不同時期局部移植人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)脊髓損傷的組織學(xué)觀察

1、www.CRTER.org陳勝，等. 不同時期局部移植人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)脊髓損傷的組織學(xué)觀察不同時期局部移植人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)脊髓損傷的組織學(xué)觀察陳 勝1，金正帥2(1南京醫(yī)科大學(xué)附屬江蘇盛澤醫(yī)院骨科，江蘇省蘇州市 215228；2南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院骨科，江蘇省南京市 210029)引用本文：陳勝，金正帥. 不同時期局部移植人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)脊髓損傷的組織學(xué)觀察J.中國組織工程研究，2016，20(45):6714-6719.DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.45.004 ORCID: 0000-0002-6849-4823(陳勝)文章快速

2、閱讀：大鼠脊髓損傷7 d后移植人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的修復(fù)效果最佳陳勝，男，1981年生，江蘇省南通市人，漢族，主治醫(yī)師，主要從事脊柱方面的研究。通訊作者：金正帥，碩士生導(dǎo)師，主任醫(yī)師，南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院骨科，江蘇省南京市 210029中圖分類號:R394.2文獻(xiàn)標(biāo)識碼: A文章編號:2095-4344(2016)45-06714-06稿件接受：2016-09-17移植大鼠運(yùn)動功能評分增加，血清白細(xì)胞介素2水平減少，血清白細(xì)胞介素10水平增加，脊髓病理損傷明顯改善，且7 d后移植組效果最為明顯Allens 打擊法建立脊髓損傷模型 3 d 7 d 21 d人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞局部移植文題釋義：白

3、細(xì)胞介素：最初指由白細(xì)胞產(chǎn)生又在白細(xì)胞間起調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞因子，現(xiàn)指一類分子結(jié)構(gòu)和生物學(xué)功能已基本明確，具有重要調(diào)節(jié)作用而統(tǒng)一命名的細(xì)胞因子，與血細(xì)胞生長因子同屬細(xì)胞因子。兩者相互協(xié)調(diào)，相互作用，共同完成造血和免疫調(diào)節(jié)功能。白細(xì)胞介素在傳遞信息，激活與調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞，介導(dǎo)T、B細(xì)胞活化、增殖與分化及在炎癥反應(yīng)中起重要作用。目前已發(fā)現(xiàn)38種白細(xì)胞介素。Allens打擊法建立脊髓損傷模型：由Allen創(chuàng)建的重物墜落致脊髓損傷的方法。即用一定質(zhì)量的重錘沿一套管垂直落下、精確打擊特定脊髓節(jié)段而致傷。這種模型比較接近人類脊髓損傷的病理生理特點及變化規(guī)律，對研究脊髓損傷后神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的病理變化、再生規(guī)

4、律和相互作用，探索神經(jīng)保護(hù)策略有很大幫助。摘要背景：脊髓損傷能造成各種運(yùn)動、感覺功能障礙，肌張力異常及病理反射等，臨床上已通過人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植對脊髓損傷進(jìn)行治療。目的：探討大鼠脊髓損傷后不同時期局部移植人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)脊髓損傷的效果。方法：選取SPF級雄性成年SD大鼠100只，隨機(jī)分為5組：空白對照組、單純脊髓損傷組及3，7，21 d后移植組，各20只。后4組利用Allens 打擊器制作大鼠T10脊髓損傷模型；3，7，21 d后移植組大鼠分別于脊髓損傷后3，7和21 d在損傷部位周圍移植人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。結(jié)果與結(jié)論：與單純脊髓損傷組相比，3，7，21 d后移植組大鼠造模后49 d

5、運(yùn)動功能評分增加，血清白細(xì)胞介素2水平減少，血清白細(xì)胞介素10水平增加，脊髓病理損傷明顯改善，且7 d后移植組效果最為明顯。說明人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植修復(fù)大鼠脊髓損傷，改善大鼠運(yùn)動功能，且在大鼠脊髓損傷7 d后移植效果最佳。關(guān)鍵詞：干細(xì)胞；骨髓干細(xì)胞；脊髓損傷；人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞；干細(xì)胞移植；損傷修復(fù)；治療效果; 感覺功能障礙；病理反射主題詞：白細(xì)胞介素類；脊髓損傷；組織工程6715 P.O.Box 1200,Shenyang 110004 kf23385083Local transplantation of human umbilical cord mesenchymal stem cell

