20156340023-15食品-臧敏

1、濰坊醫(yī)學院實驗報告科目食品理化檢驗班級： 2015 級食品班組別： 5 姓名： 臧敏學號： 20156340023 試驗項目：克倫特羅檢測（elisa檢測法）日期： 2018.04.23 一、實驗?zāi)康模?、掌握 elisa法檢測瘦肉精的原理2、掌握快速檢測的基本程序及操作，具有獨立進行快速檢測的基本技能。二、實驗原理：間接競爭 elisa方法1、在酶標板孔條上預包被克倫特羅抗原，2、 加入抗克倫特羅抗體， 樣本殘留的克倫特羅和微孔條上預包被的抗原競爭抗克倫特羅抗體，3、加入酶標二抗后，用tmb 底物（標記物為辣根過氧化物酶）顯色。4、樣本吸光值與其殘留物克倫特羅呈負相關(guān)，與標準曲線比較再乘以其

2、相對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中克倫特羅的含量。三、實驗主要儀器設(shè)備：克倫特羅 elisa檢測試劑盒（深圳市綠詩源生物技術(shù)有限公司）、微孔板酶標儀450/630nm、電子稱（ 0.01g）、漩渦混合振蕩器、離心機（15ml管和 1.5ml ep 管）、恒溫培養(yǎng)箱四、實驗步驟：1、樣品前處理組織用剪刀剪碎，研缽內(nèi)研成勻漿，取2g 肉/ 肝臟勻漿放入 15ml 離心管中 加入 6ml 去離子水，充分震蕩2min，室溫 4000r/min 以上離心 10 分鐘，（注若組織樣本中油脂含量較高，可在振蕩后放入85水浴 10min 后再離心。） 取 20ul 上層液進行分析，樣本稀釋4 倍。 2 、分析微

3、孔板編號， 如 1-12 號標準品，13/14 號樣品等 (每樣品或標準品均做平行對照即各2 孔) 加標準品 / 樣品：微孔中加入 20ul 樣品或標準品 +50ul 克倫特羅酶標物 +80ul 克倫特羅抗試劑，輕輕振蕩混勻，蓋板膜蓋板后，25避光 30min 洗板：孔內(nèi)液體甩干，用去離子水液300ul/ 孔，充分洗滌 5 次，每次間隔 30s，用吸水紙拍干（若有未拍干的氣泡用槍頭戳破）顯色： 每孔加入 50ul 底物 a+50ul 底物 b， 輕輕振蕩混勻，蓋板膜蓋板后，25避光 15-20min（藍色）測定：加入 50ul 終止液（黃色），輕輕振蕩混勻。酶標儀450nm/630nm 雙波長

4、檢測 od值（可在加入終止液前目測含五、實驗結(jié)果及計算：1. 原始數(shù)據(jù)：a b c d e f 樣品 1 樣品 2 濃度值0 0.1 0.3 0.9 2.7 8.1 吸光度值 1 2.790 1.250 1.037 0.675 0.354 0.196 2.692 1.489 吸光度值 2 2.577 1.356 1.156 0.874 0.361 0.209 2.278 1.434 平均值2.6835 1.3030 1.0965 0.7745 0.3575 0.2025 2.4850 1.4615 吸光度值百分比（% ）48.56% 40.86% 28.86% 13.32% 7.55% 92.

5、60% 54.46% 2. 標準曲線y = -12.53ln(x) + 26.359r2 = 0.99450510152025303540450.250.5124吸光度值百分比（%）濃度值的半對數(shù)克倫特羅吸光度值百分比吸光度值百分比對數(shù)(吸光度值百分比 )3. 樣品濃度值計算計算過程：樣品 1：c=exp(26.359-92.6)/12.53)*4=0.005059*4=0.0202ppb 樣品 2：c=exp(26.359-52.46)/12.56)*4=0.125167*4=0.5007ppb六、討論1、檢測結(jié)果本組樣品 1 為豬肉，樣品 2 為豬肝，其克倫特羅含量分別為0.0202ppb

6、、0.5007ppb，根據(jù)豬肉中克倫特羅標準 : 加拿大和 who 是 40ppb,而聯(lián)合國糧農(nóng)組織則是10ppb。中國、日本和新西蘭規(guī)定該國生產(chǎn)不許使用，但進口豬肉中則允許有小于10ppb 的殘留。此次試驗豬肉和豬肝為非進口產(chǎn)品，所以其克倫特羅含量均超標。2、分析討論1）、實驗操作過程中標槍使用不夠規(guī)范，試劑可能有輕微污染2）、試劑反應(yīng)過程中由于同學無意的行為導致實驗試劑之間可能相互污染影響實驗結(jié)果3）、試劑反應(yīng)時間以及洗滌時間過短，反應(yīng)及洗滌不完全也會影響結(jié)果七、注意事項1. 試劑使用前要回復到室溫否則影響結(jié)果（室溫放置30min 以上）2. 洗版拍干后要立即進行下一步否則影響結(jié)果3. 每加一種試劑前需輕