臨床檢驗(yàn)技能操作

1、實(shí)驗(yàn)一、血涂片的制備和染色【原理】 將一小滴血液均勻涂在玻片上，呈單層緊密分布，制成薄血片。用含天青B和伊紅的Romannowsky類染料進(jìn)行染色。細(xì)胞中的堿性物質(zhì)如RBC中的血紅蛋白及嗜酸性粒細(xì)胞胞質(zhì)中的嗜酸性顆粒等與酸性染料伊紅結(jié)合染成紅色；細(xì)胞中的酸性物質(zhì)如淋巴細(xì)胞胞質(zhì)及嗜堿性粒細(xì)胞質(zhì)中的嗜堿性顆粒等與堿性染料亞甲藍(lán)結(jié)合染成藍(lán)色；中性粒細(xì)胞的中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合，染成淡紫紅色?！酒鞑摹?載玻片 使用前，必須仔細(xì)清洗，并用乙醇或軟布清潔。2推片 選擇邊緣光滑的載玻片，在兩角分別作斜線標(biāo)記，然后用玻璃切割刀裁去兩角，制成約15mm寬度的推片。3吸耳球。4顯微鏡。5酒精燈。6

2、采血針。7注射器和針頭?！驹噭?瑞氏（Wright）染液（1）液：包含瑞氏染料1.0g、純甲醇（AR級(jí)以上)600ml、甘油15ml。將全部染料放入清潔干燥的乳缽中，先加少量甲醇慢慢地研磨（至少30min），以使染料充分溶解，再加一些甲醇混勻，然后將溶解的部分倒入潔凈的棕色瓶?jī)?nèi)，乳缽內(nèi)剩余的未溶解的染料，再加入少許甲醇細(xì)研，如此多次研磨，直至染料全部溶解，甲醇用完為止。再加15ml甘油密閉保存。（2）液：磷酸鹽緩沖液（pH6.46.8），包含磷酸二氫鉀（KH2PO4）0.3g、磷酸氫二鈉（Na2HPO4）0.2g、蒸餾水加至1000ml。配好后用磷酸鹽溶液校正pH，塞緊瓶口貯存。如無(wú)緩沖液可

3、用新鮮蒸餾水代替。2吉姆薩染液 包含吉姆薩染料0.75g、甘油35ml、甲醇65ml。將吉姆薩染料、甘油和甲醇放入含玻璃珠的容器內(nèi)，每天混勻3次，連續(xù)4天，最后過(guò)濾備用。3瑞-吉復(fù)合染液（1）I液：包含瑞氏染料1g、吉姆薩染料0.3g、甲醇500ml、中性甘油10ml。將瑞氏染料和吉姆薩染料置潔凈研缽中，加少量甲醇，研磨片刻，再吸出上液。如此連續(xù)幾次，共用甲醇500ml。收集于棕色玻璃瓶中，每天早、晚各搖3min，共5d，以后存放1周即能使用。（2）液：即磷酸鹽緩沖液（pH6.46.8）。包含無(wú)水磷酸二氫鉀6.64g、無(wú)水磷酸氫二鈉2.56g，加少量蒸餾水溶解，用磷酸鹽調(diào)整pH，加水至1000

4、ml?！静僮鳌?采血 （1）靜脈采血法：用EDTA·K2抗凝12h內(nèi)的標(biāo)本，使用玻棒、毛細(xì)管、注射針頭等在距載玻片一端1cm處加1滴抗凝血，直徑約4mm。（2）皮膚采血法：選擇第三、四手指，并先采紅細(xì)胞、白細(xì)胞計(jì)數(shù)，再采血1滴置潔凈玻片上用于血涂片制備。2制作涂片 左手平執(zhí)載玻片，或放在類似桌子等平坦地方，右手持推片從后方移動(dòng)接近血滴，使血液沿推片邊緣展開(kāi)，將推片與載玻片呈30°45°角，用均勻速度向前將血液推成厚薄適宜的血涂片，血涂片應(yīng)呈舌狀，頭、體、尾三部分，且清晰可見(jiàn)。所有血液必須在推片到達(dá)末端前用完。推大于一片血片。貧血病人推片速度要快。3干燥涂片 空氣干

5、燥：迅速干燥。4標(biāo)記涂片 在載玻片的一端用記號(hào)筆編號(hào)，注明患者姓名或門(mén)診/住院號(hào)。5染色（1）瑞氏染色法：待血涂片干透后，用蠟筆在兩端畫(huà)線，以防染色時(shí)染液外溢。然后將玻片平置于染色架上，滴加染液（I液）35滴，使其迅速蓋滿血涂片，約0.51min后，滴加等量或稍多的緩沖液（液），輕輕搖動(dòng)玻片或用吸球?qū)?zhǔn)血涂片吹氣，使染液充分混合。510min后用流水沖去染液，待干。（2）吉姆薩染色法：將固定的血涂片置于被pH6.46.8磷酸鹽緩沖液稀釋1020倍的吉姆薩染液中，浸染1030min（標(biāo)本較少可用滴染）。取出用流水沖洗，待干燥后顯微鏡檢查。（3）瑞一吉復(fù)合染色法：操作步驟同瑞氏染色法，只是染色時(shí)將

6、瑞一吉復(fù)合染液液和液替代瑞氏染液的液和液。6觀察結(jié)果 將干燥后的血涂片置顯微鏡下觀察。用低倍鏡觀察血涂片體、尾交界處的血細(xì)胞。在顯微鏡下，成熟紅細(xì)胞染成粉紅色；血小板染成紫色；中性粒細(xì)胞胞質(zhì)染成粉紅色，含紫紅色顆粒；嗜酸性粒細(xì)胞含大的桔黃色顆粒；嗜堿性粒細(xì)胞胞質(zhì)含有大量深紫藍(lán)色顆粒；單核細(xì)胞胞質(zhì)染成灰藍(lán)色；淋巴細(xì)胞胞質(zhì)染成淡藍(lán)色。觀察后顯微鏡擦拭?！咀⒁馐马?xiàng)】 1瑞氏染液 新鮮配制的染液偏堿，染色效果較差，經(jīng)在室溫下貯存一定時(shí)間，美藍(lán)逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)樘烨郆后方可使用，這一過(guò)程稱染料成熟。放置時(shí)間愈久，天青B愈多，染色效果愈好，但必須蓋嚴(yán)瓶口，以免甲醇揮發(fā)或氧化成甲酸。甲醇必須用AR（無(wú)丙酮）。染液中

