母豬繁殖障礙疾病的血清學調(diào)查報告

1、母豬繁殖障礙疾病的血清學調(diào)查報告母豬繁殖障礙疾病的血清學調(diào)查報告摘要 : 隨著豬場規(guī)模化、集約化程度的不斷提高, 豬病的種類也在不斷增加,特別是近年來的母豬繁殖障礙性疾病嚴重制約生豬產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。2004 年我們引進了帶有外種血緣的外種豬洋二元母豬，進行了優(yōu)良品種推廣，結(jié)果 80%的豬場母豬普遍出現(xiàn)第一胎發(fā)生流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎，新生仔豬和斷奶仔豬發(fā)病率和死亡率增高，高達 20%，而母豬一般無臨慶癥狀，對這情況我們凝似是母豬繁殖障礙性疾病，故進行了血清調(diào)查。共采血抽樣 237 份，分離血清 212 份，并對分得的 212 份血清全部進行藍耳?。?PRRS）檢測，其中陽性 80 份，陽性率37.7%；

2、對其中的 160 份血清進行了偽狂犬（ PR）檢測， 160 份進行了豬瘟（ HC）檢測， 160 份血清進行了細小病毒（ PPV）檢測。結(jié)果表明 : 一十三個豬場均有以上母豬繁殖障礙病存在。由此可見：母豬繁殖障礙病在我縣外種豬場已普遍存在。關(guān)鍵詞：母豬 ; 繁殖與呼吸綜合征 ; 調(diào)查 ; 血清學 ; 檢測As hog farms have increased in both size and efficiency,so have hog disease types,In rencent yesrs,the problem has been especially serious among b

3、reeding sows,where disease has increased inferticity and negatively affected the development of the hog breeding industry In 2004,blood was collected from 237 sous From these,212 samples of serum were successfully produced and tested for bluc Ear pisease (PRRS).The positive test rate Was 37.7 percen

4、t (80 positivesamples)Also tests for three types of disease porcine pseuudo rabies(PR),swine Fever(HC),and wicroscopic Viral infection (PPV)were performed,each test on 160 of the samples.Sow;porcine reproductive and respiratory母豬繁殖障礙疾病是近年來危害母豬的一種主要的疫病，現(xiàn)已被廣范受到人們的重視，它以妊娠母豬發(fā)生流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎、產(chǎn)弱仔、畸形胎和母豬不育、配不上

5、種為主要特征的一類疾病。此病主要包括豬瘟(HC)、豬偽狂犬病 (PR)、豬細小病毒病 (PPV)、繁殖障礙與呼吸綜合征 (PRRS)和豬乙型腦炎 (JE) 等幾種病。 2004 年我們對存在有明顯繁殖障礙病的 13 個豬場的 237 母豬頭進行采血，分離血清 212 份，并對分得的 212 份血清全部進行了檢測，對其中的160 份血清進行了豬偽狂犬、豬細小病毒檢測，并根據(jù)檢測結(jié)果對母豬繁殖障礙原因進行了分析總結(jié)，現(xiàn)將詳細情況分述如下。1 材料和方法1.1材料被檢血清被檢血清來 13 個母豬場，耳靜脈采血，3600 轉(zhuǎn)/min 分離血清，待檢。主要診斷試劑藍耳病 ELISA 試劑盒：由美國IDE

6、XX公司提供；豬瘟診斷抗原及陰、陽性血清：由蘭州獸醫(yī)研究所提供；豬偽狂犬 LAT診斷液試劑盒：由華中農(nóng)業(yè)大學提供；豬細小病毒 LAT診斷液試劑盒：由華中農(nóng)業(yè)大學提供。1.2方法母豬繁殖于呼吸綜合癥方法：間接ELISAA 采樣：常規(guī)采血，分離血清，無腐敗、溶血、凝塊和沉淀。B 準備：A 試驗前將所有試劑從冰箱中取出，置室溫下達到室溫，并輕輕搖勻，用后立即放回冰箱。B 將達到室溫并完全溶解的洗液深縮用滅菌水或去離子水稀釋10 倍。C 將待檢血清用稀釋液進行 40 倍稀釋；注意匆將陽性 / 陰性對照血清稀釋。C 取出抗原孢被的 96 孔板（該板的 1、 3、 5、 7、9、11 列孔包被的 PRRS

7、抗原， 2、4、6、8、10、12 列孔包被的正常 MARC 145 細胞抗原），在工作表上標記好樣品的位置。D 取 100UL陰性血清分別加入 C1、C2、 D1、D2孔中。E 取 100UL陽性血清分別加入 A1、A2、 B1、B2 孔中。F 取 100UL稀釋的待檢血清分別加入相鄰的 PRRS抗原孔和 MARC 145 細胞抗原孔（ NHC）中。H在室溫下孵育 30mim。L 將反應板孔里的液體倒入廢液缸，并在吸水紙上扣干。J 每孔加入 300UL洗滌液（含 Tween20 的 PBS），置室溫約 3mim，棄去孔中液體，重復 35 次，最后一次在吸水紙水輕輕扣干。K 每孔加入 100U

