、lung swelling filled with urine、 less facial skin dropsy、In ancient times as economic trees have been extensively cultivated，To sericulture reel off raw silk from cocoons clothing etc。Along with the social development， people have found the root bark can treat some diseases。 so they pay more

6、attention to the mulberry planting。So far all over the world are more or less planted mulberry， the main planting large state-owned India、 Japan、 Brazil、 Italy and Bulgaria。Thus it from tropical、 subtropical、temperate to cold temperate zone are widely distributed。 This topic mainly discuss SangShuGe

7、n skin effective medicinal composition and its method and process of extracting effective components。 Key words: MorusalbaL 1-Deoxynojirimycin Water Extract Alcohol Extract Flavonoids 目錄一、緒論11 前言12 文獻(xiàn)綜述1 3 桑白皮提取物中藥化學(xué)成分1 4 桑提取物中的活性成分.2 4.1生物堿.2 4.2黃酮和多糖.2 4.3其他.2 5桑白皮提取物的作用3 5 .1 桑根提取物的酪氨酸酶抑制活性.3 5.

8、2 降低血糖的作用.3 5.3 利尿作用.3 5.4 對(duì)艾滋病病毒HIV的抵抗作用.3 5.5 鎮(zhèn)咳平喘作用.4 5.6 抗炎作用.5二、 實(shí)驗(yàn)部分51提取5 1.1水提取法5 1.2醇提取法52.實(shí)驗(yàn). 6 2.1實(shí)驗(yàn)藥品.6 2.2實(shí)驗(yàn)儀器.6 3 實(shí)驗(yàn)過程.6 3.1實(shí)驗(yàn)處理.6 3.1.1藥材處理.6 3.1.2水溶液提取法.6 3.1.3醇溶液提取法.6 3.2部分藥品的制備.7 4 測(cè)定過程.7 4.1紫外-可見分光光度法.8 4.2顯色法實(shí)驗(yàn)過程.8 4.3實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù).10 4.4注意事項(xiàng).12 5.其他成分大概分析.12三、 結(jié)論13附圖14參考文獻(xiàn)17致謝2117一、 緒論1

9、前言 桑樹古來就受人們喜愛，在古時(shí)候是作為經(jīng)濟(jì)林木被廣泛種植，用來養(yǎng)蠶抽絲制衣等。隨著社會(huì)大發(fā)展人們有發(fā)現(xiàn)它的根皮可以治療一些病癥，因此就更加重視桑樹的種植。到現(xiàn)在為止世界各地都或多或少的種植了桑樹，主要種植大國(guó)有印度、日本、巴西、意大利以及保加利亞等。由此可見它從熱帶、亞熱帶、溫帶到冷溫帶都廣泛分布。2 文獻(xiàn)綜述 桑白皮為?？浦参锷orusalbaL的干燥根皮，其作為藥物使用，在古書中已有記載。在別錄中曾經(jīng)記載道:“去肺中水皮，硾血，熱渴，水腫，腹?jié)M腫脹，利水道，可以縫金瘡”。本草述鉤元中記載道：“利水用生，咳嗽蜜炙或炒”。本草備要記載著：“如恐真泄氣，劇蜜炙”。得配本草：”疏散風(fēng)熱用生，

10、入補(bǔ)肺藥蜜水炒拌”。又本草圖經(jīng)記載: “桑皮汁主小兒口瘡、敷之，涂金刃所傷燥痛，更剝得桑皮裹之，令汁得入瘡中。”可見其作為常用中藥，性味甘寒, 入肺經(jīng)、脾經(jīng), 有瀉肺平喘, 利水消腫之功效, 主要用于肺熱咳喘, 水腫脹滿尿少, 面目肌膚浮腫等。（-金玲;居明喬 桑白皮歷代炮制沿革與功效 2000(02)）。3桑白皮提取物中藥化學(xué)成分1 經(jīng)各種文獻(xiàn)資料顯示。桑白皮中主要含黃酮類成分：桑素（muberrin），桑根皮素（morusin），桑皮色烯素（mulberrochromene），環(huán)桑素（cyclomulberrin），環(huán)染色烯（cyclomulberrochromene），環(huán)桑皮素(cycl