7、也可加中性甘油3ml，防止甲醇揮發(fā)，使細(xì)胞染色較清晰。2采血（1）不能采集以下部位的血液：示指或拇指血液。感染部位血液，如甲溝炎。耳垂部位血液，含單核細(xì)胞太多。（2）不能使用肝素抗凝標(biāo)本。（3）玻片必須清潔、干燥、無(wú)塵。新玻片：應(yīng)在清潔液中浸泡過(guò)夜，然后用水沖洗，最后用蒸餾水沖洗。已用過(guò)的玻片：應(yīng)在60清潔液中加熱20min，然后用水沖洗，最后用蒸餾水沖洗。邊緣破碎、表面有劃痕的玻片不能再用。（4）使用玻片時(shí)，只能手持玻片邊緣，切勿觸及玻片表面，以保持玻片清潔、干燥、中性、無(wú)油膩。3制作涂片 許多因素可影響血涂片的厚度，針對(duì)不同患者應(yīng)有的放矢，對(duì)血細(xì)胞比容高、血粘度高的患者應(yīng)采用小血滴、小角度

8、、慢推；而貧血患者則應(yīng)采用大血滴、大角度、快推。涂片質(zhì)量不佳可能原因不規(guī)則間斷和尾部太長(zhǎng)推片污染、推片速度不連續(xù)、載玻片太臟有空洞載玻片污染脂肪、油脂白細(xì)胞和血小板尾部分布不規(guī)則制片技術(shù)差涂片太長(zhǎng)或太短推片角度不佳涂片沒(méi)有尾部血滴太大涂片很短血滴太小涂片沒(méi)有邊緣空隙推片太寬有細(xì)胞退變現(xiàn)象固定延遲、固定時(shí)間太短、甲醇污染血涂片厚血滴大、血粘度高、推片角度大、推片速度快白細(xì)胞破損推片時(shí)用力過(guò)猛 4干燥涂片 血涂片干透后方可固定染色，否則細(xì)胞尚未牢固地吸附在玻片上，在染色過(guò)程中容易脫落。5染色步驟（1）操作注意事項(xiàng)及操作不當(dāng)?shù)暮蠊?jiàn)表1-3。操作注意事項(xiàng)操作不當(dāng)?shù)暮蠊尤疽簯?yīng)適量過(guò)少則易蒸

9、發(fā)沉淀，一旦染料沉積在血涂片上，則不易沖洗，使細(xì)胞深染不易檢查。沖洗時(shí)不能先倒掉染液，應(yīng)以流水沖洗染料沉著在血涂片上沖洗時(shí)間不能過(guò)久脫色沖洗完的血涂片應(yīng)立放于支架上剩余水分浸泡脫色 （2）染色時(shí)間與染液濃度、室溫及細(xì)胞多少有關(guān)。染液淡、室溫低、細(xì)胞多則染色時(shí)間要長(zhǎng)；反之，可減少染色時(shí)間。必要時(shí)可增加染液量或延長(zhǎng)時(shí)間。沖洗前，應(yīng)先在低倍鏡下觀察有核細(xì)胞是否染色清楚，核質(zhì)是否分明。應(yīng)該在具體實(shí)踐中摸索合適的時(shí)間，特別是在更換染液時(shí)。每批染色液和緩沖液，均需試染，以便掌握染色時(shí)間和加緩沖液的比例。6結(jié)果觀察 低倍鏡下觀察血涂片應(yīng)厚薄適宜，細(xì)胞不重疊，頭尾及兩側(cè)有一定的空隙，一些體積大的特殊

10、細(xì)胞常在血涂片的尾部出現(xiàn)。如有可能，干燥后的血涂片先用中性樹(shù)膠封片后再觀察，不僅能長(zhǎng)期保存血涂片，而且觀察效果更佳。染色效果可能原因糾正措施太藍(lán)涂片太厚、沖洗時(shí)間太短、中性水pH太高、染色時(shí)間太長(zhǎng)、稀釋染液重復(fù)使用、貯存染液暴露于陽(yáng)光在含1硼酸的95乙醇溶液沖洗2次，用中性水沖洗，待干鏡檢太紅沖洗時(shí)間太長(zhǎng)、中性水pH太低、貯存染液質(zhì)量不佳、涂片干燥前加封片規(guī)范操作。新鮮配置中性水。保證染液質(zhì)量不佳太淡染色時(shí)間太短、沖洗時(shí)間太長(zhǎng)復(fù)染。應(yīng)先加緩沖液，后加染液，或加染液與緩沖液的混合液，不可先加染液染料沉積染料沉淀、染液未過(guò)濾、涂片太臟用甲醇沖洗2次，并立即用水沖掉甲醇，待干后復(fù)染藍(lán)色背景固定不當(dāng)、

11、涂片未固定貯存過(guò)久、使用肝素抗凝劑注意涂片的固定。使用EDTA抗凝靜脈血實(shí)驗(yàn)二、白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類計(jì)數(shù)原理：用白細(xì)胞稀釋液將血液稀釋一定的倍數(shù)，同時(shí)破壞溶解紅細(xì)胞。將稀釋的血液注入血紅細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)數(shù)一定體積內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)，經(jīng)換算即可求出每升血液中的白細(xì)胞數(shù)量。器材：顯微鏡、改良牛鮑計(jì)數(shù)板、試管、吸管、微量吸管、滴棒。試劑：白細(xì)胞稀釋液操作：1、加稀釋液  用吸管吸取白細(xì)胞稀釋液0.38ml于小試管中。2、吸取血液  用微量吸管吸取新鮮全血或末稍血20ul， 擦去管尖外部余血。將吸管插入小試管中白細(xì)胞稀釋液的底部，輕輕放出血液，并吸取上層白細(xì)胞稀釋液清洗吸管23次。3

12、、混勻  將試管中血液與稀釋液混勻，待細(xì)胞懸液完全變?yōu)樽睾稚?、充池  再次將小試管中的細(xì)胞懸液混勻。用滴棒蘸取細(xì)胞懸液1滴，充入改良Neubauer計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)池中，室溫靜置23min，待白細(xì)胞完全下沉。充兩個(gè)池雙份計(jì)數(shù)取平均值。5、計(jì)數(shù)  在低倍鏡下計(jì)數(shù)四角4個(gè)大方格內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)。6、計(jì)算： 白細(xì)胞= 4  ×10×20×106=20×109/L注意事項(xiàng)：1、稀釋用吸管、微量吸血管、血紅細(xì)胞計(jì)數(shù)板均為計(jì)量工具，使用前需經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的校正，否則將直接影響計(jì)數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確。2、使用標(biāo)本可

