高效液相對(duì)中藥材的研究

1、高效液相色譜對(duì)中藥材的研究摘要：本文從丹參的藥用資源、化學(xué)成分、藥理作用、臨床應(yīng)用以及劑型、制劑工藝等有關(guān)丹參的研究進(jìn)行了綜述,力圖闡述丹參的研究現(xiàn)狀和應(yīng)用前景，以期利于丹參的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)應(yīng)用。采用高校液相色譜分析，得到丹參的主要成分為脂溶性的丹參酮類(lèi)和水溶性的原兒茶酸、原兒茶醛和丹參素等 關(guān)鍵字 ： 丹參 活性成分 藥理作用 制劑 研究現(xiàn)狀 丹參為唇形科植物丹參的干燥根及根莖，始載于神農(nóng)本草經(jīng)，列為上品，是我國(guó)常用傳統(tǒng)中藥，味苦，性微寒，歸心、肝經(jīng)，具有祛瘀止痛，活血通經(jīng)，清心除煩等功效。臨床廣泛用于心腦血管疾患，是國(guó)內(nèi)外現(xiàn)代化中藥研究的熱點(diǎn)品種之一。1.資源分布 丹參主要分布于遼寧、河北、河

2、南、山東、山西、江蘇、湖北、甘肅、四川等省區(qū),野生的丹參常見(jiàn)于山坡、草叢、林下、溪谷旁1 。目前野生丹參資源由于過(guò)度采收已遭破壞,各地雖有栽培品種,但品質(zhì)退化嚴(yán)重,質(zhì)量參差不齊。2.丹參的化學(xué)成分 丹參的化學(xué)成分有30多種，丹參主要含兩類(lèi)成分：一為脂溶性的二萜類(lèi)化合物，二為水溶性的多聚酚酸類(lèi)成分。2.1 丹參脂溶性成分(1) 鄰醌型丹參酮類(lèi)二萜化合物在丹參中含量較高,有較強(qiáng)的生理活性,是丹參主要有效成分之一。主要有:丹參酮、丹參酮A、B、隱丹參酮、丹參酸甲酯、紫丹參素等2 。其中丹參酮A 是丹參治療冠心病的主要有效成分之一,在丹參中的含量可達(dá)0. 5 %以上,將其磺化制成丹參酮A 磺酸鈉后,可

3、增加水溶性及提高藥理活性。隱丹參酮抗菌活性很強(qiáng),比小檗堿強(qiáng)許多倍,含量亦高,常作為抗菌消炎類(lèi)丹參制劑的質(zhì)量控制指標(biāo)成分。(2) 對(duì)醌型的丹參酮類(lèi)二萜化合物在丹參中含量很低,主要有:異丹參酮、異丹參酮,異隱丹參酮等2 。(3) 其它二萜類(lèi)化合物較少,含量低。主要有丹參螺旋內(nèi)酯、新隱丹參酮等2 。2.2丹參水溶性成分主要有:原兒茶醛、迷迭香酸、丹參素、咖啡酸、丹酚酸等,均具有抗心肌缺血缺氧作用,丹參素和原兒茶醛在丹參體內(nèi)含量較高,活性較強(qiáng),是丹參治療冠心病的主要有效成分之一,常作為丹參原藥材和丹參制劑的質(zhì)量控制指標(biāo)成分。近期研究發(fā)現(xiàn):丹酚酸A 和丹酚酸B 的抗心肌缺血缺氧的活性比丹參素和原兒茶醛更

4、強(qiáng),其中丹酚酸A 是目前已知的最強(qiáng)的抗氧化化合物之一,還具有改善記憶、降低抗癌藥阿霉素毒性等作用4 。3.丹參的劑型及制劑工藝3.1丹參制劑品種3.1.1以水溶性有效成分入藥的丹參制劑5 這類(lèi)制劑的主藥丹參多采用水煎法或水提醇沉法制備,其有效成分為水溶性酚酸類(lèi)化合物。主要品種有丹參注射液、口服液、沖劑、氣霧劑、粉針劑、煎劑、透皮吸收劑、多相脂質(zhì)體；丹參素注射液、復(fù)方丹參注射液、丹紅注射液、丹歸注射液、丹參黃芪注射液、丹芪口服液、丹芪益心貼、復(fù)方丹參膏、復(fù)方丹參糖漿等。3.1.2脂溶性有效成分入藥的丹參制劑6 這類(lèi)制劑按用途又可以分成兩類(lèi):一類(lèi)用于治療化膿性感染性疾病如痤瘡、扁桃體炎、骨髓炎、蜂

