常用生物化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)PPT學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1常用生物化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)常用生物化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)2概念概念：利用物質(zhì)具有吸收、發(fā)射或散射光譜譜系的特點(diǎn)，對(duì)物質(zhì)進(jìn)行：利用物質(zhì)具有吸收、發(fā)射或散射光譜譜系的特點(diǎn)，對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性或定量定性或定量的分析方法的分析方法第1頁(yè)/共61頁(yè)3u發(fā)射光譜發(fā)射光譜 火焰光度法、原子發(fā)射光譜法、熒光光譜法火焰光度法、原子發(fā)射光譜法、熒光光譜法u吸收光譜吸收光譜 紫外、可見(jiàn)光、紅外光及原子吸收分光光度法紫外、可見(jiàn)光、紅外光及原子吸收分光光度法u散光光譜散光光譜 比濁法比濁法光譜分析技術(shù)光譜分析技術(shù)第2頁(yè)/共61頁(yè)4第3頁(yè)/共61頁(yè)5第4頁(yè)/共61頁(yè)6第5頁(yè)/共61頁(yè)第6頁(yè)/共61頁(yè)8分光光度技術(shù)的基本原理分光光度技

2、術(shù)的基本原理透光度與吸光度透光度與吸光度T=I/IOT%=T100%A=-lgT=-lg I/IO =lgIO/I第7頁(yè)/共61頁(yè)9Lambert-Beer定律定律A=KLC適用用于可見(jiàn)光、紫外光、紅外光和適用用于可見(jiàn)光、紫外光、紅外光和均勻非散射的液體均勻非散射的液體（摩爾吸光系數(shù)）：（摩爾吸光系數(shù)）：當(dāng)液層厚度為當(dāng)液層厚度為1cm1cm，物質(zhì)濃度為，物質(zhì)濃度為1mol/L1mol/L時(shí)時(shí)波長(zhǎng)下的吸光度值波長(zhǎng)下的吸光度值第8頁(yè)/共61頁(yè)10第9頁(yè)/共61頁(yè)11第10頁(yè)/共61頁(yè)12第11頁(yè)/共61頁(yè)13第12頁(yè)/共61頁(yè)14第13頁(yè)/共61頁(yè)15第14頁(yè)/共61頁(yè)16第15頁(yè)/共61頁(yè)17第

3、16頁(yè)/共61頁(yè)18第17頁(yè)/共61頁(yè)19第18頁(yè)/共61頁(yè)20第19頁(yè)/共61頁(yè)21第20頁(yè)/共61頁(yè)22 溶液中帶電粒子在直流電場(chǎng)中向溶液中帶電粒子在直流電場(chǎng)中向電性相反電極移動(dòng)的現(xiàn)象稱為電性相反電極移動(dòng)的現(xiàn)象稱為電電泳泳。 電電 泳泳第21頁(yè)/共61頁(yè)23 利用帶電粒子在電場(chǎng)作用下利用帶電粒子在電場(chǎng)作用下定向移動(dòng)的特性，對(duì)混合物組分定向移動(dòng)的特性，對(duì)混合物組分進(jìn)行分離、純化和測(cè)定的技術(shù)稱進(jìn)行分離、純化和測(cè)定的技術(shù)稱為為電泳技術(shù)電泳技術(shù)。電泳技術(shù)電泳技術(shù)第22頁(yè)/共61頁(yè)24 COO- H C NH3+ R COO- H C NH2 R COOH H C NH3+ RH+H+OH-OH-p

4、H = pIpHpI原理原理第23頁(yè)/共61頁(yè)人血清蛋白的等電點(diǎn)和電泳遷移率人血清蛋白的等電點(diǎn)和電泳遷移率 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì) 等電點(diǎn)等電點(diǎn) 電泳遷移率電泳遷移率cm2.s-1.v-1 白蛋白白蛋白 4.84 5.910-5 球蛋白球蛋白 5.06 5.110-5 球蛋白球蛋白 5.06 4.110-5 球蛋白球蛋白 5.12 2.810-5 球蛋白球蛋白 6.857.30 1.010-5 第24頁(yè)/共61頁(yè)26第25頁(yè)/共61頁(yè)27第26頁(yè)/共61頁(yè)28根據(jù)根據(jù)StokeStoke定律定律第27頁(yè)/共61頁(yè)291 1、根據(jù)被分離的樣品多少分為、根據(jù)被分離的樣品多少分為 分析電泳分析電泳 制備電泳制

5、備電泳2 2、根據(jù)電泳時(shí)電壓的高低分為、根據(jù)電泳時(shí)電壓的高低分為 高壓電泳高壓電泳 （50 V/cm50 V/cm以上）以上） 常壓電泳常壓電泳 （50 V/cm50 V/cm以下）以下） 電泳的分類電泳的分類第28頁(yè)/共61頁(yè)303 3、根據(jù)電泳媒介的不同分為、根據(jù)電泳媒介的不同分為 自由電泳自由電泳 （溶液）（溶液） 區(qū)帶電泳區(qū)帶電泳 （支持介質(zhì)）（支持介質(zhì)） 4 4、根據(jù)電泳系統(tǒng)是否均一分為、根據(jù)電泳系統(tǒng)是否均一分為 連續(xù)電泳連續(xù)電泳 不連續(xù)電泳不連續(xù)電泳第29頁(yè)/共61頁(yè)31第30頁(yè)/共61頁(yè)32v組成成分組成成分pH pH pHpH與與pIpI比較，比較，4.5-9.0,4.5-9.

