島津SPD-15C 高效液相色譜的使用

1、高效液相色譜的使用島津SPD-15C使用方法使用方法By 孫毅孫毅一.操作準備二.儀器組成三.操作過程四.注意事項目錄By 孫毅孫毅1.1流動相的配制流動相的配制一.操作準備By 孫毅孫毅用高純度的試劑配制流動相，用高純度的試劑配制流動相，必要時照紫外分光光度法進行必要時照紫外分光光度法進行溶劑檢查，應符合要求；水為溶劑檢查，應符合要求；水為新鮮制備的高純水，可用超級新鮮制備的高純水，可用超級純水器制得或用重蒸餾水。對純水器制得或用重蒸餾水。對規(guī)定規(guī)定pH值的流動相，應使用精值的流動相，應使用精密密pH計進行調(diào)節(jié)。配制好的流計進行調(diào)節(jié)。配制好的流動相應通過動相應通過0.45m適宜的濾適宜的濾膜

2、濾過，用前脫氣。應配制足膜濾過，用前脫氣。應配制足量的流動相及時待用。量的流動相及時待用。一.操作準備1.2樣品溶液的配制樣品溶液的配制樣品用規(guī)定溶劑配制成供試溶液。供試溶液在注入色樣品用規(guī)定溶劑配制成供試溶液。供試溶液在注入色譜儀前，一般應經(jīng)譜儀前，一般應經(jīng)0.45m或適宜的濾膜濾過。必要或適宜的濾膜濾過。必要時，在配制供試溶液前，樣品需經(jīng)提取凈化，以免對時，在配制供試溶液前，樣品需經(jīng)提取凈化，以免對色譜系統(tǒng)產(chǎn)生污染。色譜系統(tǒng)產(chǎn)生污染。 By 孫毅孫毅一.操作準備1.3檢查儀器狀態(tài)檢查儀器狀態(tài)檢查色譜柱是否適用于本次試驗，色譜柱進出口檢查色譜柱是否適用于本次試驗，色譜柱進出口位置是否與流動相

3、的流向一致，原保存溶劑與現(xiàn)用流位置是否與流動相的流向一致，原保存溶劑與現(xiàn)用流動相能否互溶，流動相的動相能否互溶，流動相的pH值與該色譜柱是否相適值與該色譜柱是否相適應，儀器是否完好，儀器的各開關位置是否處于關斷應，儀器是否完好，儀器的各開關位置是否處于關斷的位置。的位置。By 孫毅孫毅LC-15C液相色液相色譜泵、譜泵、SPD-15C紫外紫外-可見檢測器、可見檢測器、LCsolution 15c色譜工作站。色譜工作站。 儀器組成儀器組成二.儀器組成By 孫毅孫毅3.1接通電源接通電源三.操作過程將各儀器電源插頭插入插座將各儀器電源插頭插入插座內(nèi)，內(nèi)，按按power鍵鍵打開泵和檢打開泵和檢測器電

4、源測器電源，打開泵（該儀器打開泵（該儀器除梯度外可用單泵也可同時除梯度外可用單泵也可同時用雙泵，用單泵可僅開一個用雙泵，用單泵可僅開一個泵，用雙泵需兩個泵同時打泵，用雙泵需兩個泵同時打開開，雙泵操作與單泵操作基，雙泵操作與單泵操作基本一致本一致）。）。By 孫毅孫毅3.2泵的操作泵的操作三.操作過程打開泵和檢測器電源，儀打開泵和檢測器電源，儀器由紅燈轉(zhuǎn)換為綠燈，更器由紅燈轉(zhuǎn)換為綠燈，更換所需的流動相，然后將換所需的流動相，然后將排液閥旋鈕逆時針旋轉(zhuǎn)排液閥旋鈕逆時針旋轉(zhuǎn)180以打開排液閥。以打開排液閥。 按按“purge”鍵運行，開鍵運行，開始沖洗。如果排液閥旋鈕始沖洗。如果排液閥旋鈕旋轉(zhuǎn)的度數(shù)

5、超過旋轉(zhuǎn)的度數(shù)超過180，任，任何排出的流動相都可能包何排出的流動相都可能包含氣泡。這是正常現(xiàn)象。含氣泡。這是正?，F(xiàn)象。 By 孫毅孫毅3.2泵的操作泵的操作三.操作過程等綠燈不再閃爍時代表等綠燈不再閃爍時代表清清洗完成，以順時針方向盡洗完成，以順時針方向盡量旋轉(zhuǎn)排液閥旋鈕，關閉量旋轉(zhuǎn)排液閥旋鈕，關閉排液閥。按排液閥。按“pump”鍵，鍵，開始泵的運行。開始泵的運行。 By 孫毅孫毅3.3工作站的使用工作站的使用三.操作過程雙擊桌面雙擊桌面Lcsolution 15c】圖標，確認已經(jīng)開啟】圖標，確認已經(jīng)開啟LC系統(tǒng)后，啟動【系統(tǒng)后，啟動【LC實時實時分析分析”工作站。啟動【工作站。啟動【LC實