5、窩組織炎、燒傷等，主藥品種有丹參酮片、丹參酮膠囊、丹參酮油膏等。另一類(lèi)用于治療心腦血管疾病，主藥品種有丹參舒心膠囊、丹參舒心片、丹參酮磺酸鈉注射液、精制冠心片等。其中精制冠心片為中國(guó)藥典95版收錄。 31.3兼用脂溶性成分和水溶性成分的丹參制劑 這類(lèi)制劑是丹參制劑的主體,以復(fù)方制劑為主，多用于冠心病和腦血管疾病的治療。主要品種有復(fù)方丹參片、冠心丹參片、丹參片、丹七片、丹田降脂丸、心寧片、心可舒片、冠心寧片、冠心靜片、冠心通脈寧片、保心寧片、復(fù)方丹參川芎片、復(fù)方丹參黃芪膠囊等。 3.2丹參制劑工藝的研究3.2.1 提取精制工藝 因?yàn)閷?duì)丹參有效部位的認(rèn)識(shí)存在差異，制劑的工藝路線相差較大。 3.2.

6、1.1 水提工藝路線 主要適用于水針劑、粉針劑、口服液和可溶性沖劑中主藥丹參的提取精制3.2.1.2 醇提工藝路線 主要適用于以丹參脂溶性有效成分入藥的制劑中丹參的提取,一般采用90%以上的乙醇為提取溶媒。3.2.1.3 水提醇沉工藝路線 主要適用于水針劑、粉針劑、口服液和可溶性沖劑中主藥丹參的提取精制3.2.1.4 先醇提后水提的工藝路線 用于心血管疾病的丹參類(lèi)固體制劑大部分采用此方法。4.丹參的藥理作用4.1 對(duì)心血管系統(tǒng)的作用4.1.1抗動(dòng)脈粥樣硬化 丹參有效成分丹參素具有抑制細(xì)胞氧化修飾脂蛋白的作用，其抗氧化能力與丹參的量成正相關(guān) 9。此外，丹參素還能抑制內(nèi)源性膽固醇合成，保護(hù)血管屏障

7、，防止動(dòng)脈粥樣硬化形成 。4.1.2.抗血栓形成 丹參是傳統(tǒng)的活血化瘀藥物，現(xiàn)代研究表明 ， 丹參中的丹參素能明顯抗體外血栓形成，抑制血小板的聚集性，使血小板膜流動(dòng)性顯著增加，這與丹參素提高機(jī)體抗凝和纖溶活性、提高血小板內(nèi)cAMP水平、抑制血栓素A2等前列腺素縮血管類(lèi)物質(zhì)的合成有關(guān)9 。4.1.3 對(duì)心肌的保護(hù)作用 丹參水溶性成分丹參素可防止大鼠心肌線粒體H-ATP酶水解活性下降，對(duì)心肌具有明顯的保護(hù)作用 9。丹參及復(fù)方丹參注射液能有效清除心肌再灌注所產(chǎn)生的具有細(xì)胞毒性的氧自由基，從而對(duì)缺血再灌注損傷的心肌起保護(hù)作用 。4.1.4 擴(kuò)張血管 丹參素能明顯擴(kuò)張實(shí)驗(yàn)性急性心肌梗塞的犬、貓以及離體貓

8、、豬的冠狀動(dòng)脈，增加冠狀動(dòng)脈血流量，并能對(duì)抗嗎啡、心得安的收縮冠狀動(dòng)脈作用 ，因此丹參素被認(rèn)為是擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈血管的有效成分之一10。4.1.5 防治動(dòng)脈再狹窄 丹參注射液呈劑量依賴(lài)性地抑制培養(yǎng)的兔動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞對(duì)3H - TdR 的攝取,減少DNA 合成,抑制SMC的移行和增殖等生物過(guò)程及動(dòng)脈去內(nèi)皮后的內(nèi)膜增生,這些都說(shuō)明丹參具有潛在的預(yù)防再狹窄作用10。4.1.6 防治腦血栓、改善腦缺血、抗腦損傷 丹參中的丹酚酸B 是很好的鐵螯合劑, 能有效抑制鐵依賴(lài)性脂質(zhì)過(guò)氧化，在腦損傷的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用,故可對(duì)抗腦損傷。4.1.7 增加冠脈流量,縮小心肌梗死面積,降低心肌耗氧量,防治心肌再灌注損傷。