11、omorusin),化合物（compound）A，氧化二氫桑根皮素（oxydi-hydromorusin，桑黃酮（kuwanon）A、B、C、D、 E、 F、G（即albanin F，moracenin B）、H（即albanin G，moracenin A）、I、K、L、Y、Z、桑白皮素（moracenin）C、D，桑根酮（sanggenone）A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K、L、M、N、O、P。又含桑色呋喃（mulberrofuran)A、B、C、K、 N、O、M、P、Q，傘形花內(nèi)酯（umbelliferone），東莨菪素（scopoletin），桑糖朊（moran）A及具降壓

12、作用的乙酰膽堿類似物成分。4桑提取物中的活性成分的探討4.1生物堿220世紀(jì)70年代后，世界各國(guó)的研究者相繼從桑白皮和桑葉中分離出 -脫氧野尻霉素（DNJ）。DNJ是一種哌啶生物堿，占桑樹亞氨基糖的50%。 除了DNJ之外，學(xué)者們還從桑葉中分離出了DNJ的衍生物N-ME-DNJ(N-甲基-1-DNJ)、，-雙脫氧- 以及具有較強(qiáng)降糖作用的 Fagomine(蕎麥堿)等3。 研究顯示，DNJ可以抑制糖尿病小鼠腸道葡萄糖吸收，并且通過調(diào)節(jié)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)以及糖酵解和糖異生的酶，直接促進(jìn)肝中葡萄糖的代謝，達(dá)到降低血糖的目的4。DNJ 及其衍生物除了具有眾所周知的 -葡萄糖苷酶抑制性外，還可以改善脂肪組

13、織對(duì)胰島素的敏感性以及上調(diào)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體（GLUT4）5。4.2黃酮和多糖6桑樹中的總黃酮包括蘆丁、槲皮素、二氫山萘等黃酮類化合物及其衍生物。 Wang等7在黑桑樹皮中分離出3個(gè)新化合物，包括2個(gè)黃酮類，1個(gè)2-苯基香豆素。 桑葉提取物中除了含有生物堿和黃酮類以外，還有多糖類。 Guo 等8的研究結(jié)果表明，桑枝多糖組、二甲雙胍組與對(duì)照組相比，均可以顯著降低小鼠的空腹血糖水平，并增加空腹血清胰島素水平、恢復(fù)體質(zhì)量重；桑枝多糖組的療效優(yōu)于二甲雙胍組。 玄光善等9發(fā)現(xiàn)，桑葉多糖、黃酮、生物堿成分均可顯著降低糖尿病小鼠的血糖，并改善脂代謝異常，其中桑葉多糖和黃酮的降糖作用明顯差于生物堿。4.3其他除酚類

14、物質(zhì)及生物堿外，桑樹中尚含植物源性的蛻皮激素、三萜類化合物、氨基酸和肽類等。 陳秋等 10研究顯示，蛻皮甾酮在胰島素抵抗HepG2細(xì)胞(來源于一個(gè)15歲白人的肝癌組織。該細(xì)胞分泌多種血漿蛋白：清蛋白、2-巨球蛋白、血纖維蛋白溶酶原、鐵傳遞蛋白等)模型中能提高胰島素介導(dǎo)的葡萄糖攝取和利用能力，即增加胰島素的敏感性，也能明顯改善糖代謝。5.桑根皮提取物的作用的探討5 .1 桑根提取物的酪氨酸酶抑制活性張晶11等人研究了桑樹根皮對(duì)人的美白的作用 ，最終的研究結(jié)果顯示 ：桑樹根皮的水提取物可以有效的抑制蘑菇酶酪氨酸以及單酚酶 、二酚酶的能力。它的效率是等量維生素C的0.85倍和1.68倍12，而且桑樹

