imej熒光定量方法

1、imej熒光定量方法Ting Bao was revised on January 6, 20021lx安裝后首先打開(kāi)ImageJ：2x打開(kāi)耍分析圖片：File>open （熱鍵為CtrlP）3、轉(zhuǎn)換成 8bit 的灰度圖：Image>Type8-b：Lt4、黑白反轉(zhuǎn)（因?yàn)閷?duì)于光密度（0D）來(lái)說(shuō)越白數(shù)值越小.純白為0：越黑數(shù)值越大.純黑理論上是無(wú)限 大。因此我們需要將上一步所轉(zhuǎn)換的灰度圖進(jìn)行黑白反轉(zhuǎn).不然的話測(cè)出來(lái)的數(shù)值就會(huì)熒光越亮反而 數(shù)值越?。篍dit>Invert （熱鍵為 Ctrl+Shift+I）5、校正光密度（軟件默認(rèn)為測(cè)雖灰，度，1対此我們婆改為更加適用的光密

2、度.其中原理不是一兩句話能說(shuō)得晴的，這里忽略）：Analyze>Calibrate在彈出來(lái)的界而的Function選擇Uncalibrated 0D-并下界面左下方勾選Global calibration,然 后點(diǎn)擊右下角的0K點(diǎn)擊0K后會(huì)跳出校正后的光密度曲線:如不勾選Global calibration.光密度的校正只對(duì)這張圖片有效，一般分析都耍分析參張圖片.所 以需要勾選，勾選后在打開(kāi)另一圖片時(shí)會(huì)提示是否將此校正應(yīng)用于所有圖片.不勾選DisableGlobal Calibration.勾選 Disable these Messagesl卄0 跖 核«X 3曲Analyze

3、>Set scale點(diǎn)擊后在彈岀的界ifti里點(diǎn)擊中間的click to Remove Scale,并勾選下面的Global （同樣的，如不選Global這個(gè)測(cè)雖譏位的選擇只對(duì)這張圖片有效），最后點(diǎn)擊0K7、選擇測(cè)雖項(xiàng)目：Analyze>Set Measurements在彈出界面中選擇我們需要測(cè)ft的項(xiàng)目Area、Integrated density,并勾選下面的Limit to threshold （這個(gè)選項(xiàng)是抬只測(cè)雖我們選中的范【眾 如不勾選側(cè)會(huì)測(cè)址整張圖片數(shù)據(jù)八 選擇后點(diǎn)擊右卜角的Set在彈出來(lái)的界面點(diǎn)擊OK9、測(cè)雖：AnalyzQMeasure （熱鍵為Ctrl+M或直接按

4、M）10、記錄數(shù)據(jù)并計(jì)算：結(jié)果中的Area為選擇范困的山i積.如果是測(cè)量的是細(xì)胞的話就是細(xì)胞在圖中的血枳：IntDen就是所 選范碉的I0D （光密度的總和）c結(jié)果界面中的數(shù)據(jù)可以復(fù)制到Excel等軟件中進(jìn)行計(jì)算。用IntDen的數(shù)值除以Area的數(shù)值得出來(lái)的就是這張圖片中細(xì)胞的平均光密度，以這張圖片的數(shù)據(jù)為 例，即：18854/179252= （/pixel）同法測(cè)址命張圖的平均光密度值后就可以進(jìn)行半定址比較°以下附上分別應(yīng)用Image-Pro Plus及ImageJ對(duì)五張圖片進(jìn)行分析的結(jié)果對(duì)比:Plu；221 仇.432 CL 02?65' W1O35 220, !W5 a OZrn<.« S67101 2701&.07i tt 02SC24 滋）812 2562XHS UO2?!2 novi "OTQJtt a 譏汝0. 02722Z ej83&10： 24125.06 .C2f3T8 9ni65 2T«2 0vmT3 99M77 2SG68.M O.CC%05 8S2S23 2f£B£u34 0.CGU65