人體表皮神經(jīng)構(gòu)筑探究進展

1、人體表皮神經(jīng)構(gòu)筑探究進展皮膚感覺神經(jīng)來自脊神經(jīng)，為有髓神經(jīng)，從淺筋膜到達真 皮乳頭，脫髓鞘后進入表皮及靶組織。進入表皮層的神經(jīng)，分 支并穿過表皮各層伸向角質(zhì)層構(gòu)成表皮神經(jīng)(epidermal nerve)。由于表皮神經(jīng)異常纖細,研究相對緩慢，隨著研究的 進展，表皮神經(jīng)的作用越來越受到重視，本文就表皮神經(jīng)的 研究進展綜述如下。1表皮神經(jīng)研究方法1. 1研究方法歷史沿革：早在1868年，langerhans用 cohnneim' s金氯化物法染色最早描述了表皮神經(jīng)的存在, 此后關(guān)于表皮神經(jīng)存在與否爭論一百多年。1954年,weddell 用亞甲藍灌注法研究，肯定了表皮神經(jīng)的廣泛存在，是真皮

2、 神經(jīng)干發(fā)出的軸漿絲，以前大多數(shù)研究者沒有認識到表皮神 經(jīng)纖維是裸露的，很容易被破壞。直到1990年,wang等1-2 運用免疫組織化學(xué)染色的方法詳細地描述了皮膚真皮和表 皮神經(jīng)的構(gòu)筑，至此人們對神經(jīng)的完整構(gòu)筑有了一個較為可 靠的研究方法，有了正確的認識。表皮神經(jīng)分為肽能神經(jīng)和 非肽能神經(jīng)，肽能表皮神經(jīng)為ngf免疫陽性，表達降鈣素基因 相關(guān)肽(calcitonin gene-related peptide , cgrp) > sp 及 酪氨酸激酶a(trka)受體(ngf特異性受體)；非肽能神經(jīng)為神 經(jīng)角質(zhì)細胞來源的神經(jīng)生長因子免疫陽性，表達gdnfr a和p2x3 受體3。1. 2研究

3、方法1.2. 1取材：常用的取材方法有皰皮法和環(huán)鉆鉆取法 (punch biopsies),具有損害性小，可重復(fù)性好，容易接受的 優(yōu)點4,可以從研究對象皮膚取3mm大小的組織，然后進行 免疫組織化學(xué)研究。研究表皮神經(jīng)往往需要較厚的切片，常 見厚度有330 um石蠟切片或者10100 um冰凍切片，對 于較厚的切片需要應(yīng)用漂浮法免疫組織化學(xué)染色，以利于抗 體的浸入。1.2.2抗體：人們對表皮免疫組織化學(xué)研究常利用標(biāo)記 物有軸突胞漿成分(蛋白基因產(chǎn)物9. 5 protein gene product 9. 5,pgp9. 5),特殊細胞骨架成份(nf70或nf200, b微管蛋白, 微管相關(guān)蛋白m

4、ap1b),神經(jīng)肽類(sp、cgrp、神經(jīng)激肽a)存 在于感覺神經(jīng)，大多分布在表皮基底層或者真皮層。表皮層 的神經(jīng)標(biāo)記物還有瞬時受體電位香草酸亞型1 (trpv1),其主 要表達于表皮c神經(jīng)纖維。對于非肽能神經(jīng)纖維可以采用 p2x3受體或其同工凝集素ib4o但是就目前發(fā)表的論文 看,pgp9. 5是最常用的標(biāo)記物3。1.2.3觀察方法：免疫陽性的表皮神經(jīng)可以通過光學(xué)顯 微鏡、熒光顯微鏡及共聚焦顯微鏡觀察。激光掃描共聚焦顯 微鏡(laser scanning confocalmicroscope,lscm),具有圖 薄層光學(xué)切片功能，通過熒光分子獲得信號，獲得標(biāo)本三維 數(shù)據(jù)，經(jīng)計算機圖像處理及三

5、維重建軟件產(chǎn)生三維效果，從 而能靈活、直觀地進行形態(tài)學(xué)觀察5。近來,tamura等6 將天文學(xué)上用于分析很小的銀河外星系圖像的一種計算機 檢測(computerized detection method,cdm)軟件用來分析 lscm獲取的基底膜以內(nèi)的神經(jīng)圖像，認為其具有經(jīng)濟、快速、 可重復(fù)性高的優(yōu)點。1. 3神經(jīng)密度的測定：神經(jīng)構(gòu)筑的密度反應(yīng)了初級神經(jīng) 元投射到中樞次級神經(jīng)元的密度。由于真皮內(nèi)的軸索密集成 束，所以目前用比例尺度定量分析局限于表皮內(nèi)。近期多選 擇全神經(jīng)標(biāo)志物抗pgp9. 5抗體作為一抗進行免疫組織化學(xué) 染色。共聚焦激光顯微鏡或者圖像分析儀對神經(jīng)計數(shù)神經(jīng)纖 維數(shù)量：表皮內(nèi)有分支

