AU系列生化分析儀參數(shù)詳解

1、 AU系列生化儀的部分參數(shù)界面及名詞解釋 AU系列生化儀的部分參數(shù)界面及名詞解釋AU系列生化儀進(jìn)入中國(guó)后，顛覆了以往國(guó)人對(duì)生化儀盤(pán)式進(jìn)樣的理解。AU自帶軌道的設(shè)計(jì)顯得高大上，而且速度一直是AU系列的看家法寶，讓先期進(jìn)入中國(guó)的貝克曼和日立毫無(wú)招架之力。不過(guò)，隨著自動(dòng)生化儀的普及，人們發(fā)現(xiàn)AU的速度并非優(yōu)勢(shì)，結(jié)果的不可靠性開(kāi)始出現(xiàn)，質(zhì)疑聲不斷。AU的攪拌系統(tǒng)和杯沖洗系統(tǒng)一直成為問(wèn)題，污染和滴落甚至漫盤(pán)讓操作者傷透了腦筋，還為此被加拿大藥監(jiān)局召回。當(dāng)然還有它的半導(dǎo)體冰箱問(wèn)題。不過(guò)，任何機(jī)器都會(huì)出問(wèn)題，也都要保養(yǎng)，保養(yǎng)不夠就會(huì)遭到報(bào)應(yīng)?，F(xiàn)在的中國(guó)人恨不得回到石器時(shí)代，拿起來(lái)就用，用完不管。要

2、求所有的機(jī)器都做到召之即來(lái)，來(lái)之能戰(zhàn)，戰(zhàn)之能勝。但就是沒(méi)有保養(yǎng)，也不想維護(hù)，更不用說(shuō)維修了，那是花錢的玩意兒，而前者則是費(fèi)時(shí)費(fèi)力的事情，也是不愿意做。其實(shí)，嚴(yán)格的保養(yǎng)維護(hù)作業(yè)，成本并沒(méi)有增加多少，時(shí)間也花費(fèi)不多，卻能得到穩(wěn)定可信的結(jié)果。所有的生化儀結(jié)果問(wèn)題，大多出在保養(yǎng)和對(duì)設(shè)備的理解上。而在設(shè)備的理解上，相關(guān)名詞的理解最為重要，因?yàn)樗苯右龑?dǎo)你的操作，一旦理解錯(cuò)誤，那么結(jié)果不好也就順理成章了。AU系列生化儀從速度上分為400、800、1600、2000速。從反應(yīng)盤(pán)數(shù)量上分為單盤(pán)和雙盤(pán)，也就是800速以下和以上的區(qū)別。單反應(yīng)盤(pán)配套試劑針和樣本針各一個(gè)，雙反應(yīng)盤(pán)則是雙倍針配套。沖洗站都是一組，攪拌

3、系統(tǒng)有兩組和一組的區(qū)分，AU400/480和2700/5400是一組，AU640/680/5800是兩組。800速以上的機(jī)型都是兩組光度計(jì)，一個(gè)燈泡通過(guò)光纖分配使用。以上是簡(jiǎn)單的機(jī)器上面板介紹，下圖是AU系列反應(yīng)曲線的示意圖：                        圖1 AU系列生化儀反應(yīng)曲線示意上圖可以看出，AU的讀點(diǎn)間隔都是18秒，整個(gè)反應(yīng)周期有

4、28個(gè)點(diǎn)，也就是28*18=504秒=8.4分鐘。R1+S+R2方式，只能雙試劑。R1加入讀點(diǎn)為P0，S加入讀點(diǎn)為P1，R2加入讀點(diǎn)為P11。R1至R2時(shí)間為11*18=198秒=3.3分鐘，S 至R2時(shí)間為10*18=162秒=3分鐘，R2至P27最后反應(yīng)點(diǎn)時(shí)間為16*18=288秒=4.8分鐘。AU的反應(yīng)時(shí)間是固定的，只有28個(gè)點(diǎn)，沒(méi)有長(zhǎng)程反應(yīng)。攪拌一共進(jìn)行三次，分別是R1、R1+S、R1+S+R2。上圖是兩條曲線，下面那條是試劑空白，上面那條是樣本曲線，下面以AU680為例，解釋一些AU系列的名詞。1 空白概念：AU的空白（Blank）的概念有杯空白，其實(shí)這是反應(yīng)杯的

5、檢查，在Photocal里進(jìn)行，也是水空白（Water Blank，WB）；實(shí)時(shí)水空白;試劑空白（ReagentBlank，RB）。1.1杯空白（Water Blank，WB）：AU的杯空白并不是實(shí)時(shí)的，而是需要時(shí)測(cè)定，或者執(zhí)行周保養(yǎng)時(shí)才測(cè)定。一般更換反應(yīng)杯或者燈泡或者W2清洗后才執(zhí)行。而杯空白的檢查是用來(lái)判斷反應(yīng)杯是不是在使用狀態(tài)，借此判斷是否自動(dòng)封閉超限的反應(yīng)杯。各型號(hào)AU生化儀都有Photocal光度計(jì)校準(zhǔn)這個(gè)菜單或者選項(xiàng)，在這個(gè)界面下可以選擇全部反應(yīng)杯或指定反應(yīng)杯號(hào)的檢查：圖2 Photocal光度計(jì)校準(zhǔn)界面這是合格的光度計(jì)校準(zhǔn)界面，全部反應(yīng)杯都是黑色字體。綠色CuvetteCheck

6、 Error表示杯檢查錯(cuò)誤，儀器認(rèn)為是擦傷。判斷依據(jù)是將一個(gè)反應(yīng)杯分為前后兩部分進(jìn)行檢測(cè)，前后部分吸光度值超過(guò)0.01Abs，則認(rèn)為是有劃痕擦傷。紅色Mean CheckError表示平均值檢查，某一個(gè)杯子反應(yīng)杯的吸光度值與所有反應(yīng)杯吸光度平均值的差異不能大于0.03Abs，否則該杯將被紅色標(biāo)記，系統(tǒng)自動(dòng)封閉該反應(yīng)杯。橙色Lamp CheckError是燈泡檢查，這一項(xiàng)要經(jīng)過(guò)兩次比對(duì)，第一次是所有反應(yīng)杯在所有波長(zhǎng)下的吸光度值小于等于1.7Abs，第二次是將所有反應(yīng)杯的光度計(jì)值與更換燈泡后的該反應(yīng)杯光度計(jì)值做比較，兩次的結(jié)果應(yīng)該小于等于0.1Abs。這兩次檢查有任何一次超限就會(huì)被橙色標(biāo)記。要注意

7、的是，儀器并不知道你什么時(shí)候換的燈泡，其實(shí)是跟上一次的Photocal值做的比較。這一點(diǎn)與AU老型號(hào)的機(jī)器藍(lán)色標(biāo)記類似，新型號(hào)去掉了藍(lán)色標(biāo)記，改用橙色標(biāo)記。偶爾幾個(gè)反應(yīng)杯出現(xiàn)顏色標(biāo)記時(shí)，可把該反應(yīng)杯取出，人工清洗擦干后再行測(cè)試?；蛘吒纱喔鼡Q。出現(xiàn)橙色或者藍(lán)色，可先行保存，然后接著點(diǎn)擊檢查，也就是說(shuō)上次的數(shù)據(jù)可能是很久之前的，保存一次把數(shù)據(jù)庫(kù)的數(shù)據(jù)覆蓋，然后再檢查，這樣兩次的比較就應(yīng)該很接近，藍(lán)色或者橙色就會(huì)消失。但如果這么操作還是無(wú)法消除橙色，就要嘗試更換反應(yīng)杯或者燈泡了。大面積的出現(xiàn)紅色，應(yīng)該首先檢查沖洗站，漫盤(pán)的可能性最大。大面積出現(xiàn)綠色或者紅綠兼而有之，首先檢查燈泡和燈泡供電，光源不穩(wěn)可

