利巴韋林注射液的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查

1、利巴韋林注射液的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查一、試劑和樣品：蠻試劑（批號(hào)：0508031, 靈敏度：0. 25eu/ml湛江i専康海洋生物有限公司生 產(chǎn)）細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品2005-6, 100eu/支，中國約品生物 制品檢定所提供）利巴韋林注射液（規(guī)格：100mg/ml,批號(hào)：050302生產(chǎn)廠家：廣東南國藥業(yè)有 限公司）二、靈敏度復(fù)核：2-1、標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備取細(xì)菌內(nèi)毒索工作標(biāo)準(zhǔn)品一支，輕彈瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂輪在 瓶頸上部輕輕劃痕，用75%酒精棉球擦拭后啟開，啟開過程應(yīng)防止玻璃屑落入瓶內(nèi)。 根據(jù)蛍試劑靈敏度的標(biāo)示值（025eu/ml）,將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品2005-6用細(xì)

2、菌內(nèi)毒素檢查用水ind溶解，在旋渦混合器上混勻15分鐘，然后通過稀釋制備成 0. 50eu/ml. 0. 25eu/ml> 0. 125eu/ml 和 0. 06eu/ml 四個(gè)濃度的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液， 每稀釋一步均應(yīng)在旋渦混合器上混勻30秒鐘。得 10 eu/ml；得 l oeu/ml；得 0.50eu/ml；得 0,25eu/ml；得 0.125eu/ml； 、取51細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水溶解工作標(biāo)準(zhǔn)晶，得1 ooeu/ml； 、取第步溶液0. 2m 1+細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水1.8 ml, 、取第步溶液0. 2ml+細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水1.8 ml, 、取第步溶液l.omr細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水1

3、.0 ml, 、取第步溶液1. 0ml. +細(xì)菌內(nèi)毒索檢查用水1.0 ml, 、取第步溶液1.0ml +細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水1.0 ml,、取第步溶液ml+細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水ml,得eu/ml；、取第步溶液011+細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水ml,得eu/ml；、取第步溶液ml+細(xì)菌內(nèi)毒索檢查用水ml,得eu/ml；2-2、待復(fù)核蛍試劑的準(zhǔn)備、取第步溶液0. 5ml+細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水0. 5 ml,得 0.06eu/ml；取規(guī)格為0. 1ml/支的蛍試劑18支，放在試管架上，排成5列，其中4列4支, 1列2支。輕彈瓶壁使粉末落入瓶底，用75%酒精棉球擦拭后啟開備用，防止玻璃 屑落入瓶內(nèi)。每支加入0. l

4、nil檢查用水溶解，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)瓶壁，使內(nèi)容物充分溶解。2-4、加樣4 支 4 列每列分別加入 0. 1ml 的 0. 5eu/ml> 0. 25eu/ml、0. 125eu/ml 和 0. 06eu/ml的內(nèi)毒索標(biāo)準(zhǔn)溶液，另2支加入0. 1ml的檢查用水作為陰性對(duì)照。加樣 結(jié)束后，將蛍試劑用醫(yī)用膠布封口，輕輕振動(dòng)混勻，連同試管架放入37°c水浴或 適宜恒溫器中，試管架保持水平狀態(tài)，保溫60分鐘。2-5.結(jié)果記錄及計(jì)算方法內(nèi)毒索濃度0. 50.250. 1250. 06c反應(yīng)終點(diǎn)平1行2管3數(shù)4xc=lg-1(ex/4)二 lg_1(lg + lg + lg + lg )/4)二e

5、u/ml三、樣品常規(guī)檢查1、限值l=0. 15eu/mg （中國藥典 2005 版）。2、計(jì)算ivdmvd=cl/ 入=100x0. 15h-0. 25=603、供試品溶液的制備將樣品利巴韋林注射液稀釋到30倍和60倍備用。 、取原溶液0. 2ml+細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水1. 8 ml,得10倍; 、取第步溶液0. 5ml+細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水1.0ml,得型倍； 、取第步溶液1. 0ml+細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水1.0ml,得阻倍；4、蛍試劑的準(zhǔn)備取規(guī)格為0. 1ml/支的蛍試劑8支，放在試管架上，排成4列，每列2支。輕 彈瓶壁使粉末落入瓶底，用75%酒精棉球擦拭后啟開備用，防止玻璃屑落入瓶內(nèi)。 每支加入0. lnil檢查用水溶解，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)瓶壁，使內(nèi)容物充分溶解。4、操作加樣4-1.樣品陽性對(duì)照：（做2管）取利巴韋林注射液的30倍稀釋液和濃度為1. oeu/ml的內(nèi)毒素稀釋液各0. 3ml混 合均勻,取該混合液0. bnl加入已經(jīng)復(fù)溶好的蛍試劑（x =0. 25eu/ml）中即可。4-2、陽性對(duì)照:（做2管）取0. lml濃度為0. 5eu/ml的內(nèi)毒素稀釋液加入已經(jīng)復(fù)溶好的蛍試劑（入二0. 25eu/ml） 中即可。4-3、樣品檢查：（做2管）取利巴韋林注射液的60倍稀釋液加入已經(jīng)復(fù)溶好的崔試劑（入二025eu/nil）中即