6、時分析】工作站后，確實時分析】工作站后，確保分析儀器的所有單元（保分析儀器的所有單元（泵、柱溫箱和檢測器）都泵、柱溫箱和檢測器）都已連至系統(tǒng)控制器。確保已連至系統(tǒng)控制器。確保所有單元上都沒有顯示任所有單元上都沒有顯示任何錯誤消息。何錯誤消息。By 孫毅孫毅3.3工作站的使用工作站的使用三.操作過程設置系統(tǒng)配置，以便該系統(tǒng)與儀器的實際配置相匹配。設置系統(tǒng)配置，以便該系統(tǒng)與儀器的實際配置相匹配。僅當?shù)谝淮螌H當?shù)谝淮螌Csolution 15c連接到分析儀器，或儀器連接到分析儀器，或儀器的配置發(fā)生變化時，才需要下列設置。如果儀器的配置的配置發(fā)生變化時，才需要下列設置。如果儀器的配置沒有任何變化，

7、點擊沒有任何變化，點擊“視圖視圖”里的助手欄，點系統(tǒng)配置里的助手欄，點系統(tǒng)配置用單泵或雙泵進行運行。用單泵或雙泵進行運行。By 孫毅孫毅3.4儀器參數(shù)設置儀器參數(shù)設置三.操作過程點【文件】項下【新建方法文點【文件】項下【新建方法文件】，單擊件】，單擊“儀器參數(shù)視圖儀器參數(shù)視圖”下【正?！窟x項，可以在其中下【正?！窟x項，可以在其中輸入分析條件，例如輸入分析條件，例如LC停止時停止時間、泵間、泵A流速、檢測器流速、檢測器A波長通波長通道道 等。確保為每一檢測器設置等。確保為每一檢測器設置了【了【LC停止時間】【結(jié)束時間停止時間】【結(jié)束時間】。】。 【LC停止時間】是控制儀停止時間】是控制儀器的持續(xù)

8、時間。如果時間程序器的持續(xù)時間。如果時間程序或餾分收集時間程序都沒有設或餾分收集時間程序都沒有設置，則將其保留為置，則將其保留為0.01min。By 孫毅孫毅3.4儀器參數(shù)設置儀器參數(shù)設置三.操作過程如用單泵運行，泵【模式】鉤如用單泵運行，泵【模式】鉤選選“等濃度洗脫等濃度洗脫”（雙泵運行（雙泵運行勾選勾選“二元高壓梯度洗脫二元高壓梯度洗脫”），點【高級】選項卡中，點【高級】選項卡中“泵泵”選項，設置泵選項，設置泵A流速（一般為流速（一般為1.000ml/min）和壓力限制最大）和壓力限制最大值、最小值。如需雙泵（如梯值、最小值。如需雙泵（如梯度洗脫等），點【度洗脫等），點【LC時間程序時間程

9、序】設置梯度洗脫表，單擊】設置梯度洗脫表，單擊“下下載載”將設置傳輸?shù)絻x器，使用將設置傳輸?shù)絻x器，使用新名稱保存方法文件。新名稱保存方法文件。By 孫毅孫毅3.4.1進樣進樣設置設置三.操作過程確保顯示【就緒】，且【色譜確保顯示【就緒】，且【色譜圖視圖】中的基線穩(wěn)定后（一圖視圖】中的基線穩(wěn)定后（一般約需般約需1530分鐘）。單擊【分鐘）。單擊【LC實時分析】窗口助手欄上的實時分析】窗口助手欄上的“單次運行單次運行”圖標，出現(xiàn)圖標，出現(xiàn)“單單次運行次運行”屏幕，設置樣品名、屏幕，設置樣品名、樣品樣品ID、數(shù)據(jù)文件、數(shù)據(jù)描述、數(shù)據(jù)文件、數(shù)據(jù)描述、進樣體積等，然后單擊【確、進樣體積等，然后單擊【確定