8、能性最大。在Photocal檢查里進(jìn)行的杯空白是利用去離子水作為介質(zhì)的，并不是空反應(yīng)杯進(jìn)行測(cè)試。所以這里的杯空白又叫水空白（Water Blank）。但Photocal并非強(qiáng)制性，也不是每天必須的。而且是個(gè)多合一的數(shù)據(jù)，同時(shí)是用來(lái)判斷反應(yīng)杯是否能夠使用的依據(jù)。這個(gè)水空白的數(shù)據(jù)在定標(biāo)、結(jié)果計(jì)算里會(huì)經(jīng)常用到。后面用到的水空白校正公式是：ODF（X）=OD（X）-F（X）ODF（X）是水空白校正后的吸光度值；OD（X）是水空白校正前的吸光度值；F（X）是該反應(yīng)杯的指定波長(zhǎng)吸光度值；X是0-27個(gè)讀點(diǎn)。1.2 實(shí)時(shí)水空白：是沖洗站每次清洗完反應(yīng)杯后測(cè)定的水空白數(shù)據(jù)，這是實(shí)時(shí)的，每次清洗后的水

9、空白數(shù)據(jù)與上次的Photocal光電校準(zhǔn)里的水空白數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，誤差太大則自動(dòng)封閉，暫時(shí)不使用。注意：如果上次Photocal檢測(cè)的時(shí)候，水質(zhì)出現(xiàn)問(wèn)題，會(huì)導(dǎo)致所有反應(yīng)杯的平均值偏高，這時(shí)并不會(huì)顏色標(biāo)記。但當(dāng)水質(zhì)恢復(fù)后，實(shí)時(shí)空白會(huì)遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于當(dāng)初的的水空白，也不會(huì)報(bào)警。但由上次水空白記錄的數(shù)據(jù)計(jì)算的結(jié)果或試劑空白可能會(huì)出現(xiàn)負(fù)值，導(dǎo)致結(jié)果錯(cuò)誤或試劑空白失敗。所以說(shuō)這是一個(gè)考慮點(diǎn)，如果想排除這個(gè)因素的干擾，做一次Photocal保存然后再執(zhí)行一次保存即可。當(dāng)然可以反推，這次的水質(zhì)不好也會(huì)造成結(jié)果的混亂。1.3 雙波長(zhǎng)校正：在使用雙波長(zhǎng)的項(xiàng)目里，主波長(zhǎng)的吸光度減去付波長(zhǎng)吸光度。雙波長(zhǎng)校正公式是：

10、ODP（x）=ODM（X）-ODS（X）ODP（X）是雙波長(zhǎng)校正后的吸光度值；ODM（X）是主波長(zhǎng)的吸光度值；ODS（X）是付波長(zhǎng)的吸光度值；X是0-27個(gè)讀點(diǎn)。1.4 試劑空白（Reagent Blank，RB）：以去離子水為樣本，按照項(xiàng)目參數(shù)的設(shè)置進(jìn)行測(cè)試，得到的整條曲線的各個(gè)讀點(diǎn)的吸光度值，由于只有試劑參與，所以又叫試劑空白。試劑空白的吸光度值是經(jīng)過(guò)水空白校正的，也就是說(shuō)減去水空白值。試劑空白也是經(jīng)過(guò)雙波長(zhǎng)校正的，根據(jù)測(cè)試方法的不同而決定是否采用試劑空白校正。END1、RATE1和FIXED1這三種方法不使用試劑空白校正，這三種方法是采用的水空白校正。試劑空白的校正公式是：OD

11、R（x）=ODP（X）-RB（x）ODR（X）是試劑空白校正后的吸光度值；ODP（X）是雙波長(zhǎng)校正后的吸光度值；RB（X）是試劑空白吸光度值；X是0-27個(gè)點(diǎn)。圖3 試劑空白示意圖由于END、RATE、FIXED三種方法都采用試劑空白校正，所以試劑空白變得非常重要。不同廠家、不同批號(hào)甚至不同試劑瓶間的試劑空白可能會(huì)相差很大，所以在菜單Calibration Parameters定標(biāo)參數(shù)里，Advanced Calibration選項(xiàng)有批號(hào)、換瓶等選項(xiàng)，更換批號(hào)或瓶號(hào)即會(huì)重新定標(biāo)。而重新定標(biāo)之前必須先做試劑空白。試劑空白在定標(biāo)參數(shù)里，可以單獨(dú)測(cè)試，也可以與定標(biāo)一起測(cè)試，但絕不可以單獨(dú)做

12、定標(biāo)而不做試劑空白。而有些實(shí)驗(yàn)室既不執(zhí)行換瓶換批號(hào)定標(biāo)，也不單獨(dú)執(zhí)行試劑空白，或者執(zhí)行試劑空白時(shí)作為樣本的去離子水有問(wèn)題，導(dǎo)致保存在儀器內(nèi)的試劑空白過(guò)高，由于不檢查試劑空白范圍，所以并不報(bào)警。但在樣本測(cè)試或定標(biāo)時(shí)導(dǎo)致負(fù)值出現(xiàn)。所以在AU系列生化儀上，試劑空白和Photocal是經(jīng)常要做的，是耽誤了些時(shí)間，耗費(fèi)了一些試劑，但保證了結(jié)果準(zhǔn)確，還是值得的。每日開(kāi)機(jī)，可以不做定標(biāo)，但試劑空白是一定要做的。試劑空白每次執(zhí)行的次數(shù)可以最大到4次，一般要選擇兩次以上，這樣可以看出重復(fù)性，繼而推導(dǎo)儀器可能存在的問(wèn)題。連續(xù)兩次試劑空白則計(jì)算平均值，三次是取兩次接近的值平均，四次的話則是去掉最大最小值，剩下的兩次

13、平均。下圖是站上上截取的一幅試劑空白的圖：圖4 試劑空白示意圖由圖可以看出，P0-P27所有讀點(diǎn)的吸光度值都在數(shù)據(jù)庫(kù)里保存。根據(jù)測(cè)試參數(shù)的設(shè)定，有三個(gè)主要值單獨(dú)標(biāo)示。P0就是R1加入的吸光度值，這個(gè)值理論上同瓶試劑不會(huì)改變，或者改變范圍很小。Px是第一個(gè)測(cè)試點(diǎn)的值，如果只有單點(diǎn)，那就是這個(gè)點(diǎn)的吸光度。Py是最后一個(gè)點(diǎn)的吸光度。上圖是ASO項(xiàng)目，END方法，讀點(diǎn)分別是10和27，那么Px就是10點(diǎn)的吸光度，Py就是27點(diǎn)的吸光度。批號(hào)和瓶號(hào)全部輸入的是位置號(hào)，也就意味著不會(huì)變更，也就不會(huì)自動(dòng)定標(biāo)。下圖還是這個(gè)網(wǎng)友提問(wèn)的圖片，可惜拍照的不全：圖5數(shù)據(jù)監(jiān)測(cè)常規(guī)界面示意圖由于只有14-27點(diǎn)