9、4.2 對(duì)呼吸系統(tǒng)的作用 丹參對(duì)呼吸系統(tǒng)疾病具有一定的治療作用。在低氧狀態(tài)下，復(fù)方丹參注射液可以對(duì)抗低氧所致家兔肺動(dòng)脈高壓，降低肺血管阻力，并能改善由于低氧引起的心功能變化，使心排血量和每搏輸出量增加，動(dòng)脈血氧分壓升高，改善心肺功能。4.3對(duì)免疫系統(tǒng)的作用 丹參、復(fù)方丹參對(duì)正常小鼠免疫功能有明顯的增強(qiáng)作用11。采用丹參素進(jìn)行研究表明，丹參素在體外可顯著抑制小鼠脾細(xì)胞的增殖，抑制溶血斑形成。4.4 對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用 丹參水提液能明顯抑制小鼠自主活動(dòng)，其作用與劑量大小成正比，與氯丙嗪和眠爾通合并使用，鎮(zhèn)靜催眠作用明顯增強(qiáng) 。由此可見(jiàn)，傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為丹參具有清心除煩惱的功效確有一定道理。4.5 對(duì)

10、循環(huán)系統(tǒng)的作用 丹參對(duì)外周和內(nèi)臟微循環(huán)的改善是其活血化瘀的基本作用之一。丹參改善微循環(huán)障礙與其能提高紅細(xì)胞的變形能力、改善血液的粘彈性有關(guān)。4.6抗胃潰瘍作用 丹參水溶液灌胃給藥，對(duì)藥物性利血平潰瘍有明顯保護(hù)作用，對(duì)乙酸性慢性潰瘍有促進(jìn)愈合作用。丹參能增加胃粘膜血流和電位差，減少氫離子的逆擴(kuò)散，有保持粘膜屏障完整性，增強(qiáng)其防御功能的作用。4.7 抗腫瘤作用 丹參對(duì)腫瘤的作用機(jī)制包括：(1) 對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用,（2）誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡(3) 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞逆轉(zhuǎn)。另外，研究證明，丹參可對(duì)化療、放療引起的損傷有一定的保護(hù)作用，這可能是丹參提高抗腫瘤藥療效的機(jī)制之一。4.8對(duì)肝臟的保護(hù)作用 丹參對(duì)多種

11、因素引起的肝臟損傷具有明顯的保護(hù)作用，如脂質(zhì)過(guò)氧化引起的肝損傷等。丹參對(duì)肝臟的保護(hù)作用可表現(xiàn)在促進(jìn)肝功能恢復(fù)，減輕肝細(xì)胞的形態(tài)損傷，抑制肝硬化的發(fā)展等方面。4.9對(duì)腎臟的影響 丹參對(duì)多種物質(zhì)引起的腎功能損傷均有保護(hù)作用，丹參可以改善衰竭的腎臟功能，使腎臟濾過(guò)率和腎血流量增加18 。4.10抗氧化作用 丹參多種制劑都具有強(qiáng)大的抗氧化作用，對(duì)多種原因產(chǎn)生的自由基表現(xiàn)出較強(qiáng)的清除作用，這種作用可能是丹參多種藥理作用的主要機(jī)制之一。丹參水溶性成分能顯著抑制動(dòng)物的心、腦、肝、腎、睪丸的脂質(zhì)過(guò)氧化 。4.11對(duì)膜功能的影響 采用人工膜研究發(fā)現(xiàn)，丹參可以影響人工膜脂質(zhì)構(gòu)象，可以調(diào)節(jié)脂質(zhì)雙層膜的物理狀態(tài)，改變

12、膜蛋白的脂類(lèi)環(huán)境，改善膜的功能和代謝過(guò)程，這對(duì)于改善某些疾病狀態(tài)如冠心病患者的細(xì)胞功能有一定作用。4.12鎮(zhèn)痛作用 丹參具有鎮(zhèn)痛作用早有記載，但研究資料尚欠充分。4.13抗衰老 丹參對(duì)老年小鼠血漿及組織中超氧化物歧化酶活性有促進(jìn)作用，提示丹參可能具有延緩衰老過(guò)程的作用。4.14 性激素樣作用 子宮重量法和陰道涂片法均證明丹參酮有溫和的雌激素樣作用；精囊和前列腺重量法也證明丹參酮具有抗雄性激素的作用。 4.15 抗菌消炎 丹參對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌特別是金黃色葡萄球菌有較強(qiáng)的抑制作用，其抗菌有效成分為總丹參酮，尤以隱丹參酮的作用最強(qiáng)。另有研究表明，總丹參酮對(duì)炎癥的第一期、第二期以及急性和亞急性炎癥有良好

