諾氟沙星膠囊微生物限度檢查法驗(yàn)證報(bào)告1

1、山西太原藥業(yè)有限公司諾氟沙星膠囊微生物限度檢查法驗(yàn)證報(bào)告文件編碼：ty-gsb-yz (02) -013-04二零一六年一月驗(yàn)證立項(xiàng)申請(qǐng)表立項(xiàng)部門質(zhì)量部qc申請(qǐng)日期年 月曰立項(xiàng)題口諾氟沙星膠囊微生物限度檢查法方法學(xué)驗(yàn)證驗(yàn)證原因?yàn)榇_保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，可靠性及檢查方法的完整性，對(duì)產(chǎn)品檢驗(yàn) 方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證是極為重要的措施，因此，我們對(duì)本品的無(wú)菌檢 查法進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證。驗(yàn)證要求及目的：按照2015年版中國(guó)藥典四部通則微牛物限度檢查法規(guī)定內(nèi)容進(jìn)行驗(yàn)證。為 確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，定期對(duì)檢驗(yàn)方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證是極為重要的措 施。立項(xiàng)負(fù)責(zé)人簽名：年 月口質(zhì)量保證部意見(jiàn)簽名：年 月曰驗(yàn)證小組負(fù)責(zé)

2、人意見(jiàn)簽名：年 月口編制驗(yàn)證方案的人員：驗(yàn)證完成要求及日期：嚴(yán)格按照驗(yàn)證方案的內(nèi)容進(jìn)行試驗(yàn)并進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。要求在年 月 日前完成。驗(yàn)證小組負(fù)責(zé)人簽名：年 月日備注：目錄1驗(yàn)證目的12范圍13責(zé)任14內(nèi)容15驗(yàn)證方法15.1供試品15.1.1菌種名稱及來(lái)源25.1.2培養(yǎng)基與試劑名稱、批號(hào)及來(lái)源25.1.3儀器與設(shè)備252菌液的制備35.3菌液計(jì)數(shù)45.4計(jì)數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢查45.5供試液制備556需氧菌、霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證5.7控制菌檢查方法驗(yàn)證 6試驗(yàn)結(jié)論7偏差97.1偏差報(bào)告98驗(yàn)證評(píng)價(jià)及建議99驗(yàn)證報(bào)告：1010驗(yàn)證證書101驗(yàn)證目的根據(jù)中國(guó)藥典2015年版四部通則微生物限度檢查

3、法要求，為保證檢 驗(yàn)質(zhì)量，確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，對(duì)諾氟沙星的微生物限度檢查法 進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。本驗(yàn)證方法適用于供試品的微生物限度檢查法方法驗(yàn)證。3責(zé)任部門姓名職責(zé)質(zhì)量部蔚曉娟負(fù)責(zé)驗(yàn)證項(xiàng)目的申請(qǐng)、驗(yàn)證方案的編寫和驗(yàn)證的實(shí)施質(zhì)量部李海晉負(fù)責(zé)驗(yàn)證項(xiàng)目的實(shí)施質(zhì)量部張慧慧負(fù)責(zé)驗(yàn)證項(xiàng)目的實(shí)施質(zhì)量部高彥紅驗(yàn)證小組負(fù)責(zé)人質(zhì)量部王雅玲負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的審核、項(xiàng)目立項(xiàng)的批準(zhǔn)、驗(yàn)證的組織實(shí) 施和驗(yàn)證報(bào)告的批準(zhǔn)質(zhì)量部劉伯梅負(fù)責(zé)驗(yàn)證報(bào)告的批準(zhǔn)和偏差的調(diào)查4內(nèi)容驗(yàn)證方法需進(jìn)行3個(gè)不同批次的產(chǎn)品驗(yàn)證并且結(jié)果都符合規(guī)定時(shí)，該方 法才可以用于日后日常檢驗(yàn)。5驗(yàn)證方法根據(jù)中國(guó)藥典2015版四部通則微生物限度檢查法規(guī)格： 10

4、ml5.1供試品諾氟沙星膠囊批號(hào) 1601011601021601035.1.1種名稱及來(lái)源枯草芽孑包桿菌(cmcc(b)63501)、 大腸埃希菌cmcc (b) 44102)、 黑曲霉(cmcc (f) 98003) 金黃色葡萄球菌(cmcc (b) 26003) 白色念珠菌(cmcc (f) 98001) 銅綠假單胞菌cmcc (b) 10104)以上菌種均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。5.1.2培養(yǎng)基與試劑名稱、批號(hào)及來(lái)源胰酪大豆腺瓊脂培養(yǎng)基151109胰酪大豆腺液體培養(yǎng)基151112 沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基151117ph7.0氯化鈉蛋白陳緩沖液150313以上培養(yǎng)基均由 北京三藥科技