10、】。定】。By 孫毅孫毅3.4.2檢測器調(diào)零檢測器調(diào)零三.操作過程檢測器調(diào)零：點擊檢測器調(diào)零：點擊“檢測器檢測器A零零點點”圖標，使檢測器數(shù)值調(diào)零。圖標，使檢測器數(shù)值調(diào)零。By 孫毅孫毅3.5進樣進樣三.操作過程吸取不少于吸取不少于20l的樣品，的樣品，放在進樣口，向左打開進放在進樣口，向左打開進樣閥，將樣品全部打入進樣閥，將樣品全部打入進樣口，樣口，再再向右打下進樣閥向右打下進樣閥，系統(tǒng)即自動開始采集數(shù)，系統(tǒng)即自動開始采集數(shù)據(jù)。單次分析開始，并且據(jù)。單次分析開始，并且【LC實時分析】窗口中的實時分析】窗口中的狀態(tài)從【就緒】變?yōu)椤具\狀態(tài)從【就緒】變?yōu)椤具\行】。行】。By 孫毅孫毅3.5進樣進樣

11、三.操作過程當達到【儀器參數(shù)視圖】中指當達到【儀器參數(shù)視圖】中指定的檢測器的【結(jié)束時間】時定的檢測器的【結(jié)束時間】時，自動終止數(shù)據(jù)采集。如設定，自動終止數(shù)據(jù)采集。如設定的【結(jié)束時間】要修改，可以的【結(jié)束時間】要修改，可以單擊【采集】助手欄中的【停單擊【采集】助手欄中的【停止】圖標，也可以在【數(shù)據(jù)采止】圖標，也可以在【數(shù)據(jù)采集】菜單的【更改分析時間】集】菜單的【更改分析時間】項目中，在數(shù)據(jù)采集過程更改項目中，在數(shù)據(jù)采集過程更改結(jié)束時間。一旦開始數(shù)據(jù)采集結(jié)束時間。一旦開始數(shù)據(jù)采集，【儀器參數(shù)視圖】設置變?yōu)椋緝x器參數(shù)視圖】設置變?yōu)橹蛔x，并且不能在【儀器參數(shù)只讀，并且不能在【儀器參數(shù)視圖】中更改結(jié)束

12、時間。視圖】中更改結(jié)束時間。By 孫毅孫毅3.6 數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)處理三.操作過程方法方法1單擊單擊“Lcsolution 15c”中的中的“再解析再解析”，“LC再再解析解析”開始。開始。 選擇【文件】菜單中的選擇【文件】菜單中的“選選擇項目文件夾擇項目文件夾”，然后選擇，然后選擇預測定的數(shù)據(jù)文件，數(shù)預測定的數(shù)據(jù)文件，數(shù)據(jù)文件即打開。據(jù)文件即打開。 By 孫毅孫毅3.6 數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)處理三.操作過程單擊助手欄中的【向?qū)А繄D標，單擊單擊助手欄中的【向?qū)А繄D標，單擊“program”點擊點擊【下一步】，設置正確的積分參數(shù)。【下一步】，設置正確的積分參數(shù)。 記錄要識別的峰的保留時間，單擊【下一步】輸入

13、所需記錄要識別的峰的保留時間，單擊【下一步】輸入所需峰的詳細內(nèi)容，然后單擊【完成】。單擊化合物表右上峰的詳細內(nèi)容，然后單擊【完成】。單擊化合物表右上角【視圖】按鈕，查看【結(jié)果】。角【視圖】按鈕，查看【結(jié)果】。 單擊【單擊【LC數(shù)據(jù)】助手欄中的【應用到方法】圖標，出現(xiàn)數(shù)據(jù)】助手欄中的【應用到方法】圖標，出現(xiàn)屏幕，提示指定方法文件名。命名方法文件并單擊【保屏幕，提示指定方法文件名。命名方法文件并單擊【保存】。存】。 重復重復以上以上操作進行下一次測定，直到檢驗結(jié)束。操作進行下一次測定，直到檢驗結(jié)束。By 孫毅孫毅3.6 數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)處理三.操作過程方法方法2除上述辦法分析數(shù)據(jù)外，可除上述辦法分析數(shù)

14、據(jù)外，可以直接找到存儲數(shù)據(jù)文件的以直接找到存儲數(shù)據(jù)文件的文件夾，打開文件，單擊文件夾，打開文件，單擊【數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)】然后點擊然后點擊【峰表峰表】，在峰表中查看并記錄所需的在峰表中查看并記錄所需的保留時間，峰高，峰面積等保留時間，峰高，峰面積等信息。信息。By 孫毅孫毅3.7打印報告打印報告三.操作過程打印報告：在【打印報告：在【LC數(shù)據(jù)分析】點擊左下角的【報告數(shù)據(jù)分析】點擊左下角的【報告格式】出現(xiàn)格式】出現(xiàn)“操作人操作人”名，選名，選定定“操作人操作人”雙擊。然后點擊左下角【數(shù)據(jù)】，從【雙擊。然后點擊左下角【數(shù)據(jù)】，從【數(shù)據(jù)】中拖動【數(shù)據(jù)文件】進行打印報告。數(shù)據(jù)】中拖動【數(shù)據(jù)文件】進行打印報告。B

