肺結(jié)核患者皰疹病毒感染的檢測(cè)及意義探討

1、肺結(jié)核患者皰疹病毒感染的檢測(cè)及意義探討湖南省邵陽(yáng)市中心醫(yī)院421000摘要：目的探討肺結(jié)核患者皰疹病毒感染的檢測(cè)及臨床意義。方法選取我院收 治45例肺結(jié)核患者作為觀察組，同時(shí)選取38例正常健康人作為對(duì)照組，對(duì)兩組 患者均釆用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)血清中人巨細(xì)胞病毒（hcmv）及單純也疹病毒（hsv i型、ii型）感染的igm抗休，采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清中eb病毒vcaigm抗 體，再采用pcr-southern對(duì)兩組患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中ebv dna表達(dá)進(jìn)行檢 測(cè)。結(jié)果觀察組患者血清hcmv-igm及hsvlgm陽(yáng)性率分別為20.0%, 15.6%, 對(duì)照組分別為5.3%, 0%；兩組比較差異明顯p

2、<0.05；觀察組vca-igm陽(yáng)性率 為6.7%,對(duì)照組未檢出vcalgm陽(yáng)性,兩組比較無(wú)明顯差異,p>0.05；觀察 組ebv dna陽(yáng)性率為33.3%,對(duì)照組為7.9%,兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， p<0.01o結(jié)論 肺結(jié)核患者存在較高的hcmv、hsv及ebv活動(dòng)性感染，皰疹 病毒感染與肺結(jié)核患者病情有一定聯(lián)系。關(guān)鍵詞：肺結(jié)核；皰疹病毒感染；檢測(cè)結(jié)核病對(duì)人類健康產(chǎn)牛嚴(yán)重危害，結(jié)核病是一種慢性傳染疾病。近年 來(lái)，結(jié)核病的發(fā)病率明顯升高。有研究表明，肺結(jié)核患者一般免疫功能較低，可 能存在皰疹病毒活動(dòng)性感染，加重了結(jié)核病患者病情1。皰疹病毒一般表現(xiàn)

3、為 潛伏感染，一旦患者免疫功能下降即可引發(fā)激活感染。為更好了解皰疹病毒對(duì)結(jié) 核病病情的影響，木研究對(duì)我院收治的45例結(jié)核病患者的血清進(jìn)行檢測(cè)，重點(diǎn) 檢測(cè)hcmv-igm及hsvlgm （ i型、1型）和eb病毒vca-igm及外周血單個(gè)核 細(xì)胞中ebv-dnao現(xiàn)報(bào)道如下。1資料與方法1.1 一般資料選取我院呼吸科門診于2014年7月2015年4月間收治的肺結(jié)核患者 45例，其中男25例,女20例，年齡1879歲,平均年齡(47.4±2.1) 歲。其中繼發(fā)性肺結(jié)核38例，原發(fā)性肺結(jié)核7例。同吋選取正常人38例，其中 男27例，女11例，年齡1778歲，平均(48.1&am

4、p;plusmn;1.9)歲。兩組患者在年 齡、性別等方面比較無(wú)明顯差異，p&gt；0.05,具有臨床可比性。1.2方法1.2.1 igm抗體檢測(cè)分別采集觀察組和對(duì)照組外周血，將血清分離，采用北京貝爾生物工 程有限公司生產(chǎn)的酶聯(lián)免疫法試劑盒對(duì)hcmv抗體(igm)、hsv i型、ii型抗 體(igm)進(jìn)行檢測(cè)，采用深圳市新產(chǎn)業(yè)生物工程有限公司生產(chǎn)的化學(xué)發(fā)光法試 劑盒檢測(cè)血清中eb病毒vca igm抗體，過(guò)程嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行，對(duì)陽(yáng)性和可 疑陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢驗(yàn)。其中hsv的i型、ii型igm抗體只要有一種結(jié)果檢 測(cè)為陽(yáng)性，即hsvlgm判讀為陽(yáng)性。1.2.2 ebv-dna 的檢測(cè)分別

5、采集觀察組和對(duì)照組外周靜脈血，行edta抗凝，將pbmc分離, 加入消化液中，56°c水浴，lh后將其煮沸，持續(xù)15min, 12000r/min離心lomin, 提取上清液。采用ebv bam h i-w區(qū)特異性引物和探針，檢測(cè)提取細(xì)胞dna,上 游引物序列選為5’-ccagacagcagccaattgtc-3,下游引物序列選為 5’-ggtagaagaccccctcttac-3’, pcr 反應(yīng)體積為 30μl,引物含 量20pmol/l, tag酶1.ou, dntp83μmol/lo設(shè)立陰

6、性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照,模板 dna5μl,陰性對(duì)照組采用去離子水，94°c預(yù)變性，持續(xù)5min,再行以下循 環(huán) 30 次：94°c持續(xù) lmin, 60°c持續(xù) 2min, 72°c持續(xù) 3min,最后 72°c持續(xù) 5min, 最后取10μl pct以20g/l瓊脂糖凝膠電泳，時(shí)間為45min,再給予澳化乙錠 染色，于紫外線下進(jìn)行觀察。1.3觀察指標(biāo)觀察兩組患者血清中hcmv及hsv感染的igm及eb病毒vca-igm和外周血單個(gè)核細(xì)胞中ebv dna表達(dá)，并作臨床對(duì)比分析。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)均采用spss13.