14、的數(shù)據(jù)，那就有什么看什么了。而且是單波長(zhǎng)，所以沒(méi)有雙波長(zhǎng)校正。圖中的最大OD和最小OD分別是各個(gè)波長(zhǎng)、反應(yīng)吸光度和試劑空白的個(gè)點(diǎn)吸光度的最大最小值。由于數(shù)據(jù)不全，我們看上圖的試劑空白，最大OD出現(xiàn)在P12點(diǎn)，0.4079，而P11點(diǎn)更高是0.4093，但這一點(diǎn)不計(jì)數(shù)。最小OD值出現(xiàn)在P4點(diǎn)，0.0062。而反應(yīng)最大OD出現(xiàn)在P27點(diǎn)，0.4331。最小讀點(diǎn)應(yīng)該在P11點(diǎn)之前，圖上顯示是0.058，比試劑空白的最低點(diǎn)還要低。反應(yīng)OD是根據(jù)公式計(jì)算的，終點(diǎn)法大體是最后選擇點(diǎn)的吸光度減去首先選擇點(diǎn)的吸光度乘以液體比率系數(shù)。這個(gè)后面可能會(huì)有計(jì)算方法的解釋。下圖是一個(gè)完整的數(shù)據(jù)監(jiān)測(cè)界面：圖6 

15、完整的數(shù)據(jù)監(jiān)測(cè)常規(guī)界面示意圖這張所謂的完整圖示，其實(shí)也沒(méi)有13-27點(diǎn)的數(shù)據(jù)。不過(guò)屏幕左側(cè)是完整的，上面清晰的告訴我們，樣本測(cè)試的日期、校準(zhǔn)日期、photocal日期和試劑空白日期。不過(guò)這個(gè)項(xiàng)目采用的END1方法，所以沒(méi)有試劑空白數(shù)據(jù)。這個(gè)結(jié)果的反應(yīng)曲線如下：圖7 反應(yīng)曲線示意圖上圖綠色線條是付波長(zhǎng)曲線，藍(lán)色線條是主波長(zhǎng)反應(yīng)曲線，紅色線條是反應(yīng)曲線，也就是主波長(zhǎng)減去付波長(zhǎng)的擬合線，但圖中沒(méi)有設(shè)置顯示。由于這是廠家說(shuō)明書(shū)上的演示，所以measuring point-1 測(cè)量點(diǎn)1選擇的是0-1，measuring point-2沒(méi)有選擇，因?yàn)槭菃卧噭?。這個(gè)讀點(diǎn)選擇的很有意思，P

16、0點(diǎn)加入R1開(kāi)始，加入樣本后的第一點(diǎn)P1就結(jié)束，后面的曲線都是瞎忙活，早就測(cè)試完了。就算ALB反應(yīng)快，但也不至于此。2、測(cè)試方法：AU系列測(cè)試方法有終點(diǎn)法、速率法和固定點(diǎn)法。2.1 終點(diǎn)法：終點(diǎn)法在測(cè)試方法選擇里有END和END1兩個(gè)選項(xiàng)。END是試劑空白校正，也就是測(cè)定樣本的吸光度值減去該點(diǎn)試劑空白的吸光度值。END1是水空白校正，也就是測(cè)定樣本的吸光度值減去該點(diǎn)水空白的吸光度值。當(dāng)然，二者都可以選擇或者不選擇雙波長(zhǎng)校正，而且二者都可以選擇一組讀點(diǎn)還是兩組讀點(diǎn)，以形成一點(diǎn)終點(diǎn)法還是兩點(diǎn)終點(diǎn)法。圖8 一點(diǎn)終點(diǎn)法示意圖圖9 兩點(diǎn)終點(diǎn)法示意圖R1.V是R1試劑的體積；

17、S.V是樣本的體積；R2.V是R2試劑的體積；Pz是第一讀點(diǎn)，也叫初始讀點(diǎn)，在參數(shù)設(shè)置里是Measuring Point-1，在終點(diǎn)法里是R2之前之后各一個(gè)點(diǎn)；Px是第二讀點(diǎn)，也叫最后讀點(diǎn)，在參數(shù)設(shè)置里是Measuring Point-2，在終點(diǎn)法里不使用這組讀點(diǎn)。在如果不使用R2，也就是單試劑，是圖8的示意圖，第一讀點(diǎn)一般選擇0-27，第二讀點(diǎn)不選擇，這樣結(jié)果會(huì)扣除R1的空白。如果選擇END方法，則兩個(gè)點(diǎn)都要減去該點(diǎn)的試劑空白后再相減。由于第一讀點(diǎn)本來(lái)就是R1的空白，理論上應(yīng)該與試劑空白P0的是數(shù)值相差無(wú)幾甚至完全相等，所以只需要第二讀點(diǎn)減去該點(diǎn)的試劑空白即可。如果選擇END1方法，那么兩點(diǎn)

18、的數(shù)值均要減去水空白。理論上水空白的曲線是一條水平直線，所以兩點(diǎn)減去的值都相同，然后兩點(diǎn)間再相減，得出的吸光度值用于濃度計(jì)算。要注意的是：AU640和AU680對(duì)Measuring Point的概念是不同的，前者M(jìn)easuring Point-1是主讀點(diǎn)， Measuring Point-2是前一點(diǎn)，也就是空白點(diǎn)。而后者正好相反。Measuring Point兩組點(diǎn)都選擇，是給雙速率法和雙固定點(diǎn)法準(zhǔn)備的，終點(diǎn)法用不上。在圖9中，是雙試劑終點(diǎn)法，需要試劑樣本空白，也就是R1+S的空白，所以第一讀點(diǎn)的Fist應(yīng)該在R2加入之前的一個(gè)點(diǎn)，也就是圖中的Pz，一般選擇P10讀點(diǎn)；Px則是第一讀

19、點(diǎn)的Last點(diǎn)，反應(yīng)結(jié)束的點(diǎn)。終點(diǎn)法的反應(yīng)OD值計(jì)算公式是：反應(yīng)OD=（Px-K2*P0）-（K3*Pz-K2*P0）K2是R1體積和總反應(yīng)量的比值，也就是R1.V/（R1.V+S.V+R2.V）；K3是R1+S的體積和總反應(yīng)量的比值，也就是（R1.V+S.V）/（R1.V+S.V+R2.V）。圖5中的光路校正其實(shí)就是這個(gè)K值，由于參數(shù)不全，無(wú)法計(jì)算反推罷了。如果選擇是END方法，而且Measuring Point-1的都選擇上的話，那就是兩點(diǎn)終點(diǎn)法扣除試劑空白，公式就成為：反應(yīng)OD=（Px-RBPx）-K3（Pz-RBPz）也就是各點(diǎn)的吸光度值減去各點(diǎn)的試劑空白吸光度值，再進(jìn)行體積系數(shù)校正。

20、如果選擇是END1方法，而且Measuring Point-1都選擇上的話，那就是兩點(diǎn)終點(diǎn)法扣除水空白，公式就成為：反應(yīng)OD=（Px-WB）-K3（Pz-WB）=Px-K3Pz我們常常習(xí)慣使用測(cè)量點(diǎn)吸光度值減去水空白（或者杯空白）的方法，并不習(xí)慣減去試劑空白，所以END1方法在國(guó)內(nèi)采用的很多。而END減去試劑空白的方法，由于試劑原因和執(zhí)行時(shí)間的問(wèn)題導(dǎo)致一些結(jié)果出現(xiàn)負(fù)值，特別是低值標(biāo)本。鬧得沸沸揚(yáng)揚(yáng)的免疫比濁項(xiàng)目用終點(diǎn)法都在R2之后的問(wèn)題，大可不必使用兩點(diǎn)終點(diǎn)法，直接使用一點(diǎn)終點(diǎn)即可，只設(shè)置Measuring Point-1（例如：Fist0-Last27）。而非要使用兩點(diǎn)終點(diǎn)法，那就只能R2之