8、L酶標抗體復合物，在室溫下孵育 30mim。并利用此空隙，取等量底物濃縮液和底物稀釋液混勻（如5.5ml ： 5.5ml ）。L 重復 I 、J 操作。M每孔加入 100UL稀釋好底物溶液，在室溫下孵育15mim。N每孔加入 100終止液O用酶聯(lián)免疫檢測儀于650NM波長下測定各孔的吸光度值。Q 結(jié)果判定：a pc：PRRSNC：PRRS0.150 ，試驗方成立。b S/P 0.4 ，樣品血清 PRRS抗體陽性； S/P 0.4 ，樣品血清 PRRS抗體陰性。豬瘟檢測方法：正向血凝試驗a 取一潔凈玻片，以蠟筆劃成 34c 小格，如下圖血清號第1格第2格第3格第4格陽性血清對照 0.08ml 0

9、.04ml 0.02ml 0.01ml陰性血清對照 0.08ml 0.04ml 0.02ml 0.01ml血清樣品 1 0.08ml 0.04ml 0.02ml 0.01ml血清樣品 2 0.08ml 0.04ml 0.02ml 0.01mlb試驗前，先將待檢血清、標準血清和抗原置于室溫，使其達到20。B 將待檢血清、標準血清按上表中的量，垂直接觸玻片分別加到各方格內(nèi)。C 搖勻抗原，每一血清格內(nèi)分別垂直加入 0.03ml 抗原。D自 0.01ml 血清格開始，用牙簽將抗原與血清完全混合，攤開直徑2CM左右，依次至 0.02ml 、0.04ml 、 0.08m 血清格，一個血清樣使用一牙簽。E輕

10、輕搖動玻片后，室溫靜置58min。春冬季節(jié)室溫較低時，可置于30左右的溫箱中。F 記錄結(jié)果出現(xiàn)大凝集片或小粒狀物，液體完全透明，即100%凝集。有明顯凝集片和粒，液體幾乎完全透明，即75%凝集。有可見凝集片和顆粒，液體不甚透明，即50%凝集。豬偽狂犬檢測方法：乳膠凝集試驗操作步驟取待檢樣品、陽性 / 陰性對照血清和稀釋液各一滴，分別置于玻片上，各加一滴乳膠抗原，用牙簽或火柴棍攪拌，并輕輕搖動12min 后，于 3 5min 內(nèi)觀察結(jié)果。也可將血清作倍比連續(xù)稀釋，每個稀釋度加乳膠抗原進行定量分析。C判定結(jié)果：A 所有對照成立，即陽性血清呈“”，陰性血清和稀釋液呈“”，試驗方有效。樣品出現(xiàn)“ +”

11、以上者為陽性。豬細小病毒檢測方法：乳膠凝集試驗。2 調(diào)查內(nèi)容2.1流行病學調(diào)查：通過查閱記錄，調(diào)查種源、胎次，發(fā)病的季節(jié)性。2.2飼養(yǎng)管理調(diào)查：主要包括飼料質(zhì)量，營養(yǎng)成份，有無霉變；有無環(huán)境、機械等不良因素引起的，防疫、免疫、消毒是否落實到位。2.3臨床病例剖解：包括對繁殖母豬的臨床檢查及對發(fā)病母豬所產(chǎn)部分弱仔及新生病仔豬的病理剖檢觀察。2.4血清學檢測：對采得的212 份血清樣品進行藍耳病抗體檢測和部分血清的偽狂犬、豬瘟、豬細小病毒檢測。2 檢測結(jié)果及討論3.1發(fā)生繁殖障礙的母豬有長白、約克及長白約克，發(fā)病母豬沒有明顯的品系差別；發(fā)病的胎次主要集中在第一胎，在第一胎過后，很多母豬不再表現(xiàn)明顯

12、的繁殖障礙病 ( 說明在第一胎過后產(chǎn)生了抗體對該病有一定的免疫保護力 ) ；發(fā)病沒有季節(jié)性，一年四季均可發(fā)??；發(fā)病豬主要表現(xiàn)產(chǎn)死胎、木乃伊胎、弱仔和新生仔豬發(fā)病死亡。3.2豬場的飼料基本上都統(tǒng)一飼喂母豬專用料，不存在霉變和質(zhì)量問題，也無環(huán)境或機械因素引起的流產(chǎn)和死胎。在采血檢查時除兩家豬場拿不出嚴格的免疫記錄檔案外，其他豬場都按免疫程序進行了免疫，并做到定期消毒。3.3剖檢弱仔和新生病仔豬，大體表現(xiàn)一致，體表貧血蒼白，皮下脂肪多黃染，腎呈土黃色，在表面有小出血點，有的淋巴結(jié)水腫出血呈大理石樣狀，心包積液，小葉性肺炎，肝褐黃色。3.4血清學檢測結(jié)果：母豬繁殖障礙疾病血清學檢測統(tǒng)計表豬場 藍耳病

