檢驗(yàn)科常用檢測(cè)方法原理

1、檢測(cè)方法解釋電化學(xué)發(fā)光法ecli electro-chemiluminescence immunoassay 免疫反應(yīng)中形成三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記抗體-抗原 -抗體或者標(biāo)記抗原-抗體復(fù)合物，通過生物素-鏈霉素結(jié)合至微粒體上并轉(zhuǎn)移至電極處，附加于電極的電壓使三聯(lián)吡啶釕產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，強(qiáng)度與樣本中的待測(cè)抗原濃度成正比或反比。速率法rate method 樣本中的酶催化底物反應(yīng)生成有色產(chǎn)物，引起吸光度變化，單位時(shí)間內(nèi)的吸光度變化與酶含量呈正比。葡萄糖氧化酶法god glucose oxidase method 葡萄糖氧化酶能將葡萄糖氧化成葡萄糖酸和過氧化氫。在色原性氧受體 (如聯(lián)大茴香胺， 4氨基安替比林偶聯(lián)

2、酚)的存在下，過氧化物酶催化過氧化氫，氧化色素原，生成紅色化合物。其色澤深淺在一定范圍內(nèi)與葡萄糖濃度成正比?；瘜W(xué)發(fā)光法chemiluminescent immunometeic assay 免疫反應(yīng)中形成的抗原抗體復(fù)合物包被于固相載體表面，其上標(biāo)記的堿性磷酸酶催化底物反應(yīng)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光免疫比濁法immunonephelometry 在一定量的抗體中分別加入遞增量的抗原，經(jīng)一定時(shí)間后形成抗原抗體復(fù)合物，用濁度計(jì)測(cè)量反應(yīng)液體的濁度，并由此推算樣品中的抗原含量?；瘜W(xué)法chemical method of analysis 依賴于特定的化學(xué)反應(yīng)及其計(jì)量關(guān)系來對(duì)物質(zhì)進(jìn)行分析的方法，主要包括重量分析法和滴定

3、分析法，以及試樣的處理和一些分離、富集、掩蔽等化學(xué)手段。放射免疫法ria radioimmunoassay 放射性同位素標(biāo)記的抗原（簡(jiǎn)稱“標(biāo)記抗原”）和非標(biāo)記抗原 （標(biāo)準(zhǔn)抗原或待測(cè)抗原）同時(shí)與數(shù)量有限的特異性抗體之間發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合（抗原抗體反應(yīng)） 。反應(yīng)后分離并測(cè)量放射性而求得未標(biāo)記抗原的量。酶聯(lián)免疫吸附法elisa enzyme-linked immunosorbent assay 酶分子與抗抗體分子共價(jià)結(jié)合，滴加底物后，底物可在酶作用下出現(xiàn)顏色反應(yīng)。間接免疫熒光法ifl indirect immunofluorescence 以熒光素為標(biāo)記物測(cè)定血清中抗體的免疫測(cè)定技術(shù)。高效液相色譜法hp

4、lc high efficiency liquid chromatography 樣本各組分由于性質(zhì)不同，在色譜住中的保留時(shí)間也不相同。在特定的壓力和流動(dòng)相條件下，各組分會(huì)在各自對(duì)應(yīng)的時(shí)間被洗脫。檢測(cè)特定時(shí)間的洗脫物，就可以得到目標(biāo)物的量。流式細(xì)胞術(shù)fcm flow cytometry 主要是測(cè)量群體中單個(gè)細(xì)胞經(jīng)適當(dāng)染色后其成分所發(fā)出的散射光和熒光， 經(jīng)染色的細(xì)胞在懸濁液中以單形流過高強(qiáng)度光源的焦點(diǎn)，當(dāng)每個(gè)細(xì)胞經(jīng)過焦點(diǎn)時(shí)，發(fā)出一束散射光或熒光。它們經(jīng)過過濾及光鏡系統(tǒng)收集到達(dá)一個(gè)光電檢測(cè)器（光電倍增管或一個(gè)固態(tài)裝置） ，光檢測(cè)器把散射光定量轉(zhuǎn)化成電信號(hào)，經(jīng)數(shù)字轉(zhuǎn)換器進(jìn)行數(shù)字化后而成整數(shù)，然后進(jìn)行

