RCS大鼠視網(wǎng)膜色素變性過(guò)程中相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)

1、RCS大鼠視網(wǎng)膜色素變性過(guò)程中相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)【摘要】 目的 觀察視網(wǎng)膜色素變性過(guò)程中，視網(wǎng)膜外節(jié)層內(nèi)組織細(xì)胞腫瘤壞死因子(TNF)、神經(jīng)組織蛋白S100、細(xì)胞間黏附分子1 (ICAM1)的表達(dá)情況，探討其在視網(wǎng)膜色素變性過(guò)程中的作用及意義。方法 出生后25 d的RCS大鼠10只，雌雄不限，12 h光照12 h黑暗循環(huán)條件下飼養(yǎng)；以同齡SD大鼠10只作正常對(duì)照。蘇木精伊紅染色和免疫組化法檢測(cè)視網(wǎng)膜外節(jié)等范圍內(nèi)組織細(xì)胞TNF、S100、ICAM1等細(xì)胞因子的表達(dá)情況。結(jié)果 RCS大鼠視網(wǎng)膜組織中TNF陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)于SD大鼠，ICAM1和S100陽(yáng)性表達(dá)弱于SD大鼠。結(jié)論 上述細(xì)胞因子的變化可能與視

2、網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞對(duì)視細(xì)胞外節(jié)盤(pán)膜的吞噬、消化功能的改變有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】 視網(wǎng)膜炎,色素性；腫瘤壞死因子；細(xì)胞黏附分子；S100蛋白質(zhì)類(lèi)；大鼠 視網(wǎng)膜色素變性為遺傳性疾病，其基本病理過(guò)程已在有原發(fā)性視網(wǎng)膜色素變性的RCS大鼠視網(wǎng)膜中得到證實(shí)13。RCS大鼠視網(wǎng)膜色素變性過(guò)程中，色素上皮細(xì)胞對(duì)視細(xì)胞外節(jié)盤(pán)膜的吞噬、消化功能的喪失以及盤(pán)膜崩解物的殘留，有可能會(huì)引發(fā)相關(guān)細(xì)胞特性的改變，進(jìn)而加速了視網(wǎng)膜色素變性的進(jìn)程。本文對(duì)RCS大鼠視網(wǎng)膜色素變性過(guò)程中，視網(wǎng)膜外節(jié)等范圍內(nèi)組織細(xì)胞腫瘤壞死因子(TNF)、神經(jīng)組織蛋白S100、細(xì)胞間黏附分子1(ICAM1)的表達(dá)情況進(jìn)行觀察，以探討其在視網(wǎng)膜色素變性過(guò)

3、程中的作用及意義。 2 / 121 材料和方法 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 出生后25 d的RCS大鼠10只，雌雄不限，12 h光照12 h黑暗循環(huán)條件下飼養(yǎng)。以同齡SD大鼠10只作正常對(duì)照。 1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑 兔抗鼠ICAM1抗體、兔抗鼠TNF抗體、兔抗鼠S100抗體、羊抗兔二抗免疫組化試劑盒均購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。 1.3 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本采取 水合氯醛（400 mg/kg）腹腔麻醉動(dòng)物后，取出眼球，生理鹽水沖洗后立即放入40 g/L多聚甲醛中固定6 h，去除眼前節(jié)及玻璃體，常規(guī)石蠟包埋，沿眼球矢狀面連續(xù)切片，切片厚度5 m。 1.4 免疫組化陽(yáng)性細(xì)胞的觀察和分析 使用OLYMPAS BX50

4、多功能顯微鏡，選取不同的視野觀察并照相。運(yùn)用SamplPCI顯微圖像分析系統(tǒng)測(cè)定視網(wǎng)膜外節(jié)層內(nèi)組織細(xì)胞內(nèi)免疫反應(yīng)產(chǎn)物的平均吸光度值。在每張切片上隨機(jī)選出兩個(gè)視野進(jìn)行計(jì)算機(jī)顯微圖像分析，測(cè)得其平均吸光度值。結(jié)果以±s表示，所得數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。 2 結(jié)果 2.1 蘇木精伊紅染色檢查 正常SD大鼠出生25 d后，視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)基本接近成熟狀態(tài)，視桿層排列整齊，外節(jié)未見(jiàn)明顯的紊亂及空泡現(xiàn)象；與SD大鼠相比，RCS大鼠出生25 d后視網(wǎng)膜視桿層厚度增加，內(nèi)節(jié)變窄，外節(jié)增厚，有排列紊亂及空泡現(xiàn)象。 2.2 ICAM1免疫組化染色檢測(cè) 無(wú)論正常SD大鼠還是RCS大鼠，在

5、視網(wǎng)膜組織中均可見(jiàn)ICAM1陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞，以膜表達(dá)為主，呈彌漫分布。RCS大鼠ICAM1的平均吸光度值為0.047 85±0.006 12，而SD大鼠為0.054 90±0.004 21，RCS大鼠平均吸光度值低于RCS大鼠，差異有顯著性（t=3.213，P<0.05）。 2.3 S100免疫組化染色檢測(cè) 無(wú)論正常SD大鼠還是RCS大鼠，在視網(wǎng)膜組織中均可見(jiàn)S100陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞。RCS大鼠S100平均吸光度值為0.061 14±0.003 52，SD大鼠平均吸光度值為0.146 25±0.003 82，RCS大鼠平均吸光度值低于RCS大鼠，