13、為由靜脈搏穿刺采取的新鮮全血，也可為靜脈末梢血。采集末梢血時(shí)，應(yīng)注意采血部位不得有凍瘡、水腫、發(fā)紺、炎癥等，以免標(biāo)本失去代表性；同時(shí)也應(yīng)注意不能過(guò)度擠壓，以免組織液混入引起血液凝因或造成計(jì)數(shù)結(jié)果不準(zhǔn)確。3、在充池時(shí)，如充液不足、液體外溢、斷續(xù)充液，或產(chǎn)生氣泡、充液后移動(dòng)蓋玻片等，均會(huì)使細(xì)胞分布不均勻，造成計(jì)數(shù)結(jié)果不準(zhǔn)確。4、計(jì)數(shù)池內(nèi)的細(xì)胞分布應(yīng)均勻，一般情況下各大方格間的細(xì)胞數(shù)相差不超過(guò)10%，若相差太大，應(yīng)重新充池。5、計(jì)數(shù)大小方格內(nèi)的壓線細(xì)胞時(shí)，遵循數(shù)上不數(shù)下、數(shù)左不數(shù)右的原則。6、白細(xì)胞數(shù)量過(guò)多時(shí)，可采用加大稀釋倍數(shù)的方法，注意區(qū)分雜質(zhì)和白細(xì)胞。分類計(jì)數(shù)：原理：將血液制成細(xì)胞分布均勻的血

14、涂片，用瑞氏染液染色，根據(jù)各類細(xì)胞的形態(tài)特點(diǎn)和顏色差異將白細(xì)胞進(jìn)行分類并計(jì)數(shù)。通常分類100個(gè)白細(xì)胞，計(jì)算得出各種白細(xì)胞所占的百分率。器材：顯微鏡、分類計(jì)數(shù)器、香柏油、拭鏡紙、清潔液。試劑：瑞氏染液、磷酸鹽緩沖液操作：1、染色 將血涂片用瑞氏染液染色，沖洗干凈，自然干燥后待用。2、低倍鏡觀察  低倍鏡下觀察白細(xì)胞分布和染色情況。3、油鏡觀察  選擇血涂片體尾交界處細(xì)胞分布均勻、著色良好的區(qū)域，按一定的方向順序?qū)λ?jiàn)的每1個(gè)白細(xì)胞進(jìn)行分類，并用白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)器作好記錄，共計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞。4、計(jì)算  求出各類細(xì)胞所占的百分率注意事項(xiàng)：1、由于各種白細(xì)胞體積大小不等

15、，體積較小的淋巴細(xì)胞在血涂片的頭、體部較多，而尾部和兩側(cè)以中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞較多，因此分類最佳區(qū)域?yàn)轶w、尾交界處。2、分類時(shí)要有秩序地、沒(méi)一定方向連續(xù)地進(jìn)行，既不重復(fù)亦不遺漏，避免主觀選擇視野。3、分類計(jì)數(shù)結(jié)果的記錄也可采用手工畫(huà)“正”或“+”的方法。實(shí)驗(yàn)三、 紅細(xì)胞計(jì)數(shù)原理：稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù)，充入計(jì)數(shù)池后，在顯微鏡下計(jì)數(shù)一定體積內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)量，經(jīng)換算求出每升血液中的紅細(xì)胞數(shù)量。器材：微鏡、改良牛鮑記板、試管、微量吸管、玻璃棒。試劑：細(xì)胞稀釋液操作：1、加稀釋液  取小試管1支，加紅細(xì)胞稀釋液2ml。2、加血  用清潔干燥微量吸管采集末稍血或抗凝血10u

16、l擦去管外余血，輕輕加至紅細(xì)胞稀釋液底部，再輕吸上清液清洗吸管23次，立即混勻。3、充池  混勻后用微量吸管或玻璃棒將紅細(xì)胞懸液充入計(jì)數(shù)池，室溫下平放35min，待細(xì)胞下沉后于顯微鏡下計(jì)數(shù)。4、計(jì)數(shù)  用高倍鏡依次計(jì)數(shù)中央大方格內(nèi)4角和正中5個(gè)中方格內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)。5、計(jì)算紅細(xì)胞/L=N×5×10×106×200=N×1010=100  ×1012N：表示5個(gè)中方格內(nèi)數(shù)得的紅細(xì)數(shù)。× 5   ：將五個(gè)中方格紅細(xì)胞數(shù)換算成1個(gè)大方格紅細(xì)胞數(shù)。×10：將1個(gè)大方格紅細(xì)胞數(shù)

17、換1ul血液內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)。×106：1L=106ul200：為血液的稀釋倍數(shù)。注意事項(xiàng)：白細(xì)胞實(shí)驗(yàn)四、 網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)原理：織紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)殘存的少量核蛋白體和核糖核酸等嗜堿性物質(zhì)，在活體染色時(shí)可被煌焦油藍(lán)染成藍(lán)色網(wǎng)狀或顆粒狀，可與完全成熟的紅細(xì)胞區(qū)別。器材：微鏡、香柏油、拭鏡紙、清潔液、試管、玻片試劑：10g/l煌焦油藍(lán)水溶液，標(biāo)本新鮮全血。操作：1、加染液  于小試管中加入10g/L煌焦油藍(lán)生理鹽水溶液2滴，再加入新鮮全血2滴，立即混勻，置室溫下1520min。室溫不可過(guò)低37度。2、制備涂片  取1小滴制成薄血涂片，自然干燥。3、觀察  在低

18、倍鏡下選擇紅細(xì)胞分布均勻的部位進(jìn)行觀察。4、計(jì)數(shù)  在油鏡下計(jì)數(shù)至少1000個(gè)紅細(xì)胞中的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)。5、計(jì)算 網(wǎng)織紅細(xì)胞分?jǐn)?shù)=  N/1000網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)值（網(wǎng)織紅細(xì)胞/L)=紅細(xì)胞/L×網(wǎng)織紅細(xì)胞分?jǐn)?shù)實(shí)驗(yàn)五、 紅細(xì)胞沉降率原理：一定量的枸櫞酸鈉抗凝全血置于特制血沉管中，直立于特制血沉架上1h后讀取紅細(xì)胞下沉后血漿的高度。器材：魏氏血沉管、血沉架、吸管、試管。試劑：09mmol/L枸櫞酸鈉溶液，新鮮全血。操作：   1、加抗凝劑  吸取濃度為109mmol/L的枸櫞酸鈉0.4ml于試管中。 

19、  2、采靜脈血  取靜脈血1.6ml，加入含抗凝劑的試管中，混勻。   3、裝血沉管  用血沉管吸入混勻全血至刻度“0”處，拭去管外殘留余血。   4、立血沉管  將血沉管直立于血沉架上。注意事項(xiàng)：   1、使用分析純枸櫞酸鈉抗凝劑，配制時(shí)濃度應(yīng)準(zhǔn)確，配成后液體不渾濁、無(wú)沉淀，保存期為2周。   2、嚴(yán)格控制采血量，使抗凝劑與血液比例為14。   3、血沉管內(nèi)徑要標(biāo)準(zhǔn)，放置要垂直，不得傾斜。4、胞在單位時(shí)間內(nèi)下沉的速度與血漿蛋白的量與質(zhì)，血漿中脂類的量和

