(整理)園藝植物育種學(xué)2實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)-20142

1、園藝植物育種學(xué) 2實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書適用專業(yè)：園藝齊齊哈爾大學(xué)2014 年 4 月實(shí)驗(yàn)一 園藝植物 花器構(gòu)造及 開花習(xí)性調(diào)查一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 花是有性雜交的主要材料， 了解不同園藝植物開花習(xí)性的特點(diǎn)， 是準(zhǔn)確選擇雜 交用的花朵和決定采集花粉，去雄、授粉時(shí)間的主要依據(jù)。2. 掌握?qǐng)@藝植物花開花習(xí)性的主要觀察項(xiàng)目和觀察方法。二、實(shí)驗(yàn)原理 不同園藝植物因自身的發(fā)育特點(diǎn)不同其花器構(gòu)造及開花習(xí)性也不相同。 此項(xiàng) 調(diào)查可作為識(shí)別品種， 制定雜交計(jì)劃的主要依據(jù)， 如準(zhǔn)確選擇雜交用的花朵和決 定采集花粉，去雄、授粉時(shí)間。主要包括花期、花型、花性、花梗、花托、萼片、花朵、雄蕊以及雌蕊等調(diào) 查項(xiàng)目，如花梗的長(zhǎng)短、花托的形

2、狀、萼筒的顏色和形狀、花瓣的顏色、大小、 形狀、雄蕊的數(shù)量和形狀以及雌蕊的數(shù)量和形狀等， 同時(shí)還可以根據(jù)花器特征來 確定其傳媒類型。三、材料每人選取 3種不同園藝植物 （連翹、榆葉梅、黃刺玫、丁香、繡線菊、番茄、 李、蘋果等 ），每種園藝植物選取木本植物 2 株，草本植物要選取 5株作為觀察 材料。四、用具放大鏡、鑷子、卷尺、記錄本等。五、方法步驟觀察項(xiàng)目主要包括：1. 園藝植物種類、科屬及觀測(cè)地點(diǎn)2. 花芽的類型 純花芽、混合花芽 純花芽?jī)?nèi)只有花器官，芽萌發(fā)后，只開花結(jié)果，不抽生枝條，多數(shù)花卉屬于 此類； 混合花芽在芽?jī)?nèi)除有花器官外，還存在枝葉或葉的原始體，開花的同時(shí) 可抽生枝條，如懸鈴木等

3、。統(tǒng)計(jì)花芽的類型。3. 花型或花序類型 包括單瓣、重瓣，大花、小花等?；ㄐ偷谋憩F(xiàn)對(duì)于植物的傳粉和結(jié)實(shí)會(huì)產(chǎn)生 影響。統(tǒng)計(jì)花型，指出是單花還是花序。4. 花性（性型）： 包括雌雄異株、雌雄同株異花和雌雄同花（兩性花） 。有些植物在一個(gè)植株 上既有兩性花又有單性花； 還有些植物盡管具有兩性花， 但表現(xiàn)為雄蕊或雌蕊退 化。統(tǒng)計(jì)花性（性型） 。5. 花瓣：花瓣的顏色、形態(tài)等表現(xiàn)往往與植物的傳粉方式和授粉習(xí)性有較大 的關(guān)系。如開花時(shí)花瓣緊閉者 （金魚草等） 一般采用自花授粉。 統(tǒng)計(jì)花瓣的顏色、 形態(tài)、花瓣數(shù)目、花冠直徑、花蕾顏色。6. 雄蕊和雌蕊： 雄性和雌蕊的生長(zhǎng)發(fā)育狀態(tài)、 著生方式與植物的授粉特點(diǎn)、