15、y 孫毅孫毅3.8清洗和關機清洗和關機三.操作過程分析完畢后，先關色譜工作站和檢測器，再用適分析完畢后，先關色譜工作站和檢測器，再用適當經(jīng)濾過和脫氣的溶劑清洗色譜系統(tǒng)，一般用先當經(jīng)濾過和脫氣的溶劑清洗色譜系統(tǒng)，一般用先用用2530%甲醇沖洗，然后用純甲醇沖洗，甲醇沖洗，然后用純甲醇沖洗，2530%甲醇一般沖洗甲醇一般沖洗 1530分鐘，純甲醇沖洗不得分鐘，純甲醇沖洗不得少于少于30分鐘，特殊情況應延長沖洗時間。分鐘，特殊情況應延長沖洗時間。關斷電源，作好使用登記，內(nèi)容包括日期，檢品關斷電源，作好使用登記，內(nèi)容包括日期，檢品，儀器完好狀態(tài)等。，儀器完好狀態(tài)等。By 孫毅孫毅注意事項四.注意事項1

16、. 色譜柱與進樣器及其出口端與檢測器之間應為無死體積連色譜柱與進樣器及其出口端與檢測器之間應為無死體積連接接，以免試樣擴散影響分離。以免試樣擴散影響分離。2. 新柱或被污染柱用適當溶劑沖洗時，應將其出口新柱或被污染柱用適當溶劑沖洗時，應將其出口端與檢測器脫開，避免污染。端與檢測器脫開，避免污染。3.壓力表無壓力顯示或壓力波動時不能進行分析，壓力表無壓力顯示或壓力波動時不能進行分析，應檢查泵中氣泡是否已排除，各連接處有無漏液，應檢查泵中氣泡是否已排除，各連接處有無漏液，排除故障后方能進行操作。如壓力升高，甚至自動排除故障后方能進行操作。如壓力升高，甚至自動停泵，應檢查柱端有無污染堵塞。停泵，應檢

17、查柱端有無污染堵塞。By 孫毅孫毅注意事項四.注意事項4.發(fā)現(xiàn)記錄基線波動，出現(xiàn)毛刺等現(xiàn)象，首先應檢查檢測器發(fā)現(xiàn)記錄基線波動，出現(xiàn)毛刺等現(xiàn)象，首先應檢查檢測器流通池是否有氣泡或污染，如不是流通池引起，儀器穩(wěn)定后流通池是否有氣泡或污染，如不是流通池引起，儀器穩(wěn)定后方能進行操作。方能進行操作。5.進樣時，色譜柱應用流動相充分沖洗平衡，如系統(tǒng)進樣時，色譜柱應用流動相充分沖洗平衡，如系統(tǒng)適用性并不符合規(guī)定，或填充劑已損壞，則應更換適用性并不符合規(guī)定，或填充劑已損壞，則應更換新的同類色譜柱進行分析。如果同類色譜柱依法操新的同類色譜柱進行分析。如果同類色譜柱依法操作達不到預定的分離時，可更換另一牌號的同類

18、色作達不到預定的分離時，可更換另一牌號的同類色譜柱進行試驗。譜柱進行試驗。By 孫毅孫毅注意事項四.注意事項6.以硅膠作載體的化學鍵合相填充劑，其穩(wěn)定性受以硅膠作載體的化學鍵合相填充劑，其穩(wěn)定性受pH值影響值影響很大。所以流動相一般很大。所以流動相一般pH應為應為2.57.5。如果使用高。如果使用高pH值流值流動相時，可在泵與進樣器之間連接一硅膠短柱，以飽和流動動相時，可在泵與進樣器之間連接一硅膠短柱，以飽和流動相，保護分析柱，并盡可能縮短在高相，保護分析柱，并盡可能縮短在高pH值下的使用時間，用值下的使用時間，用后立即沖洗。后立即沖洗。7.色譜儀管路系統(tǒng)，從泵、進樣器、色譜柱至檢測器色譜儀管路系統(tǒng)，從泵、進樣器、色譜柱至檢測器流通池，在分