影響體細胞胚胎文化的ChorisiaSpeciosa的因素

1、摘 要為使美麗異木棉快速且高品質的繁殖，掌握影響美麗異木棉愈傷組織體細胞培養(yǎng) 的因素，進行了美麗異木棉愈傷組織體細胞胚胎培養(yǎng)試驗。試驗結果表明，美麗異木 棉植物體細胞胚的培養(yǎng)，第4次繼代培養(yǎng)美nhf異木棉胚性愈傷組織產(chǎn)生率最高，為16%; 平板培養(yǎng)出現(xiàn)愈傷組織的概率為8.3%。關鍵詞美麗異木棉組織培養(yǎng)影響因素factors effecting somatic embryo cultures of chorisia speciosasong yiyangabstract： in order to mastering the effecting factors of somatic embryo

2、culturesof chorisia speciosa. to propagating rapid and high quality.，an experiment was implemented about somatic embryo cultures of chorisia speciosa. the test results show that the chorisia speciosa plant cultivation of somatic embryogenesis，fourth successive transfer culture beautiful vision kapok

3、 embryonic callus have the highest rate，16%; the plate culture appears the probability of callus was 8.3%.key word： chorisia speciosa tissue culture factors effecting1引言美hlm異木棉q chorisia speciosa）又稱南美木棉或美人樹，是木棉科好木棉展植物， 此植物高約10-15米，花期在冬季，約3個月，是優(yōu)良的觀賞喬木，樹干呈濃綠色， t部膨人，成樹如酒瓶狀，且具有圓錐狀皮刺，也常作為高級行道樹。春季種子即可 成熟。

4、在廣州，種子一般在10至12月份成熟，常采用隨采隨播的播種繁殖方式。發(fā) 芽率可高達90%,但時間推移，發(fā)芽率會降低。這種繁殖方式對季節(jié)時間的要求較高， 繁殖率較為不穩(wěn)定，同時容易產(chǎn)生性狀分離，不能保證植物的優(yōu)勢。迄今為止，國內外有關美麗異木棉的研宂較少。世界權威的園藝書籍（hortusthird 和the new york botanical garden illustrated encyclopedia of horticulture均認為美麗 異木棉樹種唯一的繁殖方式是種子繁殖m。李虬曾對木棉科植物引種及繁殖做了研究, 研究表明，美麗異木棉是上世紀70年代末、80年代初被引入我國，至199

5、6年我國僅 存有4株，分別存于華南植物園，廣州市園林科研所，海南尖峰嶺樹木園。但十多年， 我國的4株美麗異木棉均不能自然結實。人工自花授粉技術也不能使其結實1。由此 推斷，美麗異木棉在我國難以有性繁殖。隨著吋間流逝，技術進步，環(huán)境氣候的改善，肖珍泉等人對美麗異木棉的種子繁 殖方式和栽培管理技術做了研究；研究表明，美麗異木棉在廣州地區(qū)可以自然結實， 結實期在每年的4一5月，但結實量不多，一棵胸徑30cm的美麗異木棉也只能結兒 個果，每一個果大概有80-120粒種子。稍微用力擠壓，成熟的果實便會開裂，如果 結實期未能對果實及時采摘，便會造成果實開裂，種子便隨綿毛飛走，且任何方式不 能有效的改善種子

6、的發(fā)芽率和發(fā)芽勢2。美麗異木棉在我國的繁殖問題仍舊是我國美麗異木棉方向需要重點解決的問題之 一。愈傷組織體細胞胚培養(yǎng)的培養(yǎng)周期較短，能大量快速的培養(yǎng)結構完整且性狀較為 單一的植物體。愈傷組織體細胞胚培養(yǎng)在細胞水平上進行遺傳操作為高等植物品種改 良提供了可靠的依據(jù)和有效途徑。此次實驗通過美麗異木棉愈傷組織體細胞胚培養(yǎng)的 方法對美麗異木棉進行培養(yǎng)研究，以期找出美麗異木棉快速且穩(wěn)定繁殖的方法。2材料與方法2.1植物材料供試材料：來自肇慶地區(qū)的美麗異木棉，取成年樹上的嫩枝進行離體培養(yǎng)所產(chǎn)生 的愈傷組織作為實驗材料。2.2 方法2.2.1取材取肇慶地區(qū)美麗異木棉離體培養(yǎng)所產(chǎn)生的愈傷組織進行細胞懸浮培養(yǎng)。