4、結(jié)實(shí)能力等有很 大的關(guān)系， 觀察記錄雄性和雌蕊的生長(zhǎng)發(fā)育狀態(tài)、 雄蕊和雌蕊的顏色、 著生方式 測(cè)定花柱長(zhǎng)度、花絲長(zhǎng)度、花絲數(shù)目、花柱數(shù)目、花柱是否開裂（幾裂） 。7.花梗：花梗長(zhǎng)度、花梗顏色、等。再隨機(jī)選取 5 株未開放的花序進(jìn)行標(biāo)記，觀察開 放順序和計(jì)算開花天數(shù)（包括單花時(shí)間、全花序時(shí)間、全株時(shí)間） ，并計(jì)算花序 花朵數(shù)的平均值。 同時(shí)記錄叢現(xiàn)蕾期到盛花期的花藥變化、 子房狀態(tài)、 胚囊及散 粉孔變化等。8.花期：開花物候期調(diào)查 不同的園藝植物其開花時(shí)間差異較大，如梅花、玉蘭、連翹等在早春開花， 懸鈴木、牡丹、芍藥等春季開花， 荷花夏天開， 菊花秋天開，蠟梅則怒放于冬季， 而月季、矮牽牛、四季

5、桂等一年四季均能開花。此外，不同品種的始花期、盛花 期、終花期及整個(gè)開花過程的長(zhǎng)短也不相同。 通過觀察明確不同植物及品種的花 期和開花規(guī)律對(duì)于人工雜交具有重要的指導(dǎo)意義。1）觀察開放順序和計(jì)算開花天數(shù)（包括單花時(shí)間、全花序時(shí)間、全株時(shí)間）2）每組同學(xué)吸輪流每天對(duì)植株進(jìn)行觀察，記載當(dāng)天開放的花朵數(shù)以及天氣 和溫度。3）統(tǒng)計(jì)初花期（花開放約 5% ）、盛花期（花開放 25-75%）、末花期（部分 花朵脫落）4）在盛花期，從早上 7 時(shí) 30 分到晚上 6 時(shí) 30分，每隔 2h 觀察一次，開 放的花朵數(shù)和溫度，統(tǒng)計(jì) 1d 內(nèi)何時(shí)開花最多。保護(hù)樹木，不許攀折六、作業(yè)1. 繪制所調(diào)查的 3 種園藝植物

6、的花蕾和花朵的形態(tài)特征圖。2. 自制表格進(jìn)行花器構(gòu)造觀察描述記載。3. 設(shè)計(jì)開花物候期觀察記載表，內(nèi)容包括種類、露瓣期、始花期、盛花期、 末花期及 1d 內(nèi)開花做多的時(shí)間和最早開花的部位。實(shí)驗(yàn)二 花粉收集、貯藏及花粉生活力測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 掌握鮮花粉收集、儲(chǔ)藏的方法及原理。2. 觀察花粉在人工配制的培養(yǎng)基上的萌發(fā)情況， 認(rèn)識(shí)花粉萌發(fā)形成花粉管的 外形和伸長(zhǎng)過程，為理解植物的生殖過程奠定基礎(chǔ)。二、實(shí)驗(yàn)原理花期不遇，給雜交工作造成困難， 有的樹木和園藝植物可通過延長(zhǎng)花期解決， 有的不得不進(jìn)行花粉儲(chǔ)藏，花粉貯藏對(duì)某些園林植物雜交育種具有重要的意義。 通過花粉貯藏，它可以使一些遲開花的園林植物和早

7、開花的園林植物進(jìn)行雜交， 或到較遠(yuǎn)的地方給母本授粉， 花粉的貯藏與運(yùn)輸可以打破雜交育種中雙親時(shí)間上 和空間上的隔離，擴(kuò)大育種的范圍。花粉在貯藏期間的穩(wěn)定性， 與花粉壁外層 （外壁） 的性質(zhì)和貯藏期間花粉原 生質(zhì)的代謝有關(guān)。在貯藏期間代謝調(diào)較少可溶性糖類和有機(jī)酸的花粉能夠在較長(zhǎng) 期間保持其活力?；ǚ圪A藏的原理在于創(chuàng)造一定的條件，使花粉降低代謝強(qiáng)度， 延長(zhǎng)花粉的壽命?；ǚ蹓勖拈L(zhǎng)短，因植物種類不同而異。在自然條件下，大多 數(shù)植物的花粉從花藥散出后只能存活幾小時(shí)， 幾天或幾個(gè)星期。 如一般木本植物 花粉壽命很長(zhǎng)，如在干燥涼爽的條件下，柑橘花粉能存活4050d，椴樹 45d，蘋果 1070d，櫻桃 3