7、0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理，計(jì)數(shù)和計(jì)量資料分別采用x2檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為σ二0.05。2結(jié)果觀察組hcmv-igm陽(yáng)性率為20.0%,對(duì)照組為5.3%,兩組比較差異明 顯,p<0.05；觀察組hsv-igm陽(yáng)性率為15.6%,對(duì)照組為0%,兩組比較有顯著 差異，p<005；觀察組vca-igm陽(yáng)性率為6.7%,對(duì)照組未檢出vca-igm陽(yáng)性， 兩組比較無(wú)明顯差異，p&gt；0.05；觀察組ebv dna陽(yáng)性率為33.3%,對(duì)照組為 7.9%,兩組比較差異明顯，p<0.01o詳見表1。3討論結(jié)核病是由結(jié)核桿菌感染導(dǎo)致，人體各個(gè)器官

8、均可累及，但主要侵入 器官是肺部，肺部感染后，可繼發(fā)腦膜、頸淋巴、腸、腹膜等部位感染。此病主 要傳播方式為呼吸道傳播。結(jié)核病發(fā)病時(shí)常伴有全身乏力、低熱、咳血、咳嗽等 癥狀。有研究表明，結(jié)核病的發(fā)生發(fā)展除了與結(jié)核病菌數(shù)量有關(guān)，還有患者機(jī)體 免疫能力密切相關(guān)。研究已證實(shí)，結(jié)核病患者免疫功能存在紊亂，免疫功能 紊亂有可導(dǎo)致皰疹病毒活動(dòng)性感染，繼而加重結(jié)核病情，形成惡性循環(huán)3。皰疹病毒是具有包膜的dna病毒，皰疹病毒感染分為潛伏期和活 動(dòng)性感染，潛伏期是指病毒非活動(dòng)狀態(tài)。目前我國(guó)皰疹病毒感染患者數(shù)量較多。 一般為潛伏感染，無(wú)明顯臨床癥狀，一旦宿主免疫功能下降，即可激活。目 前臨床中熟知的與人類疾病相關(guān)

9、的皰疹病毒主要有單純皰疹病毒i型、單純皰疹 病毒ii型、eb病毒、水痘、帶狀皰疹病毒、hcmv、人類皰疹病毒6型、人類皰 疹病毒7型及人類皰疹病毒8型。近年來(lái)，肺結(jié)核發(fā)病率逐年增加，肺結(jié)核患者 若并發(fā)皰疹病毒，則會(huì)給治療增加難度，影響患者預(yù)后。因此對(duì)肺結(jié)核患者進(jìn)行 皰疹病毒的檢測(cè)，對(duì)于了解皰疹病毒的狀態(tài)及治療方案有重要意義，對(duì)伴有皰疹 病毒活動(dòng)性感染患者不僅要用抗結(jié)核藥物，也需給予抗皰疹病毒類藥物。病毒早期感染和潛伏期激活的重要標(biāo)志之一是血清特異性igm抗體的 出現(xiàn)。本研究中，對(duì)外周靜脈血檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，觀察組hcmv-igm陽(yáng)性率為20.0%, 對(duì)照組為5.3%,兩組比較差異明顯，p&lt

10、;005；觀察組hsv-igm陽(yáng)性率為15.6%, 對(duì)照組為0%,兩組比較有顯著差異，p<0.05o由此可說(shuō)明，肺結(jié)核患者存在 hcmv和hsv活動(dòng)性感染。較多文獻(xiàn)也已證實(shí)，肺結(jié)核患者在機(jī)體免疫功能低下 情況下可引起皰疹病毒活動(dòng)性感染o vca-igm是檢測(cè)ebv原發(fā)感染的重要標(biāo)志, 相關(guān)研究表明，vcalgm僅存在與ebv原發(fā)感染，是檢測(cè)患者的急性期抗體。 而本次研究中觀察組vca-igm陽(yáng)性率為6.7%,對(duì)照組未檢測(cè)vca-igm抗體。本 研究中觀察組ebv dna陽(yáng)性率為33.3%,對(duì)照組為7.9%,兩組比較差異明顯， p<0.01o由此可說(shuō)明，結(jié)核病患者存在潛伏ebv病毒的激活感染風(fēng)險(xiǎn)。故應(yīng)檢 測(cè)ebv-dna載量，明確患者ebv感染情況。參考文獻(xiàn)：周勇，陳思東，汪保國(guó)，等肺結(jié)核病發(fā)病的非生物學(xué)影響因素的流行病學(xué)研 究j中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2008, 3 (3)： 4-6.王欣，翁少凡，祖愛(ài)華，等肺結(jié)核危險(xiǎn)因素病例對(duì)照研究j工業(yè)衛(wèi)生與職業(yè) 病，2011, 37 (4)： 208-213.3 張學(xué)青，王國(guó)民，郁紅，等健康相關(guān)行為與肺結(jié)核發(fā)病的病例對(duì)照研究j中 國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)，2009, 9 (3)： 448-4494 紀(jì)靜，許俊華，徐翻飛，等肺