藏紅花素對雷公藤甲素致小鼠臟器損傷的保護作用研究

1、    藏紅花素對雷公藤甲素致小鼠臟器損傷的保護作用研究    嚴銀銀 閆敏 武香香 朱鑫 石文博 江夢園 曾華輝中圖分類號 r285.5 文獻標志碼 a 文章編號 1001-0408（2021）19-2320-07doi 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.19.03摘 要 目的：研究藏紅花素（cr）對雷公藤甲素（tp）致小鼠臟器損傷的保護作用，為tp配伍減毒研究提供參考。方法：將50只小鼠按體質(zhì)量隨機分為正常組，tp低、高劑量組（分別記為“tp-l組”“tp-h組”，300、600 g/kg），tp低、高劑量與cr聯(lián)用組（分別

2、記為“tp-l+cr組”“tp-h+cr組”，300 g/kg tp+100 mg/kg cr、600 g/kg tp+100 mg/kg cr），每組10只。除正常組外，其余各組小鼠均灌胃相應藥物，每天1次，連續(xù)7 d。每天稱定小鼠體質(zhì)量，并記錄其死亡情況。末次灌胃后，處死小鼠，取其心臟、肝、腎、睪丸并計算臟器指數(shù);測定其血清中丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alt）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ast）、尿素氮（bun）、血肌酐（scr）水平以及肝組織中總超氧化物歧化酶（t-sod）活性和丙二醛（mda）含量;觀察其心臟、肝、腎、睪丸組織的病理學變化;測定其肝組織中b細胞淋巴瘤2（bcl-2）、bcl-2相關(guān)x蛋白（b

3、ax）、胱天蛋白酶3（caspase-3） mrna的相對表達量。結(jié)果：tp-l組、tp-h組、tp-l+cr組、tp-h+cr組分別有3、5、2、3只小鼠死亡，存活率分別為70%、50%、80%、70%。與正常組比較，tp-l組、tp-h組小鼠體質(zhì)量（實驗第7天）、心臟指數(shù)、肝指數(shù)、腎指數(shù)（tp-l組除外）睪丸指數(shù)和肝組織中t-sod活性、bcl-2 mrna的相對表達量，血清中alt（tp-l組除外）、ast（tp-l組除外）、bun、scr水平和肝組織中mda含量、bax mrna的相對表達量、caspase-3 mrna的相對表達量均顯著升高（p<0.05或p<0.01）;

4、心臟、肝、腎、睪丸組織均出現(xiàn)了明顯的病理學變化。與同劑量tp單用組比較，tp與cr聯(lián)用組小鼠上述指標均不同程度地改善，除tp-l+cr組小鼠的腎指數(shù)和血清中alt水平外，差異均有統(tǒng)計學意義（p<0.05或p<0.01）;心臟、肝、腎、睪丸組織的病理損傷均明顯改善。結(jié)論：cr可減輕tp誘導的小鼠心臟、肝、腎、睪丸的損傷，這可能與cr的抗氧化應激作用有關(guān)。關(guān)鍵詞 雷公藤甲素;藏紅花素;配伍減毒;臟器損傷;氧化應激;小鼠study on protective effects of crocin against triptolide-induced visceral organ injur

5、y in miceyan yinyin1，2，yan min2，wu xiangxiang2，zhu xin3，shi wenbo1，2，jiang mengyuan2，zeng huahui1，2           （1. school of medicine， henan university of tcm， zhengzhou 450046， china; 2. academy of chinese medical sciences， henan university of tcm， zhengzhou 450046， china; 3

6、. school of pharmacy， henan university of tcm， zhengzhou 450046， china）abstract objective： to study the protective effects of crocin （cr） against triptolide （tp）-induced visceral organ injury in mice， and to provide reference for the studying tp compatibility and detoxification. methods： fifty

7、mice were randomly divided into normal group， tp low-dose and high-dose groups （i.e. tp-l group， tp-h group， with 300， 600 g/kg）， tp low-dose and high dose combined with cr groups （i.e. tp-l+cr group， tp-h+cr group， with 300 g/kg tp+100 mg/kg cr， 600 g/kg tp+100 mg/kg cr）， with 10 mice in each group