6、的神經(jīng)纖維作為一個計數(shù)，在表皮基 底膜下就分支的每個分支單獨計數(shù)；表皮面積二測量的每個 切片表皮長度x切片厚度，表皮神經(jīng)密度二神經(jīng)軸索計數(shù)總 數(shù)/面積(mm2) o也有將密度表示為線性密度，即神經(jīng)軸索數(shù)/ 表皮長度?？梢杂妹庖邿晒怆p標(biāo)技術(shù)將真-表基底膜及表皮 神經(jīng)顯示后用圖像分析儀分析，將染色陽性的神經(jīng)構(gòu)筑區(qū)域 與表皮表面區(qū)域(由基底膜表示)相比，計算出百分數(shù)作為密 度7。活檢檢測表皮神經(jīng)密度被認為是檢測小神經(jīng)病變的 理想方法，較傳統(tǒng)的神經(jīng)學(xué)檢測更客觀、敏感8,近年來用 于多種小神經(jīng)纖維病損的檢查(糖尿病8,結(jié)節(jié)病9,遺傳 過敏性皮炎10等)。2表皮神經(jīng)的形態(tài)學(xué)有髓的感覺神經(jīng)，從淺筋膜到真皮乳

7、頭層發(fā)出各級神經(jīng) 叢，構(gòu)成神經(jīng)樹，皮膚神經(jīng)樹分支與皮膚微循環(huán)血管樹的分 布、走行有許多相似之處，具有顯著的立體結(jié)構(gòu)特征11。 一般劃分為五層，皮神經(jīng)干、淺筋膜層、真皮深層、乳頭層， 最后末梢伸向表皮。其終末分支廣泛分布于皮膚的各層，包 括游離神經(jīng)末梢和特殊神經(jīng)末梢。2. 1游離神經(jīng)末梢：一般呈細小樹枝狀分支。健康對象皮 膚表皮神經(jīng)纖維起于乳頭下神經(jīng)叢，伸向角質(zhì)層分支或者進 入角質(zhì)層少許，呈樹狀分支或不分支，神經(jīng)纖維通常是纖細 的，有的曲張，經(jīng)常以球形終末結(jié)束。表皮神經(jīng)情況將正常人 表皮神經(jīng)分為四類:無分支神經(jīng)纖維;近真皮-表皮交界 上分支向皮膚表面神經(jīng)纖維;遠離真皮-表皮交界分支向 皮膚表面神

8、經(jīng)纖維;近角質(zhì)層分支平行皮膚表面的神經(jīng)纖 維。在感覺性神經(jīng)病變中，表皮神經(jīng)分支增加，殘支曲張增加, 軸索膨大，出現(xiàn)爪型末端。即使臨床尚未受累區(qū)域密度雖然 沒有變化，但是分支增加、軸索膨大，這可能是神經(jīng)變性前變 化12。2. 2特殊神經(jīng)末梢:包括meissner corpuscles或觸覺小 體、pacini corpuscles 或環(huán)層小體、ruff ini ending、krause 終球等感受觸痛溫覺等功能。3表皮神經(jīng)構(gòu)筑的影響因素3. 1皮膚內(nèi)神經(jīng)構(gòu)筑與年齡的關(guān)系：有研究發(fā)現(xiàn)年輕組 背部皮膚表皮神經(jīng)密度顯著高于老年組（年齡70歲），未發(fā) 現(xiàn)皮膚神經(jīng)密度與年齡相關(guān)性13。近來，有研究顯示i

9、enf 與年齡有函數(shù)關(guān)系，皮膚神經(jīng)密度隨年齡（至60歲）相應(yīng)的下 降，但發(fā)現(xiàn)隨著年齡的增加，乳房部的ienf密度卻是增加的7,這種情況可能這樣解釋：表皮神經(jīng)選擇性下降，軀體部 位隨年齡下降明顯更多的是因為其基本神經(jīng)支配多的緣故, 年齡相關(guān)性的表皮神經(jīng)下降可能與ngf及其受體的合成下降 有關(guān)14 o3.2解剖部位對表皮神經(jīng)構(gòu)筑的影響：大多數(shù)報道皮膚神經(jīng)密度具有頭-尾梯度變化。面部高于軀干、眼瞼、耳前、 腹部、乳房，依次降低。有發(fā)現(xiàn)下肢ienf密度與解剖位點和 豁前上皤間的距離存在線性關(guān)系，股中間水平是口側(cè)高密度 與尾側(cè)低密度的分界點12。當(dāng)然，面部皮膚（眼瞼和耳前） 神經(jīng)密度比軀干（乳房和腹部）