21、前之后各一組點(diǎn)，這毫無(wú)疑問(wèn)見(jiàn)過(guò)很多實(shí)驗(yàn)室里的試劑空白都是空的，根本不做，因?yàn)榉椒ǘ疾捎肊ND1、RATE1和FIXED1。在終點(diǎn)法當(dāng)中，無(wú)論采用一點(diǎn)還是兩點(diǎn)，亦或是END還是END1，都有一個(gè)先天不足，那就是樣本本身的空白無(wú)法排除，有的樣本本身的顏色就很深，加入試劑后反應(yīng)度很小，可能會(huì)造成假陽(yáng)性。為了解決這個(gè)問(wèn)題，AU可以采用樣本空白校正（sample blank correction）。在菜單Parameters>Common Test Parameters>Test Name中，選擇點(diǎn)擊下面的Sample Blank，就會(huì)出現(xiàn)樣本空白界面，一共只能選擇10個(gè)項(xiàng)目，分別選擇每一個(gè)

22、項(xiàng)目的顏色和空白項(xiàng)目名稱，然后保存。在進(jìn)行這個(gè)項(xiàng)目測(cè)試的時(shí)候，就會(huì)先占用一個(gè)反應(yīng)杯，用去離子水做試劑稀釋樣本進(jìn)行樣本本身顏色的比色（樣本空白），然后再占用一個(gè)反應(yīng)杯，用參數(shù)設(shè)定的試劑進(jìn)行比色（顏色反應(yīng)），最后顏色反應(yīng)的吸光度值減去樣本空白的吸光度值。樣本空白的計(jì)算公式是：反應(yīng)OD=ODC-K*ODBODC是該點(diǎn)的顏色反應(yīng)吸光度值；ODB是該點(diǎn)的樣本空白吸光度值；K是樣本空白體積和顏色反應(yīng)體積的比值，一般是1。根據(jù)END或END1方法的不同，還要分別減去該點(diǎn)的試劑空白或者水空白。下圖就是樣本空白校正的示意圖：圖10 樣本空白校正示意圖2.2 速率法 Rate：AU中

23、， 有Rate和Rate1兩個(gè)速率法選項(xiàng)。Rate，是扣除試劑空白的速率法；Rate1，是扣除水空白的速率法；速率法可以使用單速率法和雙速率法兩種方法。圖11 速率法示意圖當(dāng)使用單速率法時(shí)，只有上圖的OD2，參數(shù)中只選擇Measuring Point-1就行了，給出開(kāi)始和結(jié)束的兩點(diǎn)，儀器根據(jù)這兩點(diǎn)計(jì)算每分鐘吸光度變化。這也是最常用的速率法。當(dāng)使用雙速率法時(shí)，就要在R2加入之前選擇兩個(gè)點(diǎn)，作為Measuring Point-1的值，然后在Measuring Point-2里輸入R2之后的兩個(gè)點(diǎn)，這樣前者是OD1，后者是OD2，計(jì)算公式時(shí)：反應(yīng)OD=（OD2-OD1）/min當(dāng)然，Rat

24、e方法要減去各點(diǎn)的試劑空白再計(jì)算OD，Rate1要減去水空白再計(jì)算OD。與終點(diǎn)法一樣，大多采用Rate1方法。線性范圍（Linearity Limit）：在速率法當(dāng)中，線性檢查是必要的。根據(jù)速率法選擇的讀點(diǎn)數(shù)不同，系統(tǒng)將全部讀點(diǎn)一分為二，分前半程和后半程兩部分分別進(jìn)行OD/min計(jì)算，然后二者再進(jìn)行公式計(jì)算。圖12 速率法線性檢查示意圖前半程的OD/min為E1，后半程的OD為E2，在菜單參數(shù)設(shè)置里面有個(gè)Linearity Limit選項(xiàng)， |（E1-E2）|÷|（E1+E2）/2|*100Linearity Limit為正常線性，否則判斷為線性錯(cuò)誤，結(jié)果有*號(hào)提

25、示。這是第一個(gè)線性判斷依據(jù)。第二個(gè)線性判斷依據(jù)是|（E1-E2）|0.003，否則也會(huì)判斷為線性錯(cuò)誤。這個(gè)0.003是系統(tǒng)默認(rèn)值。也就是說(shuō)前半程和后半程的OD/min差值絕對(duì)值不能超過(guò)0.003（Q鍵菜單中的Decision of Linearity Check設(shè)置）。逆向反應(yīng)檢查（Reverse Reaction Check）：在速率法反應(yīng)中，逆向檢查也很有必要，如果在讀點(diǎn)范圍內(nèi)有任何一個(gè)點(diǎn)出現(xiàn)反轉(zhuǎn)，哪怕是整個(gè)讀點(diǎn)區(qū)的反應(yīng)趨勢(shì)沒(méi)有改變，都會(huì)被監(jiān)測(cè)到，在結(jié)果中用* 號(hào)提示。圖13 逆向檢查示意圖檢查公式是：正反應(yīng) （Pn-Pn+1）/20.002負(fù)反應(yīng) （Pn+1

26、-Pn）/20.002（Q鍵菜單中的Decision ofReaction設(shè)置）所以，當(dāng)結(jié)果出現(xiàn)*號(hào)提示時(shí)，有兩個(gè)方面需要考慮，可能是某一點(diǎn)顛倒了方向，也可能是線性不好。LAG-TIME(延遲時(shí)間)：在速率反應(yīng)中，有些反應(yīng)速度過(guò)快，導(dǎo)致在讀點(diǎn)區(qū)有2個(gè)以上的點(diǎn)沒(méi)有讀數(shù)，例如典型的底物過(guò)剩反應(yīng)。這樣選擇是否進(jìn)行延遲讀點(diǎn)，系統(tǒng)可以選擇延遲后讀點(diǎn)進(jìn)行計(jì)算。這個(gè)功能要與OD Limit里的MIN OD和MAXOD配合使用。當(dāng)下降反應(yīng)開(kāi)啟了LAG-TINE和設(shè)置了ODLIMIT的Min OD，速率反應(yīng)低于Min OD設(shè)置值時(shí)，結(jié)果會(huì)用B提示。當(dāng)上升反應(yīng)開(kāi)啟了LAG-TINE和設(shè)置了ODLIMIT的MAX

27、OD，速率反應(yīng)高于MAX OD設(shè)置值時(shí)，結(jié)果會(huì)用D提示。圖14 速率反應(yīng)過(guò)快示意圖圖中的a線是正常速率曲線，b和c都過(guò)快，而且低于Min  OD設(shè)置的0.5的范圍。在速率法當(dāng)中，也可以選擇使用樣本空白校正，利用單獨(dú)的反應(yīng)杯進(jìn)行樣本空白比色，然后再相減。動(dòng)態(tài)范圍（Dynamic Range）：在速率法中，讀點(diǎn)區(qū)域兩點(diǎn)間的吸光度變化也要被監(jiān)測(cè)，不然會(huì)漏報(bào)高濃度樣本。而高濃度樣本不完全會(huì)造成底物過(guò)剩。所以在動(dòng)態(tài)范圍里設(shè)置最低最高吸光度，用來(lái)監(jiān)測(cè)兩點(diǎn)間的吸光度變化。超過(guò)高值限制則用F提示，超過(guò)低值限制則用G提示。2.3 固定點(diǎn)法（FIXED）：在AU中，有FIXED和FI

