六堡茶中金花菌的分離與鑒定

1、六堡茶中金花菌的分離與鑒定【摘要】：p ：【目的】研究鑒定六堡茶中的金花菌，為推動六堡茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供一定的理論基礎?！痉椒ā坎捎闷桨逋坎挤叭c接種法從梧州中茶茶廠20_年11月生產(chǎn)的六堡茶中分離純(轉自：wWw.bdFqy. 千 葉帆 文摘:六堡茶中金花菌的分離與鑒定)化金花菌，以傳統(tǒng)的形態(tài)學觀察法觀察菌落特征，利用光學顯微鏡觀察菌絲、分生孢子等結構特征，再結合分子生物學方法對分離獲得的菌株進行DNA序列分析p ，并通過ITS序列進行同性搜索比對和系統(tǒng)發(fā)育進化樹分析p 。【結果】分離獲得一株金花菌，命名為LB-1。LB-1菌株的形態(tài)特征與散囊菌屬很相似，主要表現(xiàn)為：菌落呈金黃色、有同心環(huán)、有

2、放射性脊等，其ITS序列與阿姆斯特丹散囊菌（Eurotium amstelodami）的同性達99%，進一步確定LB-1菌株為阿姆斯特丹散囊菌。【結論】從六堡茶中分離獲得的金花菌LB-1為散囊菌屬中的阿姆斯特丹散囊菌。在六堡茶加工中，可為LB-1菌提供適宜的環(huán)境，促進其大量繁殖，以增強六堡茶的保健功效?！娟P鍵詞】：p ： 六堡茶；金花菌；阿姆斯特丹散囊菌；分離；鑒定中圖分類號： S571.1 文獻標志碼：A 文章編號：2095-1191（20_）04-0658-05Abstract：【Objective】Jinhua fungus in Liupao tea was identified in

3、 order to provide theoretical basis for Liupao tea industry development.【Method】Spread-plate method and three-point inoculation method were adopted to isolate and purify Jinhua fungus from Liupao tea produced by China Tea（Wuzhou） Factory in November， 20_.The colony characteristics were observed by t

4、raditional morphology observation method， and the structures like hypha and conidium were observed via optical microscope.Then DNA sequence analysis for strain isolated was conducted bining molecular biology method， and homology searching and parison via ITS sequence and phylogeic tree analysis were

5、 carried out.【Result】One strain of Jinhua fungus was isolated and named LB-1.The morphological characteristics of LB-1were similar to those of Eurotium： golden colony， concentric rings， radioactive ridge， etc.The homology of its ITS sequence to Eurotium amstelodamiwas 99%.Therefore， LB-1 was identif

6、ied as E.amstelodami.【Conclusion】Jinhua fungus LB-1 is isolated from Liupao tea， and identified as E.amstelodami in Eurotium.During processing of Liupao tea， the producers can create suitable environment for LB-1 and promote the mass reproduction of LB-1， so as to enhance the health care effects of

7、Liupao tea.Key words： Liupao tea； Jinhua fungus； Eurotium amstelodami； isolation； identification0 引言【研究意義】六堡茶因原產(chǎn)于廣西梧州市蒼梧縣六堡鄉(xiāng)而得名，屬于黑茶類，為后發(fā)酵茶。六堡茶特殊的加工工藝：殺青初揉堆悶復揉干燥篩選拼配渥堆初蒸焗堆復蒸涼置陳化（DB45/T 479-20_），使其具有獨特的品質特征：干茶色澤黑褐光潤，湯色紅濃似琥珀，滋味醇和甘爽，潤滑可口，有檳榔味，葉底紅褐色，耐沖泡，以“紅、濃、陳、醇”四絕著稱，耐于久藏，越陳越好（何志強，20_7）。近年來，以普洱茶為代表的黑茶類

8、在市場上掀起了熱潮，黑茶中微生物鑒定也成為海內外學者研究的熱點，出現(xiàn)了大量關于茯磚茶中金花菌的研究報道，如陳椽（1984）提出，金花菌能夠分泌淀粉酶催化茶葉中的淀粉轉化為單糖，還可分泌氧化酶催化多酚類化合物氧化，從而消除茶葉枝梗的粗老氣味，使茶湯呈紅棕色，滋味也更加醇厚并帶有甜味；楊撫林（20_5）在體外模擬胃液的試驗中發(fā)現(xiàn)金花菌發(fā)酵液對胃蛋白酶活性有促進作用，但對脂肪酶活性有抑制作用；鄧放明等（20_7）研究發(fā)現(xiàn)黑茶中的金花菌具有降脂、減肥、促進消化、改善人體腸道的功效，其發(fā)酵產(chǎn)物胞外多糖還具有抑制腫瘤的功效。人們通常根據(jù)金花菌的質量和數(shù)量來判斷茯磚茶品質的好壞，因此，研究六堡茶金花菌，對改

9、善六堡茶的加工工藝、促進六堡茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重要意義?！厩叭搜芯窟M展】黑茶中的微生物種類繁多且對茶葉的影響較大。近年來，關于金花菌的鑒定研究較多并已取得較大進展。黃浩等（2021）從湖南益陽茶廠2021年生產(chǎn)的金湘益磚茶中分離純化得到一株金花菌，在光學顯微鏡下觀察菌株形態(tài)、在掃描電鏡下觀察菌株的子囊孢子（有性階段）和分子孢子（無性階段），同時結合DNA測序，在分子水平上對分離菌株進行鑒定，確定該菌株為冠突散囊菌。彭曉赟等（2021）對湖南地區(qū)茯磚茶上金花菌的菌落特征和形態(tài)特征進行了研究，并運用掃描電鏡觀察了其子囊孢子和分生孢子的發(fā)育過程，鑒定其為冠突散囊菌（Eurotium cristatum）

10、。宋偉（2021）從黑磚茶中分離純化獲得5種真菌，經(jīng)過形態(tài)學觀察及分子鑒定確定5種真菌分別為：塔賓曲霉、阿姆斯特丹散囊菌、斑點青霉、冠突散囊菌和泡盛曲霉，其中的阿姆斯特丹散囊菌（E.amstelodami）和冠突散囊菌屬于金花菌。徐書澤（20_）利用高通量測序技術對梧州茶廠4個成品六堡茶中的真菌多樣性和菌落結構進行分析p ，通過傳統(tǒng)形態(tài)學鑒定結合真菌分子鑒定技術從中分離鑒定得到5個屬18個種的微生物，其中的散囊菌屬為阿姆斯特丹散囊菌。胡謝馨等（20_）從茯磚茶中分離出一株優(yōu)勢菌株LS1，經(jīng)形態(tài)學觀察及ITS-5.8S rDNA序列分析p ，鑒定為冠突散囊菌。【本研究切入點】前人對黑茶類金花菌的研究主要集中在普洱茶和茯磚茶上，對廣西六堡茶金花菌的研究報道較少。【擬解決的關鍵問題】采用平板涂布法從梧州中茶茶廠