5、電子存儲(chǔ)，以后數(shù)據(jù)可以調(diào)出顯示和進(jìn)行分析。免疫散射比濁法immunonephelometric assay 樣本中的抗原與包被珠上的抗體反應(yīng)形成大分子的抗原抗體復(fù)合物，檢測(cè)光照射時(shí)被折射，引起特定角度的折射光強(qiáng)度改變。斑點(diǎn)法免疫印跡法western blot 抗原等蛋白樣品經(jīng)過sds- 聚丙烯酰胺凝膠電泳， 轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。熒光酶免法feia fluor euzymelinked immunosorbent assay 以熒光物質(zhì)標(biāo)記的抗體進(jìn)

6、行抗原檢測(cè)的技術(shù)。pcr- 反向點(diǎn)雜交pcr-reverse dot blot hybridization 先將帶用的探針分別點(diǎn)到硝酸纖維素膜或尼龍膜上，再將待測(cè)的dna 樣本與之雜交，待測(cè)樣本與具有同源序列的探針結(jié)合，再經(jīng)相應(yīng)的反應(yīng)顯出雜交信號(hào)。免疫凝集法immune agglutination 特異性的抗原與相應(yīng)抗體反應(yīng)，出現(xiàn)肉眼可見的凝集顆粒。實(shí)時(shí)熒光 pcr 法 real-time fluorescent pcr 在 pcr 反應(yīng)體系中加入熒光基因，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)檢測(cè)整個(gè) pcr 過程。免疫層析法immunochromatography 將單克隆技術(shù)和免疫色譜分離技術(shù)結(jié)合起來的一

7、種免疫學(xué)診斷方法。生物芯片法bio-chip detection 將大量探針分子固定于支持物上后與標(biāo)記的dna 樣品分子進(jìn)行雜交，通過檢測(cè)每個(gè)探針分子的雜交信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)而獲取樣品分子的數(shù)量和序列信息。鏡檢法microscopic examination 利用顯微鏡對(duì)人體的排泄物、分泌物、脫落細(xì)胞和人體組織等進(jìn)行分析判斷，來診斷人體疾病的方法。熱沉淀反應(yīng)法heat test method 本-周氏蛋白在一定ph 條件下加熱至 40-60 時(shí)有沉淀發(fā)生， 溫度升高至 100 時(shí)，沉淀消失，再冷卻時(shí)又可重新沉淀。羅斯法rous method 在酸性環(huán)境中，尿中含有高鐵離子（fe3+）時(shí)可與亞鐵氰化物作

8、用，產(chǎn)生藍(lán)色的亞鐵氰化鐵沉淀。酶法 enzymatic analysis 利用酶催化一系列生物化學(xué)反應(yīng)，最終產(chǎn)生可用現(xiàn)有檢測(cè)方法測(cè)定的物質(zhì)的技術(shù)。染色體 g 帶分析g banding 將染色體標(biāo)本用堿、胰蛋白酶或其他鹽溶液處理后，再用 giemsa染液染色，在普通顯微鏡下，可見深淺相間的帶紋，通過條紋來識(shí)別染色體的異常。染色體 r 帶分析r banding r 帶所顯示之深淺帶紋區(qū)域正好與g 帶之帶紋相反。 在 g 帶染色體的兩末端都不顯示深染，而在r 帶中則被染色，因此r 帶有利測(cè)定染色體長(zhǎng)度以及末端區(qū)域結(jié)構(gòu)的變化。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)pcr polymerase chain reaction 在