8、. except for normal group， other groups were given relevant medicine intragastrically， once a day， for consecutive 7 d. the body weight of mice was weighted every day， and their death was recorded. after last administration， the mice were sacrificed， and the heart， liver， kidney and testis were take

9、n， and the organ index was calculated; serum levels of alt， ast， bun and scr， the activity of t-sod and the contents of mda were all determined. the pathological changes of heart， liver， kidney and testis were observed; mrna expression of bcl-2， bax and caspase-3 in liver tissue were determined. res

10、ults： three， five， two and three mice in tp-l group， tp-h group， tp-l+cr group and tp-h+cr group died respectively， and the survival rates were 70%， 50%， 80% and 70%， respectively. compared with normal group， the body weight （7th day of experiment）， heart index， liver index， kidney index （except for

11、 tp-l group）， testicular index， t-sod activity and mrna expression of bcl-2 in liver tissue， serum levels of alt （except for tp-l group）， ast （except for tp-l group）， bun and scr， mda content and mrna expression of bax， mrna expression of caspase-3 in liver tissue were increased significantly （pkeyw

12、ords   triptolide; crocin; compatibility attenuation; organ damage; oxidative stress; mice雷公藤甲素（triptolide，tp）是從雷公藤tripterygium wilfordii hook. f.中提取得到的一種環(huán)氧化二萜內(nèi)酯化合物，其生物活性強、藥效明確，可用于治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡、風濕性關(guān)節(jié)炎、腎病綜合征及多種腫瘤疾病1。但由于tp水溶性差、體內(nèi)消除快1-2，且毒副作用較大，可通過誘導氧化應激、細胞自噬和激活炎癥及凋亡信號通路等對機體臟器（主要是肝3、腎4、心臟5、睪丸6等）產(chǎn)生毒性，故

13、其臨床應用受到了極大限制。藏紅花素（crocin，cr）又稱西紅花苷，是從茜草科植物梔子gardenia jasminoides ellis果實中提取的一種多組分混合物。研究表明，cr具有抗癌、抗凋亡、抗炎和抗氧化等作用7-8。此外，有研究報道，cr可通過其獨特的抗氧化活性降低應激狀態(tài)下機體的氧化應激反應，從而起到保護肝、腎、心臟和睪丸的作用9-10。中藥配伍減毒是一種普遍且有效的減毒策略11，本課題組前期對近年來與tp配伍減毒的相關(guān)藥物進行整合歸納，尚未發(fā)現(xiàn)有cr與tp配伍減毒的研究報道。鑒于此，本研究擬考察具有抗氧化活性的cr與tp配伍給藥后對小鼠臟器病理損傷、生化及氧化應激等指標的影響，

14、探討cr對tp誘導臟器損傷的保護作用，為tp配伍減毒研究提供參考。1 材料1.1 主要儀器本研究所用主要儀器包括al204型精密電子天平梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司、ja5001型電子天平（上海浦春計量儀器有限公司）、microfuge 22r型微量臺式冷凍離心機（美國beckman coulter公司）、phw-165q型恒溫培養(yǎng)箱（中科生命科技股份有限公司）、1510-02820c型酶標儀（美國thermo fisher scientific公司）、kz-f型高速低溫組織研磨儀（武漢塞維爾生物科技有限公司）、bx61型熒光顯微鏡及成像系統(tǒng)（日本olympus公司）、hws-24型電熱

15、恒溫水浴鍋（上海一恒科學儀器有限公司）、7500 fast型實時熒光定量-聚合酶鏈式反應（pcr）儀（美國abi公司）等。1.2 主要藥品與試劑tp（批號hx190617010，純度99.5%）購自西安昊軒生物科技有限公司;cr（批號qe4eb-ll，規(guī)格25 g）購自梯希愛（上海）化成工業(yè)發(fā)展有限公司;二喹啉甲酸（bca）蛋白定量試劑盒（批號wb6501）購自蘇州新賽美生物科技有限公司;丙二醛（mda）、總超氧化物歧化酶（t-sod）、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alt）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ast）、尿素氮（bun）、血肌酐（scr）檢測試劑盒（批號分別為20201031、20201026、20201202

