實(shí)驗(yàn)十二土壤中產(chǎn)抗生素放線菌的分離純化(共3頁(yè))

1、實(shí)驗(yàn)十二 土壤中產(chǎn)抗生素放線菌的分離純化實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、從土壤中分離產(chǎn)抗生素的放線菌。2、抗生素產(chǎn)生菌的抗菌譜測(cè)定。3、掌握微生物的基本操作。實(shí)驗(yàn)原理：放線菌是一類呈菌絲狀生長(zhǎng)，主要以孢子繁殖，革蘭染色為陽(yáng)性的單細(xì)胞原核微生物，是細(xì)菌中的一種特殊類型。放線菌與人類的生產(chǎn)和生活關(guān)系極為密切，目前廣泛應(yīng)用的抗生素約70%是各種放線菌所產(chǎn)生。許多臨床應(yīng)用的抗生素均由土壤中分離的放線菌產(chǎn)生。微生物大量存在與土壤中，其中包括細(xì)菌、放線菌和真菌等，采用選擇性培養(yǎng)基可分離土壤中的放線菌。產(chǎn)抗生素的放線菌經(jīng)液體培養(yǎng)后，其分泌的抗生素存在于離心所得的上清液中，可采用微生物的抑菌試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)，從而篩選到所需的抗生素

2、產(chǎn)生菌。實(shí)驗(yàn)材料：1、土壤 菜園土。2、實(shí)驗(yàn)菌 金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的8h培養(yǎng)物。3、培養(yǎng)基 淀粉瓊脂和淀粉液體培養(yǎng)基。4、其它 10的酚、牛津杯、滅菌生理鹽水、接種環(huán)、無(wú)菌涂棒、酒精燈、無(wú)菌吸管等。實(shí)驗(yàn)方法：一、土壤中放線菌的分離1、配制淀粉培養(yǎng)基 配方一 淀粉瓊脂培養(yǎng)基（高氏培養(yǎng)基） 可溶性淀粉 2克；硝酸鉀 0.1克；磷酸氫二鉀 0.05克；氯化鈉 0.05克；硫酸鎂 0.05克；硫酸亞鐵 0.001克；瓊脂 2克 水 100毫升 先把淀粉放在燒杯里，用5毫升水調(diào)成糊狀后，倒入95毫升水，攪勻后加入其他藥品，使它溶解。加熱到煮沸時(shí)加入瓊脂，不停攪拌，待瓊脂完全溶解后，補(bǔ)足失水。調(diào)整p

3、H值到7.27.4，分裝后滅菌，備用。 配方二 面粉瓊脂培養(yǎng)基 面粉 60克 ；瓊脂 20克；水 1000毫升把面粉用水調(diào)成糊狀，加水到500毫升，放在文火上煮30分鐘。另取500毫升水，放入瓊脂，加熱煮沸到溶解后，把兩液調(diào)勻，補(bǔ)充水分，調(diào)整pH值到7.4，分裝，滅菌，備用。2、土壤懸液梯度稀釋（1）將5.0g土壤加入到50ml滅菌的生理鹽水中，震蕩10min制備土壤懸液。（2）用無(wú)菌吸管吸取1ml土壤懸液，加入到9ml滅菌的生理鹽水中10倍稀釋。（3）按1：10稀釋至10-3、10-4、10-5。3、將3塊滅菌平板分別標(biāo)記10-3、10-4、10-5。4、將高氏1號(hào)培養(yǎng)基加熱溶化，待冷至55

4、-60時(shí)，加入10的酚數(shù)滴，混合均勻。分別吸取0.1ml稀釋液于滅菌平皿中，再加入10-15ml恒溫于55的含有酚的淀粉瓊脂培養(yǎng)基中，輕輕旋轉(zhuǎn)混合均勻。5、平皿倒置于培養(yǎng)箱28恒溫培養(yǎng)一周左右。6、將平皿上的放線菌菌落挑取在淀粉瓊脂平皿上四區(qū)劃線進(jìn)行分離純化，28恒溫培養(yǎng)一周左右，觀察放線菌菌落特征。7、涂片顯微鏡觀察放線菌的菌絲特征。二、抗菌譜測(cè)定1、挑取一個(gè)放線菌的菌落接種到含有250ml淀粉液體培養(yǎng)基的三角瓶，28恒溫培養(yǎng)一周左右。2、將2ml培養(yǎng)8h的金黃色普通球菌和大腸桿菌分別加到200ml滅菌的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中混合均勻，每培養(yǎng)皿中到20ml，凝固后待用。3、在上面培養(yǎng)皿中均勻放入4個(gè)牛津杯，每個(gè)牛津杯中加入1ml放線菌發(fā)酵培養(yǎng)液。培養(yǎng)皿放入37培養(yǎng)箱恒溫培養(yǎng)12h。4、測(cè)量抑菌圈的大小。結(jié)果與討論1、描述從土壤中分離的放線菌菌落的形態(tài)特征，并分別描述細(xì)菌、酵母菌和霉菌的菌落特征。2、描述所分離的放線菌所產(chǎn)生的抗生素的抗菌譜。3、分離放線菌時(shí)在淀粉固體培養(yǎng)基中加入10的酚的作用是什么？設(shè)計(jì)的內(nèi)容或知識(shí)點(diǎn)1、玻璃儀器的清洗和包扎。2、培養(yǎng)基的配制和消毒滅菌。3、放線菌的菌落培養(yǎng)特征的觀察。4、放線菌分離純化方法四區(qū)劃線法。5、微生物的染色方法和顯微鏡觀察。6、微生物