9、 dna 聚合酶催化下，以母鏈dna 為模板，以特定引物為起始點(diǎn)，通過變性、退火、延伸等步驟，體外復(fù)制出與母鏈模板dna互補(bǔ)的子鏈 dna 過程。是一項(xiàng)dna 體外合成放大技術(shù)，能快速的體外擴(kuò)增任何目的dna。原子吸收法atomic absorption spectrometry 光源輻射出的待測(cè)元素特征譜線通過樣品蒸汽，被待測(cè)元素基態(tài)原子吸收，由發(fā)射光譜減弱的程度，求得樣品中待測(cè)原子的含量。雙縮脲法biuret reaction 雙縮脲在堿性溶液中與二價(jià)銅離子結(jié)合形成紫紅色絡(luò)合物，這樣的呈色反應(yīng)，稱之為雙縮脲反應(yīng)。因?yàn)榈鞍踪|(zhì)含有大量彼此相連的肽鍵（ -co-nh-) ，可在相同條件下發(fā)生與雙

10、縮脲相似的反應(yīng)，生成紫紅色的絡(luò)合物。繼而根據(jù)吸光度變化，測(cè)得蛋白質(zhì)含量。溴甲酚綠法bromocresol green staining 血清白蛋白在ph 4.2 的緩沖液中帶正電荷，在有非離子型表面活性劑存在時(shí)， 可與帶負(fù)電荷的染料溴甲酚綠（bromocresol green，bcg ）結(jié)合形成藍(lán)綠色化合物復(fù)合物，其顏色深淺與白蛋白成正比。計(jì)算法calculation method 根據(jù)先前檢測(cè)獲得的數(shù)據(jù)，經(jīng)過數(shù)學(xué)計(jì)算獲得目標(biāo)數(shù)值。礬酸鹽氧化法vanadilcm-acid oxidalion method 在 ph 3 附近，表面活性劑和釩酸作用于血清tbil ，使之氧化成膽綠素，使膽紅素所特

11、有的黃色減少，由此測(cè)定吸光度的變化求出血清中總膽紅素的濃度。當(dāng)試劑中缺少表面活性劑時(shí)，釩酸只作用于血清中結(jié)合膽紅素，此時(shí)測(cè)定吸光度下降值求出血清中結(jié)合膽紅素的濃度。循環(huán)酶法enzymatic cycling assay 在 nad 存在下，各種膽汁酸c3上 羥基脫氫生成羰基，nad被還原為 nadh 。在黃素酶的存在下，nadh 氧化為 nad ，而共存的碘化硝基四氮唑（int）還原為紫紅色甲臢。甲臢的生成量與血清中總膽汁酸含量成正比。ld-l 法乳酸脫氫酶催化的反應(yīng)乳酸丙酮酸（ l p） ，伴有還原輔酶（na d h ）生成，導(dǎo)致吸光度變化。據(jù)此變化可以測(cè)得乳酸脫氫酶活性。chod-pap

12、法血清中的膽固醇酯（ce）被膽固醇酯水解酶（ceh ）水解成游離膽固醇（ chol ） ，后者被膽固醇氧化酶（chod ）氧化成 4膽甾烯酮并產(chǎn)生過氧化氫，再經(jīng)過氧化物酶 （pod ）催化 4氨基安替比林與酚（三者合稱pap） ，生成紅色醌亞胺色素（trinder ） 。吸光度與標(biāo)本中tc 含量成正比。gpopap 法用高效的微生物脂蛋白脂肪酶（lpl ）使血清中tg 水解成甘油與脂肪酸，將生成的甘油用甘油激酶及三磷酸腺苷磷酸化，以磷酸甘油氧化酶（ gpo ）氧化 3磷酸甘油（g3p） ，然后以過氧化物酶（ pod ） 、4氨基比林（ 4aap ） 與4氯酚（三者合稱 pap） 顯色， 測(cè)定所