6、s at different time after spinal cord injury in rats: a histological observationChen Sheng1, Jin Zheng-shuai2 (1Department of Orthopedics, Jiangsu Shengze Hospital, Nanjing Medical University, Suzhou 215228, Jiangsu Province, China; 2Department of Orthopedics, the First Affiliated Hospital of Nanjin

7、g Medical University, Nanjing 210029, Jiangsu Province, China)AbstractBACKGROUND: Spinal cord injury (SCI) is a disease causing a variety of motor and sensory dysfunctions, abnormal muscle tone and pathological reflex. Clinically, human umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation has become

8、 an employed therapy for SCI.OBJECTIVE: To investigate the effect of local transplantation of human umbilical cord mesenchymal stem cells in different time after spinal cord injury in rats. METHODS: 100 SPF male adult Sprague-Dawley rats were randomly divided into five groups: blank control group, S

9、CI group, post-SCI 3-, 7-, 21-day transplantation groups (n=20 per group). Animal models of T10 SCI were made by Allens method in the latter four groups, and rats in the three transplantation groups were given HUCMSCs transplantation at 3, 7, 21 days after SCI, respectively. RESULTS AND CONCLUSION:

10、Compared with the SCI group, improved motor function scores, decreased interleukin-2 level, and increased serum interleukin-10 level were observed in the three transplantation groups at 49 days after modeling, indicating SCI was improved significantly in the three transplantation groups, especially

11、in the post-SCI 7-day transplantation group. These findings suggest that human umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation for SCI repair improves the movement function of rats, and cell transplantation at 7 days after modeling has achieved best outcomes. Subject headings: Interleukins; Spi

12、nal Cord Injuries; Tissue EngineeringCite this article: Chen S, Jin ZS. Local transplantation of human umbilical cord mesenchymal stem cells at different time after spinal cord injury in rats: a histological observation. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu. 2016;20(45):6714-6719.Chen Sheng, Attending ph

13、ysician, Department of Orthopedics, Jiangsu Shengze Hospital, Nanjing Medical University, Suzhou 215228, Jiangsu Province, ChinaCorresponding author: Jin Zheng-shuai, Masters supervisor, Chief physician, Department of Orthopedics, the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University, Nanjing

14、210029, Jiangsu Province, China6717ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH0 引言 Introduction在特定引導(dǎo)條件下，人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞可分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞，具有促使腦或脊髓等中樞神經(jīng)組織修復(fù)的潛力1。因此，臨床上已通過移植該細(xì)胞對脊髓損傷進(jìn)行治療，并取得一定療效2。研究顯示，脊髓損傷能造成損傷脊髓及其周圍出現(xiàn)出血和水腫的現(xiàn)象3，并誘發(fā)大面積神經(jīng)元損傷及形成膠質(zhì)瘢痕等4，且還可引起神經(jīng)微循環(huán)病變，造成血氧不足和鈣離子及氧自由基高表達(dá)等5，從而進(jìn)一步惡化神經(jīng)損傷，并可累及移植過來的外源性人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞2，降

15、低細(xì)胞移植治療的效果。作者通過脊髓損傷大鼠模型，觀察不同時間局部移植人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的效果，尋找最佳的移植時間，為臨床人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植提供實驗依據(jù)。1 材料和方法 Materials and methods 1.1 設(shè)計 隨機(jī)對照動物實驗。1.2 時間及地點 實驗于2015年3至10月在南京醫(yī)科大學(xué)完成。1.3 材料 SPF級雄性SD大鼠100只，鼠齡85-110 d，體質(zhì)量175-260 g，由南京醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，動物許可證號SYXK(蘇)2013-0015。所有大鼠飼養(yǎng)溫度在(20±2) ，12 h黑暗和照明光線自由交替，固體飼料和飲水自由喂養(yǎng)。1.4 方法1.