8、0100d，麻櫟一年， 葉培忠教授試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)杉木的花粉可存 活 17 年之久；而在草本植物中， 如棉屬花粉采下后 24h 存活只有 65，超過 24h 很少存活；多數(shù)禾本科植物的存活時(shí)間不超過一天，如玉米 1 2d，水稻花粉在 田間條件下 3min 就有 50喪失生活力， 5min 后幾乎全部死亡， 是壽命最短的例 子。一般在自然條件下自花授粉植物花粉壽命比常異花、 異花授粉植物為短。 花 粉的類型和生活力也表現(xiàn)了相關(guān)性， 通常三胞花粉的壽命要比二胞花粉短， 如水 稻等禾本科植物為三胞花粉，壽命都是比較短的?；ǚ蹓勖拈L(zhǎng)短除了上述因種遺傳性的差異以外， 還與溫度、 濕度有密切的 關(guān)系。通常高溫高

9、濕下花粉呼吸旺盛， 會(huì)很快失去生命力， 但在極干燥的條件下， 花粉失去水分，也不利于保存。據(jù)亞達(dá)姆斯試驗(yàn)，蘋果花粉在干燥狀態(tài)下，可保 存 3 個(gè)月；如放在 2 8，濕度 80的條件下，經(jīng)過 5 個(gè)星期即失去生活力。 維霍夫試驗(yàn)中，丁香的花粉貯藏在干燥器中， 15d 以后發(fā)芽率降到 50；至 20d 時(shí)，僅有個(gè)別花粉發(fā)芽；到 30d 時(shí)，即全部死亡。因此，暫時(shí)不用的花粉，應(yīng)立 即在適宜的條件下貯藏， 妥善保存。 為保持花粉生活力則人為采取減低其代謝強(qiáng) 度，保持其純潔性，將其貯存于低溫、干燥、黑暗，并較為穩(wěn)定的環(huán)境條件下， 以保持其活力。近年來，在貯藏花粉方面利用超低溫 （-192 的液態(tài)空氣或

10、-196 的液氮）、真空或降低氧分壓以及快速冷凍干燥等方法，延長(zhǎng)花粉生活力取得良 好的效果及應(yīng)用。了解花粉的生活力對(duì)于農(nóng)林生產(chǎn)和育種工作具有重要意義。 在生產(chǎn)和雜交工 作中需要進(jìn)行的人工輔助授粉的雜交授粉，都需要收集和貯藏具有生活力的花 粉，花粉的生活力除受植物本身的遺傳決定外， 同時(shí)受環(huán)境影響。 不同來源的花 粉生活力高低存在很大差異， 花粉生活力的大小是保證雜交成功的關(guān)健。 在有性 雜交育種中， 常因父母本花期的不同， 作為父本的花粉必須經(jīng)過貯藏直到母本植 株開花時(shí)在植株開花時(shí)在用于授粉； 為了避免雜交工作失誤， 在使用遠(yuǎn)地寄來的 花粉或 一段時(shí)間儲(chǔ)藏的花粉之前，必須對(duì)花粉生命力進(jìn)行鑒定，

11、以便對(duì)雜交成 果進(jìn)行分析與研究。通?；ǚ鄣男螒B(tài)、 花粉中酶的活性以及積累淀粉 （淀粉質(zhì)花粉） 的多少與花 粉生活力密切相關(guān)， 因此可以利用花粉的形態(tài)觀察， 過氧化物酶、 脫氫酶的活性 高低，淀粉的含量以及在人工培養(yǎng)基上花粉管萌發(fā)的情況作為確定花粉生活力高 低的標(biāo)準(zhǔn)。三、實(shí)驗(yàn)材料、主要試劑及儀器（一）各種園藝植物花粉 如榆葉梅、黃刺玫、丁香、等植物的花粉（二）主要儀器 載玻片、蓋玻片、凹玻片、解剖針、毛筆、棉球、干燥器、硫酸紙級(jí)硫酸紙 袋、曲別針、小指形管、標(biāo)簽、標(biāo)記筆、顯微鏡、脫脂棉、花粉篩、冰箱、顯微 鏡、恒溫溫箱、瓷盤、鑷子、培養(yǎng)皿、玻璃棒、玻璃鉛筆、凡士林（三）主要試劑硫酸 H2SO4（