13、生成的h2o2 ， 故本法簡(jiǎn)稱gpo pap 法。勻相測(cè)定法dgkc 法德國(guó)臨床化學(xué)學(xué)會(huì)(dgkc) 推薦的方法。離子選擇電極法ion selective electrode method 利用特異的固態(tài)膜電極對(duì)標(biāo)本水相中活化離子產(chǎn)生選擇性響應(yīng)，根據(jù)產(chǎn)生的電位信號(hào)測(cè)定含量。偶氮砷法arsenazo photometric method 偶氮砷可與多種化合物形成有顏色的絡(luò)合物，且吸光度與目標(biāo)化合物的含量成正比。磷鉬酸法folin-wu method 利用葡萄糖的還原性， 將堿性銅試劑中的二價(jià)銅(cu2+)還原成一價(jià)銅(cu+)，然后 cu+可使磷鉬酸還原呈藍(lán)色，其藍(lán)色的深度與血濾液中葡萄糖的濃度

14、成正比，經(jīng)紫外比色可測(cè)定含量。二甲苯胺蘭比色法xylidyl blue 在堿性條件下，鎂離子和二甲苯胺藍(lán)形成紫色絡(luò)和物。加入gedta 和鈣形成絡(luò)和物， 使本反應(yīng)可特異監(jiān)測(cè)鎂。紫色深淺和鎂濃度呈正比。脲酶法urease method 利用脲酶催化尿素水解生成銨鹽，銨鹽可用納氏試劑直接顯色、酚-次氯酸鹽顯色或酶偶聯(lián)反應(yīng)顯色。苦味酸法jaff reaction-rate method 尿、血清中的肌酐與苦味酸鹽作用，生成黃紅色的苦味酸肌酐復(fù)合物。根據(jù)吸光度測(cè)定指標(biāo)成分含量。對(duì)硝基酚比色法p-nitrophenol -n乙酰氨基葡萄糖苷酶可使對(duì)硝基酚-n-乙酰 -d 氨基葡萄colorimetric

15、 assay 糖水解，釋放出游離的對(duì)硝基酚，在堿性溶液中顯色，其顏色深淺與酶活力有關(guān)。電泳法electrophoresis 根據(jù)帶電粒子在電場(chǎng)中定向運(yùn)動(dòng)，可將可溶性被測(cè)物的各個(gè)蛋白進(jìn)行分離，對(duì)分離后的凝膠進(jìn)行染色掃面分析。血常規(guī)自動(dòng)分析blood routine analysis 血細(xì)胞分析儀對(duì)血細(xì)胞的計(jì)數(shù)，是用電子學(xué)的方法把細(xì)胞數(shù)目和其他信息，以數(shù)碼管、打印卡片、粒度分布直方圖或散點(diǎn)圖的方式顯示出來。干化學(xué)法dry chemistry method 除了被分析物以外的反應(yīng)組分均附著于紙質(zhì)載體上，加入被分析物后發(fā)生反應(yīng)并顯色，可通過肉眼或儀器進(jìn)行比色。免疫膠體金法icg immune coll

16、oidal gold technique 是以膠體金作為作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體檢測(cè)的一種免疫標(biāo)記技術(shù)。免疫滲濾試驗(yàn)ifa immunofiltration assay 以微孔膜為固相載體，其上固定有已知的特異性抗原或抗體，將其裝入特殊的滲濾裝置中。加入的膠體金標(biāo)記的抗體(抗原 )也在滲濾中與已結(jié)合在膜上的抗原(抗體 )相結(jié)合。因膠體金本身呈紅色，陽性反應(yīng)即在膜中央顯示紅色斑點(diǎn)，陰性反應(yīng)則不會(huì)出現(xiàn)這種紅色斑點(diǎn)。免疫層析試驗(yàn)ica immunochromatographic assay, 將膠體金標(biāo)記的抗體先固定于硝酸纖維膜的某一區(qū)帶，當(dāng)該干燥的硝酸纖維素膜一端浸入樣品后，由于毛細(xì)管作用，樣