5、開(kāi)發(fā)公司 提供。5丄3儀器與設(shè)備上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠spx-250b-z生化培養(yǎng)箱:mjx-250b-z霉菌培養(yǎng)箱:5.2菌液的制備(1) 接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孑包桿菌、大腸埃希菌 的新鮮培養(yǎng)物至牒酪大豆腺液體培養(yǎng)基中或牒酪大豆腺瓊脂培養(yǎng)基上，30 35°c培養(yǎng)1824小時(shí)，上述培養(yǎng)物用ph7.0氯化鈉蛋片豚緩沖液或0.9%無(wú) 菌氯化鈉溶液制成每lml含菌數(shù)小于1 oocfu的菌懸液。(2) 接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中或沙氏葡 萄糖瓊脂培養(yǎng)基上，2025°c培養(yǎng)4872小時(shí)，上述培養(yǎng)物用ph

6、7.0氯化 鈉蛋白腺緩沖液或0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每lml含菌數(shù)小于1 oocfu的菌 懸液。(3) 接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基上，20 25°c培養(yǎng)57天，加35ml含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的ph7.0氯化 鈉蛋白月東緩沖液或0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將泡子洗脫。然后采用適宜的方 法吸出抱子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，用含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的ph7.0 氯化鈉蛋白腺緩沖液或0.9%的無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml含抱子數(shù)小于 1 oocfu的孑包子懸液。菌懸液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用，若保存在28°c, 可在24

7、小時(shí)內(nèi)使用。黑曲霉泡子懸液可保存在28°c,在驗(yàn)證過(guò)的貯存期 內(nèi)使用。5.3菌液計(jì)數(shù)取金黃色葡萄球菌、枯草芽孑包桿菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌各小于1 oocfu分別注入無(wú)菌平皿屮，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，立即傾注不高 于45°c的朕酪大豆腺瓊脂培養(yǎng)基1520ml, 3035°c培養(yǎng)不超過(guò)3天。取 白色念珠菌、黑曲霉各小于1 oocfu分別注入無(wú)菌平皿屮，每株試驗(yàn)菌平行制 備2個(gè)平皿，立即傾注不高于45°c的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基約1520ml, 2025°c,培養(yǎng)不超過(guò)5天，培養(yǎng)計(jì)數(shù)見(jiàn)表5.1表5.1活菌計(jì)數(shù)菌種名稱金黃色葡萄球菌大腸埃希菌

8、銅綠假單胞菌枯草芽泡桿菌白色念珠 菌黑曲霉菌稀釋級(jí)w6w6w610'610-510'618893837673622748489826474平均值818&586796&568菌液加入量1ml1ml1ml1ml1ml1ml54計(jì)數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢查取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孑包桿菌、各501 oocfu分別注入無(wú)菌平皿屮，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，立即傾注不高于45°c的胰 酪大豆月東瓊脂培養(yǎng)基1520ml, 3035°c培養(yǎng)3天。取h色念珠菌、黑曲霉 各501 oocfu分別注入無(wú)菌平皿屮，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，立即傾 注不

9、高于45°c的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基約1520ml, 2025°c,培養(yǎng)5天。被檢固體培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng) 在0.52范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落一致；被檢液體 培養(yǎng)基管與對(duì)照培養(yǎng)基管比較，試驗(yàn)菌應(yīng)生長(zhǎng)良好。結(jié)果記錄見(jiàn)表5.2表5.2計(jì)數(shù)培養(yǎng)基的菌落數(shù)(1ml)種名稱培名稱金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌枯草芽抱桿菌菌種名稱培養(yǎng)名稱、白色念珠菌黑曲霉胰酪大 豆腺瓊 脂培養(yǎng) 基平皿1858290沙氏葡 萄糖瓊 脂培養(yǎng) 基平皿18183平皿2878487平皿27880平均值86838&5平均值79.581.5對(duì)照培養(yǎng)基平皿192

10、9095對(duì)照培養(yǎng)基平皿19491平皿2938991平皿29094平均值92.589.593平均值9292.5菌回收率0.930.930.95菌回收率0.860.88根據(jù)表5.2結(jié)果判定培養(yǎng)基的適用性檢查是否符合規(guī)定。5.5供試液制備本品為抑菌型藥物，需氧菌、霉菌和酵母菌采用薄膜過(guò)濾法，取供試品 10g(10ml),加ph7.0無(wú)菌氯化鈉蛋白月東緩沖液，或ph7.2磷酸鹽緩沖液, 或胰酪大豆月東液體培養(yǎng)基溶解或稀釋制成1:10供試液。若需要，調(diào)節(jié)供試 液ph值至68。必要時(shí)，用同一稀釋液將供試液進(jìn)一步10倍系列稀釋。56需氧菌、霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證5.6.1試驗(yàn)組：取供試品上清液1ml加0.