10、的高，不排除神經(jīng)起源的差異 造成的影響7 o toyodo等15認為這種神經(jīng)構(gòu)筑情況的差 異可能與慢性光損害有關(guān)，表皮神經(jīng)密度與光損害嚴(yán)重程度 成比例，陽光暴露部位ngf等釋放增加，而ngf有利于感覺神 經(jīng)元的生存與分化，使表皮神經(jīng)密度增加10,調(diào)節(jié)神經(jīng)遞 質(zhì)的表達，介導(dǎo)神經(jīng)與皮膚細胞間的聯(lián)系16 o另外,神經(jīng)密度從軀干到肢體末端有下降的趨勢，這種部位差異說明了表 皮神經(jīng)功能也有區(qū)域特異性，除接受痛覺外還可能有營養(yǎng)、 調(diào)節(jié)作用17。但是,kawakami等18對志愿者表皮神經(jīng)密 度測量后，沒有發(fā)現(xiàn)這種梯度變化，僅得出臂部密度最高，背 部最低的結(jié)論。3. 3性別對皮膚神經(jīng)密度的影響：對106個正

11、常人用 pgp9. 5進行測量發(fā)現(xiàn)女性表皮密度高于男性 (13. 6 + 4. 6)/mm： (10. 5 + 3. 9)/mm) 19,這一現(xiàn)象在糖尿 病患者腕部皮膚中也存在8,性別對表皮神經(jīng)構(gòu)筑差異的 影響可能與男性酒精攝入多，職業(yè)因素神經(jīng)毒性化學(xué)物質(zhì)接 觸機會較女性多等因素有關(guān)。3.4糖尿病對表皮神經(jīng)密度的影響：隨著糖尿病發(fā)病率 的升高，糖尿病周圍神經(jīng)病變的研究也逐漸得到重視。研究 發(fā)現(xiàn)神經(jīng)密度下降，并與皮膚痛溫覺、振動覺、位置辨別覺 等的改變有相關(guān)性20-21 o但是新近一項研究表明臨床上 有中度以下周圍神經(jīng)癥狀時，表皮神經(jīng)密度并未顯著降低 9,當(dāng)然該研究只觀察了腕部皮膚神經(jīng)密度的變化

12、，并不全面。4表皮神經(jīng)密度在臨床的應(yīng)用目前，神經(jīng)密度測量主要在周圍小神經(jīng)病變診斷中的作用越來越受到重視，通過活檢檢測表皮神經(jīng)密度判定周 經(jīng)病變，具有較高的陽性率，一項研究發(fā)現(xiàn),67例有神經(jīng)癥狀 但是神經(jīng)傳導(dǎo)檢測正常的患者中88. 1%的人表皮神經(jīng)密度異 常，其敏感性在31%,特異性在98%22。此外,表皮神經(jīng)密度 的測量在對稱性肢端周圍神經(jīng)病變的診斷中也具有重要意 義23。目前表皮神經(jīng)密度測量已經(jīng)應(yīng)用到多種疾病的周圍 神經(jīng)檢測中。糖尿病患者越來越多，其引起的周圍小神經(jīng)的 損害是諸多并發(fā)癥的發(fā)病機制。有研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)周圍神經(jīng)傳導(dǎo) 檢測正常，也沒有周圍神經(jīng)癥狀時，表皮神經(jīng)密度已經(jīng)出現(xiàn) 異常24 o因而

13、表皮神經(jīng)密度測量良好的敏感性(72. 4%)和 特異性(76. 2%) 25具有良好的應(yīng)用前景。此外，新近有研究 報道60%的甲減患者表皮神經(jīng)密度會有所降低，并且在亞臨 床患者中也有較高的陽性率。自身性免疫性疾病時常常伴有 皮膚感覺的異常，此時表皮神經(jīng)密度往往也有異常，在一項 針對結(jié)節(jié)病的研究中其陽性率可達32.8%26。表皮神經(jīng)的 數(shù)量和神經(jīng)病嚴(yán)重度之間存在一個明顯的負相關(guān)，因此表皮 神經(jīng)密度測定對周圍神經(jīng)病變病程進展及預(yù)后判定中也有 輔助作用?？傊?，在皮膚損傷或者病變時神經(jīng)密度、形態(tài)、功能等 方面都有變化，反之，神經(jīng)構(gòu)筑的變化也會影響皮膚及其功 能。表皮神經(jīng)的研究目前仍有待于進一步發(fā)展，如

14、果將皮膚 神經(jīng)構(gòu)筑學(xué)與功能學(xué)相聯(lián)系，或許可以為研究諸如糖尿病難 愈創(chuàng)面愈合、光損害等皮膚病理生理過程提供新的視角。參考文獻lwang l,hilliges m, jernberg t, et al. protein gene product 9. 5-immunoreactive nerve fibres and cells in human skinj.cell tissue res,1990,261 (1):2533.2 johansson 0,wang l,hilliges m, et al. intraepidermal nerves in human skin： pgp 9. 5 i

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