茉莉花莖乙酸乙酯提取物的抗氧化作用研究

1、茉莉花莖乙酸乙酯提取物的抗氧化作用研究1.右江民族醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院廣西百色533000； 2右江民族醫(yī)學(xué)院臨床學(xué)院 廣西百色533000； 3右江民族醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院廣西百色533000基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（no.81160347）；廣西壯族自治區(qū)百色市 科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計(jì)劃第一批項(xiàng)目（百科計(jì)1001013）；廣西自然科學(xué)基金項(xiàng) 目（2013gxnsfba019197）o廣西高校教學(xué)質(zhì)量與教學(xué)改革工程項(xiàng)目自治區(qū)級(jí)創(chuàng) 新創(chuàng)業(yè)民族醫(yī)藥教學(xué)團(tuán)隊(duì)（桂教高教2015 93號(hào)、桂教高教2016 6號(hào)） 作者簡(jiǎn)介：黃建紅（1990-）女，壯族，廣西桂平市人，右江民族醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)臨 床醫(yī)學(xué)專業(yè)木科

2、，研究方向：天然產(chǎn)物化學(xué)、藥物化學(xué)、食品衛(wèi)生。通迅作者：肖剛（1979）男，漢族，廣西桂林市人，副教授，主要從事中藥藥 理研究工作。【摘要】用乙酸乙酯作溶劑，在75°c水浴中超聲提取茉莉花莖多酚30min, 通過紫外可見分光光度法測(cè)定了茉莉花莖中多酚的含量以及其提取液的清除自 由基能力，分別用fenton法、dpph法、鄰苯三酚法對(duì)比研究了其抗氧化能力。 結(jié)果表明，當(dāng)提取液體積為iml時(shí),提取液的抗氧化能力表現(xiàn)為dpph法（96.4%） >鄰苯三酚法（33.3%） >fenton法（31.9%）。提取液的抗氧化能力隨提取液 體積增大而增加，二者呈現(xiàn)一定的量

3、效關(guān)系。【關(guān)鍵詞】茉莉花莖；多酚；自由基；抗氧化性【中圖分類號(hào)】rtq351.0【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】a【文章編號(hào)】1001-5213（2016）08-0373-02study on antioxidative effect of ethyl acetate extract of jasminehua ng jiarvhon glhua ng kai-ling2xiaohua ng suo-yi3*（1 youjiang medical university for nationalities medical inspection institute,guangxi baise 533000; 2 c

4、linical institute of youjiang medical university for nationalities, guangxi baise 533000; 3 faculty of pharmacy of youjiang medical university for nationalities, guangxi baise 533000）abstract using ethyl acetate as solve nt, ultras onic extracti on jasmi ne scape polyphenol 30min at 75 °c water

5、 bath, by uv vis spectrophotometric method for content of polyphenols and jasmine flower stems extract free radical scavenging ability were measured, respectively by fenton method, dpph method, the adjace nt benzene three phe nol method compari ng the an tioxida nt capacity. the results show that, w

6、hen the extraction volume is iml, extract antioxidant ability were dpph （96.4%） > adjacent benzene three phenol method （33.3%） >fe nton （31.9%） . extract an tioxida nt capacity in creases with the extracti on volume increase of two, showing a doseresponse relationship.【key wordsljasmin

7、e flower; polyphenols; free radical; antioxidant activity 茉莉花，又稱為茉莉，為木樨科素馨屬（jasminum）常綠灌木或藤本植物的統(tǒng)稱，原產(chǎn)于 印度、巴基斯坦，中國早已引種，并廣泛地種植，在我國廣東、廣西、云南、四 川、福建、臺(tái)灣各?。▍^(qū)）均有栽培。根據(jù)我國中醫(yī)學(xué)及現(xiàn)代藥理學(xué)對(duì)茶葉的保 健功效研究認(rèn)為茶葉苦、甘，性涼，人心、肝、脾、肺、腎、五經(jīng)。茶苦能瀉下、 祛燥濕、降火；甘能補(bǔ)益緩和；涼能清熱瀉火解表。茶葉含有犬量有益于人體健 康的化合物。如兒茶素、維生素c、維生素a、咖啡堿、黃烷醇、茶多酚等，而 茉莉花茶也含有大量芳香油、香葉醇、