16、、20201202、20201120、20201204）均購自南京建成生物工程研究所;triquick reagent總rna提取試劑（批號20200924）購自北京索萊寶生物科技有限公司;beyo rttm cdna第一鏈合成試劑盒（批號093019201105）購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司;power uptm sybrtm green master mix熒光定量pcr雙鏈dna擴增試劑盒（批號00918736）購自美國thermo fisher scientific公司;0.9%氯化鈉注射液（批號5b20100704，規(guī)格250 ml 2.25 g）購自山東齊都藥業(yè)有限公司;4%多聚

17、甲醛溶液、睪丸固定液（批號分別為70085400、hj200104）均購自武漢賽維爾生物科技有限公司;其余試劑均為分析純或?qū)嶒炇页Ｓ靡?guī)格，水為純凈水。1.3 動物本研究所用動物為spf級km小鼠，共50只，雄性，體質(zhì)量為（20±2） g，購自鄭州市惠濟區(qū)華興實驗動物養(yǎng)殖場，動物生產(chǎn)許可證號為scxk（豫）2019-0002。小鼠購入后，飼養(yǎng)于明暗交替（12 h/12 h）、溫度（22±2） 、相對濕度50%左右的環(huán)境中。本實驗方案已通過河南中醫(yī)藥大學實驗動物倫理委員會審核批準（編號dwll202103173）。2 方法2.1 小鼠分組與給藥將50只雄性km小鼠適應性飼養(yǎng)1周

18、后按體質(zhì)量隨機分為5組，即正常組、tp低劑量組（記為“tp-l組”，300 g/kg ）、tp高劑量組（記為“tp-h組”，600 g/kg）和tp低、高劑量與cr聯(lián)用組（分別記為“tp-l+cr組”“tp-h+cr組”，300 g/kg tp+100 mg/kg cr、600 g/kg tp+100 mg/kg cr），每組10只。其中，tp劑量的設置參考文獻12及前期預實驗結(jié)果，cr劑量的設置參考文獻13。各給藥組小鼠均采用灌胃給藥，給藥體積均為20 l/g，每天1次，連續(xù)7 d（首次給藥天數(shù)記為實驗第0天）;正常組小鼠同法灌胃等體積生理鹽水（即0.9%氯化鈉注射液，下同）。每天早上9：0

19、0灌胃前稱定小鼠體質(zhì)量，并記錄其死亡情況。2.2 血清及組織樣本的采集及處理末次給藥12 h后，所有小鼠均禁食不禁水12 h，稱定其體質(zhì)量后，摘眼球取血。血樣先在室溫下靜置1 h，然后在4 下以3 000 r/min離心15 min，分離上層血清。取血后，立即用頸椎脫臼法處死小鼠，打開其腹腔，于冰臺上迅速取出其心臟、肝、腎和睪丸組織，用預冷的生理鹽水沖洗掉組織上的血漬，并用濾紙吸取多余水分，然后稱定各臟器的質(zhì)量。取肝組織適量，剪碎后放于凍存管中，經(jīng)液氮速凍后置于-80 冰箱中保存。將上述心臟、腎和剩余肝組織置于4%多聚甲醛溶液中固定，將睪丸用睪丸固定液固定，備用。2.3 臟器指數(shù)的計算根據(jù)各組

20、小鼠心臟、肝、腎、睪丸組織的質(zhì)量以及其體質(zhì)量計算臟器指數(shù)：臟器指數(shù)=臟器質(zhì)量（g）/小鼠體質(zhì)量（g）×100%。2.4 血清中生化指標水平檢測采用微板法檢測小鼠血清中alt、ast水平，采用比色法檢測小鼠血清中bun水平，采用肌氨酸氧化酶法檢測小鼠血清中scr水平。各指標檢測均嚴格按照相應試劑盒說明書操作，均使用酶標儀檢測。2.5 肝組織中t-sod活性和mda含量檢測取“2.2”項下凍存的肝組織適量，稱定質(zhì)量，加入預冷的生理鹽水組織（g）與生理鹽水（ml）的比例為1 9，用高速低溫組織研磨儀研磨成10%的肝組織勻漿。吸取上述肝組織勻漿適量，用生理鹽水稀釋成1%的肝勻漿，待用。用bc