12、相對(duì)密度 1.45 ）、無水氯化鈣、硅膠、碘碘化鉀、氯化三苯基 四氮唑、聯(lián)苯胺、 -萘酚、 Na2HPO4·2H2O、KH2PO4、蔗糖或葡萄糖溶液、 H3BO3、 Ca（NO3）2、MgSO4、KNO3、酒精、碳酸鈉、過氧化氫四、實(shí)驗(yàn)要求1、查閱相關(guān)文獻(xiàn)資料，根據(jù)所學(xué)知識(shí)，就實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛯?shí)驗(yàn)內(nèi)容設(shè)計(jì)出可行 的實(shí)驗(yàn)方案，設(shè)計(jì)方案包括：（1）花粉收集方法（2）花粉采集時(shí)間（3）花粉采集部位（4）花粉貯藏條件（5）花粉生活力測(cè)定方法2、實(shí)驗(yàn)方案須交指導(dǎo)教師修改，和指導(dǎo)教師商討后開始實(shí)驗(yàn)。3、設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案前要多查閱文獻(xiàn)資料。4、實(shí)驗(yàn)完成后，要認(rèn)真分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，總結(jié)實(shí)驗(yàn)成敗的因素，寫出2000

13、字以上研究小論文五、實(shí)驗(yàn)方法與步驟（一）收集花粉選擇健壯的植株上正常的花朵， 在開花前一天套硫酸紙袋， 下口用曲別針別 好以免混入其他花粉，第二天花藥開裂后收集花粉；或采集開花前一天的花粉， 第二天進(jìn)行必要的加溫處理， 使花藥開裂后收集花粉； 或采集開花前一天的花蕾， 第二天進(jìn)行必要的加溫處理， 使花藥開裂后搜集花粉。 注意一定要采集花藥開裂 前后的新鮮花粉， 對(duì)不成熟的幼嫩花藥的花粉， 成熟過頭的花粉被雨露粘濕的花 粉，有疑問的花粉基雜質(zhì)要除去。（二）干燥及貯藏花粉采集后置于清潔的環(huán)境， 以免菌類侵入引起發(fā)霉影響生命力， 并及時(shí)干 燥，可放在散光下晾干、陰干或放入盛有 CaCl2（ H2SO

14、4、硅膠、醋酸鉀飽和液、 NaOH等）的干燥器中干燥，一般以花粉由相互粘結(jié)至極易分散象水一樣不粘玻 璃壁為度， 用花粉篩篩去雜質(zhì)， 根據(jù)使用的次數(shù)將其分裝于數(shù)個(gè)指形管中， 避免 因啟封而使溫度、 濕度劇變?cè)斐苫ǚ凵盍︿J減。 一般以 1/5 或更少為宜， 管口 用脫脂棉塞好， 活用雙層的干凈紗布扎好， 有利于氣體交換和過濾氣體， 貼好標(biāo) 簽，表明植物品種名稱、 采集日期、 地點(diǎn)、貯藏條件（濕、溫條件）即統(tǒng)一編號(hào)。 然后放入無水氯化鈣或不同濃度的 H2SO4 控制的一定濕度的干燥器中，最后把干 燥器置于 02或 0以下的冰箱中貯存。同時(shí)設(shè)對(duì)照，在室內(nèi)自然溫度、 濕度及陽光條件下， 個(gè)一定時(shí)間進(jìn)行