6、0,正極正極pH pH 負(fù)極負(fù)極v離子強(qiáng)度離子強(qiáng)度離子強(qiáng)度越大，緩沖容量越大，離子強(qiáng)度越大，緩沖容量越大，pHmol/LpHmol/L3 3、緩沖液、緩沖液第31頁(yè)/共61頁(yè)335 5、蒸發(fā)作用、蒸發(fā)作用6 6、樣品、樣品4 4、支持物、支持物v吸附作用吸附作用v電滲作用電滲作用第32頁(yè)/共61頁(yè)34 電電 泳泳 儀儀 由由直流電源直流電源和和電泳槽電泳槽兩部分組兩部分組成。成。一、直流電源一、直流電源 一般由交流電經(jīng)過(guò)整流獲得一般由交流電經(jīng)過(guò)整流獲得 恒壓電源恒壓電源 恒流電源恒流電源 恒功電源恒功電源第33頁(yè)/共61頁(yè)35二、電泳槽二、電泳槽 蓋蓋 電極及電極室電極及電極室 支架支架第34

7、頁(yè)/共61頁(yè)36第35頁(yè)/共61頁(yè)37第36頁(yè)/共61頁(yè)38第37頁(yè)/共61頁(yè)39第38頁(yè)/共61頁(yè)40第39頁(yè)/共61頁(yè)41第40頁(yè)/共61頁(yè)42第41頁(yè)/共61頁(yè)43第42頁(yè)/共61頁(yè)44第43頁(yè)/共61頁(yè)45第44頁(yè)/共61頁(yè)46第45頁(yè)/共61頁(yè)第46頁(yè)/共61頁(yè)48第47頁(yè)/共61頁(yè)49第48頁(yè)/共61頁(yè)50 不同的蛋白質(zhì)具有不同的等電點(diǎn)，利用具有線性不同的蛋白質(zhì)具有不同的等電點(diǎn)，利用具有線性pHpH梯度的電泳介質(zhì)來(lái)分離等電點(diǎn)不同的蛋白質(zhì)，這種電泳技術(shù)稱為梯度的電泳介質(zhì)來(lái)分離等電點(diǎn)不同的蛋白質(zhì)，這種電泳技術(shù)稱為等電聚焦電泳等電聚焦電泳。第49頁(yè)/共61頁(yè)51進(jìn)行等電聚焦電泳的條件進(jìn)行

8、等電聚焦電泳的條件1.1.有一個(gè)在電泳條件下基本穩(wěn)定的、有一個(gè)在電泳條件下基本穩(wěn)定的、 重復(fù)性良好的重復(fù)性良好的pHpH 分離的區(qū)帶。分離的區(qū)帶。第50頁(yè)/共61頁(yè)52 雙向電泳雙向電泳是先把樣品從一個(gè)方向進(jìn)行電泳分離，接著再與其成是先把樣品從一個(gè)方向進(jìn)行電泳分離，接著再與其成9090方向進(jìn)行第二次電泳分離。方向進(jìn)行第二次電泳分離。 第一次電泳以其電荷性質(zhì)為基礎(chǔ)；第二次電泳則按分子量不同進(jìn)行分離。第一次電泳以其電荷性質(zhì)為基礎(chǔ)；第二次電泳則按分子量不同進(jìn)行分離。第51頁(yè)/共61頁(yè)53 轉(zhuǎn)移電泳轉(zhuǎn)移電泳是將凝膠電泳的高分辯率與放射標(biāo)記或酶標(biāo)記等免疫化學(xué)方法的高靈敏度結(jié)合起來(lái)的電泳技術(shù)。是將凝膠電泳的高分辯率與放射標(biāo)記或酶標(biāo)記等免疫化學(xué)方法的高靈敏度結(jié)合起來(lái)的電泳技術(shù)。第52頁(yè)/共61頁(yè)54第53頁(yè)/共61頁(yè)55第54頁(yè)/共61頁(yè)56第55頁(yè)/共61頁(yè)57 核酸轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜或重氮芐氨核酸轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜或重氮芐氨 基甲基紙上。基甲基紙上。 3.3.鑒定紙上的蛋白質(zhì)或核酸鑒定紙上的蛋白質(zhì)