16、4.1 動物分組 所有實驗動物隨機(jī)分為5組，空白對照組、單純脊髓損傷組、3 d后移植組、7 d后移植組和21 d后移植組，各20只。1.4.2 脊髓損傷模型的建立 體積分?jǐn)?shù)10%水合氯醛對大鼠行腹腔麻醉，劑量3.3×10-3 mL/g，取俯臥位，以T10為中心將背部皮膚、皮下組織縱向切開，將兩側(cè)椎旁肌逐漸剝離，充分暴露T10棘突和椎板后咬除，直至完全顯出硬膜。選取HI-0400脊髓打擊器(贊德儀器有限公司)，以25 mm高度、10 g質(zhì)量打擊，待大鼠表現(xiàn)一過性鼠尾擺動及后肢痙攣，則造模成功，最后將肌肉、筋膜、皮膚逐層縫合。造模后排尿2次/d，至模型大鼠有正常排尿反射；移植前3 d至實

17、驗結(jié)束，皮下注射10 mg/kg環(huán)孢素A(注冊證號H20050433，瑞士Novartis Pharma Stein AG)，1次/d6?？瞻讓φ战M大鼠只切開皮膚。1.4.3 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植 先將人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(上海華雅思創(chuàng)生物科技有限公司)使用常規(guī)無血清培養(yǎng)基進(jìn)行體外培養(yǎng)至50%融合7，棄去培養(yǎng)基加入10 mg/L溴脫氧尿啼淀核苷(BrdU，武漢博士德生物工程有限公司)，培養(yǎng)72 h。移植前0.5 h滴入0.25%胰蛋白酶后離心，再充分洗滌，使用無血清培養(yǎng)基調(diào)制細(xì)胞濃度為1×1011 L-1的細(xì)胞懸液。3 d后移植組、7 d后移植組和21 d后移植組大鼠分別于脊髓損傷后

18、3，7和21 d行細(xì)胞移植，暴露T10部位硬膜后分5個點注射人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞至脊髓損傷頭、尾側(cè)，每個點均注射劑量為6 L，總注射細(xì)胞1.2×106個，結(jié)束后留針3 min，緩慢退出逐層縫合肌肉、筋膜和皮膚，大鼠復(fù)蘇后精心喂養(yǎng)。空白對照組和單純脊髓損傷組注射等量生理鹽水。1.4.4 運(yùn)動功能評價 對5組大鼠進(jìn)行運(yùn)動評分，內(nèi)容包括行走能力、關(guān)節(jié)運(yùn)動、協(xié)調(diào)性及肢體穩(wěn)定性6。評分越高，大鼠運(yùn)動功能恢復(fù)越好。1.4.5 ELISA法檢測血清中白細(xì)胞介素2和白細(xì)胞介素10水平 抽取大鼠尾端靜脈血5 mL，滴入干凈試管內(nèi)，離心機(jī)內(nèi)3 200 r/min離心5 min，取上清液滴入干凈試管，放入-

19、20 冰箱冷存，7 d內(nèi)使用ELISA法檢測白細(xì)胞介素2和白細(xì)胞介素10水平，試劑盒均購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司，檢測步驟嚴(yán)格按照試劑盒附帶說明書操作。1.4.6 蘇木精-伊紅染色 大鼠麻醉后，取仰臥位，胸骨正中切口開胸，于左心室插入20 mL注射器針頭至升主動脈弓，血管鉗固定主動脈根部，右心耳位置剪開放血，生理鹽水沖洗干凈至觀察不到血性液流出，40 g/L多聚甲醛行心內(nèi)灌注將標(biāo)本固定30 min。暴露T10脊髓，提取T4-L1段脊髓2 cm，放入40 g/L多聚甲醛固定3 d，常規(guī)脫水、石蠟包埋、切片，采用蘇木精-伊紅染色，在奧林巴斯CX23顯微鏡下觀察其組織結(jié)構(gòu)變化。 1.5 主要觀察指

20、標(biāo) 大鼠運(yùn)動功能變化；大鼠血清中白細(xì)胞介素2和白細(xì)胞介素10水平；大鼠脊髓組織病理變化。1.6 統(tǒng)計學(xué)分析 數(shù)據(jù)分析用SPSS 19.0軟件，以±s表示，多組比較采用方差分析，并用LSD-t 檢驗進(jìn)組間兩兩比較；P < 0.05為差異有顯著性意義。2 結(jié)果 Results 2.1 實驗動物數(shù)量分析 5組共100只大鼠均進(jìn)入結(jié)果分析，未出現(xiàn)異常死亡情況。2.2 運(yùn)動功能 與空白對照組相比，其他4組大鼠的運(yùn)動功能評分明顯下降(P < 0.05)，但4組大鼠造模后隨時間的延長，運(yùn)動功能評分逐漸增加(P < 0.05)。單純脊髓損傷組、3 d后移植組、7 d后移植組和21