11、1%無(wú)菌氯化鈉蛋白腺水溶液至100ml,全量通 過(guò)一次性薄膜過(guò)濾器，用7.0的無(wú)菌氯化鈉-蛋白月東緩沖液沖洗濾膜2次 （100ml/次），最后一次沖洗液加大腸埃希菌液lml,將濾膜貼至相應(yīng)瓊脂培 養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)。5.6.2菌液組取上述各菌液lml用相應(yīng)的培養(yǎng)基倒平板，每種菌液平行兩皿。5.6.3供試品對(duì)照組取供試液lml,加入0.1%無(wú)菌氯化鈉蛋口腺水溶液100ml,全量通過(guò)一 次性薄膜過(guò)濾器，用ph7.0氯化鈉蛋口腺緩沖液沖洗濾膜兩次，過(guò)濾兩份， 濾膜過(guò)濾面向上分別置于朕酪大豆腺瓊脂培養(yǎng)基平板和沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng) 基平板上，作為需氧菌菌和霉菌計(jì)數(shù)樣品對(duì)照。5.6.4稀釋劑對(duì)照組取無(wú)菌氯化鈉

12、-蛋白月東緩沖液100ml,過(guò)濾，用pii7.0氯化鈉-蛋白月東緩 沖液沖洗兩次，每次loonil,最后一次加入試液菌液，分別置于相應(yīng)培養(yǎng)基 平板上培養(yǎng)。5.6. 5培養(yǎng)溫度胰酪大豆月東瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度3035°c,培養(yǎng)時(shí)間35天，沙氏葡萄 糖瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度20-25°c，培養(yǎng)時(shí)間57天。5.6.6驗(yàn)證結(jié)果（回收率）計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)中，采用薄膜過(guò)濾法時(shí)，試驗(yàn)組菌落數(shù)減去供試品對(duì)照 組菌落數(shù)的值與菌液組菌落數(shù)的比值應(yīng)在0.52范圍內(nèi)。結(jié)果記錄見(jiàn)表5.35.6.7結(jié)論根據(jù)上述各試驗(yàn)菌的回收率結(jié)果，最終判定檢查方法是否適合供試品的 需氧菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法。5,7控

13、制i檢驗(yàn)方法驗(yàn)證5.7.1控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查菌液制備：同5. 2項(xiàng)下制得菌液的方法。控制菌檢查中所用培養(yǎng)基的適用性檢查結(jié)果記錄見(jiàn)表5.4表5. 4培養(yǎng)基名稱促生長(zhǎng)能力抑制能力指示能力麥康凱瓊脂培養(yǎng)基分別接種不大于 loocfu大腸埃希菌 液于麥康凱瓊脂培 養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基 中置3035°c培養(yǎng) 1872小吋，觀察 結(jié)果。用涂布法接種不大于loocfu 大腸埃希菌于麥康凱瓊脂培 養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基平板上置 3035°c培養(yǎng)1872小時(shí), 觀察結(jié)果。檢驗(yàn)結(jié)果麥康凱 液體培 養(yǎng)基分別接種不大于 loocfu大腸埃希菌 于麥康凱液體培養(yǎng) 基和對(duì)照培養(yǎng)基中 置4244

14、76;c培養(yǎng) 2448小吋，觀察 結(jié)果。分別接種不少于 loocfu金黃色葡萄 球菌于麥康凱液體 培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng) 基中置4244°c培 養(yǎng)2448小時(shí),觀 察結(jié)果。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定以上培養(yǎng)基的適用性檢查是否符合規(guī)定，是否可用于測(cè)定 本品的控制菌檢查。5.7.2控制菌檢查方法驗(yàn)證5.7.2.1試驗(yàn)組取供試液lml,加入0.1%無(wú)菌蛋口腺水溶液100ml,全量通過(guò)一次性薄膜過(guò) 濾器，用ph7.0氯化鈉蛋口腺緩沖液沖洗濾膜兩次，最后一次加入大腸埃希菌 菌液1ml,取出濾膜接入100ml膜酪大豆腺液體培養(yǎng)基中。5.7.2.2陰性對(duì)照組取稀釋液lml,加入0.1%無(wú)菌蛋口腺水溶液100ml,

15、全量通過(guò)一次性薄膜過(guò) 濾器，用ph7.0氯化鈉蛋口腺緩沖液沖洗濾膜兩次，取出濾膜接入100m朕酪 大豆月東液體培養(yǎng)基屮。5.7.2.3陽(yáng)性對(duì)照組取大腸埃希菌菌液lml,加入0.1%無(wú)菌蛋口腺水溶液100ml,全量通過(guò)一次 性薄膜過(guò)濾器，用ph7.0氯化鈉蛋口腺緩沖液沖洗濾膜兩次，取出濾膜接入100m 膜酪大豆月東液體培養(yǎng)基中。5723培養(yǎng)取上述培養(yǎng)物lml,接種至100ml麥康凱液體培養(yǎng)基中，4244°c培養(yǎng)24 48小時(shí)，取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上，3035°c 培養(yǎng)1872小時(shí)，若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長(zhǎng)，應(yīng)進(jìn)行分離純化及 適宜的鑒定試驗(yàn)