21、a法分別計算出10%肝組織勻漿和1%肝組織勻漿中蛋白的含量后，分別采用wst-1法和硫代巴比妥酸（tba）法檢測肝組織中t-sod活性和mda含量。各指標檢測均嚴格按照相應試劑盒說明書操作，均使用酶標儀檢測。2.6 心臟、肝、腎和睪丸組織的病理形態(tài)學觀察取“2.2”項下經(jīng)固定的心臟、肝、腎和睪丸組織各適量，常規(guī)制備石蠟切片（厚度為3 m）后，行蘇木精-伊紅（he）染色，再經(jīng)常規(guī)乙醇梯度脫水、二甲苯透明、中性樹脂封片后，使用顯微鏡觀察各組小鼠心臟、肝、腎和睪丸組織的病理形態(tài)學變化。2.7 肝組織中b細胞淋巴瘤2（bcl-2）、bcl-2相關(guān)x蛋白（bax）、胱天蛋白酶3（caspase-3）mr

22、na表達水平測定取“2.2”項下凍存肝組織適量，用triquick reagent總rna提取試劑組織（mg）與提取試劑（ml）的比例為100 1提取其總rna，再對rna進行濃度和純度檢測后，按beyo rttm cdna第一鏈合成試劑盒說明書操作，將rna逆轉(zhuǎn)錄成cdna。以cdna為模板，使用實時熒光定量-pcr儀進行擴增。反應體系（10 l）包括：cdna模板4 l，power uptm sybrtm green master mix試劑 5 l，上、下游引物各0.5 l。反應條件為：50 加熱2 min，95 預變性2 min;95 變性15 s，60 退火1 min，72 延伸30

23、 s，共40個循環(huán)。以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（gapdh）作為內(nèi)參，采用2-ct法分析bcl-2、bax、caspase-3 mrna的表達水平，并以正常組為參照計算其余各組mrna的相對表達量。每組隨機選取3只小鼠的樣本進行測定，實驗重復3次?；蛞镉商K州金唯智生物科技有限公司設計并合成，引物序列及產(chǎn)物片段長度見表1。2.8 統(tǒng)計學方法采用spss 21.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。實驗數(shù)據(jù)以x±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用lsd檢驗。檢驗水準=0.05。3 結(jié)果3.1 tp與cr聯(lián)用對小鼠存活率的影響正常組小鼠在給藥期間無死亡;tp-l組、tp-h組小鼠

24、給藥后分別有3、5只死亡，存活率分別為70%、50%;tp-l+cr組、tp-h+cr組小鼠給藥后分別有2、3只死亡，存活率分別為80%、70%。可見，相較于同劑量tp單用組，tp與cr聯(lián)用組小鼠的存活率均有一定提高。由于各給藥組均有小鼠死亡，故后續(xù)實驗中每組均選取5只小鼠的結(jié)果進行統(tǒng)計分析。3.2 tp與cr聯(lián)用對小鼠體質(zhì)量的影響從給藥第2天起（即實驗第1天），與正常組比較，tp-l、tp-h組小鼠的體質(zhì)量均顯著降低（p<0.05或p<0.01）;與同劑量tp單用組比較，tp與cr聯(lián)用組小鼠的體質(zhì)量均顯著升高（p<0.05或p<0.01）。各組小鼠的體質(zhì)量測定結(jié)果見圖

25、1。3.3 tp與cr聯(lián)用對小鼠臟器指數(shù)的影響與正常組比較，tp-l、tp-h組小鼠的心臟、肝、睪丸指數(shù)以及tp-h組小鼠的腎指數(shù)均顯著降低（p<0.05或p<0.01）;與同劑量tp單用組比較，tp與cr聯(lián)用組小鼠的上述各臟器指數(shù)均不同程度地升高，除tp-l+cr組小鼠的腎指數(shù)外，差異均有統(tǒng)計學意義（p<0.05或p<0.01）。各組小鼠的心臟、肝、腎和睪丸指數(shù)測定結(jié)果見表2。3.4 tp與cr聯(lián)用對小鼠血清中生化指標水平的影響與正常組比較，tp-l組小鼠血清中bun、scr水平和tp-h組小鼠血清中ast、alt、bun、scr水平均顯著升高（p<0.05或p