21、d后移植組大鼠在造模后28，29和35 d時運(yùn)動功能評分接近(P > 0.05)。造模后42 d和49 d時3 d后移植組、7 d后移植組和21 d后移植組大鼠運(yùn)動功能評分高于單純脊髓損傷組(P < 0.05)，且7 d后移植組大鼠運(yùn)動功能評分高于3 d后移植組和21 d后移植組(P < 0.05；表1)。2.3 血清白細(xì)胞介素2和白細(xì)胞介素10水平 其他4組大鼠血清白細(xì)胞介素2水平均高于空白對照組(除造模后28 d外，P < 0.05)；3 d后移植組、7 d后移植組和 21 d后移植組大鼠血清白細(xì)胞介素2水平均低于單純脊髓損傷組(P < 0.05)，且7 d后

22、移植組大鼠血清白細(xì)胞介素2水平在造模后29 d和35 d時小于3 d后移植組和21 d后移植組(P < 0.05；表2)，而5組中白細(xì)胞介素10的變化與白細(xì)胞介素2相反(表3)。2.4 脊髓組織病理變化 造模后49 d時，蘇木精-伊紅染色結(jié)果顯示，空白對照組大鼠脊髓結(jié)構(gòu)清晰，無破壞；單純脊髓損傷組大鼠脊髓組織結(jié)構(gòu)破裂、紊亂；3 d后移植組大鼠脊髓組織結(jié)構(gòu)仍見結(jié)構(gòu)破裂、紊亂，灰質(zhì)和白質(zhì)有大量空洞；7 d后移植組大鼠脊髓組織結(jié)構(gòu)清晰，灰質(zhì)和白質(zhì)少量空洞；21 d后移植組大鼠脊髓顯示組織結(jié)構(gòu)較清晰，灰質(zhì)和白質(zhì)少量空洞(圖1)。3 討論 Discussion目前，醫(yī)學(xué)界已經(jīng)通過臍靜脈灌注聯(lián)合密度

23、梯度離心的方式提取間充質(zhì)干細(xì)胞，對其進(jìn)行生理學(xué)鑒定和細(xì)胞分化方面的研究，對臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的提取已經(jīng)比較成熟8。此外通過體外誘導(dǎo)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，可使得其向神經(jīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)化，并能夠釋放相對量的神經(jīng)標(biāo)記物，其中包括各類神經(jīng)元特異性烯醇化酶及酪氨酸羥化酶等生物酶和多種生長性蛋白因子等9，表明通過人工手段能夠誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分化為完整、成熟的神經(jīng)細(xì)胞。此外，該細(xì)胞具有來源廣泛，易從動物中提取的特點，在商業(yè)應(yīng)用不存在倫理問題，且免疫源性相對低，能夠進(jìn)行多向潛能分化，因此成為骨外科治療中研究重點之一。既往研究中，將人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植至脊骨全橫斷模型大鼠的脊髓內(nèi)，移植細(xì)胞能長時間存活，可顯著恢復(fù)斷脊

24、大鼠的后肢功能10。將初次提取的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植到大鼠脊髓損傷部位中度損傷處后，移植來細(xì)胞能夠成功存活，并可和損傷處細(xì)胞相互融合，有效加快軸突再生11。但迄今為止，關(guān)于臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞最佳移植時間仍處于爭論之中。表1 不同時間點移植人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對脊髓損傷模型大鼠運(yùn)動功能評分的影響 (±s，n=20)Table 1 Effects of human umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation at different time points on the motor function of rats with sp

25、inal cord injury組別造模后28 d造模后29 d造模后35 d造模后42 d造模后49 d空白對照組20.14±1.5419.63±1.2819.57±1.9621.05±1.5920.09±1.67單純脊髓損傷組0.15±0.24a6.47±1.64ae7.12±1.24ae8.15±1.27ae8.95±1.49ae3 d后移植組0.17±0.19a6.41±1.52ae7.68±1.52ae11.26±1.48abe12.26

