079-肝糖原的提取、鑒定與定量實驗報告

1、南方ti科丈修生物化學實驗報告姓名：符含敏學號：3140090079專業(yè)年級：2014級預防醫(yī)學組另ij:第三實驗室生物化學與分子生物學實驗教學中心實驗日期2015-1-8合作者楊銳評分教師簽名實驗地點第三實驗室指導老師朱利娜批改日期格式要求：正文請統(tǒng)一用：小四號，宋體，1.5倍行距；數(shù)字.英文用times newroman；標題用:現(xiàn)多行、多頁空白現(xiàn)象。一、實驗目的：提取雞肝中的肝糖原進行肝糖原的定性以及定量實驗二、實驗原理：1 低濃度的三氯醋酸能使蛋白質變性，破壞肝組織中的酶且沉淀蛋白 質，使糖原能很好地保存在上清液中，95%的乙醇能將濾液中的糖原沉淀。2. 糖原溶液遇碘呈紅棕色，糖原水解

2、成的葡萄糖與班氏試劑水浴加熱可變黑色。步脫水生成糠醛衍生物，它再3糖原在濃酸中可水解為葡萄糖，濃硫酸可使葡萄糖進與蔥酮試劑脫水縮合生成藍色的化合物。4.糖含量在10-100 ug,溶液顏色深淺與可溶性糖含量成正比。三.實驗材料：1雞肝乙醇5%三氯醋酸50%na0h 12mol/lhcl碘試劑班氏試劑普通離心機室溫至100°c恒溫箱可見光分光光度計天平剪刀銀子研缽試管架10ml離心管刻度吸量管白瓷反應板 2. 30%k0h標準葡萄糖溶液90%濃硫酸蔥酮顯色劑四.實驗步驟：1 肝糖原的提取與鑒定：雞肝約1. 5 g,剪碎i +5%cc13cooh 1 ml研磨至乳狀|+5%ccl3c00

3、h 3 ml審磨成肝勻漿全部轉入離心管中，離心3分鐘（4000 r / min）沉淀（棄去）上清離心5(取 3 ml)+ 3ml 95%乙醇，混勻，靜置10分鐘(4000 r / min)上清（棄去）沉淀i+蒸錨水1 ml沸水浴°2分鐘，溶解沉淀碘試劑2滴糖原溶液lmli+濃hc1 5滴詢水浴15分鐘，冷卻+ 50%na0h 5 滴糖原水解液2滴糖原水解液j+班氏試劑4滴混勻沸水浴2分鐘，觀察變化2.肝糖原的定量測定：雞肝0. 15 g|+30%k0h 1.5ml （用吸量管）沸水浴15分鐘冷卻，全部轉入100 ml容量瓶中加水至標線,仔細混勻，此為糖原提取液糖原的測定取3支試管，按下表操作:試劑(ml)空白管標準管樣品管標準葡萄糖溶液1.0糖原提取液1.00. 2%恿酮溶液2.52.52.5(用吸量管)混勻，沸水浴10分鐘，冷卻角在分光光度計620 nm波長處，用空白管溶液調零，測 定各管溶液的吸光度(a) o五.實驗結果的記錄與分析：1.所測吸光度值記錄表標準管糖原提取液吸光度值0. 6930. 7632.肝糖原含量的計算:肝糖原（g/100g 肝組織）=0. 763/0. 693 x0. 05x100/0. 12x0. 1x1. 11=5. 091實驗結果與預估值十分不符3. 實驗過程中的主要圖片:雞肝研磨充分后后班氏試劑瀕色為亮藍色搪原水解液