8、橙花椒醇、丁香酯等20多種化合物。大 多數(shù)資料都是單獨(dú)研究茉莉花茶對(duì)自由基清除能力，而本文分別用fenton法、 dpph法和鄰苯三酚對(duì)茉莉花莖總自由基能力進(jìn)行了對(duì)比研究，研究結(jié)果為保健 醫(yī)學(xué)和食品營養(yǎng)學(xué)等方面提供了重要的實(shí)驗(yàn)參考，同時(shí)為開發(fā)和利用茉莉花的藥 理價(jià)值提供理論依據(jù)。1材料、試劑與設(shè)備1.1材料茉莉花莖干品（產(chǎn)于廣西南寧市橫縣），粉碎，于乙酸乙酯75°c 水浴超聲30min,抽濾，將濾液轉(zhuǎn)移至容量瓶中備用。1.2試劑乙酸乙酯（分析純）：天津市百世化工有限公司；水楊酸（分 析純）：成都市科龍化工試劑廠；鹽酸（分析純?nèi)肆袗哿噭┯邢薰? 30%過氧化氫（分析純?nèi)颂旖蚴?/p>

9、富宇精細(xì)化工有限公司；硫酸亞鐵（分析純）: 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；酒石酸（分析純）：天津市大茂化學(xué)試劑廠；tris （三疑甲基氨基甲烷）：上海浦化有限公司；鄰苯三酚（分析純）：貴港遵義佳宏 化工有限公司；dpph （化學(xué)純）：東京化成工業(yè)株式會(huì)社；實(shí)驗(yàn)室用水均為 二次蒸憎水。1.3實(shí)驗(yàn)儀器fa1004天子天平：上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司； kq5200db型數(shù)控超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；馬頭牌jyt5架盤 藥物天平：上海醫(yī)用激光儀器廠；shz-d （iii）循環(huán)水式真空泵：鞏儀市子華儀 器有限責(zé)任公司；722可見分光光度計(jì)：上海菁華科技儀器有限公司；紫外分光 光度計(jì)：島津企業(yè)

10、管理有限公司2試驗(yàn)方法2.1茉莉花莖乙酸乙酯提取液的制備精確稱取6g茉莉花莖粉末，加入 乙酸乙酯，在75°c下水浴超聲30min,抽濾，然后將濾液轉(zhuǎn)移至looml的容量 瓶中，用乙酸乙酯定容到looml備用。再取上述溶液lml于10訊的比色管中， 加入一定體積的乙酸乙酯定容至刻度，然后測(cè)其吸光度。2.2酒石酸亞鐵法測(cè)定多酚以及工作曲線繪制取11支25ml的試管，標(biāo) 記序號(hào)，分別加入lmg/ml的沒食子酸溶液0、0.25、0.5、0.75、1.0、1.25、1.50、 1.75> 2.0、2.25、2.5ml,再往每根試管中加入水4ml和剛配置好的酒石酸亞鐵 溶液5.0ml,用緩

11、沖液定容至25ml刻度，搖勻，靜置lh后，在最大吸收波長為 549nm處以空白對(duì)照作參比，測(cè)其吸光度。以吸光度a為縱坐標(biāo)，沒食子酸濃 度c （μg/m）為橫坐標(biāo)繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線并求出其冋歸方程。2.3樣品中活性物質(zhì)多酚含量的測(cè)定分別移取一定體積稀釋一定倍數(shù) 的提取液，用上述方法測(cè)其吸光值，代入回歸方程，求出濃度，按下列公式計(jì)算： 含量（μg/g）=濃度（μg/ml） ×稀釋倍數(shù)×提取液體積（ml） / （原料干重×106） ×100%,盡量取多次提取液稀釋后測(cè)其吸光值, 求其平

12、均含量。2.4抗氧化能力測(cè)定2.4.1 fen ton法本實(shí)驗(yàn)通過f ent o n法測(cè)定茉莉花莖乙酸乙酯提取液的抗氧化能力，利用h2o2與fe反應(yīng)產(chǎn)生疑自由基(· 0h),基本反應(yīng)如下：h 2 0 2 +f e 2+→· 0 h + 0 h-+f e 3 + 清除率的測(cè)定：取4支試管，往每支試管加入9 mm ol/ l f e s 0 4 1 ml、9 mm ol/l水楊酸一乙酸乙酯溶液2.0 ml,在其中3支試管中分別加入0.5、1.0、2.0 ml的提取液，另一試管中2.0 ml蒸憎水作空白對(duì)照。最后往4支試 管中加入8.89