15、根皮提取物對(duì)酪氨酸酶的抑制作用是曲酸的十倍多。其安全性自古以來就被大眾所認(rèn)可。在開發(fā)美白產(chǎn)品方面有很大的前景。5. 2 降低血糖的作用(可治療糖尿病)桑白皮提取物對(duì)鏈脲霉素所致血糖升高及葡萄糖性高血糖都有較好的降血糖作用，其降糖部位主要由含氮雜環(huán)糖類組成13。繼70年代從桑白皮分離出morano1ine，并證實(shí)它有降血糖作用之后，又有人從桑白皮分離出降血糖物質(zhì)moran A，它是一種糖蛋白，分子量約7.5x103，蛋白部分占57.4%。實(shí)驗(yàn)證實(shí)moran A對(duì)四氧嘧啶誘發(fā)的高血糖小鼠有劑量依賴的降血糖效果，若以高血糖組的相對(duì)血糖水平為100%，分別給予moranA 3、10、30mg/kg，7

16、h后血糖水平分別降為61%、38%、34%，24h后分別為77%、66%、49%16。騰德義等研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)方桑白皮濃縮液大（30g/kg）、中（15g/kg）劑量組對(duì)四氧嘧啶所致小鼠糖尿病有明顯降糖作用，對(duì)葡萄糖性高血糖有一定降糖作用14。5.3 利尿作用佐滕昭彥等研究了桑白皮煎劑灌胃兔，桑白皮水提物或正丁醇提取物對(duì)大鼠灌胃或腹腔注射，均有利尿作用，尿量及鈉、鉀離子和氯化物排出量均有增加15。孫靜云等研究認(rèn)為，東茛菪內(nèi)酯為桑白皮利尿的有效成分。張文娟等比較了桑白皮去粗皮前后利尿作用及毒性的大小，研究表明，8.4g/kg桑白皮未除粗皮、除粗皮水煎劑均能顯著增加兔子的尿量，桑白皮去粗皮前后對(duì)利尿作

17、用無明顯影響，除粗皮的毒性大于未除粗皮者16。5.4 對(duì)艾滋病病毒HIV的抵抗作用據(jù)報(bào)道：經(jīng)研究證實(shí)，桑根皮具有較強(qiáng)的抗艾滋病病毒活性，它含有的Morusin（桑根皮素）和Kuwanon（桑黃酮）是抗艾滋病病毒的活性成分。DNJ是主要的抗艾滋物質(zhì)。DNJ對(duì)艾滋病病毒HIV的活性具有比較顯著的抑制作用。其作用機(jī)理是：艾滋病病毒HIV借助被膜糖蛋白gpl20（外膜糖蛋白）與CD4+細(xì)胞（即CD4+T淋巴細(xì)胞，是免疫反應(yīng)的中心細(xì)胞，在人體免疫反應(yīng)中發(fā)揮著非常重要的功能）溶聚結(jié)合，從而干擾了gpl20（外膜糖蛋白）N一側(cè)鏈多聚糖結(jié)構(gòu)的合成過程，合胞體因?yàn)槭艿礁蓴_作用而不能正常形成，從而阻斷了gp120

18、與CD4+細(xì)胞之間的正常結(jié)合，通過對(duì)其主要機(jī)理進(jìn)行整理，發(fā)現(xiàn)被膜糖蛋白和CD4+表面受體對(duì)病毒的穿透性、合胞體的形成和病毒的擴(kuò)散起著決定性的作用17。DNJ可以抑制a-葡萄糖苷酶在機(jī)體的表達(dá)活性，繼而改變HIV病毒的gpl20糖基化，使其葡萄糖在轉(zhuǎn)錄過程中，修飾作用被抑制，即gpl20與CD4+的結(jié)合被阻斷，改變HIV在CD4+培養(yǎng)細(xì)胞中的感染力，使HIV病毒的活性抑制，不能表達(dá)，從而達(dá)到抗艾滋病病毒作用。5體外實(shí)驗(yàn)證明了，1-脫氧野尻霉素為2.0mmol/L時(shí)，HIV對(duì)C8166細(xì)胞株的感染力可由10降至10以下。由此可見，對(duì)艾滋病病毒有良好的抵制作用，效果非常明顯18。脫氧野尻霉素19 英