20、質(zhì)，紅細(xì)胞的大小與數(shù)量，是否成串錢(qián)相聚以及血沉管的內(nèi)徑、清潔度、放置位置是否垂直，室溫高低等因素都有關(guān)系。 5、采集時(shí)應(yīng)空腹。 6、血沉的標(biāo)本要在采集后3h 內(nèi)測(cè)定，并充分混勻。 7、溫過(guò)低、過(guò)高和貧血時(shí)，對(duì)結(jié)果有影響。為此，血沉應(yīng)盡量放在1825室溫下測(cè)定。室溫過(guò)高時(shí)血沉加快，可以按溫度系數(shù)校正。室溫過(guò)低時(shí)血沉減慢，無(wú)法校正。實(shí)驗(yàn)六、 血小板計(jì)數(shù)原理：液經(jīng)稀釋液按一定比例稀釋和破壞紅細(xì)胞后，充入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板內(nèi)在顯微鏡下計(jì)數(shù)一定范圍內(nèi)的血小板數(shù)量，經(jīng)過(guò)換算求出每升血液中血小板的數(shù)量。器材 微鏡，血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，采血針，血紅蛋白吸管，試管。試劑10g/L草酸銨稀釋液。操作：1、吸取稀釋液

21、 準(zhǔn)確吸取10g/L  草酸銨稀釋液0.38ml，置于清潔小試管中。2、采血  常規(guī)消毒無(wú)名指，穿刺后，讓血液自然流出，準(zhǔn)確采血20ul，置于含有草酸銨的稀釋液中，立即充分混勻。3、稀釋靜置  待完全溶血后再混勻1min，置室溫10min。4、充液靜置 取混勻的血小板懸液1滴充入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板內(nèi)，靜置1015min，使血小板充分下沉?？諝飧稍锏募竟?jié)應(yīng)將血細(xì)胞計(jì)數(shù)板置濕盒內(nèi)。5、計(jì)數(shù)  用高倍鏡計(jì)數(shù)血細(xì)胞計(jì)數(shù)板中央大方格內(nèi)的四角和中央共5個(gè)中方格內(nèi)血小板數(shù)量。6、計(jì)算  每升血小板數(shù)=5個(gè)中方格內(nèi)血小板數(shù)×109/L注意事項(xiàng)1、草酸銨稀釋

22、液要清潔，無(wú)細(xì)菌、塵埃等污染。存放時(shí)間較長(zhǎng)后應(yīng)過(guò)濾后再使用。2、毛細(xì)血管采血時(shí)，針刺應(yīng)達(dá)3mm深，使血液流暢。拭去第1滴血后立即采血，以防血小板聚集和破壞。如果同時(shí)做白細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)時(shí)，應(yīng)先采血做血小板計(jì)數(shù)。3、血液加入血小板稀釋液內(nèi)要充分混勻，但不可過(guò)度振蕩，以免導(dǎo)致血小板破壞和聚集。4、血小板懸液充入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板內(nèi)需要靜置1015min，使血小板完全下沉后再計(jì)數(shù)。但應(yīng)注意保持濕度，避免水分蒸發(fā)而影響計(jì)數(shù)結(jié)果。5、計(jì)數(shù)時(shí)光線不可太強(qiáng)，注意微有折光性的血小板與塵埃等的鑒別，附著在血紅細(xì)胞旁的血小板也要注意，不要漏數(shù)。6、應(yīng)在1h內(nèi)計(jì)數(shù)完畢，否則結(jié)果偏低。7、所用計(jì)量器材必須標(biāo)準(zhǔn)化。8、檢查前

23、，患者應(yīng)避免服用含有阿司匹林及其他抗血小板藥物。實(shí)驗(yàn)七、 尿葡萄糖定性檢查原理：葡萄糖或其他還原性糖的醛基在熱堿性溶液中，能將班氏試劑的藍(lán)色硫酸銅還原為黃色的氫氧化亞銅，進(jìn)而形成紅色氧化亞銅沉淀。器材：試管架、中試管、滴管、試管夾、酒精燈。試劑：1、甲液 枸櫞酸鈉，無(wú)水碳酸鈉，蒸餾水加熱助溶。2、乙液  硫酸銅，蒸餾水加熱助溶。冷卻后，將乙液緩慢加入甲液中，不斷混勻，冷卻至室溫后補(bǔ)充蒸餾水至1000ml。如溶液不透明則需要過(guò)濾，煮沸后出現(xiàn)沉淀或變色則不能應(yīng)用。操作：1、鑒定班氏試劑質(zhì)量  取中號(hào)試管1支，加入班氏試劑2.0ml，搖動(dòng)試管徐徐加熱至沸騰，觀察試劑有無(wú)

24、顏色及性狀變化，若試劑仍為透明藍(lán)色，可進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)。2、加尿液  向班氏試劑中加離心后的尿液0.2ml，混勻。3、加熱煮沸  繼續(xù)煮沸12min，或置沸水浴5min，自然冷卻。4、判斷結(jié)果  判斷結(jié)果見(jiàn)表糖定性試驗(yàn)結(jié)果判斷反應(yīng)現(xiàn)象 報(bào)告方式  葡萄糖含量（mmol/L)藍(lán)色不變   5.6藍(lán)色中略帶綠色,但無(wú)沉淀  ± 5.611.2綠色,伴少許黃綠色沉淀 +28較多黃綠色沉淀,以黃為 + 2856土黃色渾濁,有大量沉淀+ 5

25、7112大量棕紅色或磚紅色沉淀 + 112注意事項(xiàng)：1、試劑與尿液的比例為101。2、煮混時(shí)應(yīng)不時(shí)搖動(dòng)試管以防爆沸噴出，出可在沸水浴中實(shí)驗(yàn)。3、檢驗(yàn)糖尿病患者尿液中葡萄糖，應(yīng)空腹或餐后2h留取尿標(biāo)本。4、尿液中有大量尿酸鹽存在時(shí)，煮沸后也呈渾濁并帶綠色，但久置后并不變黃色而呈灰藍(lán)色，故必須于冷卻后觀察結(jié)果。尿中含大量銨鹽時(shí)可抑制氧化亞銅沉淀的生成，應(yīng)加堿煮沸除去。蛋白含量較高時(shí)也影響銅鹽的沉淀，可用加熱乙酸法除去。5、一些非糖還原性物質(zhì)，如水合氯醛、氨基比林、PAS、阿匹林、青霉素、鏈霉素、VitC、異煙肼等，當(dāng)基在尿中含量過(guò)高時(shí)亦呈陽(yáng)性反應(yīng)，應(yīng)停藥3d后再進(jìn)行檢查。對(duì)靜脈