16、，確證是否為大腸埃希菌；若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上沒(méi)有菌落 生長(zhǎng)，或雖有菌落生長(zhǎng)但鑒定結(jié)果為陰性，判供試品未檢出大腸埃希菌。結(jié)果見(jiàn) 表5.5表5.5大腸埃希菌檢查結(jié)果試驗(yàn)組陰性對(duì)照組陽(yáng)性對(duì)照組大腸埃希菌+根據(jù)表5的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，判定試驗(yàn)方法是否可用于本品的控制菌檢查。6試驗(yàn)結(jié)論按照中國(guó)藥典2015版要求我們對(duì) 諾氟沙星膠囊 的微生物限度檢 查法進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證。結(jié)果各項(xiàng)指標(biāo)規(guī)定，證明本方案適合本品的微生物限度檢查。7偏差驗(yàn)證過(guò)程中如果出現(xiàn)偏差，應(yīng)立即通知驗(yàn)證小組并對(duì)偏差進(jìn)行詳細(xì)記錄，分 析偏差產(chǎn)生的根木原因并提出解決方法。所有偏差得到有效處理后，驗(yàn)證方可進(jìn) 入下一步驟。7.1偏差報(bào)告偏差報(bào)告偏差號(hào)偏

17、差描述及建議的糾正措施驗(yàn)證人員簽名h期糾正措施的審核和批準(zhǔn)qa主任簽名日期結(jié)果跟蹤qa主任簽名h期糾正措施產(chǎn)生積極的效果？是否確認(rèn)質(zhì)量管理部jj h驗(yàn)證小組年月 日8驗(yàn)證評(píng)價(jià)及建議驗(yàn)證評(píng)價(jià)：在整個(gè)驗(yàn)證工作中嚴(yán)格按照驗(yàn)證方案進(jìn)行了驗(yàn)證，中間未對(duì)驗(yàn)證方案 進(jìn)行修改，通過(guò)對(duì)諾氟沙星膠囊三個(gè)不同批次的微牛物限度檢查法驗(yàn)證數(shù)據(jù)及結(jié) 果的評(píng)價(jià)分析，按照薄膜過(guò)濾法對(duì)木品進(jìn)行需氧菌、霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)是可行的, 按照驗(yàn)證的方法檢查大腸埃希菌也是可行的。這次在整個(gè)驗(yàn)證過(guò)程中，較詳細(xì)地 填寫了各種記錄。建議：以后在木品檢驗(yàn)過(guò)程中，須加強(qiáng)偏差的發(fā)現(xiàn)和分析，以便及時(shí)釆取糾正和 預(yù)防措施。評(píng)價(jià)人：日期： 年 月 日9驗(yàn)證

18、報(bào)告:在驗(yàn)證領(lǐng)導(dǎo)小組的組織下，對(duì)諾氟沙星膠囊微生物限度檢查法進(jìn)行了驗(yàn)證， 于 年 月 日開(kāi)始按照驗(yàn)證方案實(shí)施了驗(yàn)證并于 刀 日結(jié)束了驗(yàn)證工 作。按驗(yàn)證方案的驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)諾氟沙星膠囊的三批（批號(hào)：160101、160102、 160103）分別進(jìn)行了需氧菌、霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)驗(yàn)證以及大腸埃希菌檢查法的驗(yàn)證，通過(guò)對(duì)驗(yàn)證數(shù)據(jù)及結(jié)果的評(píng)價(jià)分析，按照薄膜過(guò)濾法對(duì)諾氟沙星膠囊 進(jìn)行需氧菌、霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)以及大腸埃希菌檢查是可行的。在整個(gè)驗(yàn)證過(guò)程 中，較詳細(xì)地填寫了各種記錄。報(bào)告人：日期： 年 月 日10驗(yàn)證證書驗(yàn)證證書編號(hào):ty-jsb-yz (06) -013-04驗(yàn)證報(bào)告名稱諾氟沙星膠囊微生物限度檢查法驗(yàn)證驗(yàn)證項(xiàng)目按照驗(yàn)證方案所設(shè)計(jì)的標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)產(chǎn)品的需氧菌、霉菌和酵母菌 計(jì)數(shù)以及大腸埃希菌檢查方法分別驗(yàn)證。驗(yàn)證要求及目的按驗(yàn)證方案的驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)諾氟沙星膠囊三批（批號(hào):16010k 160102、160103、）分別進(jìn)行了需氧