15、花粉生 活力測(cè)定，比較其差異性。（三）花粉生活力測(cè)定鑒定花粉生活力的方法有很多， 概括起來不外下列幾種： 一是將待測(cè)花粉直 接授粉，最后計(jì)算結(jié)實(shí)數(shù)和結(jié)籽數(shù)； 二是將花粉授到柱頭上， 隔一定時(shí)間切下柱 頭，在顯微鏡下觀察花粉萌發(fā)情況， 測(cè)定萌發(fā)率；三是形態(tài)觀察； 四是染色觀察； 五是在人工培養(yǎng)基上播種花粉， 觀察萌發(fā)率。 以后三種為主介紹花粉生活力測(cè)定 的具體方法。1. 形態(tài)觀察法 一般把具有品種典型性的花粉（指具有該品種花粉粒的大小、形態(tài)色澤等） 作為具有生活力的花粉，把小型的、皺癟的、畸形的作為無生活力的花粉。形態(tài)觀察的具體方法是： 首先將花粉置于載玻片上， 在顯微鏡下查看 5 個(gè)視 野，要

16、求被檢查的花粉?？倲?shù)達(dá) 100粒以上， 計(jì)算正?；ǚ哿Ｕ伎倲?shù)的比率。 此 法簡(jiǎn)便易行，但準(zhǔn)確性差，通常只用于測(cè)定新鮮花粉的生活力。2. 染色觀察法（1）碘碘化鉀染色法。先稱取 0.3g 碘和 1.3g 碘化鉀溶于 100ml 的蒸餾 水中，即成碘碘化鉀溶液。 取少量花粉振播到用棉球擦凈的普通載玻片上， 然 后加水一滴，使花粉散開，再加一滴碘碘化鉀溶液，蓋上蓋玻片，置于顯微鏡 下觀察不同的 5 個(gè)視野，凡花粉粒被染成藍(lán)色的表示具有生活力， 呈黃褐色為缺 少生活力的花粉（遇碘變藍(lán)是淀粉的特性） 。（2）氯化三苯基四氮唑（ TTC）法。凡具有生活力的花粉，在其呼吸作用中 都有氧化還原作用， 而無生活

17、力的花粉則無此反應(yīng)， 因此當(dāng) TTC滲入有生活力的 花粉時(shí)其脫氫酶在催化去氫過程中與 TTC結(jié)合，是污水的 TTC變成 TTF而成紅色。磷酸鹽緩沖液的配置：在 100ml 的蒸餾水中溶解 0.832g 的 Na2HPO4·2H2O和 0.273g 的 KH2PO4，調(diào)整 pH值為 7.17 。TTC溶液配置：取 0.02 0.05g 的 TTC溶解于 10ml 磷酸緩沖液中，放于棕 色瓶中，置于暗處。 取少量花粉于凹玻片的凹槽內(nèi)或直接放于普通載玻片上， 滴 入 0.5 TTC溶液一兩滴，用鑷子攪拌均勻，蓋上蓋玻片，將此片置于 35 40 下 1520min，在顯微鏡下觀察不同的 5

18、個(gè)視野，反被染成紅色的均為有生活力 的花粉。（3）- 萘酚法 配制藥液A. 將0.20g 聯(lián)苯胺溶于 100ml的 50的乙醇中，盛入棕色瓶中，放暗處備用。B. 0.15 克 -萘酚溶于 100ml 的乙醇中，盛入棕色瓶中，放暗處備用。C. 0.25 克碳酸鈉溶于 100ml 蒸餾水中，盛入白色瓶中備用。D. 將以上三種溶液等量混合，即成“甲液” ，盛如棕色瓶中。E. 將 3%過氧化氫，臨用前用蒸餾水稀釋成 0.3%溶液，即成“乙液”，隨配隨用。 制片取花粉少許，撒入凹型載玻片的凹點(diǎn)內(nèi)，滴入“甲液” ，片刻后在滴入“乙 液”， 3 5min 后，在顯微鏡下觀察不同的 5 個(gè)視野。凡有生活力的花