26、輸注大劑量VitC者5d內(nèi)不宜做尿糖定性，或定性時(shí)先將尿液煮沸使之分解破壞。實(shí)驗(yàn)八  尿沉渣鏡檢原理：采用顯微鏡觀察的方法，根據(jù)尿液細(xì)胞、管型等有形成分的形態(tài)特征，識(shí)別并記錄其在顯微鏡一定視野內(nèi)的數(shù)量。器材：載玻片、離心機(jī)、刻度離心管、蓋玻片、滴管、普通顯微鏡、定量尿沉渣分析板。操作：1、未離心直接涂片法（1)混勻：充分混勻尿液。（2)制備涂片：取混勻的尿液1滴于載玻上，加蓋玻片，注意避免產(chǎn)生氣泡。（3)觀察計(jì)數(shù)：先用低倍觀察全片細(xì)胞、管型等成分的分布情況，然后用高倍鏡確認(rèn)。注意使用暗視野觀察尿液有形成分，特別是透明管型。管型在低倍鏡下觀察，至少計(jì)數(shù)20個(gè)視野；細(xì)胞在高倍鏡下觀察至少

27、計(jì)數(shù)10個(gè)視野，取其平均值報(bào)告；尿結(jié)晶和鹽類數(shù)量以每一高倍視野、2、3、4報(bào)告。計(jì)數(shù)時(shí)要注意細(xì)胞的完整性，還要注意有無(wú)其他異常巨大細(xì)胞、寄生蟲(chóng)蟲(chóng)卵、滴蟲(chóng)、細(xì)菌、粘液絲等，男性尿液標(biāo)本還要注意有無(wú)精子及卵磷脂小體。2、離心沉淀涂片法（1)離心尿液：透用于尿外觀非明顯渾濁的尿標(biāo)本，是尿沉渣檢查標(biāo)準(zhǔn)化推行的方法。取尿液10ml離心5min，要求相對(duì)離心力為400g。1500r/ min 離心5min（2)提取尿沉渣：手持離心管傾斜45°90°，用滴管吸去上層尿液，保留下層0.2ml尿沉渣。（3)涂片：輕輕混勻尿沉渣后，取1滴置載玻片上，用18mm×18mm或22mm&#

28、215;22mm的蓋玻片覆蓋后顯微鏡檢查。（4)觀察計(jì)數(shù)：與未離心尿直接涂片法相同。3、定量尿沉渣分析法  定量尿沉渣分析板由1塊硬質(zhì)塑料板制成，每塊板內(nèi)分為10個(gè)統(tǒng)一深度的計(jì)數(shù)池，每1個(gè)計(jì)數(shù)池內(nèi)的計(jì)數(shù)區(qū)為1.0ul計(jì)數(shù)區(qū)分為10個(gè)大方格，每個(gè)大方格又分為9個(gè)小方格。（1)未離心法：直接取充分混勻的尿液1滴充入定量尿沉渣分析計(jì)數(shù)池內(nèi)，在低倍鏡下計(jì)數(shù)10個(gè)大方格內(nèi)管型總數(shù)，在高倍鏡下計(jì)數(shù)10個(gè)大方格內(nèi)細(xì)胞總數(shù)，此即每微升尿液某種細(xì)胞或管型的數(shù)量。（2)離心法：尿液標(biāo)本處理同離心尿沉淀涂片法，然后充池計(jì)數(shù)，方法同上。4、報(bào)告結(jié)果（1)涂片法：細(xì)胞以最低數(shù)最高數(shù)/HP、管型以最低數(shù)最高數(shù)/

29、低倍鏡視野報(bào)告。結(jié)晶以所占視野面報(bào)告，無(wú)結(jié)晶為（)；結(jié)晶占1/4視野（+)；結(jié)晶占1/2視野為（+)；結(jié)晶占3/4視野為（+)；結(jié)晶滿視野為（+)。如果細(xì)胞、管理的數(shù)量過(guò)多難以計(jì)算，也可按結(jié)晶的報(bào)告方式報(bào)告結(jié)果。（2)定量尿沉渣分析板法：以每微升某種細(xì)胞或管型數(shù)報(bào)告。實(shí)驗(yàn)九 尿沉渣定量檢查 （一小時(shí)尿沉渣計(jì)數(shù)法） 操作： 1. 標(biāo)本收集：患者先排尿棄去，準(zhǔn)確收集3 h 尿液于干燥容器內(nèi)送檢（標(biāo)本留取時(shí)間5:308 :30）。 2. 準(zhǔn)確測(cè)量3h尿量，充分混合。取混勻尿液10ml，置刻度離心管中，1500r/min離心5min，用吸管吸棄上層尿液9ml，留下1ml，充分混勻。吸取混勻尿液1滴，注

30、于血細(xì)胞計(jì)數(shù)板內(nèi)。細(xì)胞共數(shù)10個(gè)大方格，管型共數(shù)20個(gè)大方格。最終計(jì)算出紅細(xì)胞/h、白細(xì)胞/h、管型/h。 注意事項(xiàng)： 1. 尿液應(yīng)新鮮，PH應(yīng)在6以下。 2. 尿液比重最好在1.026以上。 3. 如尿液中含多量磷酸鹽時(shí)，應(yīng)加少量稀醋酸液（切勿加多），使其溶解；含大量尿酸鹽時(shí)，應(yīng)加溫使其溶解。 4. 亦可采用尿沉渣定量分析板或尿沉渣自動(dòng)分析儀進(jìn)行尿沉渣定量檢查，詳見(jiàn)有關(guān)資料。實(shí)驗(yàn)十 本周氏蛋白定性檢查 試劑： 1. 200g/L磺基水楊酸溶液； 2. 2mol/L醋酸鹽緩沖溶液（pH4.9±0.1）。 操作： 1. 先將尿液用磺基水楊酸法作蛋白定性檢查，如呈陰性反應(yīng)，則可認(rèn)為尿液標(biāo)

31、本中本周氏蛋白陰性。 2. 取透明尿液4ml于試管中，再加入醋酸鹽緩沖液1ml，混勻后，放置56水浴中15分鐘。如有渾濁或出現(xiàn)沉淀，再將試管放入沸水中，煮沸3分鐘，觀察試管中渾濁或沉淀的變化，如渾濁變清、渾濁減弱或沉淀減少，均提示本- 周氏蛋白陽(yáng)性。若煮沸后，渾濁增加或沉淀增多，表明此尿液中還有其它蛋白質(zhì)，此時(shí)應(yīng)將試管從沸水中取出，立即過(guò)濾。如濾液開(kāi)始透明，溫度下降后渾濁，再煮沸時(shí)又透明，提示本- 周氏蛋白為陽(yáng)性。注意事項(xiàng)： 1. 過(guò)多的本- 周氏蛋白，在90以上不易完全溶解，故需與對(duì)照管比較，也可將尿液稀釋后再測(cè)。 2. 煮沸過(guò)濾除去尿中白、球蛋白時(shí)，動(dòng)作要迅速，并需保持高溫，否則本- 周氏