13、的治療作用，而對(duì)炎癥的第三期即慢性期無(wú)治療作用 。4.16調(diào)節(jié)組織修復(fù)和再生 筆者認(rèn)為，丹參對(duì)組織的修復(fù)和再生作用與其改善微循環(huán)、改善血液流變學(xué)特性和局部血流動(dòng)力學(xué)等作用是密切相關(guān)的14。4.17抗纖維化作用 近年來(lái)研究證實(shí)，丹參具有抗纖維化作用。已廣泛用于抗肝、肺、皮膚、腎等纖維性變。5. 丹參的臨床應(yīng)用研究5.1 治療胸痹 丹參用于治療胸痹療效確定 此外，丹參還可用于淤血閉阻引起的肝纖維化、肺源性心臟病、尋常型銀屑病、新生兒缺氧缺血性腦病及淤血閉阻引起的肺源性心臟病繼發(fā)紅細(xì)胞增多癥、頸性眩暈、銀屑病、糖尿病周?chē)窠?jīng)病變、嬰幼兒腹瀉 。52 治療冠心病心絞痛 復(fù)方丹參滴丸治療冠心病心絞痛，血

14、液流變學(xué)指標(biāo)變化尤為突出，緩解癥狀有效率顯著增強(qiáng)；而消心痛擴(kuò)張冠脈有限，隨著時(shí)間延長(zhǎng)易產(chǎn)生耐藥性，出現(xiàn)藥物不良反應(yīng)，擴(kuò)血管作用降低，療效下降17。說(shuō)明丹參可作為一種安全有效的藥物長(zhǎng)期使用，特別是對(duì)于患偏頭痛和對(duì)消心痛耐藥或易產(chǎn)生嚴(yán)重不良反應(yīng)的患者更為適用。53 治療妊高癥 丹參治療妊高癥療效顯著，可作為治療妊高癥的常規(guī)藥物之一17 。54 重癥急性胰腺炎(SAP)并發(fā)腎功能損害的保護(hù)作用 丹參通過(guò)改善微循環(huán)對(duì)SAP腎功能損害有益17 。55 對(duì)肝硬化門(mén)脈血流的影響 丹參可消除內(nèi)毒素血癥并抑制血栓素生成，舒張血管平滑肌，降低門(mén)脈壓力。從丹參的水溶部分提取的丹參素可抑制血小板合成和聚集，促進(jìn)纖維蛋

15、白降解，降低血液高黏滯性，從而改善肝內(nèi)微循環(huán)障礙和增加肝實(shí)質(zhì)血供，并對(duì)全身血液循環(huán)無(wú)不良影響，對(duì)于防治門(mén)脈高壓改善預(yù)后具有重要意義。56 輔助治療惡性腫瘤 丹參注射液聯(lián)合化療具有協(xié)同作用，能提高腫瘤細(xì)胞對(duì)化療的敏感性，延遲腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐受性；同時(shí)可提高正常組織對(duì)化療藥物的耐受性，對(duì)骨髓、消化道、心臟等重要器官有一定保護(hù)作用，能減輕化療毒副反應(yīng)，改善患者生活質(zhì)量，有良好的增效減毒作用。57 改善妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥(ICP)圍生兒預(yù)后 研究者認(rèn)為，ICP圍生兒預(yù)后不良是因?yàn)樘ケP(pán)血管發(fā)育和功能異常導(dǎo)致胎兒的氧供不足。丹參可通過(guò)增加內(nèi)皮細(xì)胞的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)，增強(qiáng)血管的通透性，使胎盤(pán)部位血

16、流灌注增加，促進(jìn)母胎之間血、氧交換，改善圍生兒因血供不足而引起的缺氧窘迫、發(fā)育遲，從而改善了圍生兒預(yù)后。58 治療紅斑性肢痛病 丹參注射液治療紅斑性肢痛病，尤其是對(duì)頑固性病情的患者，具有較好的治療臨床療效。59急性胰腺炎 復(fù)方丹參注射液配合西藥治療急性胰腺炎與常規(guī)治療急性胰腺炎相比，能顯著提高療效、縮短病程、降低費(fèi)用。5.10治療慢性咽炎 5.11治療皮膚病 丹參治療血栓閉塞性脈管炎、紅斑性狼瘡、硬皮病、皮肌炎、干燥綜合征、銀屑病、感染性疾病、痤瘡均有一定療效。5. 12丹參在獸醫(yī)臨床上的應(yīng)用 獸醫(yī)臨床上主要用丹參復(fù)方的水煎劑來(lái)治療口瘡、赤眼、喘咳、水腫、瘡瘍癰毒、疽疥癬、跌打損傷和一些虛證等