28、XED1兩個(gè)選項(xiàng)。也叫做兩點(diǎn)法。FIXED，是扣除試劑空白的固定點(diǎn)法；FIXED1，是扣除水空白的固定點(diǎn)法；固定點(diǎn)法都可以采用單固定點(diǎn)和雙固定點(diǎn)法。也可以進(jìn)行樣本空白校正。圖15 固定點(diǎn)法示意圖反應(yīng)OD的計(jì)算公式是：OD = (Px - Py) - K1 X (Pw - Pz)K1是體積校正系數(shù)，(R1 +S)/(R1 + R2 + S) ；Px, Py MeasuringPoint-2的第一點(diǎn)和最后一點(diǎn)的吸光度值；Pw, Pz MeasuringPoint-1試劑樣本空白的第一點(diǎn)和最后一點(diǎn)吸光度值。由于固定點(diǎn)法僅僅是主讀點(diǎn)區(qū)兩點(diǎn)間的差值，而且都在R2之

29、后，所以無(wú)論終點(diǎn)法還是速率法都可以這個(gè)使用。而鬧得沸沸揚(yáng)揚(yáng)的免疫比濁項(xiàng)目用終點(diǎn)法都在R2之后的問(wèn)題，換成這個(gè)方法即可，也可以說(shuō)選點(diǎn)沒(méi)有問(wèn)題，問(wèn)題出在方法上。而采用這個(gè)方法，Measuring Point-1和Measuring Point-2的間隔要相當(dāng)遠(yuǎn)才行。例如，單固定點(diǎn)法一般這樣選擇：Measuring Point-1 Fist12， Last27；雙固定點(diǎn)法一般這樣選擇：Measuring Point-1 Fist2， Last10；Measuring Point-2 Fist12， Last27；3. 定標(biāo)方法：分為ACAL自動(dòng)定標(biāo)和MCAL人

30、工定標(biāo)兩大類。ACAL可分為AA、AB和7AB三小類，MCAL可以分為MB和7MB兩個(gè)小類。3.1 ACAL 自動(dòng)定標(biāo)：根據(jù)給定的定標(biāo)液位置和濃度，以及計(jì)算公式進(jìn)行的自動(dòng)定標(biāo)曲線繪制。ACAL AA：是兩點(diǎn)線性定標(biāo)，給出兩個(gè)定標(biāo)液濃度，自動(dòng)計(jì)算繪制一條直線（線性定標(biāo)的曲線）。這種方法適用于零濃度值不過(guò)原點(diǎn)的定標(biāo)，也就是說(shuō)有截距。ACLA AB：是單點(diǎn)線性定標(biāo)，只需要給出一個(gè)定標(biāo)液濃度，自動(dòng)計(jì)算繪制一條經(jīng)過(guò)原點(diǎn)的定標(biāo)曲線。根據(jù)直線公式：Y=KX+B得知，K為直線的斜率，B則是截距。圖16 AA和AB定標(biāo)曲線示意圖上圖坐標(biāo)系是扣除水空白的，也就是說(shuō)不考慮水空白的因素。如果選擇了END1、

31、Rate1和FIXED1這些扣除水空白的測(cè)試方法，又是線性定標(biāo)的話，直接選擇AB即可。如果選擇AA，則會(huì)出現(xiàn)一個(gè)零濃度截距ODa，也就是試劑空白，當(dāng)試劑改變，出現(xiàn)波動(dòng)的話，可能低值標(biāo)本會(huì)出現(xiàn)負(fù)值。因?yàn)橛锌赡茉噭┛瞻装l(fā)生改變，低于定標(biāo)時(shí)很多，這樣低值樣本的OD會(huì)低于ODa很多，AA直線延長(zhǎng)下來(lái)，濃度X軸的值就是負(fù)的，到了第二象限去了。如果選擇了END、Rate和FIXED這些扣除試劑空白的測(cè)試方法，又是線性定標(biāo)的話，直接選擇AA定標(biāo)即可。因?yàn)槊看味?biāo)前必須執(zhí)行試劑空白測(cè)定，這個(gè)截距會(huì)自動(dòng)被試劑空白校正過(guò)來(lái)，這樣就會(huì)把X軸移動(dòng)到X1位置，相當(dāng)于AA也是過(guò)了修正后的原點(diǎn)。如果這個(gè)時(shí)候選擇AB方法，則

32、很有可能低值標(biāo)本的吸光度是負(fù)值的情況下才能得出低值濃度，到了第四象限去了。所以說(shuō)，測(cè)試方法和定標(biāo)方法要結(jié)合使用才能達(dá)到最佳的狀態(tài)，并不是絕對(duì)的哪一個(gè)方法負(fù)值概率就低。無(wú)論是試劑空白校正還是水空白校正，前提是要經(jīng)常做試劑空白和水空白，不然依舊會(huì)導(dǎo)致負(fù)值出現(xiàn)。ACAL 7AB：是多點(diǎn)線性或多點(diǎn)非線性定標(biāo)，最多7個(gè)點(diǎn)，最少2個(gè)點(diǎn)，默認(rèn)零濃度點(diǎn)為原點(diǎn)。圖17 7AB定標(biāo)曲線示意圖7AB定標(biāo)可選擇的公式很多，后面會(huì)單獨(dú)介紹計(jì)算公式。3.2 MCAL 人工定標(biāo)：根據(jù)跟定的數(shù)據(jù)繪制定標(biāo)曲線，而不需要定標(biāo)液。MCALMB：給出線性定標(biāo)的直線斜率，也就是K值，默認(rèn)是過(guò)原點(diǎn)的。MCAL7MB：多點(diǎn)定標(biāo)，

33、最多7個(gè)點(diǎn)，最少兩個(gè)點(diǎn)。但每?jī)蓚€(gè)點(diǎn)間的斜率要人工給出，也就是說(shuō)只能給出折線，做不了弧線。圖18 MCAL MB和7MB示意圖由此可以看出，MCAL是最不靠譜的定標(biāo)方法，能不采用就不采用。3.3 定標(biāo)公式（Fomula）：與定標(biāo)方法配合使用，確立定標(biāo)曲線的繪制方法。在菜單Parameters>Calibration Parameters>CalibrationSpecific中，會(huì)見(jiàn)到下面的圖：圖19 AU定標(biāo)參數(shù)界面上圖中CalibrationType里就是選擇剛才所講的定標(biāo)方法，F(xiàn)omula就是計(jì)算公式。Straight Line 直線線性，公式是：y

34、0;= Ax 或 y = Ax + BPolygonal Line 折線，公式是：y =Anx + BnQuadratic Type 二元二次方程，公式是：y = Ax2 + Bx + CTertiary Type二元三次方程，公式是：y = Ax3 + Bx2 + Cx + DTertiary Type (ReversedFunctio

35、n) 反轉(zhuǎn)的二元三次方程，公式是：x = Ay 3 + By 2 + Cy + DEIA-TYPE 1 對(duì)數(shù)曲線Logit-Log4PEIA-TYPE 2 對(duì)數(shù)曲線Logit-Log5PEIA-TYPE 3 指數(shù)函數(shù)曲線EIA-TYPE 4 可能是同工酶多點(diǎn)線性Spline 樣條曲線圖20 部分多點(diǎn)定標(biāo)曲線的計(jì)算公式在AU系列中，定標(biāo)公式使用最多的是線性、EIA-TYPE 1和Spline。這里不再給出各公式的曲線趨勢(shì)圖。3.