32、蛋白也會(huì)濾去。實(shí)驗(yàn)十一 尿含鐵血黃素定性試驗(yàn) 試劑： 120g/L亞鐵氰化鉀水溶液（用時(shí)新鮮配制）； 23 %鹽酸。 操作： 1. 取混勻的新鮮尿液15ml，以2000r/min離心5min，傾去上清液。 2. 在沉渣中加入新鮮配制的20g/L亞鐵氰化鉀水溶液及3%鹽酸液各2ml，充分混勻，室溫靜置10min。 3. 再離心沉淀，取沉淀物涂片，加蓋玻片后用高倍鏡（必要時(shí)用油鏡）檢查。 4. 如見(jiàn)有分散或成堆藍(lán)色閃光顆粒（直徑13um）即為陽(yáng)性，如在細(xì)胞內(nèi)則更為可信。注意事項(xiàng)： 1. 所有試管、玻片、試劑均應(yīng)防止鐵劑污染，以免出現(xiàn)假陽(yáng)性。 2. 一般應(yīng)做陰性對(duì)照，如亞鐵氰化鉀與鹽酸混和后即顯深藍(lán)

33、色，表示試劑已污染高鐵，不宜再用。實(shí)驗(yàn)十一 尿乳糜定性檢查 【 試 劑 】 1. 乙醚（AR）； 2. 蘇丹醋酸乙醇染色液或猩紅染色液。 【 操 作 】 1. 取尿510ml，加乙醚23ml，混合振搖后，使脂肪溶于乙醚。靜置數(shù)分鐘后，2000r/min離心5min。 2. 吸取乙醚與尿液的界面層涂片，加蘇丹醋酸乙醇染色液或猩紅染色液1滴。 3. 鏡檢觀察是否有紅色脂肪小滴。 【 注意事項(xiàng)】 1. 尿液中加少量飽和氫氧化鈉，再加乙醚，有助于澄清。 2. 將分離的乙醚層隔水蒸干，若留有油狀沉淀，也可加蘇丹，鏡檢證實(shí)有無(wú)脂肪小滴。實(shí)驗(yàn)十二 尿膽色素原定性試驗(yàn) 【 試 劑 】 1. 對(duì)二甲氨基苯甲醛試

34、劑； 2. 飽和醋酸鈉溶液； 3. 氯仿； 4. 正丁醇。 【 操 作 】 1. 在試管中，加入尿標(biāo)本2ml及對(duì)二甲氨基苯甲醛試劑2ml，混合。 2. 立即加飽和醋酸鈉溶液4ml，混合，加氯仿3ml，振搖混合后，上層水溶液呈紅色者為陽(yáng)性反應(yīng)。 3. 陽(yáng)性結(jié)果應(yīng)用下法證實(shí)：如尿膽原含量多，用一次氯仿不能完全抽提尿膽原，應(yīng)多次用氯仿抽提，直至氯仿層呈淡粉紅色或無(wú)色為止，再觀察上層水溶液色澤。如上層水溶液為紅色時(shí)，再加正丁醇4ml抽提，如水溶液仍呈紅色則證實(shí)尿中膽色素元為陽(yáng)性。 【注意事項(xiàng) 】 1. 醋酸鈉溶液必須為飽和液。 2. 當(dāng)尿膽色素原濃度太高時(shí)，應(yīng)將尿標(biāo)本稀釋25100倍。 3. 尿液必須

35、新鮮，不能久置。實(shí)驗(yàn)十三 尿苯丙酮酸定性試驗(yàn) （三氯化鐵法） 【 試 劑 】 1. 100g/L三氯化鐵液； 2. 磷酸鹽沉淀劑。 【 操 作 】 1. 尿液4ml加磷酸鹽沉淀劑1ml，混勻，靜置3min，如出現(xiàn)沉淀，可用濾紙過(guò)濾或離心除去。 2. 濾液中加入濃鹽酸23滴和100g/L三氯化鐵溶液23滴，每加1滴立即觀察顏色變化。以尿液顯藍(lán)綠色并持續(xù)24min，為陽(yáng)性。 【 注意事項(xiàng) 】 1. 尿中若含酚類藥物（如水楊酸制劑）及氯丙嗪，也可與氯化鐵結(jié)合顯色，試驗(yàn)前應(yīng)停用此類藥物。膽紅素也可造成假陽(yáng)性。 2. 小兒出生后6 周內(nèi)不易查出。故于出生6 周后檢查為宜。 3. 大多數(shù)苯丙酮尿癥患者的尿

36、液可出現(xiàn)陽(yáng)性。但約1/41/2病例可能會(huì)漏檢 4. 亦可采用2，4-二硝基苯肼法。實(shí)驗(yàn)十四  腦脊液顯微鏡檢查器材：顯微鏡、改良牛鮑計(jì)數(shù)板、微量吸管、刻度吸管、小試管。試劑：生理鹽水或紅細(xì)胞稀釋液，1%冰乙酸，白細(xì)胞稀釋液，瑞氏染液或瑞-吉染液。操作：（1)充池：直接用微量吸管吸取混勻的腦脊液，充入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的上下2個(gè)計(jì)數(shù)池。（2)計(jì)數(shù)：靜置23min后，低倍鏡下計(jì)數(shù)2個(gè)計(jì)數(shù)池內(nèi)四角和中央大方格共10個(gè)大方格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)。（3)計(jì)算：10個(gè)大方格內(nèi)的細(xì)胞總數(shù)即為每微升腦脊液細(xì)胞總數(shù)，再換算成每升腦脊液細(xì)胞總數(shù)。 1. 細(xì)胞總數(shù)： （1）澄清腦脊液：混勻后用滴管直接滴入計(jì)數(shù)池，計(jì)數(shù)10

37、個(gè)大方格內(nèi)紅、白細(xì)胞數(shù)，其總和即為每u l的細(xì)胞數(shù)。（如細(xì)胞較多，可計(jì)數(shù)一大格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)×10）。 （2）渾濁或帶血腦脊液：用血紅蛋白吸管吸取混勻的腦脊液20ul，加入含紅細(xì)胞稀釋液0.38ml的小試管內(nèi)，混勻后滴入計(jì)數(shù)池內(nèi)，用低倍鏡計(jì)數(shù)4個(gè)大方格中的細(xì)胞總數(shù)，再乘以50即為每ul腦脊液的細(xì)胞總數(shù)。 2白細(xì)胞數(shù)： （1）非血性標(biāo)本：小試管內(nèi)放入冰乙酸12滴，轉(zhuǎn)動(dòng)試管，使內(nèi)壁沾有冰乙酸后傾去之，然后滴加混勻的腦脊液34滴，數(shù)分鐘后，混勻充入計(jì)數(shù)池，按細(xì)胞總數(shù)操作中的紅、白細(xì)胞計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)。 （2）血性標(biāo)本：將混勻的腦脊液用1%冰乙酸溶液稀釋后，按細(xì)胞總數(shù)操作中的紅、白細(xì)胞計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)，結(jié)果

