葡萄糖注射液無菌檢查方法學(xué)驗(yàn)證

1、葡萄糖注射液無菌檢查方法學(xué)驗(yàn)證1、樣品和儀器1.1樣品：葡萄糖注射液1.2儀器:iity-601集菌儀全封閉集菌培養(yǎng)器1.3培養(yǎng)基：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基胰酪大豆陳液體培養(yǎng)基1.3陽性對(duì)照菌：金黃色葡萄球菌cmcc (b) 26 003,第2代大腸埃希菌菌cmcc (b) 44 102, 第2代枯草芽泡桿菌cmcc (b) 63 501, 第4代生泡梭菌cmcc (b) 64 941,第4代白色念珠菌cmcc (f) 98 001,第2代黑曲霉cmcc (f) 98 003,第4代2、菌液制備2. 1金黃色葡萄球菌菌懸液的制備接種金黃色葡萄球菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆腺液 體培養(yǎng)基中，30-359

2、培養(yǎng)24小時(shí)，取lml,加入9mlph7. 0氯化鈉-蛋白腺緩沖液中，1 0倍稀釋至1(t約為10100cfu/ml備用。2.2大腸埃希菌菌懸液的制備接種大腸埃希菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆月東液體培養(yǎng)基中,30-35°c培養(yǎng)24小時(shí)，取lml,加入9mlpii7. 0氯化鈉-蛋白月東緩沖液屮，10倍稀釋 至io"約為10100cfu/ml備用。2.3枯草芽泡桿菌菌懸液的制備接種枯草芽泡桿菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆腺液體培 養(yǎng)基中,30-35°c培養(yǎng)24小時(shí),取lml,加入9mlph7. 0氯化鈉-蛋白陳緩沖液中，10倍稀 釋至10 約為10100cfu/ml備用。2.

3、4生孑包梭菌菌懸液的制備 接種生抱梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，3 0-35°c培養(yǎng)24小時(shí),取lml,加入9mlph7. 0氯化鈉-蛋白月東緩沖液中，10倍稀釋至10" 約為10100cfu/ml備用。2.5白色念珠菌菌懸液的制備接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基 中，20-25°c培養(yǎng)24小時(shí)，取lml,加入9mlph7. 0氯化鈉-蛋口月東緩沖液中，10倍稀釋至 kt'約為10100cfu/ml備用。2.6黑曲霉也子懸液的制備將黑曲霉斜而的新鮮培養(yǎng)物接種至沙氏葡萄糖瓊脂斜而培 養(yǎng)基上，20-25°c培養(yǎng)7天，加入4

4、ml含0. 05% (ml/ml)聚山梨酯80的ph7. 0氯化鈉-蛋 白腺緩沖液中，洗下泡子,吸出抱子液,取此抱子液lml加入9ml含0. 05% (ml/ml)聚山 梨酯80的ph7. 0氯化鈉-蛋白腺緩沖液中10倍稀釋至10一"約為10100cfu/ml備用。3、活菌計(jì)數(shù)分別取上述六種菌懸液lml加入培養(yǎng)皿，每種菌液做平行2皿。2. 12. 4四種菌各加入 胰酪大豆腺瓊脂培養(yǎng)基18ml,凝固，倒置培養(yǎng)48小時(shí)，2. 5-2. 6兩種菌各加入沙氏葡萄糖 瓊脂培養(yǎng)基凝固，倒置培養(yǎng)72小時(shí)。計(jì)數(shù)。陽性對(duì)照菌菌懸液記數(shù)結(jié)果菌種代數(shù)稀釋度取樣量(ml)菌數(shù)(cfu/ml)金黃色葡萄球菌2

5、10-616360人腸埃希菌2io"17167枯草芽砲桿菌410詩16266生淪梭菌4ict?17175白色念珠菌210-516872黑曲霉4e150424、薄膜過濾法的方法驗(yàn)證取少量沖洗液潤濕全封閉集菌器濾膜，取供試品5瓶濾過，在最后一瓶供試品中加入小 于loocfu的試驗(yàn)菌菌懸液，過濾，如此共制備6管帶菌集菌器，分別加入硫乙醇流體培養(yǎng)基 或胰酪大豆陳液體培養(yǎng)基；另取5瓶濾過，不加菌懸液作為陰性對(duì)照，制備2管，加入硫乙 醇酸鹽流體培養(yǎng)基或胰酪大豆月東液體培養(yǎng)基loomlo另取裝有同體積硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基或月夷酪大豆月東液體培養(yǎng)基的全封閉集菌器，加入等量的各試驗(yàn)菌菌懸液，作為陽性對(duì)

6、照。 按各規(guī)定溫度培養(yǎng)5天。具體方法驗(yàn)證及結(jié)果見下表。驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果1批菌種纟日呷硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)蔭種甸胰酪大矍液體培基 esc20-25c金黃色葡 萄球菌日期12345 匚伍人秒日期12345對(duì)照組 + 曰詈' 壞對(duì)照組 一 +試驗(yàn)組 +、試驗(yàn)組 -+大腸埃希對(duì)照組+黑曲霉對(duì)照組- +菌試驗(yàn)組+試驗(yàn)組- +生孑包梭菌對(duì)照組+枯草芽抱對(duì)照組- +試驗(yàn)組十+桿菌試驗(yàn)組- +十+陰性對(duì)照陰性對(duì)照2批金黃色葡日期12345白色念珠日期1 2345萄球菌對(duì)照組+菌對(duì)照組- +試驗(yàn)組+試驗(yàn)組- +大腸埃希對(duì)照組+黑曲霉對(duì)照組- +菌試驗(yàn)組+試驗(yàn)組- +生他梭菌對(duì)照組+枯草芽抱對(duì)照組- +十+試驗(yàn)組+桿菌試驗(yàn)組- +陰性對(duì)照陰性對(duì)照菌種胰酪大豆月東液體培組別養(yǎng)基20-25°c3批金黃色葡日期12345白色念珠日期1 2345萄球菌對(duì)照組+菌對(duì)照組- +試驗(yàn)組+試驗(yàn)組- +大腸埃希對(duì)照組+黑曲霉對(duì)照組- +菌試驗(yàn)組+試驗(yàn)組- +生他梭菌對(duì)照組+枯草芽抱對(duì)照組- +十+試驗(yàn)組+桿菌試驗(yàn)組- +陰性對(duì)照陰性對(duì)照菌種胰酪大豆陳液體培組別養(yǎng)基20-25°c州口“硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)期袖爼力基30-35°c園“屮如n.硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)甘鈾組別基30-35°c菌種結(jié)論：與對(duì)照管比較，含供試品