36、4 定標(biāo)檢查在圖19的定標(biāo)參數(shù)界面中，有個(gè)Counts，這是每次定標(biāo)的重復(fù)次數(shù)，最多4次，一般選擇2次，這樣可以驗(yàn)證儀器的重復(fù)性。在線性定標(biāo)中，可以選擇是否進(jìn)行斜率檢查（Slope Check）, 也就是與上次的斜率值進(jìn)行比較，超過(guò)一定的范圍則報(bào)告錯(cuò)誤提示。而這個(gè)百分比范圍是在Q鍵菜單里設(shè)置的。定標(biāo)參數(shù)中，允許范圍（Allowable Range Check）檢查也是有必要的，它規(guī)定了試劑空白和定標(biāo)液的吸光度值不能超出多少范圍。這一項(xiàng)只能是ACAL方法時(shí)才能設(shè)置。高級(jí)定標(biāo)（Advanced calibration）選擇Yes時(shí)，可以選擇LOT-LOT，LOT-Bottle，

37、Bottle-Bottle等批號(hào)和瓶號(hào)改變而自動(dòng)進(jìn)行試劑空白和定標(biāo)作業(yè)。在這個(gè)界面下，還可以選擇定標(biāo)和試劑空白的穩(wěn)定期（Stabilty），可以設(shè)置X天X小時(shí)的方式，超過(guò)這個(gè)時(shí)間范圍，系統(tǒng)會(huì)提示重新定標(biāo)。MB type Factor其實(shí)就是人工定標(biāo)的因數(shù)，也就是手工輸入的K系數(shù)，當(dāng)選擇MB定標(biāo)時(shí)這個(gè)參數(shù)必須輸入。1-point Calibration Point 是一點(diǎn)定標(biāo)校正的點(diǎn)，也是兩點(diǎn)或多點(diǎn)定標(biāo)才能使用，要么不填，要么填寫(xiě)1-7的數(shù)字，表示要校正哪一個(gè)點(diǎn)，這個(gè)點(diǎn)一定是小于最高濃度的一個(gè)點(diǎn)。換句話說(shuō)，不能校正最高濃度點(diǎn)。with CONC-0 復(fù)選框是讓操作人員選擇是否

38、使用零濃度定標(biāo)液，如果使用就打上。這個(gè)只在2AB-7AB的時(shí)候與1-point Calibration Point配合才能使用，在一點(diǎn)校正的時(shí)候，是否加上零濃度點(diǎn)，形成一個(gè)兩點(diǎn)校正。定標(biāo)曲線修正：在多點(diǎn)定標(biāo)中，由于最高濃度定標(biāo)液缺失或者只有一個(gè)非最高濃度值的非上次定標(biāo)所用的定標(biāo)液，這種情況下如果要修正定標(biāo)曲線的話，可以采用一點(diǎn)定標(biāo)修正，也可以采用擬合曲線校正。圖21 1點(diǎn)校正示意圖上圖的曲線校正公式是：ODn'= ODn × （OD3'/OD3）CONC3是修正的那一個(gè)點(diǎn)的濃度值，相應(yīng)的通過(guò)計(jì)算OD3（原來(lái)的曲線該點(diǎn)吸光度值）和OD3（修正后的該點(diǎn)

39、吸光度值）的比值，計(jì)算其它各點(diǎn)，從而重新描繪定標(biāo)曲線（實(shí)線）。圖22 帶有零濃度點(diǎn)修正的1點(diǎn)校正示意圖上圖的曲線校正公式是：ODn'= (ODn- OD1)*（OD3'-OD1'）/（OD3-OD1）+OD1用零濃度點(diǎn)和CONC3兩個(gè)點(diǎn)進(jìn)行曲線修正。    圖23 擬合曲線校正示意圖在定標(biāo)參數(shù)界面里，除了輸入各種定標(biāo)液的濃度值和位置外，在下面還有一個(gè)選擇，那就是在定標(biāo)完成后的修正。Point Cal. for Master Curve 這一項(xiàng)就是利用擬合曲線修正點(diǎn)的設(shè)置，后面緊跟著的是No.of Correct

40、ion Points選擇，可以選擇1-2個(gè)點(diǎn)，然后是User Master Curve，就是使用何種擬合曲線（MC1或MC2，也就是1點(diǎn)還是兩點(diǎn)）。接下來(lái)就是輸入需要擬合的1個(gè)或兩個(gè)點(diǎn)的濃度值和名稱，系統(tǒng)會(huì)在執(zhí)行定標(biāo)的時(shí)候自動(dòng)擬合。圖23的虛線是原來(lái)的主曲線，給出的兩個(gè)擬合點(diǎn)CONC1/2與原來(lái)的定標(biāo)液濃度值可以是毫無(wú)干系的，通過(guò)這兩個(gè)點(diǎn)，把整條曲線擬合校正。計(jì)算公式是：OD(n)=OD(n)m-OD(2)m*OD(1)-OD(2)/OD(1)m-OD(2)m+OD(2)圖24 線性自動(dòng)定標(biāo)參數(shù)示意圖這是線性自動(dòng)定標(biāo)的示意圖，與圖19的手工多點(diǎn)定標(biāo)可以比較出差異。因數(shù)和吸光度（Fac

41、tor/OD Range）范圍檢查：這是針對(duì)線性定標(biāo)的AA和AB進(jìn)行的檢查，斜率和因數(shù)不能超過(guò)規(guī)定的范圍，否則會(huì)報(bào)錯(cuò)導(dǎo)致定標(biāo)失敗，如果不進(jìn)行該項(xiàng)檢查，則最低最高值放到最大，因數(shù)范圍是：±9999999，OD吸光度范圍是-2.0000至3.0000。多點(diǎn)斜率檢查（Multi-Slope Check）：這是內(nèi)置的檢查項(xiàng)目，多點(diǎn)定標(biāo)中，根據(jù)反應(yīng)方向的不同，各點(diǎn)的吸光度值應(yīng)該依次增大或者減少，違背這個(gè)原則就會(huì)被認(rèn)為出現(xiàn)拐點(diǎn)而報(bào)錯(cuò)，定標(biāo)失敗。圖25 多點(diǎn)斜率檢查示意圖4. 測(cè)試參數(shù)設(shè)置：圖26 測(cè)試參數(shù)基本界面示意圖測(cè)試名稱（Test Name）：測(cè)試名稱登記注冊(cè)

42、后，就可以設(shè)置參數(shù)菜單。樣本形式（Type）：有血清、尿液等選擇（“Serum”,“Urine”, “Other-1”, and “Other-2”.）操作選項(xiàng)（Operation）：是否啟用這個(gè)測(cè)試項(xiàng)目。樣本相關(guān)參數(shù)：樣本體積（Sample Volume）：非自動(dòng)稀釋樣本的范圍是1.6-25ul，如果要機(jī)內(nèi)稀釋，范圍則是1.6-20ul，可以0.1ul步進(jìn)；稀釋后樣本量（Dilution）：有0和10ul可供選擇；樣本預(yù)稀釋比例（Pre-DilutionRate）：有1、3、5、10、15、20、25、50、75、100可供選擇。選擇比例后，儀器自動(dòng)按照此比例加注稀釋液。此功能會(huì)延遲報(bào)告結(jié)果

43、的速度，整機(jī)速度也會(huì)延遲一些，但可以大大減少高濃度樣本警報(bào)的比例。試劑相關(guān)參數(shù)：試劑量（Reagent Volume）：0，10-235ul之間，1ul步進(jìn)。稀釋液（Dilution）：試劑稀釋液的量，有些濃縮試劑是可以稀釋的。每種試劑和稀釋液的量不能超過(guò)250ul；R1+S+R2的總量不能超過(guò)450ul，不能低于120ul。試劑吸光度范圍（Reagent OD Limit）：分為第一試劑吸光度高低限制和第二試劑吸光度高低限制，如果超過(guò)這個(gè)限制，會(huì)提示Y（y）和U（u），要么留空，要么放到最大：-2.0000和3.0000。公共試劑（common Reagent）：這是針對(duì)3試劑項(xiàng)目應(yīng)用的，是