38、×稀釋倍數(shù)。 3細(xì)胞分類： （1）直接分類法：白細(xì)胞計(jì)數(shù)后，將低倍鏡換成高倍鏡，直接在高倍鏡下根據(jù)細(xì)胞核的形態(tài)分別計(jì)數(shù)單個(gè)核細(xì)胞（包括淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞）和多核細(xì)胞，應(yīng)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞，并以百分率表示。若白細(xì)胞少于100個(gè)，應(yīng)直接寫(xiě)出單核、多核細(xì)胞的具體數(shù)字。 （2）染色分類法：如直接分類不易區(qū)分細(xì)胞時(shí)，可將腦脊液離心沉淀，取沉淀物2滴，加正常血清1滴，推片制成均勻薄膜，置室溫或37溫箱內(nèi)待干，進(jìn)行瑞氏染色后用油鏡分類。如見(jiàn)有不能分類的細(xì)胞，應(yīng)另行描述報(bào)告。注意事項(xiàng)：1、直接白細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，也可用微量吸管吸取冰乙酸后盡可能全部吹出，僅使吸管內(nèi)壁粘附少許冰乙酸，再吸以少量混勻的腦脊液于吸

39、管中，數(shù)分鐘后吸管內(nèi)紅細(xì)胞溶解，然后再充池計(jì)數(shù)。2、細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，如發(fā)現(xiàn)較多細(xì)胞有皺縮或腫脹等異?，F(xiàn)象，應(yīng)如實(shí)報(bào)告，以協(xié)助臨床醫(yī)學(xué)鑒別是陳舊性出血或新鮮出血。3、血性腦脊液中的白細(xì)胞必須校正后才有價(jià)值，校正方法是分別計(jì)數(shù)血液紅細(xì)胞、白細(xì)胞數(shù)和腦脊液細(xì)胞總數(shù)、白細(xì)胞數(shù)，扣除因出血而帶進(jìn)腦脊液的白細(xì)胞數(shù)。   腦脊液紅細(xì)胞數(shù)×血液白細(xì)胞數(shù)白細(xì)胞校正數(shù)腦脊液白細(xì)胞未校正數(shù)  血液內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)4、細(xì)胞涂片時(shí)，為了使細(xì)胞容易粘在玻片上，可取沉淀的細(xì)胞懸液2滴，加血清1滴，混勻后涂片。5、涂片染色分類時(shí)，如見(jiàn)內(nèi)皮細(xì)胞或異常細(xì)胞，則另行描述報(bào)告，必要時(shí)

40、用巴氏或HE染色查找腫瘤細(xì)胞。6、實(shí)驗(yàn)結(jié)果后，血細(xì)胞計(jì)數(shù)板用0.75%乙醇浸泡消毒60min，忌用酚浸泡，以免損壞計(jì)數(shù)板。7、細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，應(yīng)注意新型隱球菌與白細(xì)胞的區(qū)別。實(shí)驗(yàn)十五  腦脊液蛋白質(zhì)定性檢查原理：腦脊液中球蛋白與苯酚結(jié)合，形成不溶性蛋白鹽而產(chǎn)生白色渾濁或沉淀。器材：小試管、刻度吸管、尖滴管。試劑：5%飽和苯酚溶液操作：1、加試劑  取試劑2ml于小試管中。2、加標(biāo)本  用尖滴管垂直滴加腦脊液標(biāo)本12滴。3、觀察結(jié)果  在黑暗背景下立即用肉眼觀察結(jié)果。4、判斷結(jié)果（1)清晰透明，不呈現(xiàn)云霧狀為（)。（2)呈微白霧狀，對(duì)光不易看見(jiàn)，黑色背景下才能

41、見(jiàn)到（±)。（3)灰白色云霧狀為（+)。（4)白色渾濁或白色薄云狀沉淀為（+)。（5)白色絮狀沉淀或白色濃云塊狀為（+)。（6)立即形成白色凝塊為（+)。注意事項(xiàng)：1、當(dāng)室溫在10以下時(shí)，應(yīng)將試劑保存在37溫箱中，否則飽和度降低，可致假陽(yáng)性。2、試管內(nèi)徑以小為佳，一般為（13±1)mm，加入試劑后立即觀察結(jié)果。3、標(biāo)本中如紅細(xì)胞過(guò)多，應(yīng)離心沉淀取上清液檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)十六  漿膜腔積液顯微鏡檢查器材：顯微鏡、改良牛鮑計(jì)數(shù)板、微量吸管、小試管。試劑：生理鹽水或紅細(xì)胞稀釋液，冰乙酸，白細(xì)胞稀釋液，瑞氏染液或瑞-吉染液。操作：（一)有核細(xì)胞計(jì)數(shù)1、直接計(jì)數(shù)法（1)去除紅細(xì)胞：

42、在小試管內(nèi)放入冰乙酸12滴，轉(zhuǎn)動(dòng)試管，使內(nèi)壁粘附少許冰乙酸后傾去，滴加混勻漿膜腔積液34滴，混勻，放置數(shù)分鐘，破壞紅細(xì)胞。（2)充池：用微量吸管取混勻破壞紅細(xì)胞后的漿膜腔積液充入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的2個(gè)計(jì)數(shù)池內(nèi)。（3)計(jì)數(shù)：靜置23min后，低倍鏡計(jì)數(shù)2個(gè)計(jì)數(shù)池內(nèi)四周和中央大方格共10個(gè)大方格內(nèi)的有核細(xì)胞數(shù)。（4)計(jì)算：10個(gè)大方格有核細(xì)胞總數(shù)即每微升漿膜腔積液的有核細(xì)胞總數(shù)，再換算成每升漿膜腔積液的有核細(xì)胞數(shù)。2、稀釋計(jì)數(shù)法（1)稀釋破壞紅細(xì)胞：根據(jù)標(biāo)本內(nèi)有核細(xì)胞多少，用白細(xì)胞稀釋液對(duì)標(biāo)本進(jìn)行一定倍數(shù)稀釋，混勻，放置數(shù)分鐘，破壞紅細(xì)胞。（2)充池：用微量吸管取混勻稀釋后的漿膜腔液充入1個(gè)計(jì)數(shù)池。（