17、19。6 .質(zhì)量控制現(xiàn)狀及存在的問(wèn)題6.1 質(zhì)量現(xiàn)狀 隨著丹參市場(chǎng)的擴(kuò)大、需求量的劇增,野生丹參資源已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足市場(chǎng)的需求,而栽培資源只種不選的狀況又使各地產(chǎn)丹參質(zhì)量參差不齊,品質(zhì)退化嚴(yán)重,有效成分含量低。丹參制劑品種繁多，但是質(zhì)量大多不穩(wěn)定，有很多潛在的風(fēng)險(xiǎn)。6.2存在的問(wèn)題 主要就是丹參成分穩(wěn)定性和保留率低問(wèn)題。穩(wěn)定性問(wèn)題來(lái)源于成分本身對(duì)濕、熱、光的不穩(wěn)定所致8。 其次丹參制劑品種的工藝研究沒(méi)有突破，主要是水醇工藝。雖然藥物劑型有多種，只不過(guò)用藥形式的改變，沒(méi)有從根本上提高丹參制劑的質(zhì)量。此外丹參制劑工藝只注重藥物的提取，而忽視后續(xù)工藝的研究，如濃縮、干燥、成型等，這也是造成丹參制劑質(zhì)量

18、不穩(wěn)定的主要原因之一7。 7.展望 丹參有廣闊的國(guó)際市場(chǎng)前景和發(fā)展?jié)摿?。隨著丹參市場(chǎng)的擴(kuò)大、需求量的劇增,野生丹參資源已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足市場(chǎng)的需求,因此有必要應(yīng)用植物細(xì)胞工程和基因工程等現(xiàn)代生物工程技術(shù),結(jié)合和利用前人的研究成果,通過(guò)尋找優(yōu)良產(chǎn)地、篩選和推廣優(yōu)良品種、提高有效成分的含量等有效措施以保證丹參藥材質(zhì)量的穩(wěn)定性和優(yōu)良性,解決丹參供求矛盾、擴(kuò)大我國(guó)丹參的市場(chǎng)份額及保護(hù)丹參的野生資源,充分利用我國(guó)加入WTO的契機(jī),促進(jìn)藥用植物和地區(qū)經(jīng)濟(jì)的良性發(fā)展16。大量的藥理實(shí)驗(yàn)和臨床療效報(bào)道為丹參有效部位的確立提供了科學(xué)、可靠的依據(jù)，藥學(xué)研究人員要依托現(xiàn)代技術(shù)對(duì)成分富集、濃縮、干燥、成型及質(zhì)量控制進(jìn)行系

19、統(tǒng)、深入的研究，開(kāi)發(fā)出優(yōu)質(zhì)高效的新劑型、新制劑。 因此，用高效i液相二極管陣列檢測(cè)法同時(shí)測(cè)定3種復(fù)方丹參制劑中的7個(gè)成分：原兒茶醛、丹酚酸B、丹參酮A、隱丹參酮、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1。該方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可為全面評(píng)價(jià)復(fù)方丹參制劑的質(zhì)量提供依據(jù)。參考文獻(xiàn)：（1）馮玲玲，吉源，丹參的研究現(xiàn)狀與應(yīng)用前景，中國(guó)野生植物資源， Vol. 23 No. 2 Apr. 2004（2）杜冠華，張均田，丹參現(xiàn)代研究概況與進(jìn)展，醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)2004年7月第23卷第7期（3）楊勤1，趙朝偉2，丹參的藥理作用研究現(xiàn)狀，中國(guó)藥業(yè)2003年第12卷第10期（4）劉艾林1，李銘源2，王一濤2，杜冠華，丹參藥理學(xué)活性物質(zhì)基礎(chǔ)研究現(xiàn)狀，中國(guó)藥 學(xué)雜志2007 May，V0142 No9（5）劉陶世，黃耀洲，丹參成分、制劑和質(zhì)量控制研究概況，南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào).1998，（4）：256 （6）楊宇宏，丹參及其制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，當(dāng)代醫(yī)學(xué)2009年3月第l5卷第7期總第162（7）陳鋒，李澤友，劉明生，丹參制劑的研究進(jìn)展，中國(guó)藥房，