44、在菜單Parameters>Common Test Parameters>CommonReagents中設(shè)置的最多10個(gè)試劑。不過(guò)，這里的三試劑與AU自有的糖化血紅蛋白的三試劑概念不同。前者是采用三種試劑完成一個(gè)項(xiàng)目的測(cè)試，而后者是采用三種試劑完成兩個(gè)項(xiàng)目的測(cè)試，兩個(gè)項(xiàng)目的波長(zhǎng)、方法甚至反應(yīng)方向都不相同。反應(yīng)方法相關(guān)參數(shù)：波長(zhǎng)（Wave Length）：主波長(zhǎng)Pri.和付波長(zhǎng)Sec.可以選擇，主波長(zhǎng)必選。方法（Methed）：就是反應(yīng)方法，END、END1、Rate、Rate1、Fixed、Fixed1可供選擇。反應(yīng)方向（Reaction Slope）：有+和-可供選擇，代表正負(fù)反

45、應(yīng)方向；測(cè)量點(diǎn)（Measuring Point）：分為Measuring Point-1和Measuring Point-2，每組點(diǎn)都有開(kāi)始點(diǎn)Fist和結(jié)束點(diǎn)Last輸入框。該點(diǎn)的選擇與反應(yīng)方法有關(guān)。一定注意AU680的這兩組點(diǎn)與AU640的概念不同。AU640中，Measuring Point-1為主讀點(diǎn)，Measuring Point-2為子讀點(diǎn)。而AU680，常規(guī)使用時(shí)，Measuring Point-1是主讀點(diǎn)，在雙速率法和雙固定點(diǎn)法時(shí)是子讀點(diǎn)，Measuring Point-2則成為主讀點(diǎn)。舉例說(shuō)明：Measuring Point的使用單試劑終點(diǎn)法：Measuring Point-1

46、 Fist（0），Last（Px）。Px是1-27點(diǎn)之間的讀點(diǎn)，根據(jù)需要設(shè)置，這也是一點(diǎn)終點(diǎn)法。雙試劑終點(diǎn)法，帶試劑樣本空白的：Measuring Point-1 Fist（Pz），Last（Px）。Px是11-27點(diǎn)之間的讀點(diǎn)，根據(jù)需要設(shè)置。Pz是1-10之間的讀點(diǎn)，根據(jù)需要設(shè)置，也就是R2加入之前的一個(gè)點(diǎn)，這也是兩點(diǎn)終點(diǎn)法。單速率法和固定點(diǎn)法：Measuring Point-1 Fist（Pw），Last（Px）。Px和Pw是11-27點(diǎn)之間的讀點(diǎn)，根據(jù)需要設(shè)置，Px>pw，都在R2之后。雙速率法和固定點(diǎn)法：Measuring Point-1Fist（Pz），Last（Pe）。Mea

47、suring Point-2Fist（Pw），Last（Px）。Px和Pw是11-27點(diǎn)之間的讀點(diǎn)，根據(jù)需要設(shè)置，Px>pw，也就是R2之后的一組讀點(diǎn)。Pz和Pe是1-10點(diǎn)之間的讀點(diǎn)，根據(jù)需要設(shè)置，Pe>Pz，也就是R2之前的一組讀點(diǎn)。反應(yīng)監(jiān)測(cè)參數(shù)：線性范圍（Linrarity Limit），可以單獨(dú)使用，詳見(jiàn)前面的介紹；延遲時(shí)間（Lag Time Check），與吸光度范圍結(jié)合使用，詳見(jiàn)前面的介紹；吸光度范圍（OD Limit），與延遲時(shí)間結(jié)合使用，詳見(jiàn)前面的介紹；以上只能速率法使用。動(dòng)態(tài)范圍（Dynamic Range），詳見(jiàn)前面的介紹；相關(guān)系數(shù)（Correlation Fa

48、ctor）：與動(dòng)態(tài)范圍配合使用，利用直線方程Y=AX+B，進(jìn)行斜率A和截距B的修正，修改A、B值后，已經(jīng)測(cè)定的結(jié)果數(shù)值實(shí)時(shí)改變。默認(rèn)為1和0。在動(dòng)態(tài)范圍檢查之后進(jìn)行相關(guān)系數(shù)檢查。制造系數(shù)（Factor For Maker）:與動(dòng)態(tài)范圍配合使用，利用直線方程Y=AX+B，進(jìn)行斜率A和截距B的修正，在動(dòng)態(tài)范圍之前進(jìn)行制造系數(shù)檢查。對(duì)于某些項(xiàng)目的結(jié)果，質(zhì)控值與靶值總是相差一個(gè)范圍的數(shù)值時(shí)，利用直線相關(guān)系數(shù)和制造系數(shù)校正很有必要。試劑穩(wěn)定期（Onboard Stability Period）：試劑放入試劑倉(cāng)后的穩(wěn)定期，超過(guò)這個(gè)時(shí)間則報(bào)告試劑失效，提示更換試劑。圖27 LIH樣本檢查設(shè)置界面LIH樣本是

49、脂血（乳糜）Lipemia、黃疸Icterus和溶血Hemolysis的三個(gè)首字母縮寫(xiě)，這三種樣本對(duì)結(jié)果的影響很大，因?yàn)闃颖颈旧淼念伾秃苤?。目前大多采取的方式是上機(jī)前人工判斷，將這三種樣本單獨(dú)稀釋后上機(jī)，或者將這三種樣本單獨(dú)修改參數(shù)，用樣本空白通道的方式進(jìn)行校正，還有的是上機(jī)自動(dòng)稀釋，還有的采用兩點(diǎn)終點(diǎn)法和雙速率雙固定點(diǎn)法來(lái)盡可能的消除干擾。AU自帶的LIH參數(shù)設(shè)置，是機(jī)器自動(dòng)進(jìn)行LIH樣本的定性判定，并在結(jié)果上給出提示。采用LIH分析，需要在公共試劑里添加一個(gè)專用的或者非專用的LIH試劑。AU自己有專門(mén)的LIH試劑，而非專用的試劑一般是生理鹽水或者水或者測(cè)試項(xiàng)目本身的試劑，這些都需要在公共

50、試劑界面里進(jìn)行設(shè)置。在LIH參數(shù)設(shè)置界面里，LIHReagent要選擇專用試劑（Dedicated）或者非專用試劑（Not dedicated），設(shè)置好樣本量和稀釋量，以及第一試劑的量，然后就是設(shè)置一個(gè)+到五個(gè)+的吸光度值。LIH檢測(cè)是內(nèi)定的參數(shù)，無(wú)法進(jìn)行更改。大致原理是用專用鹽水（或者生理鹽水、去離子水、項(xiàng)目R1試劑）與樣本混合，分別讀取410（主波長(zhǎng)）和480nm（付波長(zhǎng)）波長(zhǎng)下的P1（主讀點(diǎn)）和P0（子讀點(diǎn)）點(diǎn)吸光度值，570和600nm的P2和P0點(diǎn)吸光度值，660和800nm的P3和P0點(diǎn)吸光度值。也就是說(shuō)有三個(gè)內(nèi)置的MB定標(biāo)的終點(diǎn)法項(xiàng)目，分別檢測(cè)LIH在P1、P2、P3點(diǎn)的數(shù)值。吸