43、3)計(jì)數(shù)：靜置23min后，低倍鏡計(jì)數(shù)1個(gè)計(jì)數(shù)池內(nèi)的四角和中央大方格共5個(gè)大方格內(nèi)的有核細(xì)胞總數(shù)。（4)計(jì)算：根據(jù)5個(gè)大方格內(nèi)的有核細(xì)胞總數(shù)稀釋倍數(shù)，計(jì)算每升漿膜腔積液的有核細(xì)胞數(shù)。（二)有核細(xì)胞分類1、直接分類法 有核細(xì)胞計(jì)數(shù)后，將低倍鏡轉(zhuǎn)為高倍鏡，直接在高倍鏡下根據(jù)細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞核形態(tài)進(jìn)行分類，共分類計(jì)數(shù)100個(gè)有核細(xì)胞，分別計(jì)數(shù)單個(gè)核細(xì)胞（包括淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞及間皮細(xì)胞)和多個(gè)核細(xì)胞（粒細(xì)胞)的百分率。方法基本與腦脊液同，漏出液中有核細(xì)胞數(shù)量常在100×106/L以下；滲出液中有核細(xì)胞數(shù)量較多，常在500×106/L以上。2、涂片染色分類法  在抽出穿刺液

44、后，立即以1000r/min離心5min，取沉淀物制成均勻的薄片，置于室溫下或37恒溫箱內(nèi)盡快干燥，瑞氏或瑞-吉染色后油鏡分類計(jì)數(shù)100個(gè)有核細(xì)胞。一般標(biāo)本中可見(jiàn)到淋巴細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、間皮細(xì)胞等。注意事項(xiàng)：1、有核細(xì)胞計(jì)數(shù)應(yīng)包括間皮細(xì)胞。2、必要時(shí)可采用細(xì)胞玻片離心沉淀儀收集細(xì)胞，以提高白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。3、有核細(xì)胞分類計(jì)數(shù)誤差大，尤其是陳舊性、細(xì)胞變形的標(biāo)本，故推薦采用涂片染色分類計(jì)數(shù)。4、染色分類計(jì)數(shù)過(guò)程中，若發(fā)現(xiàn)間皮細(xì)胞和不能分類的異常細(xì)胞應(yīng)中外描述或作HE、巴氏染色查找腫瘤細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)十七  漿膜腔積液粘蛋白定性試驗(yàn)原理：漿膜腔上皮細(xì)胞在炎癥刺激下分泌粘

45、蛋白。粘蛋白是一種酸性糖蛋白，其等電點(diǎn)pH為35，因此，可在稀乙酸中出現(xiàn)白色沉淀。器材：100ml量筒，滴管。試劑：冰乙酸、蒸餾水。操作：1、加試劑  加23滴冰乙酸于100ml量筒中，再加大約100ml蒸餾水，混勻，此時(shí)溶液的pH為35，靜置數(shù)分鐘。2、加標(biāo)本  垂直滴加待測(cè)標(biāo)本1滴于量筒中。3、觀察結(jié)果  立即在黑色背景下觀察有無(wú)白色云霧狀沉淀生成及其下降程度。4、判斷結(jié)果（1)陰性、陽(yáng)性結(jié)果的判斷。1)陰性：清晰，不顯霧狀或有輕微白色霧狀渾濁，但在下降過(guò)程中消失。2)陽(yáng)性：出現(xiàn)白色霧狀渾濁并逐漸下沉至量筒底部不消失。（2)陽(yáng)性程度的判斷1)漸呈白霧狀為（&#

46、177;)2)可見(jiàn)灰白色霧狀為（+)3)白色薄云狀為（+)4)白色濃云狀（+)注意事項(xiàng)：1、血性漿膜腔積液經(jīng)離心沉淀后，用上清液進(jìn)行檢查。2、量筒的高度與蒸餾水的量要足夠。3、加入標(biāo)本后立即在黑色背景下仔細(xì)觀察結(jié)果。如渾濁不明顯，下沉緩慢，中途消失者為陰性。實(shí)驗(yàn)十八  精子活動(dòng)率和活動(dòng)力檢查原理：精液液化后，將精液滴于載玻片上，顯微鏡下觀察精子的活動(dòng)情況，計(jì)算活動(dòng)率和活動(dòng)力。器材：顯微鏡，載玻片，蓋玻片。試劑：5g/L伊紅Y染液標(biāo)本：新鮮液化精液。操作：1、計(jì)算精子活動(dòng)率 取液化精液1滴于載玻片上，加蓋玻片，高倍鏡下觀察100個(gè)精子，計(jì)數(shù)有尾部活動(dòng)精子數(shù)，計(jì)算其百分率，即精子活動(dòng)率。

47、2、觀察精子活動(dòng)力  在觀察活動(dòng)率的同時(shí)，觀察精子活動(dòng)的強(qiáng)度，將精子活動(dòng)分為a、b、c、d四個(gè)級(jí)別，即精子活動(dòng)力。a級(jí)：精子呈前向快速運(yùn)動(dòng)；b級(jí)：緩慢或呆滯的前向運(yùn)動(dòng)；c級(jí)：非前向運(yùn)動(dòng)；d級(jí)：死精子。3、染色  若不活動(dòng)精子大于50%，可進(jìn)行體外活體染色，以鑒別其死活。取新鮮液化精液和伊紅Y染液1滴于載玻片上，混勻，1min后推成薄片，自然干燥后于顯微鏡（高倍鏡)下觀察。死精子呈紅色，活精子不著色。觀察100個(gè)精子，以不著色精子的百分率報(bào)告精子活率。注意事項(xiàng)：1、排精后1h內(nèi)送檢，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，精子活動(dòng)率和活動(dòng)力減低。2、檢查時(shí)注意保溫，溫度過(guò)低，精子活動(dòng)率、活動(dòng)力下降。如室溫低于10時(shí)，應(yīng)將標(biāo)本先放入37溫育510min后鏡檢。實(shí)驗(yàn)十九  精子計(jì)數(shù)原理：采用碳酸氫鈉破壞精液的粘稠度，甲醛固定精子，然后充計(jì)數(shù)池，顯微鏡下計(jì)數(shù)一定范圍內(nèi)的精子數(shù)，換算成每升精液中的精子數(shù)。試劑：精子稀釋液。標(biāo)本：新鮮精液化精液。操作：1、取稀釋液  取精子稀釋液0.38ml于小試管內(nèi)。2、加精液 加入混勻的液化精液20ul，充分混勻。3、充池  取1滴精子懸液充入計(jì)數(shù)池內(nèi)，靜置35min。4、觀察  高倍鏡下計(jì)數(shù)中央大方格內(nèi)四角及中央5個(gè)中方格內(nèi)的精子數(shù)。以精子頭部作為基準(zhǔn)進(jìn)行計(jì)數(shù)。5、計(jì)算精子計(jì)