26、<0.01）。與同劑量tp單用組比較，tp與cr聯(lián)用組小鼠血清中ast、alt、bun、scr水平均不同程度降低，除tp-l+cr組小鼠血清中alt水平外，差異均有統(tǒng)計學意義（p<0.05或p<0.01）。各組小鼠血清中ast、alt、bun、scr水平測定結(jié)果見表3。3.5 tp與cr聯(lián)用對小鼠肝組織中t-sod活性和mda含量的影響與正常組比較，tp-l、tp-h組小鼠肝組織中t-sod活性均顯著降低（p<0.01），mda含量均顯著升高（p<0.05或p<0.01）。與同劑量tp單用組比較，tp與cr聯(lián)用組小鼠肝組織中t-sod活性均顯著升高（p<

27、;0.05或p<0.01），mda含量均顯著降低（p<0.05）。各組小鼠肝組織中t-sod活性和mda含量測定結(jié)果見表4。3.6 tp與cr聯(lián)用對小鼠心臟、肝、腎和睪丸組織病理形態(tài)學的影響3.6.1 心臟組織 正常組小鼠心肌細胞形態(tài)正常，心肌纖維排列良好、橫紋清晰;tp單用組小鼠心肌纖維均排列紊亂、橫紋模糊不清，且tp-h組小鼠心臟組織間質(zhì)內(nèi)少量血管出現(xiàn)充血現(xiàn)象;tp與cr聯(lián)用組小鼠的心肌細胞病理變化均較tp單用組明顯改善，心肌纖維排列均良好、橫紋均清晰，間質(zhì)均未見充血現(xiàn)象。各組小鼠心臟組織病理形態(tài)學顯微圖見圖2。3.6.2 肝組織 正常組小鼠肝細胞無水腫，肝索排列整齊，肝小葉結(jié)

28、構(gòu)清晰;tp單用組小鼠肝細胞均可見嚴重水腫、炎性細胞浸潤、溶解性壞死等病理學變化; tp與cr聯(lián)用組小鼠的肝細胞均無水腫、無炎性細胞浸潤，形態(tài)均接近正常。各組小鼠肝組織病理形態(tài)學顯微圖見圖3。3.6.3 腎組織 正常組小鼠腎小球結(jié)構(gòu)完整，組織形態(tài)正常;tp-l組小鼠腎小管上皮細胞略腫脹，偶見炎性細胞浸潤;tp-h組小鼠腎組織出現(xiàn)血栓，腎小球萎縮，間質(zhì)內(nèi)纖維組織彌漫性增多;tp與cr聯(lián)用組小鼠腎小球結(jié)構(gòu)均較tp單用組明顯改善、纖維組織均減少，均未見血栓，且腎組織形態(tài)均接近正常。各組小鼠腎組織病理形態(tài)學顯微圖見圖4。3.6.4 睪丸組織 正常組小鼠睪丸形態(tài)正常，各級生精細胞發(fā)育良好、排列規(guī)則，腔內(nèi)

29、可見大量的成熟精子;tp-l組小鼠睪丸中成熟精子數(shù)量明顯減少，少量生精細胞脫離基底面;tp-h組小鼠睪丸組織基底面細胞發(fā)生空泡變性、層次變窄，各級生精細胞排列不規(guī)則，腔內(nèi)無成熟精子;tp與cr聯(lián)用組小鼠睪丸組織基底面細胞層次較tp單用組增厚、排列規(guī)則，成熟精子數(shù)量明顯增多。各組小鼠睪丸組織病理形態(tài)學顯微圖見圖5。3.7 tp與cr聯(lián)用對小鼠肝組織中bcl-2、bax、caspase-3 mrna表達的影響與正常組比較，tp-l、tp-h組小鼠肝組織中bax、caspase-3 mrna的相對表達量均顯著升高（p<0.05或p<0.05或p4 討論存活率和體質(zhì)量均是毒性實驗中比較直觀