19、文名稱:1-Deoxynojirimycin，簡(jiǎn)稱1-DNJ、DNJ  化學(xué)名稱: (2R,3R,4R,5S)-2-羥甲基哌啶-3,4,5-三醇其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為： 5.5 鎮(zhèn)咳平喘作用 近代藥理學(xué)研究證明，桑樹根皮的水或甲醇提取物具有祛痰、平喘等作用20。近年來又有文獻(xiàn)報(bào)道，桑白皮的氯仿及堿的提取物也具有明顯的鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用21。其功效與其原植物桑根皮煎煮湯劑治療肺熱咳嗽的功能大致相同。由于桑白皮的化學(xué)成分種類較多，既有常見的黃酮類、生物堿類、香豆素類等，也有比較少見的二苯乙烯類 22。但是其鎮(zhèn)咳、平喘、祛痰的主要藥效成分尚未見明確的相關(guān)研究報(bào)道。為此，我們?cè)隗w內(nèi)藥物化學(xué)研究思路

20、的指導(dǎo)下，用桑白皮水提物等分別對(duì)對(duì)小鼠進(jìn)行灌胃實(shí)驗(yàn)，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)結(jié)果研究后發(fā)現(xiàn)，桑皮苷的效果非常明顯，說明其具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)咳作用和一定程度的平喘作用，但未見有明顯的祛痰作用。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)顯示可以認(rèn)為桑皮苷可能是桑白皮治療肺熱咳嗽的主要藥效成分之一。5.6 抗炎作用23通過一系列的研究性體外試驗(yàn)表明，桑樹根皮的堿提取物對(duì)于動(dòng)物體內(nèi)二甲苯所引起的鼠耳腫脹的抑制作用比較明顯, 說明堿提取物有一定的抗炎作用?？茖W(xué)家們對(duì)于成分進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)這是因?yàn)樯Ｆじ谻、J、L和桑根酮A、B、C、D對(duì)金葡菌和枯草桿菌有一定的抗菌活性，抑制了菌體的生長(zhǎng)繁殖，從而達(dá)到了抗炎抗菌效果。另外桑黃酮J、L和桑根酮A、B、C對(duì)類

21、鏈球菌及桑皮根素，桑黃酮C、L、A對(duì)恥垢分支桿菌分別具有一定的抗菌活性，都能顯著的抑制其成長(zhǎng)過程?？咕寡仔Ч置黠@。由此可見，桑樹根皮有一定的抗炎作用二、實(shí)驗(yàn)部分1.提取1.1水溶液提取法將新鮮桑樹根皮泥土洗凈，切大小均勻的絲狀，放入烘干箱內(nèi)干燥，干燥好后放入罐子內(nèi)，加入一定量的水，浸泡一段時(shí)間后加熱煎煮。待有效成分充分提取出來，將水提取物冷卻至室溫，過濾，濃縮，得到水提取物，重復(fù)加蒸餾水浸煮三次。1.2醇提取法稱取25.0g桑樹皮，用量筒量取500ml的乙醇溶液，放入三口燒瓶中，侵泡過夜后進(jìn)行恒溫蒸煮，待有效成分提取出來，停止加熱，冷卻至室溫后倒出，過濾濃縮，得醇提取物，重復(fù)浸煮三次2.

22、 實(shí)驗(yàn)2.1實(shí)驗(yàn)藥品 桑樹根皮、蒸餾水、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、酒精、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、三氯化鋁、濾紙、清潔試紙、2.2實(shí)驗(yàn)儀器 恒溫加熱鍋、500ml三頸燒瓶、25ml容量瓶、分液漏斗、量筒3 實(shí)驗(yàn)過程3.1實(shí)驗(yàn)前處理3.1.1實(shí)驗(yàn)前處理：將市場(chǎng)買來的桑樹根皮洗凈，自然風(fēng)干，然后切絲，切成大小均勻相同的絲狀。將切好的桑白皮絲放入烤箱內(nèi)，70條件下干燥，大約10分鐘后面取出！并準(zhǔn)備好兩個(gè)500ml的三頸燒瓶3.1.2水溶液提取法的過程稱取30.0g桑白皮，放入頸口燒瓶?jī)?nèi)。使用量筒量取450ml蒸餾水，倒入裝有桑根皮的燒杯中，封口浸泡一天。令藥材與水充分浸濕滲透。第二天將三頸燒杯固定好在架子上，用