19、粉為紅色 或玫瑰紅色。黃色的（不著色的） ，為無生活力的花粉。3. 發(fā)芽實(shí)驗(yàn)法此法受花粉萌發(fā)的培養(yǎng)基限制。 若有適宜的培養(yǎng)基能精確測(cè)定出具有生活力 并能夠萌發(fā)的花粉粒的個(gè)數(shù)，還能看到花粉粒發(fā)芽的真實(shí)情況。（1）懸滴液發(fā)芽法把供試花粉播種在一定濃度的培養(yǎng)液液面上， 使其花粉真實(shí)地發(fā)芽， 以測(cè)定 生活力高低的一種方法。 培養(yǎng)液一般都是用蔗糖或葡萄糖溶液， 濃度因物種而不 同，差別很大。 糖液濃度高低是為了調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的滲透壓， 防止供試的花粉在溶 液中發(fā)生破裂。適合多數(shù)園林植物花粉的發(fā)芽，通用培養(yǎng)基配方如下：蔗糖 10加 H3BO3100mg/L，C（a NO3）22300mg/L，MgSO4200

20、 mg/L，KNO3100 mg/L， 可配成母液，用時(shí)稀釋，母液放在冰箱中保存。具體操作方法：配制 10蔗糖溶液，滴一滴于凹玻片上，取少量花粉置于 滴液中，用大頭針攪拌均勻， 然后將凹玻片放在培養(yǎng)皿加蓋放到 20-25溫箱中。 加蓋 2h 后花粉即開始萌發(fā)， 24h 后在顯微鏡下檢查發(fā)芽花粉的百分率。不同物 種的花粉發(fā)芽所需的時(shí)間不同，如牡丹花粉用15蔗糖溶液在室溫條件下，接種后一小時(shí)即可觀察 ?；ǚ郯l(fā)芽檢查在低倍鏡下進(jìn)行，花粉的長(zhǎng)度為花粉粒直 徑 2 倍以上才算發(fā)芽， 一倍以上者算萌芽。（2）培養(yǎng)基發(fā)芽法培養(yǎng)基的制備： 在 250ml的燒杯中加入 90ml 蒸餾水，再加入 1g 的瓊脂，

21、在酒精燈上加熱，使之完全溶解，然后加入定量蔗糖，制成不同濃度（ 5%、10%、 15%、 20%）的蔗糖瓊脂培養(yǎng)基（分組加，每組制成一個(gè)濃度） ，為了防止水分蒸 發(fā)，配制加熱的燒杯應(yīng)加蓋。先把水在酒精燈或電爐上加熱煮開，倒入瓊脂，使之融化，然后倒入蔗糖， 用玻璃棒不斷攪拌， 呈透明狀即可。 為保持培養(yǎng)的濃度， 可在燒杯上液面處貼上 紙條或用玻璃鉛筆沿液面劃線標(biāo)記， 當(dāng)液面在熬制過程中因水分蒸發(fā)下降時(shí)應(yīng)及 時(shí)添加蒸餾水， 以保持液面的穩(wěn)定和培養(yǎng)基的標(biāo)準(zhǔn)濃度， 并將熬制好的培養(yǎng)基溶液連同燒杯放入盛有 35熱水的容器中，防止冷卻凝固，以備隨后使用，即配 成 5%濃度的培養(yǎng)基。同法配成 10%、15%

22、、 20%濃度的培養(yǎng)基。用品消毒： 發(fā)芽實(shí)驗(yàn)時(shí)所用的載玻片、 凹玻片、 鑷子等都要在消毒柜中消 毒或在 100條件下煮沸 20min，冷卻后取出用酒精棉球擦干放在大培養(yǎng)皿中備 用，經(jīng)過消毒過的載玻片使用時(shí)要盡量減少和手指接觸的面積，以減少污染。 花粉的播種與檢查： 用玻璃棒蘸取培養(yǎng)基溶液， 立即滴一滴于蓋玻片的中 央（直徑 1.5-2.0mm），使成為一表面完整的球面（球面越薄越好，否則透光性 差，影響在顯微鏡下觀察） ，當(dāng)凝固后再進(jìn)行花粉的播種。播種花粉時(shí)， 用經(jīng)過酒精消毒過的發(fā)絲蘸取花粉 （若所用花粉為陳花粉或過 于干燥的花粉時(shí)，可在播種前取出一部分在濕氣大的培養(yǎng)皿中密閉 15-30min