30、的檢測指標。本研究結(jié)果顯示，與正常組比較，tp單用組小鼠死亡數(shù)量較多，且其體質(zhì)量均顯著下降;而與同劑量tp單用組比較，tp與cr聯(lián)用組小鼠的死亡數(shù)量相對較少，且其體質(zhì)量均顯著升高，這表明cr可改善tp誘導的小鼠體質(zhì)量下降及死亡。臟器指數(shù)是動物實驗中用于檢測藥物毒性強度的常用指標，當臟器發(fā)生退行性萎縮以及充血或水腫等增大變化時，其臟器指數(shù)也會隨即發(fā)生改變;臟器指數(shù)的變化不僅可反映出藥物對臟器的綜合毒性作用，還可為尋找毒性物質(zhì)作用的靶器官提供重要線索14。通過組織病理形態(tài)學檢查，可進一步驗證毒性物質(zhì)對臟器的損傷15。本研究結(jié)果顯示，與正常組比較，tp單用組小鼠心臟、肝、腎和睪丸指數(shù)均不同程度地降低

31、，表明tp可誘導小鼠臟器功能發(fā)生退行性改變或萎縮，綜合毒性較強;而tp與cr聯(lián)用組小鼠的上述臟器指數(shù)均較tp單用組不同程度地升高，表明cr可逆轉(zhuǎn)tp誘導的小鼠臟器指數(shù)的改變。本研究病理形態(tài)學檢查結(jié)果顯示，tp對小鼠心臟、肝、腎和睪丸組織均有明顯損傷，且劑量越高損傷越嚴重;而tp與cr聯(lián)用組小鼠上述臟器組織的損傷均較tp單用組有明顯改善，表明cr可減弱tp對小鼠臟器的毒性。ast、alt和bun、scr分別是反映肝、腎功能損傷最常用的檢測指標，其水平越高，說明肝、腎功能損傷越嚴重15-16。本研究結(jié)果顯示，tp單用組小鼠血清中ast、alt、bun、scr水平均顯著高于正常組，提示tp給藥后小鼠

32、肝、腎功能受損;與同劑量tp單用組比較，tp與cr聯(lián)用組小鼠血清中ast、alt、bun、scr水平均不同程度地降低，說明cr可以保護tp誘導的肝、腎功能損傷。t-sod活性和mda含量分別是直接和間接反映機體在氧化應激狀態(tài)下抗氧化能力強弱的指標17。有研究表明，cr可以通過升高機體中t-sod活性、降低機體中mda含量，從而降低機體氧化應激反應，最終起到保護臟器的作用12。本研究結(jié)果顯示，與正常組比較，tp單用組小鼠肝組織中t-sod活性均顯著降低，mda含量均顯著升高;與同劑量tp單用組比較，tp與cr聯(lián)用組小鼠肝組織中t-sod活性均顯著升高，mda含量均顯著降低，這說明cr可以逆轉(zhuǎn)tp

33、誘導的小鼠肝臟的氧化應激損傷。研究顯示，tp可通過調(diào)控bax基因的表達來激活caspase-3，進而觸發(fā)細胞凋亡，最終產(chǎn)生臟器毒性14。bcl-2能與bax結(jié)合形成異源二聚體，阻止bax的釋放，從而抑制細胞凋亡;此外，bcl-2過表達也可減少氧自由基的產(chǎn)生，進而抑制氧化應激反應18。氧化應激反應能夠?qū)е戮€粒體損傷，減少腺苷三磷酸的產(chǎn)生，進而促進細胞凋亡19。本研究結(jié)果顯示，tp單用組小鼠肝組織中bax、caspase-3 mrna的相對表達量均顯著升高，bcl-2 mrna的相對表達量均顯著降低;而同劑量tp與cr聯(lián)用組小鼠肝組織中bax、caspase-3 mrna的相對表達量均顯著降低，b

34、cl-2 mrna的相對表達量均顯著升高。結(jié)果提示，當tp給藥后機體發(fā)生氧化應激反應和細胞凋亡時，cr可以減少由氧化應激誘導的細胞凋亡的發(fā)生。綜上所述，cr可減輕tp誘導的小鼠心臟、肝、腎、睪丸組織的損傷，這可能與cr的抗氧化應激作用有關(guān)。但tp所致毒副作用的機制十分復雜，本研究只是初步研究了cr對tp誘導臟器損傷的保護作用，還需開展更深入的機制研究來進一步驗證。參考文獻 1 張雪，彭富全，何風雷，等.含雷公藤甲素中藥的風險控制j.中成藥，2019，41（7）：1667-1671. 2 cai b，hu z，tang h，et al. triptolide impairs genome int

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