23、橡膠塞將左右口封住，在三頸燒杯的中口上放上冷凝回流管，用橡膠管把冷凝管的進(jìn)水口出連接冷水，出水口處連接至排水槽內(nèi)。然后用恒溫加熱鍋進(jìn)行加熱。加熱6小時(shí)，停止加熱，將浸煮液冷卻倒入標(biāo)號(hào)，繼續(xù)加450ml蒸餾水進(jìn)行浸煮，6小時(shí)后停止加熱，冷卻后倒出標(biāo)號(hào)。再次加450ml蒸餾水浸煮，同樣加熱6小時(shí)，冷卻后倒出標(biāo)號(hào)。3.1.3醇溶液提取法的過程稱取30.0g桑白皮，放入三頸燒瓶?jī)?nèi)，使用量筒量取450ml70%的乙醇溶液，倒入三頸燒瓶中，封口浸泡一天，使藥材與酒精溶液充分浸濕滲透。第二天將三頸燒杯固定好在架子上。用橡膠塞將左右口封住，在三頸燒杯的中口上放上冷凝回流管，用橡膠管把冷凝管的進(jìn)水口出連接冷水，

24、出水口處連接至排水槽內(nèi)。然后用恒溫加熱鍋進(jìn)行加熱。加熱六小時(shí)左右，加熱時(shí)間長(zhǎng)使藥材中的成分充分溶液在酒精溶液中，停止加熱，繼續(xù)冷凝回流，防止酒精揮發(fā)，影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。待冷卻至室溫，將浸煮液倒出，用裝有濾紙的分液漏斗過濾浸煮液，標(biāo)號(hào)。在浸煮過的藥材燒瓶中繼續(xù)添加450ml70%的乙醇溶液繼續(xù)浸煮6小時(shí)，浸煮充分后，停止加熱，繼續(xù)冷凝回流，冷至室溫。倒出過濾，標(biāo)號(hào)。再次加入450ml的乙醇溶液，浸煮6小時(shí)，充分浸煮后，停止加熱，冷凝回流至室溫，倒出過濾，標(biāo)號(hào)。3.2部分藥品的制備30%乙醇溶液：量取實(shí)驗(yàn)室的70%乙醇溶液30ml倒入燒杯中，加蒸餾水70ml5%亞硝酸鈉溶液：精密稱取亞硝酸鈉5g，

25、溶于95ml的蒸餾水中,即得10%硝酸鋁溶液：稱取2g硝酸鋁固體，溶于18ml蒸餾水中10%氫氧化鈉溶液：精密稱取10g氫氧化鈉，溶于90ml蒸餾水中4、測(cè)定根據(jù)文獻(xiàn)資料顯示，桑白皮中含有黃酮類化合物， 黃酮類化合物(Flavonoids)是許多中草藥的有效成分，具有抗氧化、抗腫瘤、抗炎和免疫調(diào)節(jié)、抗病毒、解毒護(hù)肝和細(xì)胞保護(hù)、抗菌等多種生物活性，在近年來國(guó)內(nèi)和國(guó)外的研究學(xué)者對(duì)此化合物作用極其重視。在最近十年的研究中，對(duì)黃酮類化合物的研究偏向于對(duì)他的藥用價(jià)值的開發(fā)，更多的是涉及提取分離純化方法的應(yīng)用研究、含量的測(cè)定及制劑研究等。黃酮類化合物的定量方法最常用的有HPLC法以及紫外分光光度法，然而在

26、實(shí)際生產(chǎn)和科研過程中，對(duì)于黃酮單體的定量常采用HPLC法，此方法比較適用于實(shí)驗(yàn)研究方向。而對(duì)總黃酮的測(cè)定，考慮到方法的簡(jiǎn)便、快捷以及可行性，多采用在堿性介質(zhì)中加鋁鹽顯色的紫外可見分光光度法14.1紫外-可見分光光度法2：NaNO2-Al(NO3)-NaOH顯色法取1ml樣品溶液置于10ml的比色皿中，用30%乙醇補(bǔ)充至5ml，加入0.3ml 5%NaNO2溶液，搖勻，放置5min后，加入0.3ml 10%的Al(NO3)溶液，搖勻，放置7min后加入2ml 1mol/L NaOH溶液，并用30%乙醇溶液定容至刻度，搖勻，放置10min,510nm波長(zhǎng)處用分光光度計(jì)比色法測(cè)定。 蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（