26、7;1.54abe7 d后移植組0.17±0.21a6.25±1.61ae7.39±1.44ae13.07±1.35abce14.96±1.75abc21 d后移植組0.16±0.17a6.38±1.62ae7.57±1.43ae10.59±1.34abcde11.85±1.37abcd表注：與空白對照組相比，aP < 0.05；與單純脊髓損傷組相比，bP < 0.05；與3 d后移植組相比，cP < 0.05；與7 d后移植組相比，dP < 0.05；與前一時間點相比，

27、eP < 0.05。表2 不同時間點移植人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對脊髓損傷模型大鼠血清白細(xì)胞介素2水平的影響 (±s，n=20，ng/L)Table 2 Effects of human umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation at different time points on serum interleukin-2 level in rats with spinal cord injury組別造模后28 d造模后29 d造模后35 d造模后42 d造模后49 d空白對照組1 046.17±105.654

28、56.63±101.75468.85±107.24448.93±105.06451.23±102.69單純脊髓損傷組1 034.25±96.281 085.67±98.23a1 054.32±97.87a1 066.75±95.58a1 078.98±99.67a3 d后移植組1 062.32±97.63921.67±85.62abe845.23±89.69abe721.21±82.62abe624.82±85.50abe7 d后移植組1 052.14&#

29、177;94.17825.42±87.62abce704.54±96.41abce701.75±95.58ab534.89±92.45abce21 d后移植組1 073.44±95.52902.65±84.73abe858.35±88.58abd734.41±83.54ab645.86±86.49abde表注：與空白對照組相比，aP < 0.05；與單純脊髓損傷組相比，bP < 0.05；與3 d后移植組相比，cP < 0.05；與7 d后移植組相比，dP < 0.05；與前一時間

30、點相比，eP < 0.05。表3 不同時間點移植人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對脊髓損傷模型大鼠血清白細(xì)胞介素10水平的影響 (±s，n=20，ng/L)Table 3 Effects of human umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation at different time points on serum interleukin-10 level in rats with spinal cord injury組別造模后28 d造模后29 d造模后35 d造模后42 d造模后49 d空白對照組538.64±75.

31、25946.65±75.69958.25±71.21951.27±78.81949.69±75.60單純脊髓損傷組554.12±68.54a562.28±64.17a557.79±70.23a549.63±71.15a552.20±69.79a3 d后移植組549.39±69.55a642.47±75.60ab735.40±71.59abe812.27±78.59abe846.27±62.74ab7 d后移植組543.23±69.65a673.3

32、9±65.28abc659.52±72.36ab872.24±70.26ab842.35±71.68ab21 d后移植組546.48±68.64a885.68±69.92abce727.48±73.48abde834.38±75.42abe855.18±69.95ab表注：與空白對照組相比，aP < 0.05；與單純脊髓損傷組相比，bP < 0.05；與3 d后移植組相比，cP < 0.05；與7 d后移植組相比，dP < 0.05；與前一時間點相比，eP < 0.05。有研

33、究者認(rèn)為脊髓損傷后3 d是進(jìn)行間充質(zhì)干細(xì)胞移植的最佳時間段12，作者選取大鼠損傷后3，7和 21 d進(jìn)行細(xì)胞移植，結(jié)果顯示，移植后大鼠運(yùn)動功能評分均明顯提高，這驗證了人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植能夠顯著改善大鼠受損傷脊髓生理功能，促使運(yùn)動功能恢復(fù)。且實驗結(jié)果還表明大鼠后肢運(yùn)動功能需要恢復(fù)時間，主要因為移植人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞存活和分化時一個自然演進(jìn)的過程。3，7和21 d移植組大鼠在造模后42 d的運(yùn)動功能評分均高于單純脊髓損傷組，從該結(jié)果顯示大鼠損傷脊髓具有自恢復(fù)功能，但恢復(fù)能力有限，具有時間局限性，因此作者推斷為42 d，而臨床移植手術(shù)的最佳時間應(yīng)為脊髓損傷后3 d。研究結(jié)果顯示7 d后移植組高于

34、3 d后移植組和21 d后移植組，說明人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植能夠有效改善脊髓損傷大鼠的神經(jīng)功能，且改善效果隨著時間推移逐漸增強(qiáng)。既往研究與實驗結(jié)果均顯示，脊髓損傷大鼠行人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植后，移植細(xì)胞分化良好13，能有效6719ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH E D C B A圖1 造模后49 d移植人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對脊髓損傷模型大鼠脊髓病理變化的影響(蘇木精-伊紅染色，×40)Figure 1 Hematoxylin-eosin staining results of the spinal cord in rats at 49