23、 后 在行播種），輕輕震動(dòng)（風(fēng)媒花）或涂抹（蟲媒花）在培養(yǎng)基表面。一要注意發(fā) 絲不能過重地接觸培養(yǎng)基表面， 避免破壞培養(yǎng)基的表面； 二是要注意花粉的分布 要松散、均勻，不能密集成堆， ；三要注意適宜的播種數(shù)量。經(jīng)驗(yàn)證明，花粉太 稀，影響發(fā)芽，播種太稠也影響發(fā)芽， 一般情況下， 一個(gè)顯微鏡視野以分布 20-50 ?；ǚ蹫橐?。 播好后將蓋玻片翻轉(zhuǎn)， 置于載玻片上的小玻璃環(huán)上， 小玻璃環(huán)上下 涂上凡士林，環(huán)內(nèi)加 1 第水用于保濕。濕室密封后，應(yīng)在載玻片上用玻璃鉛筆標(biāo)號(hào)， 并進(jìn)行記錄， 記錄內(nèi)容包括花 粉種類、培養(yǎng)基的糖液濃度、采粉時(shí)間，播種時(shí)間、濕室中滴水的多少。然后全 組集中放在一個(gè)大的瓷盤中，用

24、紗布覆蓋后加蓋，放于 15-25的溫箱內(nèi) 24h 后 進(jìn)行檢查。如果時(shí)間允許，最好播后每隔 2-3h 檢查一次，直至花粉粒發(fā)芽數(shù)不 再增加為止，記載花粉發(fā)芽數(shù)， 以明確不同花粉的發(fā)芽的速度和發(fā)芽進(jìn)程。 牡丹 花粉接種后 1h 即可觀察。花粉發(fā)芽檢查在低倍鏡下進(jìn)行，花粉的長(zhǎng)度為花粉粒 直徑 2 倍以上算發(fā)芽，一倍以上者算萌芽。每片應(yīng)觀察 5 個(gè)視野花粉數(shù)不少于 100 粒以上，計(jì)算發(fā)芽率，此法每人做 3 片，選發(fā)芽情況最好的一片進(jìn)行發(fā)芽情 況的檢查。五、思考題1. 詳細(xì)記載花粉采集及貯存的日期、 花粉名稱、花粉收集方法及過程、 花粉 貯藏方法。2. 通過實(shí)驗(yàn)總結(jié)所采集貯藏的花粉種類的特點(diǎn)。3.

25、用染色法計(jì)算花粉生活力（ 5 個(gè)視野）。用發(fā)芽法計(jì)算花粉生活力（ 5 個(gè) 視野）。4. 繪一幅花粉粒發(fā)芽形態(tài)圖。附表表 1 0 條件下控制各種濕度所需 H2SO4 的百分比濃度相對(duì)濕度0（極干燥）10253550657090H2SO49563.154.148.143.134.829.417.8表 2 幾種物質(zhì)在一定條件下所控制的相對(duì)濕度物質(zhì)溫度保持相對(duì)濕度 / CaCl2032H2SO4 （相對(duì)密度 1.45 ）430硅酸5醋酸鉀飽和液22表 3 花粉生活力測(cè)定統(tǒng)計(jì)表測(cè)定方法花粉種類培養(yǎng)基的 糖液濃度采粉時(shí)間播種時(shí)間濕室中滴 水的 多少有生活力的花粉 / 觀察花粉總數(shù)花粉生活 力/12345總

26、計(jì)碘碘化 鉀染色法氯化三苯 基四氮唑 （TTC）法- 萘酚懸滴液發(fā) 芽法培養(yǎng)基發(fā) 芽法實(shí)驗(yàn)三 有性雜交技術(shù)一、目的和要求園藝植物有性雜交是創(chuàng)造樹新類型的主要方法之一， 本實(shí)驗(yàn)是通過品種間雜 交的實(shí)際操作，掌握有性雜交技術(shù)。二、材料和用具材料：葡萄用具：鑷子、小剪刀、紙牌、透明紙袋、授粉器或毛筆、 細(xì)棉紗線或回形針、 干燥器、指形管、棉花、酒精（ 70%）、紅漆。三、有性雜交技術(shù)葡萄1花器結(jié)構(gòu)及開花習(xí)性大多數(shù)葡萄的栽培品種是完全花， 花很小，著生在復(fù)總狀花序上 （圓錐花序）， 花冠綠色。上部合生，開花時(shí)下部與子房分離，向外卷曲成帽狀脫落，雄蕊56個(gè)。在栽培品種中，除了完全花品種外，還有“雌能花”