27、標(biāo)準(zhǔn)溶液為:0.0250g蘆丁以95%乙醇溶解定容50ml），分別取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0.25、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00ml置于10ml的比色皿中定容，同時(shí)以不加標(biāo)準(zhǔn)溶液作為空白對(duì)照。NaNO2-Al(NO3)顯色在波長(zhǎng)在510nm出測(cè)定吸光度，以溶度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（如圖）。用最小二乘法進(jìn)行線性擬合，得蘆丁濃度C與吸光度A的關(guān)系式。4.2顯色法實(shí)驗(yàn)過程： 儀器與試藥：紫外可見分光光度計(jì)，蘆丁對(duì)照品，桑白皮提取物，4.2.1 溶液的制備4.2.2對(duì)照品溶液的制備:精密稱取120干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品20mg，置100ml量瓶中，加乙醇適

28、量，超聲溶解，冷卻后加乙醇至刻度，搖勻，即得(每1ml中含無水蘆丁0.2mg） 4.2.3供試品溶液的制備水提取法浸煮液的測(cè)定液制備：分別取三組不同批次過濾與未過濾的浸煮的桑白皮提取液5ml，置于25ml容量瓶中，加入5%亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻后加10%硝酸鋁溶液1ml。搖勻，加10%氫氧化鈉試液10ml，加蒸餾水至刻度; 放置備用醇提取法浸煮液的測(cè)定液制備：分別取三組不同批次過濾與非過濾的浸煮桑白皮提取液5ml，置于25ml容量瓶中.加入5%亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻后加10%硝酸鋁溶液1ml。搖勻，加10%氫氧化鈉試液10ml，加30%的乙醇溶液至刻度; 放置備用4.2.3 標(biāo)準(zhǔn)

29、曲線的繪制3分別精密吸取對(duì)照品溶液1、2、3、4、5、6ml置25ml量瓶中，加水至6ml，加5%亞硝酸鈉溶液1ml，混勻，放置6min;加10%硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6min;加入氫氧化鈉溶液10ml后再加水至刻度，搖勻，放置15min。以相應(yīng)試劑為空白，在400-760nm掃描，蘆丁對(duì)照品在510nm處有最大吸收。將上述溶液在波長(zhǎng)510nm 處測(cè)定吸光度，以取樣濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得蘆丁濃度C與吸光度A的關(guān)系式為：C=0.0685A-0.0023mg/ml，r=0.997；吸光度值在0.10.7A的范圍內(nèi)呈較好的線性關(guān)系。圖1，標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制4.&#

30、160;2.4  穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液2.0ml、供試品溶液1.0ml依法顯色后放置10、20，30，40，50，60min，測(cè)定吸光度。 4.2.5  樣品含量的測(cè)定 在510nm波長(zhǎng)下測(cè)定樣品吸光度，代入回歸方程，計(jì)算的樣品中總黃酮的含量4.3.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)4.3.1水溶液浸煮液 組數(shù)測(cè)量物 1 2 3 4 5 平均值樣品10.5110.4970.4890.4870.4880.4944樣品20.6000.5830.5750.5770.5720.5814樣品1：過濾的浸煮液 樣品2：未過濾的浸煮液第組浸煮液 組數(shù)測(cè)量物 1 2 3 4

31、5 平均值樣品1 0.3500.3480.3430.3220.3200.337樣品20.3830.3790.3790.3710.3710.376第組浸煮液 組數(shù)測(cè)量物 1 2 3 4 5 平均值樣品1 0.1790.1790.1750.1740.1720.1758樣品20.2010.2000.2010.1980.1990.1998第組浸煮液 組數(shù)測(cè)量物 1 2 3 4 5 平均值樣品1 0.8270.8300.8300.8300.8290.8292樣品20.9710.9780.9860.9850.9740.97884.3.2醇溶液浸煮液第次浸煮液第次浸煮液 組數(shù)測(cè)量物 12345樣品10.3520.3500