13、偽狂犬細小病毒繁殖障礙病史樣品數(shù)陽性數(shù)陽性率 樣品數(shù)陽性數(shù) 陽性率樣品數(shù) 陽性數(shù)陽性率1場 35 10 28.6%14 857.1%14 642.9% 11頭流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎2場 32 7 21.9%17 1058.8%17 847.1%記載不詳3場 14 5 35.7%14 1071.4%14 964.3% 14頭流產(chǎn)、死胎、木乃伊4場 20 14 70.0%20 14 70.0% 20 16 80.0% 4頭發(fā)流產(chǎn)5場 26 13 50.0%13 11 84.6% 13 9 69.2%記載不詳6場13215.4%13 6 46.2% 13 7 53.8% 9頭流產(chǎn)、死胎、弱仔、木乃伊、

14、7場9111.1%9666.7%9555.6% 1配不上種、 1 頭產(chǎn)死胎、 7 頭流產(chǎn)、弱仔8場1100.0% 11 8 72.7% 11 8 72.7% 11頭流產(chǎn)、死胎、木乃伊、弱仔9場12758.3%12 6 50.0% 12 7 58.3% 12頭流產(chǎn)、死胎、弱仔、木乃伊10場 7 2 28.6% 7 6 85.7%7 4 57.1%7死胎、木乃伊11場 7 3 42.9% 4 2 50.0%4 3 75.0%7頭發(fā)生過流產(chǎn)、死胎、木乃伊12場 24 16 66.7%24 20 83.3% 24 17 70.8% 24頭發(fā)生過流產(chǎn)、死胎、弱仔13場200.0%22100.0%2 1

15、50.0%2頭后備發(fā)病豬合計 212 80 37.7% 160 109 68.1% 160 100 62.5% 110頭繁殖障礙4 小結(jié)與分析4.1通過流行病學、飼料、飼養(yǎng)管理和對弱仔、新生病仔豬剖檢等各個方面的調(diào)查，排除了母豬繁殖障礙病因為品種、種源、飼料和飼養(yǎng)管理因素造成的可能。因為剖檢有一定的病理變化，說明是由病毒或病原微生物等致病因素引起。4.2本次監(jiān)測采樣全由專業(yè)人員把關(guān)操作，藍耳病檢測采用美國進口ELISA 試劑，微電腦數(shù)控機洗板，偽狂犬、細小病毒采用華中農(nóng)業(yè)大學LAT試劑盒，其靈敏度高，監(jiān)測結(jié)果可靠。4.3監(jiān)測豬均未接種藍耳病疫苗免疫，經(jīng)過豬偽狂犬、豬細小病毒疫苗免疫，被監(jiān)測種豬

16、群體中有藍耳病陽性(+) ，說明有感染豬或曾經(jīng)感染過；偽狂犬、細小病毒的免疫合格率分別達到68.1%和 72.5%說明了種豬的免疫效果較好。4.4本次監(jiān)測的樣本較大，檢測結(jié)果具有代表性，監(jiān)測結(jié)果，藍耳病樣品陽性 37.7%(80/212) ，其中 1 至 5 場樣品陽性率 38.58%（49/127 ），豬場藍耳病樣品陽性率比較高；偽狂犬和細小病毒的免疫陽性率比較高，說明種豬在經(jīng)過免疫或曾經(jīng)感染后產(chǎn)生了對該病的較高抵抗力，免受強毒的攻擊。4.5在本次的調(diào)查中還發(fā)現(xiàn)，同一頭豬在藍耳病呈陰性（- ），偽狂犬、細小病毒免疫抗體都達到免疫保護力的情況下，仍然存在繁殖障礙病，說明該豬場發(fā)生的繁殖病不僅由藍耳病、偽狂犬、細小病毒引起，還有其它繁殖障礙疾病參與。5 防制建議繁殖障礙性疾病，特別是藍耳病，它是我縣的首次監(jiān)測到的一個新病，它對養(yǎng)豬業(yè)的危害較重，一是引起嚴重的種豬繁殖障礙，導致其它疫病的免疫抑制，產(chǎn)生免疫失敗；二是隱性豬瘟很難控制和消除，是母豬繁殖障礙的潛在殺手；三