7、2.2.2組織培養(yǎng)培養(yǎng)基的配方：（1 ）ms+1 mg/ml6-ba+0.3mg/mlnaa+0.1 mg/mltdz+3%蔗糖+0.8%瓊脂（ph5.8）（2）ms+lmg/ml6-ba+0.3mg/mlnaa+0.1nig/mltdz+3%蔗糖（ph5.8）美麗異木棉愈傷組織的繼代： 取一瓶木棉愈傷組織，擰開蓋子前在酒精燈上烤瓶蓋30s左右，打開蓋子，烘 烤瓶口 30s.取一瓶培養(yǎng)基，用同樣方法處理。 取一塊木棉愈傷組織迅速夾到新的培養(yǎng)基屮。此步驟需在靠近火焰處完成，但 要注意防止愈傷被高溫燙死。 將愈傷組織放到培養(yǎng)基（配方）上后便可以封蓋，消毒步驟同。 20d后觀察繼代。美麗異木棉細胞懸

8、浮培養(yǎng)： 用鑷子夾取在固體培養(yǎng)基上繼代產(chǎn)生的胚性愈傷組織，接種在培養(yǎng)基（配方（2）, 將搖床轉速為120r/min,溫度為26°c，黑暗培養(yǎng)。 用移液槍吸取lml的懸浮培養(yǎng)物轉入至新鮮培養(yǎng)基（配方）中，每隔4d繼代 一次，放入搖床，進行培養(yǎng)。連續(xù)培養(yǎng)3代后逐漸形成穩(wěn)定的細胞系美麗異木棉t板培養(yǎng)： 將己滅菌溫熱的培養(yǎng)基（配方）倒在培養(yǎng)皿屮 用移液槍吸取lml的木棉愈傷懸浮培養(yǎng)液，置于培養(yǎng)基表面，密封，培養(yǎng) 定期進行觀察。3結果與分析3.1美麗異木棉植物愈傷組織的轉接用配方的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，初期20天后出現(xiàn)胚性愈傷組織（多為分散性較 好、較為疏松的愈傷組織，顏色多為嫩黃嫩綠，如圖1）。在

9、此次試驗期間共進行了 10次美麗異木棉的轉接，胚性愈傷組織發(fā)生率出現(xiàn)差異。圖i胚性愈傷組織3.1.2繼代次數(shù)對美麗異木棉愈傷組織的影響表1美麗異木棉繼代次數(shù)情況表繼代次數(shù)（次）胚性出現(xiàn)胚愈傷接種數(shù)成活數(shù)性愈傷成活率組織（瓶）（瓶）組織數(shù)（）發(fā)生（瓶）率（%）19040244.44524023257.58325101401041061601651510166.7106201628012.5720161806.25820161806.25920171855.81020100()<誰鏈20123456789繼代次數(shù)（次）圖2繼代次數(shù)對成活率的影響從圖2可以看出，成活率雖然第3次繼代出現(xiàn)了最低值

10、，但隨著繼代次數(shù)的增 加，總體仍呈現(xiàn)上升趨勢。愈傷組織的擴繁，是繼續(xù)植物體細胞培養(yǎng)的基礎，所以 隨著繼代次數(shù)的增加，成活率逐漸增加，但后期趨于穩(wěn)定。20()<胡靶5sb?e銅史、岧123456789繼代次數(shù)（次）圖3繼代次數(shù)對胚性愈傷組織發(fā)生的影響從圖3可以看出，雖然隨著繼代次數(shù)的增加胚性愈傷組織的發(fā)生率出現(xiàn)了波動。但總而言之，隨著繼代次數(shù)的増加，胚性愈傷組織的發(fā)生率是先增加后降低的。 胚性愈傷組織發(fā)生率最高為16%，最低為5%,胚性愈傷組織發(fā)生率在第4次達到 了最大值。由此可見胚性愈傷組織發(fā)生率較低，在此次實驗中，胚性愈傷組織發(fā)生 率最高是第四次的繼代。3.2美麗異木棉細胞懸浮培養(yǎng)用配