6、差異有顯著性（t=4.112,P<0.05）。 2.4 TNF免疫組化染色檢測(cè) 無(wú)論正常SD大鼠還是RCS大鼠，在視網(wǎng)膜組織中均可見(jiàn)到TNF陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞。RCS大鼠TNF平均吸光度值為0.148 20±0.002 35, SD大鼠平均吸光度值為0.096 03±0.002 38,RCS大鼠平均吸光度值高于RCS大鼠，差異有顯著性（t=4.056，P<0.05）。 3 討論 原發(fā)性視網(wǎng)膜色素變性的發(fā)生，主要由于視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞對(duì)視細(xì)胞外節(jié)盤(pán)膜的吞噬、消化功能衰退，致使盤(pán)膜崩解物殘留、堆集形成一層障礙物，妨礙營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)從脈絡(luò)膜到視網(wǎng)膜的轉(zhuǎn)運(yùn)，從而引起

7、視細(xì)胞的進(jìn)行性營(yíng)養(yǎng)不良及逐漸變性和消失。至于色素上皮細(xì)胞吞噬消化功能衰竭的原因，目前還不清楚，可能與基因異常、某種或某些酶的缺乏有關(guān)。在免疫學(xué)方面，近年研究結(jié)果顯示本病病人體液免疫、細(xì)胞免疫均有異常，玻璃體內(nèi)有激活的T細(xì)胞、B細(xì)胞與巨噬細(xì)胞，視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞表達(dá)HLADR抗原。這些證據(jù)提示RCS大鼠視網(wǎng)膜色素變性過(guò)程中，色素上皮細(xì)胞對(duì)視細(xì)胞外節(jié)盤(pán)膜的吞噬、消化功能的喪失以及盤(pán)膜崩解物的殘留，有可能會(huì)引發(fā)相關(guān)細(xì)胞特性的改變，進(jìn)而加速了視網(wǎng)膜色素變性的進(jìn)程。臨床上常見(jiàn)的包括原發(fā)性視網(wǎng)膜色素變性在內(nèi)的視網(wǎng)膜疾病如視網(wǎng)膜靜脈周?chē)?、視盤(pán)血管炎、視網(wǎng)膜脫離、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤等，常常伴有細(xì)胞因子的表達(dá)異常

8、等細(xì)胞生物學(xué)改變。在調(diào)節(jié)免疫功能、參與炎癥發(fā)生過(guò)程中起重要作用的細(xì)胞因子TNF具有刺激視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞增生作用46。LIMB等7，8在視網(wǎng)膜前膜細(xì)胞和基質(zhì)中檢測(cè)出細(xì)胞因子IL1（、）、IL6、TNF、干擾素以及炎癥相關(guān)分子E選擇素、P選擇素、黏附分子等。IL6、TNF在視網(wǎng)膜外節(jié)盤(pán)膜中的普遍表達(dá)，說(shuō)明增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變的形成過(guò)程中有細(xì)胞因子介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)參與。而對(duì)于視網(wǎng)膜色素變性，大多數(shù)的研究集中在視網(wǎng)膜細(xì)胞的形態(tài)特征上，對(duì)相關(guān)細(xì)胞因子的作用報(bào)道甚少。我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中觀察到，無(wú)論正常SD大鼠還是RCS大鼠，在視網(wǎng)膜組織中均可見(jiàn)TNF、ICAM1和S100陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞，但RCS大鼠視網(wǎng)膜組織中

9、TNF陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)于SD大鼠，ICAM1、S100陽(yáng)性表達(dá)弱于SD大鼠。這也許預(yù)示著相關(guān)細(xì)胞因子在視網(wǎng)膜色素變性中發(fā)揮一定的作用?？紤]到這些細(xì)胞因子的生物學(xué)效應(yīng)，是否可以認(rèn)為，RCS大鼠視網(wǎng)膜組織中ICAM1、S100陽(yáng)性表達(dá)弱于SD大鼠，提示細(xì)胞間相互黏附的能力降低、組織自我修復(fù)能力減弱促進(jìn)了視網(wǎng)膜視細(xì)胞外節(jié)盤(pán)膜細(xì)胞脫落，而盤(pán)膜崩解物殘留、堆集形成的障礙物，引發(fā)了視網(wǎng)膜組織細(xì)胞TNF的過(guò)度表達(dá)，甚或誘發(fā)一定程度的組織炎性反應(yīng)，進(jìn)一步妨礙營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)從脈絡(luò)膜到視網(wǎng)膜的轉(zhuǎn)運(yùn)，從而加重視細(xì)胞的進(jìn)行性營(yíng)養(yǎng)不良，其確切機(jī)制尚需要進(jìn)一步研究證實(shí)。 【參考文獻(xiàn)】 1BOULTON M, DAYHAW B P.

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