51、光度計(jì)算方法是：脂血（乳糜）Lipemia檢測(cè)的吸光度值= P3(OD660-OD800)-P3（RBOD660-RBOD800)也就是P3點(diǎn)的主波長(zhǎng)660nm吸光度值減去子波長(zhǎng)800nm的吸光度值，然后減去同點(diǎn)的試劑空白相應(yīng)波長(zhǎng)的差。黃疸Icterus檢測(cè)的吸光度值=P1OD480-P2OD570)-（P2RBOD660-P3RBOD800)P1點(diǎn)的480nm吸光度值減去P2點(diǎn)的570nm吸光度值，再減去P2點(diǎn)的660nm和P3點(diǎn)800nm的試劑空白吸光度差值。溶血Hemolysis檢測(cè)的吸光度值=P1（OD410-OD480）-（P2RBOD660-P3RBOD800)P1點(diǎn)的410和48

52、0nm的差值減去減去P2點(diǎn)的660nm和P3點(diǎn)800nm的試劑空白吸光度差值。LIH檢查的P0-P3點(diǎn)設(shè)置是在Q鍵菜單里，可以根據(jù)需要修改，不過(guò)默認(rèn)的已經(jīng)足夠了，一般都是樣本加入后的兩三個(gè)點(diǎn)。得到吸光度值數(shù)據(jù)后，還要經(jīng)過(guò)公式計(jì)算才能得到檢查值：LIH檢查值=反應(yīng)吸光度值*（R1.V+S.V）/(300)*(18)/（S.V）計(jì)算出的LIH檢查值與LIH設(shè)置里的LIH判斷水平（LIH Judgment Level）進(jìn)行比較，符合哪一個(gè)范圍就報(bào)告哪一個(gè)定性。AU的手冊(cè)上，除了說(shuō)明專用試劑外，對(duì)于判斷水平的設(shè)置只用了一句聯(lián)系廠家服務(wù)人員帶過(guò)。但在AU640這樣的老版本手冊(cè)中，提供了計(jì)算方式和公式。設(shè)

53、置LIH檢查，這么多年我僅做過(guò)1次，當(dāng)時(shí)是一家醫(yī)院兩臺(tái)同樣的機(jī)器，用生理鹽水做了10個(gè)正常人的標(biāo)本，計(jì)算前幾個(gè)點(diǎn)的吸光度值，按照公式計(jì)算后，得到的檢查值乘以20%輸入到第一個(gè)+號(hào)那里，超過(guò)這個(gè)吸光度就報(bào)告一個(gè)+號(hào)，然后翻倍輸入其余幾個(gè)+號(hào)那里。后來(lái)幾天的測(cè)試結(jié)果出來(lái)后，院方竟然比較滿意，從一個(gè)+號(hào)到五個(gè)+號(hào)都有出現(xiàn)，重點(diǎn)復(fù)查了一個(gè)+號(hào)的標(biāo)本，認(rèn)為取值范圍比較準(zhǔn)確。在AU640的說(shuō)明書(shū)里，廠家給出了一個(gè)實(shí)例，但也聲明僅僅是例子，并不代表標(biāo)準(zhǔn)，各實(shí)驗(yàn)室要自行確定數(shù)值或聯(lián)系客服。由于是定性檢查，而且占用反應(yīng)杯很多，每個(gè)項(xiàng)目都開(kāi)展的話，生化速度勢(shì)必會(huì)降低很多。而且并不多收費(fèi)，所以很多醫(yī)院并不啟用這個(gè)功

54、能。圖28 ISE參數(shù)設(shè)置界面示意圖ISE參數(shù)設(shè)置：安裝ISE模塊后這個(gè)界面才有效。在這個(gè)界面里，可以選擇血清或尿液的K、Na、CL三個(gè)電解質(zhì)項(xiàng)目是否開(kāi)啟；樣本量和稀釋量的設(shè)置，中標(biāo)液和高低標(biāo)準(zhǔn)液濃度的設(shè)置，以及動(dòng)態(tài)范圍和相關(guān)系數(shù)的設(shè)置等。圖29 糖化血紅蛋白設(shè)置界面示意圖糖化血紅蛋白（HbA1c）：上圖是AU專用試劑的糖化血紅蛋白參數(shù)界面，如果第三方的試劑參數(shù)與此類似，照抄或稍微修改即可。根據(jù)這個(gè)參數(shù)做出來(lái)的數(shù)值有三個(gè)，其中T-Hb和HbA1c是直接測(cè)定出來(lái)的，HbA1c%則是(HbA1c/T-Hb)×91.5)+2.15計(jì)算出來(lái)的。采用這個(gè)參數(shù)，需要固定三個(gè)試劑通道，也

55、就是100、101和102，名稱分別是HbA1c%，T-Hb和HbA1c，這是不可更改的。從這張圖可以看出，T-Hb和HbA1c是兩套反應(yīng)，有各自的波長(zhǎng)、方法、試劑以及讀點(diǎn)。圖30 計(jì)算項(xiàng)目設(shè)置界面示意圖計(jì)算項(xiàng)目（Calculated Test）：這是設(shè)置根據(jù)任意幾個(gè)結(jié)果計(jì)算另一個(gè)結(jié)果的界面，給出根據(jù)哪幾個(gè)測(cè)試結(jié)果（Test Name）和常數(shù)（Constant）的值（Value），再經(jīng)過(guò)給出的公式（Formula）進(jìn)行計(jì)算得出的結(jié)果。比如經(jīng)常用到的AST/ALT比值項(xiàng)目，就可以在這里進(jìn)行設(shè)置，計(jì)算后在結(jié)果里多出一個(gè)AST/ALT項(xiàng)目和數(shù)值。圖31 范圍設(shè)置界面示意圖范圍（Range）

56、設(shè)置：這個(gè)功能目前很少使用了，因?yàn)槎加肔IS進(jìn)行設(shè)置。在這里，可以設(shè)置正常范圍，根據(jù)年齡段和性別設(shè)定正常范圍，危急值設(shè)定，還有項(xiàng)目結(jié)果的單位。當(dāng)然也可以設(shè)置是數(shù)值還是旗標(biāo)，也就是定性還是定量。5.自動(dòng)重測(cè)參數(shù)（Repeat Parameters）設(shè)置：自動(dòng)重測(cè)功能十分有用，特別是針對(duì)特異樣本，比如濃度極高的樣本非常有效。但自動(dòng)重測(cè)功能設(shè)置很有琢磨勁兒，不是簡(jiǎn)單的超過(guò)高低值就重測(cè)這么簡(jiǎn)單。首先要了解一下旗標(biāo)5.1旗標(biāo)（Flag）：下圖是AU680的旗標(biāo)，以及旗標(biāo)產(chǎn)生的范圍，不做翻譯，可自行翻譯或?qū)φ罩形氖謨?cè)。圖32 旗標(biāo)Flag列表5.2 自動(dòng)重測(cè)公共參數(shù)（Repeat Common）：圖33 自動(dòng)重測(cè)公共參數(shù)示意圖在這個(gè)界面中，Data Flag數(shù)據(jù)旗標(biāo)里有兩個(gè)選項(xiàng)（是否啟用旗標(biāo)自動(dòng)重測(cè)和是否將重測(cè)結(jié)果覆蓋原始結(jié)果），和三組選擇。第一組選擇是等量重測(cè)，20個(gè)旗標(biāo)可供選擇，可以全選也可以部分選擇。當(dāng)選擇的旗標(biāo)出現(xiàn)時(shí)，自動(dòng)等量樣本重測(cè)一次。這個(gè)意義不大，首先儀器要保證的是重復(fù)性，如此重測(cè)數(shù)值差別不大，其次是重復(fù)性不好的儀器，無(wú)論怎么