17、品將沿著該膜向前移動(dòng)，當(dāng)移動(dòng)至固定有抗體的區(qū)域時(shí)，樣品中相應(yīng)的抗原即與該抗體發(fā)生特異性結(jié)合。若用免疫膠體金可使該區(qū)域顯示一定的顏色，從而實(shí)現(xiàn)特異性的免疫診斷。染料結(jié)合終點(diǎn)法dye-binding method 利用來源相同的蛋白質(zhì)和堿性（或酸性）氨基酸含量大體相同這一特點(diǎn)，加入過量的酸性（或堿性）染料，使其和蛋白質(zhì)形成不溶性鹽而沉淀析出，以分光光度計(jì)測(cè)定反應(yīng)前后溶液和透光度，然后根據(jù)計(jì)算出來的結(jié)合染料量求得蛋白質(zhì)含量。試管法tube method 在試管中完成完成對(duì)標(biāo)本中目標(biāo)成分含量的一類方法。微柱凝膠免疫法mgia micro-column gel immunoassay, 在微柱凝膠管內(nèi)的

18、反應(yīng)中，紅細(xì)胞和相應(yīng)抗體結(jié)合后，形成紅細(xì)胞凝集團(tuán)塊。在一定的離心力作用下，未結(jié)合抗體的紅細(xì)胞沉降至凝膠管底，而形成凝集團(tuán)塊的則將被凝膠截留在表面或膠中。魏氏法westergren 將一定量的抗凝全血灌注于特制的血沉管中，直立于血沉架上1h后讀取紅細(xì)胞下沉后所暴露出的血漿段高度。乙醚萃取法extraction 利用溶質(zhì)在互不相溶的溶劑里溶解度的不同，用乙醚將目標(biāo)成分從樣品中提取出來的操作方法。熒光原位雜交fish fluorescence in situ hybridization 將 dna( 或 rna) 探針用特殊的核苷酸分子標(biāo)記，然后將探針直接雜交到染色體或dna 纖維切片上， 再用與熒

19、光素分子偶聯(lián)的單克隆抗體與探針分子特異結(jié)合，檢測(cè)dna 序列在染色體或dna 纖維切片上的定性、定位、相對(duì)定量分析。采集注意事項(xiàng)1、正確的采集標(biāo)本是保證檢驗(yàn)質(zhì)量的基礎(chǔ)。要注意以下問題：1) 避免干擾物污染，特別是定量分析標(biāo)本；2) 標(biāo)本采集部位和方法要正確；3) 標(biāo)本標(biāo)識(shí)一定要清晰無誤；4) 無人為的溶血和混濁因素：如收集標(biāo)本用力震蕩或用玻璃棒及木棍攪拌會(huì)導(dǎo)致溶血；餐后采血會(huì)出現(xiàn)脂血而致血清、血漿混濁。5) 合理使用抗凝劑及防腐劑；6) 收集區(qū)溫度最好不超過20；7) 微生物檢驗(yàn)標(biāo)本采集嚴(yán)格無菌概念；8) 標(biāo)本采集后要盡快送至實(shí)驗(yàn)室。2、標(biāo)本采集時(shí)間：1) 空腹標(biāo)本：一般指空腹8h 后采集的標(biāo)本。清晨空腹血液標(biāo)本常用于臨床生化定量測(cè)定，受飲食、體力活動(dòng)、生理活動(dòng)等的影響較小，易于發(fā)現(xiàn)和觀察病理情況，而且重復(fù)性較好。2) 隨時(shí)或急診標(biāo)本：指無時(shí)間限制或無法規(guī)定時(shí)間而必須采集的標(biāo)本，被檢者一般無法進(jìn)行準(zhǔn)備。 隨時(shí)或急診標(biāo)本主要用于體內(nèi)代謝比較穩(wěn)定以及受體內(nèi)因素干擾少的物質(zhì)的檢查，或者急診、搶救病人必須做的檢查。3) 指定時(shí)間標(biāo)本：即指定采集時(shí)間的標(biāo)本，根據(jù)不同的檢測(cè)要求有不同的指定時(shí)間，如24h 尿蛋