13、 mm o l / lh 2 0 2 2 ml開始反應(yīng)，用乙酸乙酯定容至10m l,靜置1 h。以蒸憎水作參比，于5 1 0 nm波長處測(cè)其吸光度，并計(jì)算其清 除率：清除率二 ×100%式中：a 0為空白對(duì)照液的吸光度；as為加入提取液后的吸光度。4.2 dpph·法清除率的測(cè)定：分別取提取液2.0ml及2ml2×10-4mol/l的dpph·溶液加入同一 10ml的比色管中，搖勻，30min后用試劑空白做參 比，測(cè)定吸光度a樣品，同時(shí)用乙酸乙酯作參比，測(cè)定2ml2×10-4ml/ldpph

14、·液與2ml乙酸乙酯混合溶液的吸光度值a對(duì) 照，根據(jù)下面公式計(jì)算自由基清除率：清除率() =× 1 0 0%=& times; 10 0%式中：a參比為加入乙酸乙酯吋的吸光度值；a對(duì)照為加入dpph的 自由基體系的吸光值；a樣參為加入不同提取液后吸光值；a樣品為加入彳、同提 取液和dpph·后自由基體系的吸光值。2.4.3鄰苯三酚法抑制率的測(cè)定：在4支試管中，分別加入2 ml新配置的ph=8.43的緩沖溶液，在其中3支中分別加入0.5、1.0、2.0 ml的提取液，再往 4支試管中分別加入lm l0.2&times

15、;l 0 - 3 m ol/ l鄰苯三酚溶液，用水 定容至1 oml,在吸收波長為3 2 2處每隔3 0 s記錄一次吸光值，測(cè)量時(shí)間 為4m i n,每支試管測(cè)得8個(gè)吸光值。其抑制率計(jì)算公式為：3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論31酒石酸亞鐵法測(cè)定多酚及其曲線繪制結(jié)果由表3可知：茉莉花莖乙酸乙酯提取液對(duì)dpph·和·0 h的清除率以及對(duì)0 2 ·的抑制率隨著提取液體積的增人，即活性成 分多酚的含量的增高，自由基的清除率以及抑制率不斷增強(qiáng)，兩者之間呈一定的 量效關(guān)系。而u,在相同體積的提取液中，用不同的方法測(cè)得的茉莉花莖提取液 的抗氧化能力表現(xiàn)為

16、：dpph·清除率0 2 ·清除率· 0h清除率。結(jié)論與展望：自由基是機(jī)體氧化反應(yīng)中產(chǎn)生的有害化合物，具有強(qiáng)氧化性，可損害 機(jī)體的組織和細(xì)胞，進(jìn)而引起慢性疾病及衰老效應(yīng)，與人的病理生理關(guān)系密切。 研究表明，含氧自由基關(guān)系到很多疾病，如02-·自由基可使細(xì)胞質(zhì)和細(xì) 胞核中的核酸鏈斷裂，會(huì)導(dǎo)致腫瘤、炎癥、血液病及心肝、肺、脾、皮膚等方面 病變的產(chǎn)生；ho·是化學(xué)性質(zhì)最活潑的活性氧化物，能與糖、蛋白質(zhì)、 dna、堿基磷脂和有機(jī)酸等反應(yīng)，導(dǎo)致身體組織損害和機(jī)體退化，引發(fā)疲勞、延 遲性肌肉酸痛、運(yùn)動(dòng)性貧血和血紅旦白尿等。隨著對(duì)自由基研究的逐步深入，科 學(xué)家們?cè)絹碓角逄幍卣J(rèn)識(shí)到，清除多余自由基的措施有益于某些疾病的預(yù)防和治 療，而自由基清除劑的研究對(duì)人體健康的意義便顯得更為重大。本實(shí)驗(yàn)以茉莉花 作原料，研究了其乙酸乙酯提取液抗氧化自由基作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示茉莉花莖乙 酸乙酯提取液具有較強(qiáng)的抗氧化能力，對(duì)自由基有良好的清除作用。參考文獻(xiàn)：1嚴(yán)志慧，方義，張錫友，胡春學(xué),劉黎.茶多酚提取與