27、品種。這種花的雌蕊 完好，有正常受精能力，而它的雄蕊花粉通常是不育的，沒有受精能力。葡萄花芽為混合芽， 著生在結(jié)果母枝的葉腋， 枝條的中下部葉腋芽能形成花 芽，但以基部 38 節(jié)形成的花芽最佳， 在結(jié)果枝上應(yīng)選擇下部的花序供雜交用。新梢下部的花序比上部花序開放早?；ɡ僖话阍谏衔?611 時(shí)開放，以 9 10 時(shí)開放最多，一個(gè)花序的花期約 35 天，柱頭花蕾開放后 46 天內(nèi)有受精 能力。2雜交技術(shù)（1）花粉的收集和貯藏 一般收集葡萄花粉是在晴天的早上，采摘?jiǎng)傞_而未經(jīng)昆蟲訪問過的父本花 序，在室內(nèi)用鑷子取下花藥，這種方法對(duì)花的收集較為經(jīng)濟(jì)，但較費(fèi)事；另一方 法是用透明紙袋直接套在未開的父本花序上

28、，待花盛開時(shí)，用手多次震動(dòng)花序， 花藥，花粉即落至透明紙袋內(nèi)?；ǚ凼占院螅?將它們放在吸水能力強(qiáng)的紙上， 清除其中的花絲， 待花藥稍 干后，再將它們倒入小瓶或指形管中， 用棉花塞好瓶口， 貼上注明品種和采收日 期的標(biāo)簽，放在干燥器內(nèi)，置于 0 10的低溫條件下保存。（2）去雄和套袋供雜交用的花序應(yīng)選擇發(fā)育良好， 著生位置適中的花序。 通常在一個(gè)發(fā)育充 實(shí)的結(jié)果枝上生長(zhǎng)著兩個(gè)以上的花序， 最好選用枝條下部發(fā)育良好的花序， 除去 上部花序。 由于葡萄是無限花序， 一個(gè)花序上的花數(shù)一般可達(dá) 200 1500 朵。因 此，一穗上開花前后不一致增加了雜交的困難， 影響果實(shí)發(fā)育， 所以在選定花序后，一般

29、剪去整個(gè)花穗尖的 1/4 和付穗，每個(gè)花序保留 100150 個(gè)花蕾供雜交 用，修剪花序后，當(dāng)有少數(shù)花已開放，要進(jìn)行疏花疏蕾工作，留下那些大致能在 同一天開放的花蕾。疏穗后應(yīng)隨即去雄。最適去雄時(shí)間是開花前23 天，這時(shí)花蕾已互相分離而肥大。 顏色為黃綠色。 花瓣和花盤已完全分離， 只用鑷子在花 蕾的頂端一夾， 花瓣和花藥即可除去。 去雄后， 應(yīng)檢查有無遺漏的花蕾或殘存的 花藥，然后套上準(zhǔn)備好的透明紙袋，扎緊捆綁在結(jié)果枝上。套袋用的透明紙袋大小一般長(zhǎng) 26 厘米，寬 14 厘米。（3）授粉去雄后 23 天即可進(jìn)行授粉，這時(shí)母本花序的柱頭上分泌有大量的粘液， 表示子房已能接受花粉， 而且給花粉創(chuàng)造了良好的發(fā)芽條件， 是授粉的最適時(shí)機(jī)。 授粉宜在晴朗無風(fēng)的上午 810 時(shí)進(jìn)行。少量花序授粉可用授粉器或毛筆蘸花粉授粉； 大量花序進(jìn)行授粉時(shí)可將花粉放在透明紙袋內(nèi)，套到去雄的花序上，用手指從紙袋外面向花粉集中處彈23下，于是花粉便在紙袋中飛揚(yáng)， 約經(jīng)半分鐘， 使花粉均勻的落在每朵花的柱頭上 以后即可取出；也可用小型噴霧器，當(dāng)手