35、 days after human umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation (×40)圖注：圖中A為空白對照組；B為單純脊髓損傷組；C-E為3，7，21 d后移植組。箭頭指示組織中結(jié)構(gòu)損傷及空洞。修復(fù)損傷，這是因為局部移植人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞能夠增強(qiáng)神經(jīng)營養(yǎng)因子3、血管內(nèi)皮生長因子受體3和堿性成纖維生長因子等的表達(dá)，而這些細(xì)胞因子能夠促使血管再生，加快損傷組織生產(chǎn)及生長14。蘇木精-伊紅染色結(jié)果顯示，人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植后大鼠損傷脊髓恢復(fù)效果由于自然條件下的恢復(fù)。有研究認(rèn)為，脊髓損傷后能夠引起免疫因子出現(xiàn)趨化性反應(yīng)，造

36、成白細(xì)胞介素等炎癥因子表達(dá)上升，形成急性免疫反應(yīng)會對毒殺移植人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，不利于損傷脊髓恢復(fù)15-26。實驗結(jié)果顯示移植后大鼠白細(xì)胞介素10水平明顯上升，且7 d后移植組效果最為明顯，表明人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植可加快脊髓的免疫炎性恢復(fù)。有研究顯示移植能夠促使脊髓損傷21 d后出現(xiàn)膠質(zhì)細(xì)胞增生27，但作者并未發(fā)現(xiàn)這一現(xiàn)象。通過研究發(fā)現(xiàn)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植能夠有效治療大鼠脊髓損傷，改善其運(yùn)動功能，這移植方式選取也密切相關(guān)。作者選取局部注射移植方式，比其他移植方式更能在損傷區(qū)內(nèi)聚集大量“種子細(xì)胞”，從而加快脊髓修復(fù)。但作者也發(fā)現(xiàn)該移植方式能對局部組織產(chǎn)生損傷，但總體而言，局部注射移植人臍帶間

37、充質(zhì)干細(xì)胞效果優(yōu)秀。綜上所述，人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植修復(fù)大鼠脊髓損傷療效顯著，并能夠有效改善大鼠運(yùn)動功能，且待造模后7 d，其移植效果最佳，為臨床治療人脊髓損傷具有參考價值。作者貢獻(xiàn)：陳勝和金正帥進(jìn)行實驗設(shè)計，實驗實施、評估、資料收集為陳勝，陳勝和金正帥成文，金正帥審校。利益沖突：所有作者共同認(rèn)可文章無相關(guān)利益沖突。倫理問題：實驗方案經(jīng)南京醫(yī)科大學(xué)動物實驗倫理委員會批準(zhǔn)，批準(zhǔn)號為NJYKDX-20160911。實驗動物在戊巴妥納麻醉下進(jìn)行所有的手術(shù)，并盡一切努力最大限度地減少其疼痛、痛苦和死亡。文章查重：文章出版前已經(jīng)過CNKI反剽竊文獻(xiàn)檢測系統(tǒng)進(jìn)行3次查重。文章外審：文章經(jīng)國內(nèi)小同行外審專家

38、雙盲外審，符合本刊發(fā)稿宗旨。作者聲明：第一作者對研究和撰寫的論文中出現(xiàn)的不端行為承擔(dān)責(zé)任。論文中涉及的原始圖片、數(shù)據(jù)(包括計算機(jī)數(shù)據(jù)庫)記錄及樣本已按照有關(guān)規(guī)定保存、分享和銷毀，可接受核查。文章版權(quán)：文章出版前雜志已與全體作者授權(quán)人簽署了版權(quán)相關(guān)協(xié)議。4 參考文獻(xiàn) References1 孫海偉,陸士奇,陳慶梅,等.不同來源干細(xì)胞移植治療創(chuàng)傷性脊髓損傷的免疫反應(yīng)J.江蘇醫(yī)藥,2015,2(16): 1867- 1870.2 李波.脊柱手術(shù)并發(fā)脊髓不完全損傷10例臨床分析J.現(xiàn)代儀器與醫(yī)療,2014,2(6):52-54.3 Han YF, Sun TJ, Han YQ, et al. Prep

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