11、方的培養(yǎng)基進行懸浮培養(yǎng)，約4天繼代一次，每一周期繼代2次，此次試驗 共進行了3個周期。在此過程中每一周期第一代與第三代木棉細胞出現(xiàn)了明顯的差異， 第一代培養(yǎng)液顯得較為清澈，培養(yǎng)液中還存在細小的美麗異木棉胚性愈傷組織顆粒， 第三代培養(yǎng)液顯得較為渾濁且不再看見胚性愈傷組織顆粒，如圖4:圖4美麗異木棉體細胞第一代（左）與第三代（右）對比3.3美麗異木棉平板培養(yǎng)用配方的培養(yǎng)基進行平板培養(yǎng)，在此實驗過程中，共進行了 3個周期，每 一周期倒4個平板，有1個平板在倒平板后第三周出現(xiàn)了星點愈傷組織，如圖5; 剩余11個既沒有出現(xiàn)菌落，也不曾長出愈傷組織，如圖6。圖5第三周出現(xiàn)了星點愈傷組織圖6未曾出現(xiàn)任何結果

12、表2各種結果出現(xiàn)的概率占平板培養(yǎng)的行分數(shù)（）培養(yǎng)皿內出現(xiàn)愈傷組織數(shù)帶丨個8.3培養(yǎng)肌內未出現(xiàn)結果的數(shù)呈11個91.7由表2可以看出，培養(yǎng)皿內出現(xiàn)愈傷組織的數(shù)量為8.3%,培養(yǎng)皿內未出現(xiàn)結果的數(shù)量為91.7%。所以由此可見木棉的美麗異木棉愈傷組織體細胞胚培養(yǎng)成活較 低。4、討論美麗異木棉愈傷組織在 ms+lmg/ml6-ba+o.3mg/mlnaa+o.lmg/mltdz+3% 蔗糖 +0.8%瓊脂培養(yǎng)基中20天后觀察發(fā)現(xiàn)愈傷組織變成了黃色顆粒狀松脆、透明的小球體, 這樣的愈傷組織是胚性愈傷組織。胚性愈傷組織對于體細胞胚胎的發(fā)生具有重要的意 義。胚性愈傷組織具有親本的遺傳特征，分裂活性強，有利于

13、在分化培養(yǎng)基上再生完 整的植株。要使懸浮培養(yǎng)快速、有效的進行，不能缺少合理的轉速、適宜的溫度。由于植物 細胞液泡di細胞體積的95%。植物細胞的細胞壁主要由纖維素組成，這些使得植物細 胞對剪切力的敏感性要高于微生物，一般轉速控制在90120r/min培養(yǎng)物物在搖床 中受力較為均勻生長環(huán)境相對穩(wěn)定。暗處理有利于誘導胚狀體的發(fā)生。在此實驗中，美麗異木棉胚性愈傷組織在第六次繼代時胚性愈傷組織的發(fā)生率達 到最高，說明在第四次繼代對美麗異木棉愈傷組織體細胞胚培養(yǎng)最好。平板培養(yǎng)出現(xiàn) 愈傷組織的概率為8.3%。終上所述，木實驗認為第六次繼代對美麗異木棉愈傷組織體細胞胚培養(yǎng)的效果最 好，產(chǎn)生率最高，達到16%

14、。平板培養(yǎng)愈傷組織出現(xiàn)率較低，為8.3%。此結果表明了 繼代對美麗異木棉愈傷組織體細胞胚培養(yǎng)的影響為美麗異木棉的快速且穩(wěn)定繁殖提供 了實驗依據(jù)。由于此次實驗周期較長，約為一年，經(jīng)過了四季，季節(jié)對愈傷組織成活率也具冇 一定影響，但此次實驗，未曾對此加以研究，是木次實驗的欠缺之一。由于實驗周期 較長，實驗后期樣本數(shù)量較少，可能存在誤差。本實驗只是對美麗異木棉愈傷組織體 細胞胚培養(yǎng)以及美麗異木棉愈傷組織體細胞胚培養(yǎng)的影響因素進行了初步研究，相關研究還有待進一步開展。參考文獻i 李虬，陳惠明.木棉科植物引種及繁殖研究j.廣東園林，1996(04)2尚珍泉，劉湘源，費盛強，等.美麗異木棉的種子繁殖與栽培

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